专利名称：：朝鲜紫菀提取物，以及含有该提取物的药物组合物和功能食品的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种朝鲜紫菀(Aster)的叶和茎提取物，一种朝鲜紫菀的根提取物，一种朝鲜紫菀的花提取物，以及一种用于预防或治疗糖尿病并发症的药物组合物和功能食品，其至少含有一种所述提取物作为活性成分，尤其是叶和茎提取物，根提取物和花提取物，其不仅具有抑制作为诱导糖尿病并发症重要因子的晚期糖基化终末产物的产生的作用，还具有抑制醛糖还原酶活性的作用，从而有效预防和治疗糖尿病并发症，并作为一种药物组合物和功能食品用于预防或治疗糖尿病并发症。
背景技术：
：糖尿病是世界上主要的成人病之一，最近，随着经济的快速增长，其在韩国的发病率达到7至8%。特别是，自从普遍寿命增长直到糖尿病引发，糖尿病患者不能避免糖尿病并发症的痛苦。一般地，在糖尿病发病1020年内，身体的大部分器官都受损，进而引起糖尿病性视网膜病变，糖尿病性白内障，糖尿病肾病，糖尿病神经病变等病。慢性糖尿病肾病是导致血液透析和终末期肾衰的关键原因，并且糖尿病性白内障引起失明，导致死亡。诱发糖尿病并发症的机制主要解释为蛋白质的非酶糖基化，多元醇通路以及氧化应激。蛋白质的非酶糖基化是由于蛋白质的氨基酸成员(例如赖氨酸残基)在缺乏酶作用的还原糖条件下进行的非酶缩合，也就是美拉德反应。反应的结果导致晚期糖基化终末产物(AGEs)的产生。蛋白质的非酶糖基化包括2步。第一步，蛋白质的氨基酸成员(例如赖氨酸残基)，与还原糖的醛基或酮基，在没有酶反应的情况下易于发生亲核加成反应，因而形成作为早期产物的席夫碱，与席夫碱毗邻的酮胺加合物与之彼此缩合产生可逆的阿马杜型早期糖基化产物。第二步，在持续高血糖的状态下，可逆的阿马杜型早期糖基化产物发生重构而不发生降解，并与蛋白质发生交联，从而产生晚期糖基化终末产物。与可逆的阿马杜型早期糖基化产物不同的是，AGEs是不可逆产物。因此，即使血糖浓度恢复到正常水平，终末产物，一旦产生，在蛋白质存在期间蓄积在组织内而不发生降解，导致组织的结构和功能发生异常改变(Vinson,J.A.等，1996,J.NutritinalBiochemistry7:559-663;Smith,P.R.等，1992，Eur.J.Biochem.,210:729-739)。例如，由糖原与不同蛋白反应产生的晚期糖基化终末产物的糖基化白蛋白是引起慢性糖尿病肾病的一个重要因子。糖基化白蛋白比非糖基化正常白蛋白更易进入到肾小球细胞，高浓度的葡萄糖刺激肾小球细胞增加细胞外基质的合成。糖基化白蛋白的过量导入以及细胞外基质的过量增加导致肾小球细胞纤维化。通过这些机制，肾小球遭到持续损坏，最终不得不使用极端的治疗方法，因此诸如血液透析或器官移植的极端治疗方法不可避免。同时，据报道，由于慢性糖尿病，动脉壁的胶原蛋白以及肾小球的基底膜蛋白与AGEs结合并蓄积在组织内(Brownlee，M.,等，1986,Sciences,232,1629-1632)。如上所述，非酶蛋白质糖基化导致基底膜，血清白蛋白，晶状体蛋白质，血纤维蛋白，胶原蛋白等的糖基化，并且晚期糖基化终末产物引起组织的结构和功能的异常改变，导致慢性糖尿病并发症诸如糖尿病性视网膜病变，糖尿病性白内障，糖尿病肾病，糖尿病神经病变等的发生。同时，有报道表明，在高血糖状态下产生AGEs期间，血脂发生异常，同时抵抗有害氧自由基的防御系统功能恶化，进而导致氧化应激(Yol垂wa,T.,等，2001,J.ofTrad.Med.,18:107-112)。因此，非酶糖基化反应是与氧化应激的作用机制相关联的。.多元醇通路包括2步。第一步，醛糖或酮糖在醛糖还原酶(AR)作用下形成山梨醇。第二步，山梨醇被山梨醇脱氢酶氧化产生果糖。高血糖水平激活多元醇通路，据此山梨醇和果糖大量产生并蓄积在组织内，从而增加组织的渗透压。由于渗透压增加，水进入组织引起糖尿病性视网膜病变，糖尿病性白内障以及糖尿病性神经病变等等(diabetics,EungjinKim等，Koreandiabetesassociation,Koreamedical,483p;Soulis-Liparota,T.，等，1995，Di隱abetologia，38:357-394)。据报道AGEs激活醛糖还原酶(AR)，醛糖还原酶是人微血管内皮细胞中多元醇通路中的一种关键酶(Nakamura,N.，等，2000，FreeRadicBiol.Med.,29:17-25)。在正常状态下，AR对葡萄糖亲和力低，但是在高葡萄糖浓度下，AR被激活，大量的葡萄糖被还原为山梨醇，接着山梨醇在山梨醇脱氢酶的作用下转化为果糖。果糖的非酶糖基化率比葡萄糖高大约10倍。因此，高浓度的果糖与蛋白结合，进而加速了AGEs的形成。如上所述，非酶糖基化，多元醇通路以及氧化应激机制相互作用诱发糖尿病并发症。因此，抑制晚期糖基化终末产物形成的同时抑制醛糖还原酶的活性对预防或治疗糖尿病并发症，或推迟其发病是非常重要的(Brownlee，M.，etal.,1988,N.Engl.Med，318,1315-1321)。当糖尿病刚发病时，血液中葡萄糖的水平并不立即降低，这时为了预防糖尿病并发症的发生必须给药预防糖尿病并发症。氨基胍是一种亲核肼，其是目前用作蛋白糖基化抑制剂的唯一合成药。它通过与阿马杜产物结合，抑制阿马杜产物与蛋白的交联，因而抑制晚期糖基化终末产物的产生，进而推迟或预防糖尿病并发症的发展(Brownlee，M.,等，1986,Sciences,232，1629-1632;Eddstein,D.等，1992,Diabetes,41,26-29)。氨基胍是最有希望用于预防和治疗糖尿病并发症的候选合成药物，目前已进入第三阶段的临床试验，但是存在长期服用引起毒性的问题。因此，目前需要研发安全的药物。因此，本发明人发现了朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物和朝鲜紫菀的花提取物能够抑制晚期糖基化终末产物的产生以及醛糖还原酶的活性，因而可以用于预防糖尿病发症的治疗，从而完成本发明。
发明内容技术问题本发明一方面提供一种朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物和朝鲜紫菀的花提取物，它们具有抑制引起糖尿病并发症的晚期糖基化终末产物的产生以及醛糖还原酶的活性的作用。本发明另一方面提供所述每种提取物依次用正己垸、乙酸乙酯、正丁醇和水分馏得到的馏分。本发明再--方面还提供一种用于预防或治疗糖尿病并发症的药物组合物，一种用于改善糖尿病并发症的保健功能噙品，一种用于预防或延缓衰老的药物组合物以及保健功能食品，所述的每种组合物以及食品含有至少一种所述提取物或馏分作为活性成分。技术方案依据本发明，通过将朝鲜紫菀的叶和茎部分，朝鲜紫菀的根和花精细分类，用乙醇或乙醇水溶液提取切碎植物，提取液过滤并将滤液在减压下的浓缩，获得各种提取物，其可以用作用于预防或治疗糖尿病并发症的药物组合物，用于预防衰老的组合物，或用于改善糖尿病并发症的保健功能食品。同时，通过将每种所述叶和茎提取物，根提取物和花提取物依次用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇和水分僧得到的僧分，可以用作用于预防或治疗糖尿病并发症的药物组合物，用于预防衰老的组合物，或用于改善糖尿病并发症的保健功能食品。有益效果如上所述，朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物，朝鲜紫菀的花提取物，以及各种提取物的乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分和水馏分，能够抑制引发糖尿病并发症的晚期糖基化终末产物的产生，同时抑制醛糖还原酶的活性，并且所述的提取物和馏分与阳性对照氨基胍和3，3-四甲烯戊二酸相比，抑制活性更好。因此，朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物，朝鲜紫菀的花提取物，以及各种提取物的乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分和水馏分能够用作药物组合物和功能性食品，用于预防或治疗由于晚期糖基化终末产物产生和醛糖还原酶激活引起的糖尿病并发症，包括糖尿病性视网膜病变，糖尿病性白内障，糖尿病肾病和糖尿病神经病变。同时，如果抑制晚期糖基化终末产物的产生和醛糖还原酶活性，那么氧化应激的诱导率将会降低。因此，所述的提取物和提取物馏分可以用作药物组合物和功能性食品，用于预防或延缓由于氧化应激引起的衰图l是朝鲜紫菀的提取和分馏示意图。图2是朝鲜紫菀的叶和茎提取物对晚期糖基化终末产物抑制效果图。图3是朝鲜紫菀的根提取物对晚期糖基化终末产物抑制效果图。图4.是朝鲜紫菀的花提取物对晚期糖基化终末产物抑制效果图。图5是氨基胍的花提取物对晚期糖基化终末产物抑制效果图。图6是朝鲜紫菀的叶和茎提取物对醛糖还原酶活性抑制效果图。图7是朝鲜紫菀的根提取物对醛糖还原酶活性抑制效果图。图8是朝鲜紫菀的花提取物对醛糖还原酶活性抑制效果图。图9是3，3-四甲烯戊二酸对醛糖还原酶活性抑制效果图。图10是朝鲜紫菀的叶和茎提取物的乙酸乙酯馏分对醛糖还原酶活性抑制效果图。图11是朝鲜紫菀的叶和茎提取物的正丁醇馏分对醛糖还原酶活性抑制效果图。图12是朝鲜紫菀的叶和茎提取物的水馏分对醛糖还原酶活性抑制效果图。图13是朝鲜紫菀的根提取物的乙酸乙酯馏分对醛糖还原酶活性抑制效果图。图14是朝鲜紫菀的根提取物的正丁醇馏分对醛糖还原酶活性抑制效果图。图15是朝鲜紫菀的花提取物的乙酸乙酯馏分对醛糖还原酶活性抑制效果图。图16是朝鲜紫菀的花提取物的正丁醇馏分对醛糖还原酶活性抑制效果图。图17是通过ELISA分析朝鲜紫菀的根提取物对AGEs-BSA产物图18是通过ELISA分析朝鲜紫菀的茎和叶提取物对AGEs-BSA图19是通过ELISA分析朝鲜紫菀的花提取物对AGEs-BSA产物具体实施例方式为了实现上述目的，本发明提供一种朝鲜紫菀的叶和茎提取物，通过将朝鲜紫菀的叶和茎，根和花干燥和细切，用乙醇或乙醇水溶液提取，过滤提取液并将滤液浓缩获得。另一方面，本发明还提供所述朝鲜紫菀的各种提取物通过分馏获得的乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分和水馏分。再一方面，本发明还提供一种用于预防或治疗糖尿病并发症的药物组合物，一种可以改善糖尿病并发症的保健功能食品，以及一种用于预防或延缓衰老的药物组合物和保健功能食品，所述的每种组合物和食品至少含有一种所述提取物和馏分作为活性成分。朝鲜紫菀是一种菊科多年生草本植物，高50-60cm,—般生长在比较潮湿的地方。其也可以种植在花园里(Sei-Young，Yun,PictorialBookofKoreanPlants,AcademicPress,pp.508)。然而，未见关于朝鲜紫菀对预防或治疗糖尿病并发症效果，或任何效果或组分的报道。因此，本发明发现朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物，朝鲜紫菀的花提取物，以及所述朝鲜紫菀的各种提取物的乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分和水馏分对糖尿病并发症的产生具有良好的抑制作用，从而完成本发明。以下将详细描述本发明。依据本发明，朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物和朝鲜紫菀的花提取物是通过将朝鲜紫菀的叶和茎，根和花干燥和细切，用乙醇或乙醇水溶液提取，过滤提取液并将滤液减压浓缩制备获以下将进一步详细说明制备朝鲜紫菀提取物的方法和检测提取物效果的方法。1.制备朝鲜紫菀提取物的方法1)提取步骤首先，将朝鲜紫菀的叶和茎切成细片。对切碎的叶和茎，按照5-10倍的量(w/v)添加任何一种甲醇，乙醇，以及它们的水溶液。将含有植物的溶液在室温下连续提取2-5次。2)浓缩步骤将提取溶液过滤，接着减压浓缩。此时，浓缩温度维持在40-45°C，可以防止植物的分解和水解。按照上述相同的方法提取朝鲜紫菀的根和花。说明书第8/18页2.朝鲜紫菀提取物的分馏步骤如图1所示，按照上述方法制备的每一种朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物和朝鲜紫菀的花提取物，都分馏入正己烷层，乙酸乙酯层，正丁醇层和水层，因此获得各种提取物的正己烷馏分，乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分和水馏分。3.对晚期糖基化终末产物的抑制作用朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物，朝鲜紫菀的花提取物以及乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分和水馏分都通过体外试验进行验证。结果表明，提取物和馏分可以抑制牛血清白蛋白(BSA)的糖基化作用。具体来说，当单独一种提取物和馏分培养在BSA中时，晚期糖基化终末产物被抑制50%(IQ。)时，各种提取物和馏分的浓度是18.74—1(叶和茎提取物),38.75吗/ml(根提取物)和35.36(ig/ml(花提取物)，表明提取物对晚期糖基化终末产物的产生具有良好的抑4.对醛糖还原酶活性的抑制作用朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物，朝鲜紫菀的花提取物以及各种提取物的正己烷馏分，乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分和水馏分都通过体外试验来检测其对醛糖还原酶活性的抑制效果。结果显示，提取物和馏分都能抑制醛糖还原酶的活性。具体来说，当单独一种提取物和馏分能抑制50%的醛糖酶活性时的浓度为0.40昭/ml(叶和茎提取物)，3.77吗/ml(根提取物)和2.07昭/ml(花提取物)，表明提取物对醛糖还原酶的活性具有良好的抑制作用。同时，叶和茎提取物馏分能抑制50%的醛糖酶活性时的浓度为1.34jug/ml(乙酸乙酯馏分)，0.47|ig/ml(正丁醇馏分)和2.15|ig/ml(水僧分)。此外，根提取物馏分能抑制50%的醛糖酶活性时的浓度为0.41Ug/ml(乙酸乙酯馏分)和0.86jag/ml(正丁醇馏分)。此外，花提取物馏分能抑制50%的醛糖酶活性时的浓度为1.39yg/ml(乙酸乙酯馏分)和3.63ng/ml(正丁醇提取物)。另外，本发明还提供一种用于预防或治疗糖尿病并发症的药物组合物，一种预防或延缓衰老的药物组合物，每种组合物含有至少一种选自朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物，朝鲜紫菀的花提取物，以及各种提取物的乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分和水馏分作为其活性成分。该药物组合物在临床上可通过口服给药并按一般药物制剂形式使用。具体来说，依据本发明的药物组合物可以用稀释剂或辅料诸如填料，稀释液，黏合剂，湿润剂，崩解剂，表面活性剂制成各种剂型。用于口服给药的固体剂型有片剂，丸剂，粉剂，颗粒剂，胶囊等，其通过将一种或多种诸如淀粉，碳酸钙，蔗糖或乳糖，明胶等的辅料与此外.除了简单的辅料外，还可以用诸如硬脂酸镁或滑石粉的润滑剂。口服给药的方法包括混悬剂，内液，乳剂，糖浆等，并且除简单的诸如水和液体石蜡外的稀释剂外，还可能需要使用多种辅料，例如润湿剂，甜味剂，赋香剂，防腐剂等等。非消化道给药剂型包括无菌水溶液，非水溶剂，悬浮液，乳化液，冻干制剂，或栓剂等。可以使用丙二醇，聚乙二酸，植物油诸如橄榄油，注射酯如油酸乙酯等作为非水溶剂和悬浮液。可以使用半合成脂肪酸酯，聚乙二醇，吐温61，可可黄油，劳林黄油，甘油明胶等用作栓剂基质。另夕卜，本发明还提供一种用于预防或治疗糖尿病并发症的功能性食品，一种预防或延缓衰老的功能性食品，每种组合物含有至少一种选自朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物，朝鲜紫菀的花提取物，以及各种提取物的乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分和水馏分作为其活性成分。依据本发明的功能性食品可以根据最终产品的用途和不同消费者的偏好添加不同的食品添加剂。有报道表明，晚期糖基化终末产物产生过程中发生脂肪酸代谢异常，同时抵抗有害氧自由基的防御系统功能恶化，这样就会导致氧化应激。此时，由于氧化应激，在体内以稳定形式存在的氧气可以通过包括酶系统，还原代谢，化学品，污染物及光化学反应等环境和生化因子转化为高活性氧，因此不可逆转地打破了人体细胞的蛋白质，脂肪和DNA。据认为，抑制晚期糖基化终末产物的产生可以降低氧化应激的诱导率。下文，将通过以下实施例和实验例进一步详述本发明。但是，这些实施例和实验例仅用于说明本发明，而不作为对本发明保护范围的限定。实施例朝鲜紫菀的提取和分馏2004年9月，在韩国全罗北道茂朱郡收集朝鲜紫菀的叶，茎，根和花。将收集的植物按照叶和茎部，根，花进行分类，并分别切成细片。切碎的每部分添加到80%的乙醇中置于提取器中在室温条件下提取3次，每次7天。将提取物在减压条件下浓缩，这样就获得了叶-茎提取物，根提取物和花提取物。在浓缩过程中，提取器的温度维持在40-45'C，目的是防止植物组成部分的分解和水解。通过真空浓缩完全去除乙醇后，将提取物置于冷冻干燥机中去除水分干燥。如图l所示，朝鲜紫菀的叶和茎提取物，根提取物和花提取物根据上述方法获得，并分馏入正己垸层，乙酸乙酯层，正丁醇层和水层，接着收集各分馏层。实验例1:发明材料对晚期糖基化终末产物的抑制作用分析选择牛血清白蛋白(下文称作为BSA;Sigma,USA)作为体外试验检测朝鲜紫菀的叶和茎提取物，根提取物和花提取物以及各种提取物馏分对晚期糖基化终末产物产生的抑制作用的蛋白来源。用50mM的磷酸缓冲液(pH7.4)溶解BSA到终浓度10mg/ml。用0.2M的果糖和0.2M的葡萄糖作为糖来源。将果糖/葡萄糖混合物添加到制备好的BSA溶液中。将朝鲜紫菀的叶和茎提取物，根提取物和花提取物以及提取物正己烷馏分，乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分和水馏分溶于蒸馏水中作为试验组。接着，将各种溶液添加到BSA/糖混合液中，37'C培养14天。此时，添加0.02%的叠氮钠作为一种抗菌剂。对照组是BSA/糖混合培养物，以及各试验组的空白，且对照组制备好后不进行培养。同时，将作为决定发明材料优势指标的氨基胍作为阳性对照。各种培养物制备4个样本，目的是减少误差。14天后，测定各组培养物中晚期糖基化终末产物(AGEs)的含量，并记录结果。AGEs显示荧光棕色并具有能够交联的物理和化学特性。此外，它们还具有被细胞膜受体识别的配体。利用分光光度计(激发光350nm,发射光450nm)来测定具有如此特性的晚期糖基化终末产物的总量来分析晚期糖基化终末产物的抑制情况。将按照上述实施例制备的朝鲜紫菀叶和茎提取物，分别制成浓度为5Mg/ml，10ng/ml和25Mg/ml的溶液。接着，按照试验实施例1将实施例中制备得到的朝鲜紫菀根和花提取物，分别制成浓度为10jig/ml，25jug/ml和50jug/ml的溶液。接着，按照试验实施例1的方法将制备好的各种溶液置于37。C，培养14天。14天后，利用分光光度计(激发光350nm，发射光450nm)来测定每种培养物中晚期糖基化终末产物的总量。测量结果如表1和图2所示。按照下面的公式来计算晚期糖基化终末产物的抑制产物的抑制(％)=100-(样本组的荧光强度-空白样本组的荧光强度)/(对照组的荧光强度-空白对照组的荧光强度)x100比较例1:氨基胍对晚期糖基化终末产物的抑制作用作为阳性对照的氨基胍，是用于预防和治疗糖尿病并发症的最有前途的合成药，将其溶解在蒸馏水中到终浓度为18.5Mg/ml,55.5jag/ml和74.0jug/ml，接着按照试验实施例1的方法置于37。C，培养14天。14天后，利用分光光度计(激发光350nm，发射光450nm)来测定各组培养物中晚期糖基化终末产物的含量。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>如表1和图2至5所示，朝鲜紫菀叶和茎提取物的ICs。值为18.74Hg/ml，它的抑制效果优于阳性对照氨基胍(Q。值是72.12ng/ml)3.8倍。同时，朝鲜紫菀根提取物(Cw值是38.75Mg/ml)和花提取物(Cso值是35.36jug/ml)的抑制效果都优于阳性对照约2倍。实验例2:发明提取物和馏分对醛糖还原酶活性的抑制作用分析将朝鲜紫菀的叶和茎提取物，根提取物和花提取物以及各种提取物正己烷馏分，乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分和水馏分溶用于体外试验分析其对醛糖还原酶活性的抑制作用。检测方法按照Dufrane(1984)的方法，为了从SD大鼠(Sprague-Dawley大鼠，250-280g)的眼球获得天然的醛糖还原酶，将从大鼠釆集的晶状体在135mM的钠,钾磷酸缓冲液(pH7.0)和10mM的2-巯基乙醇缓冲液中用勻浆仪和超声波破碎仪破粹。将获得的溶液在14000rpm下离心30分钟，将上清液用0.2-um过滤器过滤后用于试验。以上所有过程都在4'C下进行。BSA用作一种酶蛋白质来源，蛋白质浓度的测定釆用Lawiy，的方法。将135mM的钠，钾磷酸缓冲液(pH7.0)，lOOmM硫酸锂，0.03mMNADPH，0.04mMDL-甘油醛，以及100ng/ml的酶的混合物溶于0.1%的DMSO中，然后添加至50jul的每种样品，使其最终体积为lml。接着将获得的溶液置于37°C，反应10分钟。将不添加0.04mMDL-甘油醛的混合液作为对照，将含有135mM的钠,钾磷酸缓冲液(pH7.0)和添加有50julNADP(0.2-5jum)的100mM硫酸锂混合液作为标准。添加0.3ml的0.5NHC1终止反应后，添加lml含有10mM咪唑的6MNaOH在6(TC反应IO分钟。测定NADP转化为荧光产物的情况。每个样品重复测定三次。利用分光光度计(Bio-TEK，SynergyHT,USA)在激发光波长为360nm,发射光波长为460nm条件下，测定各样品的效果，表述为IC50。1.朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物和朝鲜紫菀的花提取物对醛糖还原酶活性抑制效果的分析将按照实施例中制备的朝鲜紫菀叶和茎提取物，分别制成浓度为0.1jag/ml，0.25|ig/ml和0.5jag/ml的溶液。接着，按照实验例2的方法检测各种溶液的作用效果。将实施例中制备的朝鲜紫菀根提取物，分别制成浓度为0.5yg/ml，5ug/ml和10ng/ml的溶液。接着，按实验例2的方法检测各种溶液的作用效果。将实施例中制备的朝鲜紫菀花提取物，分别制成浓度为1.0M<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>将按照上述实施例制备的朝鲜紫菀根提取物乙酸乙酯馏分，分别制成浓度为0.25|ag/ml，0.5jag/ml和1.0jag/ml的溶液。接着，按照实验例2的方法检测各种溶液的作用效果。将按照上述实施例制备的朝鲜紫菀根提取物正丁醇馏分，分别制成浓度为0.25|ug/ml，0.5jig/ml和1.0jug/ml的溶液。接着，按照实验例2的方法检测各种溶液的作用效果。将按照上述实施例制备的朝鲜紫菀根提取物水馏分，分别制成浓度为20.0yg/ml，30.0Mg/ml和40.0jig/ml的溶液。接着，按照实验例2的方法检测各种溶液的作用效果。将按照上述实施例制备的朝鲜紫菀花提取物正己垸馏分，分别制成浓度为10.0|ug/ml，20.0ug/ml和30.0ng/ml的溶液。接着，按照实验例2的方法检测各种溶液的作用效果。将按照上述实施例制备的朝鲜紫菀花提取物乙酸乙酯馏分，分别制成浓度为0.5jug/ml，1.0jag/ml和2.5jag/ml的溶液。接着，按照实验例2的方法检测各种溶液的作用效果。将按照上述实施例制备的朝鲜紫菀花提取物正丁醇馏分，分别制成浓度为2.5jug/ml，5.0Mg/ml和10.0jag/ml的溶液。接着，按照实验例2的方法检测各种溶液的作用效果。将按照上述实施例制备的朝鲜紫菀花提取物水馏分，分别制成浓度为10.0jug/ml，20.0)Jg/ml和30.0Mg/ml的溶液。接着，按照实验例2的方法检测各种溶液的作用效果。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>如表3和图10至16所示，朝鲜紫菀叶和茎提取物正丁醇馏分，乙酸乙酯馏分和水馏分的IC5o值分别为0.47吗/ml，1.34吗/ml，2.15吗/ml，表明馏分的抑制效果优于3,3-四甲烯戊二酸(Cso值是4.50吗/ml，参见表2)9.6倍，3.4倍和2.1倍。朝鲜紫菀根提取物乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分的IC5Q值分别为0.41(ig/ml和0.86ng/ml，表明馏分的抑制效果优于3,3_四甲烯戊二酸U倍和5.2倍。朝鲜紫菀花提取物乙酸乙酯馏分，正丁醇馏分的ICso值分别为1.39|tig/ml和3.63jLig/ml,表明馏分的抑制效果优于3,3-四甲烯戊二酸3.2倍和1.2倍。实验例3:利用ELISA试验来测定发明提取物和馏分对AGEs-BSA产生的抑制作用利用晚期糖基化终末产物特异抗体按照免疫学方法(ELISA)分析本发明的提取物和馏分中对晚期糖基化终末产物产生具有相对良好抑制作用的材料的效果。检测方法依据Engvall的方法按照下面的方式进行AGEs-ELISA试验。取100ixl样品和50mM碳酸盐缓冲液(pH9.6)(l:2v/v)的混合液体添加到96孔板的每个小孔中，接着置于37。C下2小时。将平板用0.05%的PBST洗3次，接着用1%BSA/PBS封闭。在平板放置1小时后，用0.05%的PBST洗3次。将每种AGE抗体(6D12,TransGenicInc.,Kobe,Japan)和CML抗体(NF-IG,TransGenicInc.,Kobe,Japan)稀释1000倍，然后每孔添加lOO(il的抗体稀释液，室温放置1小时。在用0.05。/。的PBST洗板3次后，每孔加入100iil的HRP标记的二抗(SantaCruz,USA)IOOO倍稀释液，放置1小时。用0.05%的PBST洗平板3次，每孔添加100|il的底物3,3',5，5'-四甲基联苯胺(TMB)。平板放置5分钟后，每孔添加lOO(il的反应终止液(1MH2S02)。接着，用酶标仪测定平板小孔里内含物的吸光度。在根提取物和茎/叶提取物中，培养14天后，它们在浓度为25jng/ml和50Mg/ml时对AGEs的产生表现出显著的抑制作用(参见图17和18)。在花提取物中，其在浓度为50jug/ml时对AGEs的产生表现出显著的抑制作用(参见图19)。20当AGEs浓度为25和50yg/ml时，茎/叶提取物具有最佳的效果。在图中，#，##和絲#分别表示与不含紫菀的培养物的统计比较结果p〈0.05，0.01和0.001。权利要求1、一种用于预防或治疗糖尿病并发症的药物组合物，其含有选自下组中的任一种作为有效成分朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物，朝鲜紫菀的花提取物，朝鲜紫菀的叶和茎提取物的乙酸乙酯馏分、正丁醇馏分或水馏分，朝鲜紫菀的根提取物的乙酸乙酯馏分或正丁醇馏分，以及朝鲜紫菀的花提取物的乙酸乙酯馏分或正丁醇馏分，所述每种提取物是通过将朝鲜紫菀的叶和茎部分，根和花细切用乙醇或乙醇水溶液提取，过滤提取液并将滤液减压浓缩制备获得，所述每种提取物的馏分是通过将各种提取物依次用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇和水分馏得到。2、一种用于预防或延缓衰老的药物组合物，其含有选自下组中的任一种作为有效成分朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物，朝鲜紫菀的花提取物，朝鲜紫菀的叶和茎提取物的乙酸乙酯馏丁醇馏分，以及朝鲜紫菀的花提取物的乙酸乙酯馏分或正丁醇馏分，所述每种提取物是通过将朝鲜紫菀的叶和茎部分，根和花细切用乙醇或乙醇水溶液提取，过滤提取液并将滤液减压浓缩制备获得，所述每种提取物的馏分是通过将各种提取物依次用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇和水分馏得到。3、一种用于预防和减缓糖尿病并发症的保健功能食品，其含有选自下组中的任一种作为有效成分朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物，朝鲜紫菀的花提取物，朝鲜紫菀的叶和茎提取物的乙酸乙酯馏分、正丁醇僧分或水馏分，朝鲜紫菀的根提取物的乙酸乙酯馏分或正丁醇馏分，以及朝鲜紫菀的花提取物的乙酸乙酯馏分或正丁醇馏分，所述每种提取物是通过将朝鲜紫菀的叶和茎部分，根和花细切用乙醇或乙醇水溶液提取，过滤提取液并将滤液减压浓缩制备获乙酯、正丁醇和水分馏得到。4、一种用于预防和延缓衰老的保健功能食品，其含有选自下组中的任一种作为有效成分朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物，朝鲜紫菀的花提取物，朝鲜紫菀的叶和茎提取物的乙酸乙酯馏分、正丁醇馏分或水馏分，朝鲜紫菀的根提取物的乙酸乙酯馏分或正丁醇馏分，以及朝鲜紫菀的花提取物的乙酸乙酯馏分或正丁醇馏分，所述每种提取物是通过将朝鲜紫菀的叶和茎部分，根和花细切用乙醇或乙醇水溶液提取，过滤提取液并将滤液减压浓缩制备获得，所述每种提取物的馏分是通过将各种提取物依次用正己烷、乙酸乙酯、正丁醇和水分馏得到。全文摘要本发明公开了一种朝鲜紫菀的叶和茎提取物，一种朝鲜紫菀的根提取物，一种朝鲜紫菀的花提取物，以及一种用于预防或治疗糖尿病并发症的药物组合物，一种用于改善糖尿病并发症的保健功能食品，以及一种预防或延缓衰老的药物组合物和保健功能食品，所述组合物和食品含有至少一种所述朝鲜紫菀提取物作为活性成分。所述每种提取物是通过干燥并细切朝鲜紫菀的每个叶和茎部分，根和花，用乙醇或乙醇水溶液提取切碎植物，将提取溶液过滤并将滤液减压浓缩得到。本发明还公开一种用于预防或治疗糖尿病并发症的药物组合物，一种预防或治疗糖尿病的功能食品，以及一种预防或延缓衰老的药物组合物和功能食品，其含有至少一种通过每种所述朝鲜紫菀提取物依次用正己烷，乙酸乙酯，正丁醇和水分馏得到的馏分。朝鲜紫菀的叶和茎提取物，朝鲜紫菀的根提取物以及朝鲜紫菀的花提取物具有抑制导致糖尿病并发症的晚期糖基化终末产物(AGEs)的作用，并且有效抑制醛糖还原酶(AR)活性。因此，所公开的提取物在预防或治疗糖尿病并发症和预防衰老中具有重要作用。文档编号A61K36/28GK101678061SQ200880015216公开日2010年3月24日申请日期2008年3月7日优先权日2007年3月9日发明者刘姃林,孙银珍,张大植,李允美,郑东昊,金周焕,金正玹,金温顺,金真淑,金种敏,金英淑,金赞植申请人:韩国韩医学研究院