增殖性疾病的治疗方案的制作方法

专利名称：增殖性疾病的治疗方案的制作方法
增殖性疾病的治疗方案相关申请的交叉引用本申请要求2007年10月22日提交的美国临时申请第60/981，716号的优先权，其通过引用全文并入本文。背景尽管在医学研究中取得了许多进展，但是癌症仍然是死亡的重要原因。在对于癌 症的治疗策略的研究中，溶瘤病毒治疗近来已经成为特异性杀死肿瘤细胞的可行的方法。 不像传统的基因治疗，其使用能够凭借病毒复制和同时发生的细胞裂解而通过肿瘤组织传 播的可复制病毒，提供癌症的备选的治疗。选择性复制并杀死癌细胞的病毒目前已被鉴定。溶瘤病毒可利用多种杀死癌细胞的作用机制_细胞裂解、细胞凋亡、抗血管生成 和细胞坏死。病毒感染肿瘤细胞并且之后开始复制。病毒持续复制直到当肿瘤细胞不再能 够容纳病毒时宿主细胞的细胞膜裂解(破裂)。肿瘤细胞被破坏并且新产生的病毒被扩散 至相邻的癌细胞继续循环。溶瘤病毒往往仅在癌细胞中复制并且经过正常组织而不产生 伤害。因此，一旦所有的肿瘤细胞被根除，溶瘤病毒就不再具有复制的能力并且被从体内清 除。经过过去的几年，对病毒的细胞毒性的分子机制的新的理解已经提供了设计更有 效的溶瘤病毒的科学原理。分子生物学上的新近进展已经允许特异性地在肿瘤细胞中复制 并杀死肿瘤细胞的几种遗传修饰的病毒例如腺病毒和单纯疱疹病毒的设计。还正为临床目 的对具有自身溶瘤能力的病毒进行评估。概述本文提供了治疗或改善受治疗者中增殖性疾病的方法。所述方法包括向受治疗者 施用一剂量的免疫抑制剂，之后向受治疗者施用一至五剂量的呼肠孤病毒的步骤。任选地， 在呼肠孤病毒的施用前至少约72小时向受治疗者施用免疫抑制剂。设计治疗方案以将呼 肠孤病毒的治疗有效性最佳化。本文还提供了用于治疗或改善受治疗者中增殖性疾病的方法，其包括向受治疗者 施用溶瘤病毒和B-细胞调节剂的步骤。还提供的是含有溶瘤病毒和至少一种B-细胞调节 剂的试剂盒和药物组合物。详述 呼肠孤病毒是指分类在呼肠孤病毒属中的任何病毒，无论是天然存在的、非天然 存在的、修饰的、重排的或者重组的。呼肠孤病毒是具有双链的、分段的RNA基因组的病 毒。病毒粒子直径上经测量为60-80nm并且具有两个同心的衣壳外壳，其每一个都是二十 面的。基因组由具有16-27千碱基对的总基因组大小的10-12个分离区段中的双链RNA组 成。单个的RNA区段在大小上是不同的。已经从多个种中获得三个不同但是相关类型的呼 肠孤病毒。所有三种类型共用一种常见的补体结合抗原。 人类呼肠孤病毒由三种血清型组成类型1(毒株Lang或T1L)、类型2(毒株 Jones, T2J)和类型3 (毒株Dearing或毒株Abney，T3D)。这三种血清型容易在中和和血凝 素抑制测定的基础上鉴定。
呼肠孤病毒是天然存在的或非天然存在的。当呼肠孤病毒可从自然中的来源分离并且没有在实验室中被人为有意地修饰时其为天然存在的。例如，呼肠孤病毒任选地来自 实地来源(field source)，即来自已经感染呼肠孤病毒的人类。当呼肠孤病毒已经在实验 室中被修饰或处理时，其为非天然存在的。例如，非天然存在的呼肠孤病毒选自实验室毒株 或是被诱变的。任选地诱变非天然存在的呼肠孤病毒以增强溶瘤活性。如本文所用的，短 语增强的溶瘤活性是指比野生型或对照呼肠孤病毒更有活性的呼肠孤病毒。如本文所用 的，溶瘤活性是指呼肠孤病毒杀死瘤细胞的能力。因此，例如具有增强的溶瘤活性的呼肠孤 病毒与对照或野生型呼肠孤病毒相比杀死至少约1. 5、2、5、10、20、50、75、100倍或1. 5倍至 100倍以上之间的任何量的瘤细胞。任选地，具有增强的溶瘤活性的呼肠孤病毒与对照或野 生型呼肠孤病毒相比杀死至少约100倍或更多的瘤细胞。呼肠孤病毒任选地被修饰但是仍能够裂解性感染具有活性ras路径的细胞，例如 哺乳动物细胞。例如，呼肠孤病毒在对增殖的细胞施用之前经化学或生物化学(例如通过 用蛋白酶诸如胰凝乳蛋白酶或胰蛋白酶处理)预处理。使用蛋白酶的预处理除去病毒的外 部外壳或衣壳并且任选地增加病毒的感染性。呼肠孤病毒任选地包被在脂质体或胶束中。 例如，在形成胶束的浓度的烷基硫酸酯洗涤剂存在的条件下用胰凝乳蛋白酶处理病毒粒子 以产生新的感染性的亚病毒粒子颗粒(ISVP)。呼肠孤病毒任选地为产生自来自两种或更多种遗传上不同的呼肠孤病毒的基因 组区段的重组/重排的重组或重排的呼肠孤病毒。呼肠孤病毒基因组区段的重组/重排可 在用至少两种遗传上不同的呼肠孤病毒感染宿主生物后在自然界或实验室中发生。重组的 呼肠孤病毒任选地在细胞培养中产生，例如，通过使用遗传上不同的呼肠孤病毒的容许的 宿主细胞的共感染。相应地，本文提供了含有来自两种或更多种遗传上不同的呼肠孤病毒的基因组 区段的重组或重排的呼肠孤病毒，包括但不限于人类呼肠孤病毒，例如类型1(诸如毒株 Lang)、类型2 (诸如毒株Jones)和类型3 (诸如毒株Dearing或毒株Abney)，非人类哺乳动 物呼肠孤病毒或鸟类呼肠孤病毒。还提供了含有来自两种或更多种遗传上不同的呼肠孤病 毒的基因组区段的重组的呼肠孤病毒，其中至少一个亲本病毒是遗传工程的，所述重组的 呼肠孤病毒含有一种或多种化学合成的基因组区段或已经用化学或物理诱变剂处理。提供了已经在包括但不限于硫酸二甲酯和溴化乙锭的化学诱变剂或包括但不限 于紫外光和其他形式的辐射的物理诱变剂存在条件下经历重组的重组的呼肠孤病毒。还提 供了包含一个或多个基因组区段中的缺失或复制，包含作为用宿主细胞基因组重组的结果 的另外的遗传信息或包含合成的基因的重组的呼肠孤病毒。呼肠孤病毒任选地通过将突变的外壳蛋白或多肽结合至例如诸如病毒粒子外部 衣壳中来修饰。蛋白通过取代、插入或缺失来突变。取代包括在天然氨基酸的位置插入不同 的氨基酸。插入包括在一个或多个位置向蛋白或多肽插入另外的氨基酸残基。缺失包括在 蛋白或多肽中一个或多个氨基酸残基的缺失。这种突变可通过本领域中已知的方法产生。 例如，编码外壳蛋白中的一个的基因的寡核苷酸定点诱变导致所期望的突变体外壳蛋白的 产生。突变蛋白在呼肠孤病毒感染的哺乳动物细胞例如COS 1细胞中的体外表达使得突变 的蛋白结合到呼肠孤病毒病毒粒子颗粒中。任选地，所提供的方法包括具有一个或多个基因组区段中的突变(包括插入、取代、缺失或复制)的呼肠孤病毒的使用。这种突变可包含作为使用宿主细胞基因组的重组 的结果的另外的遗传信息或包含合成的基因。例如，本文中所描述的突变体呼肠孤病毒可 含有减少或基本消除λ3多肽的表达或导致有功能的λ3多肽的缺失的突变，如美国序列 号第12/124，522号中所描述的，其通过引用全文并入本文。消除λ 3多肽的表达或导致有 功能的λ 3多肽的缺失的突变可位于编码λ 3多肽的核酸(即，Ll基因)中或位于编码调 节λ3多肽的表达或功能的多肽的核酸中。任选地，本文中所公开的呼肠孤病毒被鉴定为 IDAC登录号第190907-01号。呼肠孤病毒任选地为被修饰以减少或消除对呼肠孤病毒的免疫反应的呼肠孤病 毒。这种修饰的呼肠孤病毒被称为免疫保护的(immimoprotected)呼肠孤病毒。这种修饰 包括将呼肠孤病毒包装在脂质体、胶束或其他媒介中以从免疫系统掩蔽呼肠孤病毒。任选 地，将呼肠孤病毒病毒粒子颗粒的外部衣壳除去，因为外部衣壳中存在的蛋白或多肽是宿 主体液或细胞反应的主要决定因素。呼肠孤病毒可使用标准方法来纯化。参见例如，Schiff等人，“Orthoreoviruses and Their R印lication(正呼肠孤病毒和它们的复制)”，第52章，Fields Virology (病 毒学领域)中，Knipe 和 Howley 编辑，2006，Lippincott Williams 和 Wilkins ;Smith 等 人，1969，Virology 39 (4) :791_810 以及美国专利第 7，186，542,7, 049，127,6, 808，916 和 6，528，305号。如本文所使用的，纯化的突变体呼肠孤病毒是指已经与天然伴随它们的细 胞组分分离的呼肠孤病毒。通常，当呼肠孤病毒为至少70% (例如，至少75%、80%、85%、 90%、95%或99% )干重，与它们天然相关的蛋白或其他细胞组分分离时，被认为是纯化 的。对受治疗者施用病毒是指将病毒以一定方式向受治疗者施用以致其接触靶瘤细 胞的行为。病毒被施用的路线以及制剂、运载体或媒介取决于靶细胞的位置以及类型。各 种各样的施用路线被使用并在下文中更加详细地被讨论。经由病毒的感染是指细胞中病毒 的进入和复制。相似地，经由病毒的肿瘤的感染是指肿瘤的细胞中病毒的进入和复制。在许多动物模型中呼肠孤病毒被有效地用作溶瘤剂。已经用呼肠孤病毒处理了具 有建立自v-erbB转化的鼠NIH 3T3细胞或人类U87神经胶质母细胞的肿瘤的严重联合免 疫缺陷小鼠(SCID)小鼠(Coffey,M C等人1998 Science 282:1332)。病毒的单独的瘤内 注射导致肿瘤的衰退。对具有两侧U87肿瘤异种移植物的动物进行对同侧的肿瘤的单独的 单侧的呼肠孤病毒注射导致对侧肿瘤的减小。远处肿瘤部位中的这一减小是病毒的系统扩 散的结果。对具有建立自ras转化的C3H-10T1/2细胞的肿瘤的能够免疫的C3H小鼠的治 疗同样导致肿瘤在一系列的病毒注射时衰退(Coffey，M C等人1998 Science 282:1332)。本文提供了治疗或改善受治疗者中的增殖性疾病的方法。向受治疗者施用免疫抑 制剂之后施用呼肠孤病毒使得呼肠孤病毒治疗的浓度和/或频率减少。所述方法包括向受 治疗者施用一剂量的免疫抑制剂，之后向受治疗者施用一剂量至五剂量的呼肠孤病毒的步 骤。因此，一剂量、两剂量、三剂量、四剂量或五剂量的呼肠孤病毒被施用。在呼肠孤病毒的 施用前至少72小时施用免疫抑制剂。任选地，在呼肠孤病毒的施用前约96小时至72小时 或于96小时和72小时之间的任何时间点施用免疫抑制剂。任选地，在呼肠孤病毒的施用 前72小时或96小时施用免疫抑制剂。可选择地，在呼肠孤病毒的施用前约12小时至72 小时或于12小时至72小时之间的任何时间点施用免疫抑制剂。因此，任选地在呼肠孤病毒的施用前至少72小时、至少48小时、至少24小时或至少12小时施用免疫抑制剂。以有 效杀死增殖性疾病的瘤细胞的量施用呼肠孤病毒。任选地，增殖性疾病是ras介导的增殖 性疾病。如本文所用的，术语免疫抑制剂是指抑制、减缓或逆转免疫系统的活性的剂。免疫抑制剂通过直接(例如通过在免疫细胞上作用)或间接(通过在其他介导细胞上作用) 地抑制相应的免疫细胞(包括例如T细胞)的功能来作用。传统的非特异性免疫抑制剂 包括但不限于类固醇、糖皮质类固醇、环孢菌素、环孢菌素类似物、环磷酰胺、包括泼尼松和 甲泼尼松的皮质类固醇、硫唑嘌呤、FK-506 (Fujisawa Pharmaceuticals, Deerfield, IL)、 15-去氧精胍菌素、巴利昔单抗、达珠单抗、雷帕霉素、麦考酚酸吗乙酯、干扰素、皮质类固 醇、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、mimoribine、米索前列醇、抗-IL-2受体抗体、沙立度胺、抗肿 瘤坏死因子抗体、抗-CD2抗体、抗-CD 147抗体、抗-CD4抗体、抗-CD8抗体和抗-胸腺细 胞球蛋白抗体。免疫抑制剂还包括 0RTH0CL0NE (0KT3) (Ortho Biotech, Raritan, NJ)、 SANDIMMUNE ORAL (环孢菌素)(Sandoz Pharmaceuticals, Hanover, NJ) ,PROGRAF (他 克莫司)(Fujisawa Pharmaceuticals, Deerfield, IL)、CELLCEPT (麦考酚酸酯)(Roche Pharmaceuticals，Nut ley，NJ)和 RAPAMUNE (西罗莫司)(ffyeth, Collegeville, PA)。任 选地，所述剂是雷帕霉素、他克莫司、麦考酚酸、硫唑嘌呤或环磷酰胺。任选地，免疫抑制剂 不是环孢菌素、抗-CD4抗体或抗-CD8抗体。如下文的实施例中所讨论的，在向患有晚期癌症的患者静脉内施用呼肠孤病毒 (RE0LYSIN )的I期研究中观察到抗肿瘤活性。除了一个患者以外，患者在呼肠孤病毒治 疗后具有中和抗体上的显著增加。这些数据支持其中在癌症的治疗中免疫抑制药物与系统 施用的呼肠孤病毒组合的流程的开发。因此，本文还提供了用于治疗或改善受治疗者中增 殖性疾病的方法，其包括向受治疗者施用溶瘤病毒和至少一种B-细胞调节剂。B-细胞调节 剂选自由抗B-细胞抗体、抗细胞因子抗体和B-细胞的小分子选择性调节剂组成的组。任 选地，选择性地调节受治疗者中B-细胞的水平。任选地，哺乳动物是免疫活性的。任选地， 溶瘤病毒是免疫保护的。任选地，向受治疗者施用第一 B-细胞调节剂(例如，抗B-细胞抗 体)和第二 B-细胞调节剂。第二 B-细胞调节剂可选自由抗细胞因子抗体和B-细胞的小 分子选择性调节剂组成的组。任选地，第二 B-细胞调节剂是抗细胞因子抗体。在将瘤细胞与溶瘤病毒接触之前，与将瘤细胞与溶瘤病毒接触同时，在将瘤细胞 与溶瘤病毒接触之后和/或当用溶瘤病毒感染瘤细胞时，调节哺乳动物中B-细胞的水平。 任选地，通过调节剂减少受治疗者中B-细胞的水平。如本文所用的，调节受治疗者中B-细胞的水平意指控制B-细胞的水平，包括增 力口、减少或维持B-细胞的水平。选择性的调节B-细胞的水平意指将B-细胞的水平控制在 高于其他细胞(例如其他免疫细胞诸如T-细胞)的程度，通常至统计学上显著的程度。基 本上独立于其他免疫细胞地控制选择性调节的B细胞的水平。B-细胞是指B淋巴细胞。有 两种主要的B淋巴细胞的亚群，B-I和B-2细胞。B-I细胞是自我更新的并且常常分泌高水 平的以相对低的亲和力结合一系列抗原(多特异性)的抗体。B-细胞的主体，B-2细胞，直 接产生自骨髓中的前体并且分泌高特异性抗体。B-细胞调节的水平可在B-细胞的值的正 常范围的士50%内，或值的正常范围的士25%、士 10%或士5%内。任选地，B-细胞调节的 水平可少于B-细胞的值的正常范围。例如，B-细胞调节的水平可少于B-细胞的值的正常范围的50%、25%、10%、5%或1 %。任选地，B-细胞的水平被减少以致中和抗病毒反应减 少，但是未消失，以致这种中和抗病毒反应仅仅部分地被折衷。例如，中和抗病毒反应被减 少1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%或1%和 90%之间的任何量。B-细胞调节剂(例如，抗B-细胞抗体、抗细胞因子抗体或B-细胞的小分子选择性 调节剂)调节哺乳动物中的B-细胞水平和/或可干扰一种或多种B-细胞功能，例如通过 减少或预防B-细胞引起的体液反应，通过抑制抗体产生或类似方式。选择性B-细胞调节 剂调节B-细胞至高于其他细胞(例如其他免疫细胞诸如T-细胞)的程度，通常至统计学 上显著的程度。任选地，通过选择性剂来基本上独立于其他免疫细胞地控制B细胞的调节。 调节剂优选地在向受治疗者施用时能够使B-细胞消耗(即减少循环的B-细胞水平)。这 种消耗可经由不同的机制例如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖细 胞毒性(CDC)，B-细胞增殖抑制和/或B-细胞死亡的诱导(例如经由凋亡)或类似机制来 实现。包括在本公开内容范围内的剂包括与B-细胞表面抗原结合的，任选地与细胞毒性剂 轭和或融合的抗体、合成或天然序列肽和小分子拮抗剂。优选的拮抗剂包括抗体，更优选地 包括B-细胞消耗抗体。任选地，B-细胞调节剂是抗B-细胞抗体。抗B-细胞抗体对于包括前B淋巴细胞 和成熟B淋巴细胞的B-细胞来说可以是选择性的。抗B-细胞抗体可与B细胞抗原结合， 例如所述抗原选自由 CD19、CD20、CD22、CD23、CD27、CD37、CD53、CD72、CD73、CD74、CD ω 78、 CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD85 和 CD86 组成的组。任选地，抗 B-细胞抗 体与选自由CD20和CD22组成的组的B-细胞抗原结合。与CD20抗原结合的抗体的实例包 括C2B8(美国专利第5，736，137号)、称为Y2B8的钇-[90]-标记的2138鼠抗体(美国专 利第5，736，137号)；任选地由1311标记以产生1311-B1抗体的鼠IgG2a 131 (美国专利第 5，595，721 号)、鼠单克隆抗体 1F5 (Press 等人 Blood 69(2) :584_591 (1987))、嵌合的 2H7 抗体(美国专利第 5，677，180 号)以及可从 International Leukocyte Typing Workshop 获 得的单克隆抗体L27、G28-2、93-1133、B-Cl或NU-B2(Valentine等人，在LeukocyteTyping 111(111 型白细胞)中(McMichael 编辑，第 440 页，OxfordUniversity Press (1987))。 结合CD19抗原的抗体的实例包括在Hekman等人，Cancer Immunol. Immunother. 32 364-372(1991)和 Vlasveld 等人 Cancer Immunol. Immunother. 40 :37_47 (1995)中的抗 CD19 抗体和 Kiesel 等人 Leukemia Research 11,12:1119(1987)中的 B4 抗体。任选地，B-细胞调节剂是抗细胞因子抗体。抗细胞因子抗体是调节细胞因子的表 达和/或活性的抗体。术语细胞因子包括由对另一种细胞作用的一种细胞群释放的作为细 胞间调节剂的蛋白质。如本文所用的，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培 养物的蛋白质以及天然序列细胞因子的生物活性等价物。细胞因子的实例是淋巴因子、单 核因子、白细胞介素、干扰素和传统的多肽激素。典型的细胞因子包括白细胞介素(IL)例 如 IL-UIL-la, IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-11、IL-12、IL-15，干扰 素α和干扰素Y (IFN- α和IFN-γ )或者肿瘤坏死因子例如TNF_a或TNF-P。因此，抗细 胞因子抗体可与选自由IL2、IL6、IL10、IFN-y和TNF-α组成的组的细胞因子结合。任选 地，抗细胞因子抗体与ILlO结合。任选地，B-细胞调节剂是B-细胞的小分子选择性调节剂。B-细胞的小分子选择性调节剂包括调节B-细胞的小的有机分子和肽。实例包括芳香族喹啉甲酰胺(例如，喹 啉-8-芳基甲酰胺，诸如N-[4-(三氟甲基)苯基]喹啉-8-甲酰胺、N-[5-(三氟甲基) 吡啶-2-基]喹啉(quinole)-8-甲酰胺、N-(苯基)喹啉_8_甲酰胺、N_[2_(三氟甲基) 苯基]喹啉-8-甲酰胺、N-[3-(三氟甲基)苯基]喹啉-8-甲酰胺、7-甲基-N-[4-(三 氟甲基)苯基]喹啉-8-甲酰胺、N-[4-(三氟甲基)苯基]-2-(三氟甲基)喹啉-8-甲 酰胺或N-[4-(三氟甲基)苯基]-1，2，3，4-四氢喹啉-8-甲酰胺，参见Papageorgiou等 人，J Med Chem. 2001 年 6 月 7 日；44 (12) 1986-92)；地塞米松(Cupic 等人，J. Int JMol Med. 2005年6月；15(6) :1023_31)；雷帕霉素、来氟米特、咪唑立宾、麦考酚酸、布喹那和 去氧精胍菌素(Morris, J Heart LungTransplant. 1993Nov-Dec ； 12 (6 Pt 2) :S275_86)； Π(506、雷帕霉素、麦考酚酸吗乙酯丙二腈酰胺(来氟米特，FK778, Π(779)、15-去氧精胍 MM (DSG) (Ma ^A, Curr Drug Targets Cardiovasc Haematol Disord. 2002 ^ 12 M 2(2) 57-71)；柳氮磺吡啶和其类似物(Habens等人，Apoptosis. 2005年5月；10 (3) 481-91)；染料木黄酮(Mansour 等人，Cell Cycle. 2004 年 12 月；3 (12) 1597-605) ；2-氰 基-3，12-二氧代齐墩果-1，9-二烯-28-酸(Ray 等人，Exp Hematol. 2006 年 9 月；34 (9) 1201-1210) ；PD 0332991 (Baughn 等人，Cancer Res. 2006 年 8 月 1 日；66 (15) :7661_7)； BU12-SAP0RIN (Flavell 等人，Br J Haematol. 2006 年 7 月；134 (2) 157-70. Epub 2006 年 6 月 12 日)；HA 14-1 (Skommer 等人 ，Leuk Res. 2006 年 3 月；30 (3) :322_31) ；PKC412 (Chen 等 人，Oncogene. 2005 年 12 月 15 日；24(56) :8259_67) ；PS-1145 和相关的化合物(Lam 等人， Clin Cancer Res. 2005 年 1 月 1 日；11(1) :28_40)；㈠-棉酚(Mohammad等人，Mol Cancer Ther.2005 年 1 月；4(1) 13-21) ；4-氨基-1-叔-丁基-3-(1-萘基)吡唑并[3，4_d]嘧 啶(Wong 等人，Proc NatlAcad Sci U S A. 2004 年 12 月 14 日；101 (50) 17456-61) ；二肽 基肽酶(DPP)抑制剂，例如，PT-100 (Val-boro-Pro) (Adams 等人，CancerRes. 2004 年 8 月 1 日；64(15) =5471-80)和类似物。任选地，B-细胞的小分子选择性调节剂选自由芳香族喹啉甲酰胺、地塞米松、 来氟米特、咪唑立宾、布喹那、去氧精胍菌素、丙二腈酰胺、柳氮磺吡啶、染料木黄酮、2_氰 基-3，12- 二氧代齐墩果-1，9- 二烯-28-酸、PD 0332991、BU12-SAP0RIN、HA14_1、PKC412、 PS-1145、棉酚、4-氨基-1-叔-丁基-3-(l-萘基)吡唑并[3,4-d]嘧啶和Val-boro-Pro 组成的组。任选地，B-细胞调节剂和B-细胞的小分子选择性调节剂尤其不包括选自由雷帕 霉素、他克莫司和麦考酚酸和其类似物所组成的组的一种或多种化合物。任选地，B-细胞调 节剂和B-细胞的小分子选择性调节剂尤其不包括选自由5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、甲氨蝶 呤、羟基脲、环磷酰胺、达卡巴嗪、米托蒽醌、蒽环类(anthracyclins)、卡钼、顺钼、紫杉醇、 紫杉特尔、他莫昔芬、抗-雌激素、干扰素、雷帕霉素、他克莫司、麦考酚酸、硫唑嘌呤、环孢 菌素、环磷酰胺和其类似物组成的组的一种或多种化合物。溶瘤病毒，如本文所用的，是能够在瘤细胞中选择性复制的病毒。任选地，溶瘤病 毒选自由呼肠孤病毒、修饰的腺病毒、修饰的HSV、修饰的牛痘病毒、修饰的副痘病毒属羊痘 病毒、修饰的流感病毒、delNSl病毒、表达p53的病毒、ONYX-015、δ 24和水疱性口炎病毒 组成的组。术语修饰的腺病毒是指其中抑制PKR的活化的一种或多种基因产物是缺乏的、被抑制或被突变的以致PKR的活化没有被阻断的腺病毒。优选地，VAI RNA的没有被转录。这种修饰的腺病毒将不能够在不具有活化的ras通路的正常细胞中复制，然而将能够感染具 有活化的ras通路的细胞并在具有活化的ras通路的细胞中复制。术语修饰的HSV是指其中抑制PKR的活化的一种或多种基因产物是缺乏的、被抑 制或被突变的以致PKR的活化没有被阻断的单纯疱疹病毒(HSV)。优选地，HSV基因γ 134. 5 没有被转录。这种修饰的HSV将不能够在不具有活化的ras通路的正常细胞中复制；然而 将能够感染具有活化的ras通路的细胞并在具有活化的ras通路的细胞中复制。副痘病毒属羊痘病毒是痘病毒。其是在不同哺乳动物种类包括人类中诱导急性皮 肤损伤的病毒。副痘病毒属羊痘病毒通过破裂或受损的皮肤天然感染绵羊、山羊和人类，在 再生的表皮细胞中复制并诱导会变成痂的脓疱损伤。术语修饰的副痘病毒属羊痘病毒是指 其中抑制PKR的活化的一种或多种基因产物是缺乏的、被抑制或被突变的以致PKR的活化 没有被阻断的副痘病毒属羊痘病毒。优选地，基因0V20. OL没有被转录。这种修饰的副痘 病毒属羊痘病毒将不能够在不具有活化的ras通路的正常细胞中复制；然而将能够感染具 有活化的ras通路的细胞并在具有活化的ras通路的细胞中复制。术语修饰的牛痘病毒是指其中抑制PKR的活化的一种或多种基因产物是缺乏的、 被抑制或被突变的以致PKR的活化没有被阻断的牛痘病毒。优选地，E3L基因和/或K3L 基因没有被转录。这种修饰的牛痘病毒将不能够在不具有活化的ras通路的正常细胞中复 制；然而将能够感染具有活化的ras通路的细胞并在具有活化的ras通路的细胞中复制。任选地，溶瘤病毒可以是重组病毒，例如，重组呼肠孤病毒。瘤细胞可与不止一种 类型的溶瘤病毒或不止一种的溶瘤病毒毒株接触。溶瘤病毒还可被包封在胶束中。可在与 瘤细胞接触之前用蛋白酶处理溶瘤病毒。任选地，方法还包括向哺乳动物施用抗抗溶瘤病毒的抗体或从哺乳动物除去抗溶 瘤病毒抗体。抗溶瘤病毒抗体是指与溶瘤病毒结合的抗体。IgG抗体是指免疫球蛋白G抗 体。IgG，最充足的类型的抗体，携带中和细菌毒素的主要负载并且与微生物结合以增强它 们的吞噬作用。抗溶瘤病毒抗体的选择性去除可避免受治疗者的免疫系统除去治疗性施用 的溶瘤病毒。防止抗体与病毒的相互反应还有助于系统治疗策略。抗体可通过几种方法除 去，包括血红素透析和使血液经过固定的溶瘤病毒(选择性的抗体去除)；通过经由血红素 透析和使血液经过固定的蛋白质A (商业上可获得的为PR0S0RBA，Cypress Bioscience, San Diego, Calif.)除去所有IgG抗体或通过施用人源化的抗独特型抗体，其中独特型是抗溶 瘤病毒的。任选地，溶瘤病毒可通过掩蔽或损害溶瘤病毒的免疫识别来系统地起作用而不损 害正常免疫功能。为了避免受治疗者的免疫系统识别溶瘤病毒，进行溶瘤病毒和溶瘤病毒 重排株(reassortants)的系列施用。可选择地，溶瘤病毒可被无病毒毒性的人源化抗体包 被，例如用抗体的Fab部分包被，或包被在胶束中。此外，可用胰凝乳蛋白酶处理溶瘤病毒以产生感染性亚病毒颗粒(ISVP)。ISVP可 被单独使用或与完整病毒组合使用以提供患者的免疫系统识别不好或没有被患者的免疫 系统预先预防的剂。溶瘤病毒含有不同的抗原决定簇由此减少或预防之前暴露于溶瘤病毒亚型的哺 乳动物的免疫响应。这种重组的病毒粒子，也称为重排株，可通过使用具有所获得的用途(resorting)的不同亚型的溶瘤病毒共感染哺乳动物细胞并且将不同亚型的外壳蛋白结合 至所得的病毒粒子衣壳中来产生。溶瘤病毒优选地为被修饰以减少或消除对溶瘤病毒的免疫反应的溶瘤病毒。这种 修饰的溶瘤病毒被称为免疫保护的溶瘤病毒。这种修饰可包括将溶瘤病毒包装在脂质体、 胶束或其他媒介中以从哺乳动物免疫系统掩蔽溶瘤病毒。可选择地，溶瘤病毒病毒粒子颗 粒的外部衣壳可被除去，因为外部衣壳中存在的蛋白是宿主体液和细胞反应的主要决定因素。本文还提供了含有溶瘤病毒和至少一种B-细胞调节剂的药物组合物和试剂盒。 B-细胞调节剂选自由抗B-细胞抗体、抗细胞因子抗体和B-细胞的小分子选择性调节剂所 组成的组。药物组合物或试剂盒任选地包括第一 B-细胞调节剂(例如抗B-细胞抗体)和 第二 B-细胞调节剂。药物组合物或试剂盒还任选地包括化学治疗剂或非B-细胞特异性 的免疫抑制剂。任选地，非B-细胞特异性的免疫抑制剂可以是类固醇或可以选自由雷帕霉 素、他克莫司、麦考酚酸、硫唑嘌呤、环孢菌素、环磷酰胺和其类似物组成的组。优选地，非 B-细胞特异性的免疫抑制剂是环孢菌素。在所提供的方法中，术语增殖性疾病是指由瘤或肿瘤细胞所表征的疾病。瘤细胞、 肿瘤细胞或患有增殖性疾病的细胞是指以不正常的高速率增殖的细胞。包含瘤细胞的新生 长是瘤，也称为肿瘤。肿瘤是不正常的组织生长，通常形成不同的块，其通过比正常组织生 长更快的细胞增殖来生长。肿瘤可显示出与正常组织的结构组织和功能协调的部分或整体 缺失。如本文所用的，肿瘤往往包括造血肿瘤以及实体肿瘤。如本文所用的，术语增殖性疾 病包括由瘤或肿瘤细胞或以非正常的高速率增殖的细胞所表征的肿瘤、瘤和疾病。肿瘤可以是良性的(良性肿瘤)或恶性的(恶性肿瘤或癌症)。恶性肿瘤可大致 上分为三个主要的类型。来自于上皮结构的恶性肿瘤被称为癌，起源于结缔组织例如肌肉、 软骨、脂肪或骨的恶性肿瘤被称为肉瘤；而影响包括免疫系统组分的造血结构(与血液细 胞的形成有关的结构)的恶性肿瘤称为白血病或淋巴瘤。其他肿瘤包括但不限于神经纤维 瘤病。任选地，瘤细胞是ras介导的。术语ras活化的和ras介导的在通篇申请可交替 使用。ras通路可通过ras基因突变、升高的ras基因表达水平、升高的ras基因信息稳定 性或导致ras或ras通路中ras下游或上游的一种或多种因子的活化由此增加ras通路活 性的任何突变或其他机制来活化。例如EGF受体、PDGF受体或SOS的活化导致ras通路的 活化。Ras介导的瘤细胞包括但不限于，ras介导的癌细胞，其是由于ras通路的活化而以 恶性方式增殖的细胞。任选地，在ras介导的瘤细胞中，PKR的磷酸化被抑制。例如，PKR的 磷酸化可通过PKR的失活或缺失来抑制。ras介导的瘤细胞可缺乏PKR或ras介导的瘤细 胞中的PKR的磷酸化可被抑制或逆转。Ras活化的瘤细胞或ras介导的瘤细胞是指至少部 分由于ras通路的活化而以非正常的高速率增殖的细胞。如本文所用的，术语ras介导的增殖性疾病是指由ras活化或ras介导的瘤细胞 所表征的疾病。因此，例如，ras介导的增殖性疾病包括瘤，其中瘤含有ras介导的增殖性 细胞。增殖性疾病任选地是瘤或实体瘤。瘤包括实体肿瘤例如癌和肉瘤。癌包括浸润或 侵入周边组织并产生转移瘤的来源于上皮细胞的恶性瘤。腺癌是来源于腺体组织或来源于形成可识别的腺体结构的组织的癌。癌症的另一种大的类别包括肉瘤和纤维肉瘤，其是其细胞被包埋在纤维状或同类物质例如胚胎性结缔组织中的肿瘤。本文提供了治疗骨髓或淋 巴系统的增殖性疾病的方法，所述疾病包括白血病(例如急性淋巴性白血病、急性非淋巴 性白血病、慢性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病和多毛细胞白血病)、淋巴瘤(包括渗出 性淋巴瘤和基于体腔的淋巴瘤和通常不作为肿瘤块存在但是在血管或淋巴网状系统中散 布的其他癌症)。增殖性疾病包括成人或小儿增殖性疾病；实体肿瘤/恶性肿瘤的生长；粘液状和 圆形细胞癌；局部晚期肿瘤；甲状腺癌；肾上腺癌；肝癌；胰腺癌；中央和外周神经系统癌； 人类软组织肉瘤，包括尤因肉瘤；癌转移瘤，包括淋巴转移瘤；鳞状细胞癌，尤其是头和颈； 食管鳞状细胞癌；口腔癌；血液细胞恶性肿瘤，包括多发性骨髓瘤；肺癌，包括肺的小细胞 癌；皮肤T细胞淋巴瘤；霍奇金淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤；肾上腺皮质的癌；产生ACTH的肿 瘤；非小细胞肺癌；乳癌；胃肠癌，包括胃癌、结肠癌、结肠直肠癌和与结肠直肠瘤形成相关 的息肉；胰腺癌、肝癌、泌尿道癌，包括膀胱癌，例如原发性表面膀胱肿瘤、膀胱的浸润移行 细胞癌和肌肉浸润性膀胱癌；前列腺癌；女性生殖道的恶性肿瘤，包括卵巢癌、原发性腹膜 上皮细胞瘤、子宫颈癌、子宫内膜癌、阴道癌、阴户的癌、子宫癌和卵泡中的实体肿瘤；男性 生殖道的恶性肿瘤，包括睾丸癌和阴茎癌；肾癌，包括肾细胞癌；脑癌，包括内在性脑肿瘤、 神经母细胞瘤、星形细胞脑肿瘤、神经胶质瘤和中央神经系统中的转移肿瘤细胞浸润；骨 癌，包括骨瘤和骨肉瘤；皮肤癌，包括恶性黑色素瘤、人类皮肤角化细胞的进行性肿瘤、基底 细胞癌和鳞状细胞癌；甲状腺癌；视网膜母细胞瘤；神经母细胞瘤；腹膜积液；恶性胸腔积 液；间皮瘤；威尔姆氏肿瘤；胆囊癌；滋养细胞瘤；血管外皮细胞瘤和卡波济氏肉瘤。任选地，用药学上可接受的运载体或赋形剂体外或体内施用本文提供的病毒和 齐U。所谓的药学上可接受的意指不是生物学上或其他方式上非所期望的材料，即材料被施 用于受治疗者而不导致非所期望的生物作用或以有害的方式与其所被包含的药物组合物 中其他的组分相互反应。选择运载体以将有效成分的任何降解最小化并将受治疗者中的任 何不良副作用最小化。因此，所提供的是药物组合物，其中含有病毒和/或剂。在制备药物组合物时，病 毒和/或剂通常与赋形剂混合、被赋形剂稀释或包封在胶囊、囊、纸或其他容器的形式的运 载体中。当药学上可接受的赋形剂作为稀释剂时，其可是作为活性成分的媒介、运载体或介 质起作用的固体、半固体或液体材料。因此，组合物可以是片剂、丸剂、粉末、锭剂、囊、扁囊、 酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气溶胶(例如为固体或在液体介质中)、含有例如多达10% 重量的活性化合物的软膏、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液和无菌包装的粉末。适 合的制齐U可在 Remington :The Science and Practice of Pharmacy (雷明顿药物科学禾口 实践)(第 21 版)编辑 A. R. Gennaro 等人,University of the Sciences inPhiladelphia 2005中找到。适合的赋形剂的一些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯 树胶、磷酸钙、海藻盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、无菌 水、糖浆和甲基纤维素。剂量形式可另外包括润滑剂，例如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿 剂；乳化和悬浮剂；防腐剂例如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂和调味剂。本发 明的组合物可被配制以便在使用本领域已知的程序向受治疗者施用后提供活性成分快速、持久或延迟的释放。可使用本领域技术人员已知的方法和材料将病毒包封在脂质体、胶束、微粒、纳米 颗粒或微球中。例如，美国专利第5，019，400号描述由不同材料制成的控制释放生物可降 解的微球的制备。用于脂质体的材料包括脂质、嵌段共聚物和其他生物学上相容的表面活 性剂和其共聚物。用于制备微粒的方法包括例如溶解、乳化或悬浮含有所感兴趣的分子的 聚合物液体。
为了制备固体组合物，例如片剂，将活性成分与药学赋形剂混合以形成含有活性 成分的均质混合物的固体预制剂组合物。当称这些预制剂组合物为均质的时，其意指活性 成分均勻地分散于整个组合物以致组合物可被容易地细分为同等有效的单位剂量形式，例 如片剂、丸剂和胶囊。片剂或丸剂任选地被包衣或以其他方式被复合以提供供给延长的作用的优点的 剂量形式。例如，片剂或丸剂含有内部剂量和外部剂量组分，后者是包围前者的套的形式。 两种组分任选地被肠溶衣层分隔，所述肠溶衣层起抵抗胃中的崩解并允许内部组分完整进 入十二指肠或被延迟释放的作用。不同的材料被用于这种肠溶衣层或包衣，这种材料包括 许多聚合物酸以及聚合物酸与这种材料例如虫胶、十六烷醇和醋酸纤维素的混合物。用于口服或通过注射施用的其中结合组合物的液体形式包括含水溶液、适当调味 的糖浆、含水或油性悬浮液和具有可食用的油例如玉米油、棉籽油、芝麻油、椰子油或花生 油的调味的乳液以及酏剂和相似的药学媒介。用于吸入或吹入的组合物包括溶于药学上可接受的含水或有机溶剂或者其混合 物的溶液和悬浮液，以及粉末。液体或固体组合物任选地含有如本文所描述的适当的药学 上可接受的赋形剂。优选地，为了局部或系统的作用，通过口服或经鼻的呼吸路线施用组合 物。任选地通过使用惰性气体来雾化于优选地药学上可接受的溶剂中的组合物。可从雾化 装置直接吸入雾化的溶液或者雾化的装置可与面具罩或间歇性正压呼吸机相连。可优选地 口服地或经鼻地从以适当的形式递送制剂的装置施用溶液、悬浮液或粉末组合物。本文所提供的方法中使用的另一个制剂使用经皮递送装置(贴片)。用于药学剂 的递送的经皮贴片的构建和使用是本领域中熟知的。参见，例如，美国专利第5，023，252 号，其通过引用并入本文。构造这种贴片以便药学剂的连续的、脉动的或按需的递送。在所提供的方法中，以一定方式施用病毒以使其可最终与靶肿瘤或肿瘤细胞接 触。例如，系统地施用病毒。病毒被施用的路线以及制剂、载体或媒介取决于靶细胞的位置 以及类型。使用各种各样的施用路线。例如，对于容易接近的实体肿瘤，任选地通过直接向 肿瘤注射来施用病毒。例如，对于造血的肿瘤，静脉内或血管内施用病毒。对于体内不容易 接近的肿瘤，例如转移瘤，以一定的方式施用病毒以使其系统地运输遍布哺乳动物的身体 并由此到达肿瘤(例如，静脉内或肌肉内地)。可选地，病毒被直接施用至单独的实体肿瘤， 其中其之后被系统地运输遍布身体至转移瘤。任选地皮下地、腹膜内地、鞘内地(例如对于 脑肿瘤)、局部地(例如对于黑素瘤)、口服地(例如对于口腔或食道癌)、直肠地(例如对 于结肠直肠癌)、阴道地(例如对于子宫颈或阴道癌)、经鼻地或通过吸入喷雾(例如对于 肺癌)施用病毒。在所提供的方法中，口服地、胃肠外地(例如静脉内地)、通过肌肉内注射、通过腹 膜内注射、经皮地、体外地、局部地或类似方式地(包括鼻内施用或通过吸入施用)来施用一种或多种剂和组合物。以足以治疗肿瘤或瘤的量(例如有效量)施用病毒。治疗导致，例如，瘤大小上的 减少或瘤的完全消除。瘤的大小上的减少或瘤的消除通常由经由溶瘤病毒的瘤细胞的裂 解(溶瘤作用)所导致。有效量是从约1. 0至约IO15Pfukg体重或1. 0和1015pfu/kg体重 之间的任何量。任选地，呼肠孤病毒的有效量是从约IO3至约1012pfu/kg体重或约IO8至 1012pfu/kg体重。因此，取决于存在的肿瘤的类型、大小和数量，可使用大约1.0至IO15蚀 斑形成单位(PFU)的病毒。任选地以单位剂量形式配制病毒，每个剂量含有从约IO2Pfu至约IO17Pfu的呼肠孤病毒。术语单位剂量形式是指适合作为对于受治疗者来说的单一的剂量的物理上分离的 单元，每个单元含有与适当的药学赋形剂联合的估计产生所期望的治疗作用的预定量的溶
瘤病毒。组合物的有效剂量取决于许多因素并且可因此从受治疗者到受治疗者稍有不同。 取决于受治疗者的物种、年龄、体重和一般状况，被治疗的病症的严重度，所使用的特定的 病毒或载体和其施用的方式，所需要的确切的量从受治疗者到受治疗者有所变化。因此，指 定每个组合物的确切的量是不可能的。然而，适合的量由本领域的一般技术人员仅使用本 文提供的指导给出的常规实验即可确定。组合物的施用的剂量范围是大得足以产生所需要的作用的那些，所述作用中病症 的症状被影响。剂量没有大到产生有害的副作用，例如不想要的交叉反应和过敏性反应。如 果有任何相反的指示，那么剂量由医师个人调整。在一个给药方案中，以单一的剂量或多个剂量(即多于一个剂量)施用病毒。对 于多个剂量来说，给药方案可发生在几天或几周的时间段中。任选地，酌情每周或每月重复 给药方案。任选地，同时或系列地向同一个受治疗者中的不止一个瘤施用呼肠孤病毒。本文提供的方法任选地与其他肿瘤治疗例如化学治疗、放射治疗、手术和/或激 素治疗组合。化学治疗剂是可抑制肿瘤生长的化合物。这种剂包括但不限于5-氟尿嘧啶、 丝裂霉素C、甲氨蝶呤、羟基脲、环磷酰胺、达卡巴嗪、米托蒽醌、蒽环类(表柔比星和多柔比 星)、受体的抗体(例如赫赛汀)、依托泊苷、pregnasome、钼化合物(例如卡钼和顺钼)、紫 杉烷(例如紫杉醇和紫杉特尔)、激素治疗(例如他莫昔芬和抗_雌激素)、干扰素、芳香酶 抑制剂、促孕剂和LHRH类似物。因此，任选地与一种或多种其他治疗或预防方案组合施用 所提供的组合物。本文提供的是治疗受治疗者中的增殖性疾病的试剂盒。例如，试剂盒包括一种或 多种呼肠孤病毒和一种或多种免疫抑制剂。可选择地，试剂盒包括含有一种或多种呼肠孤 病毒的组合物和含有一种或多种免疫抑制剂的组合物。任选地，在试剂盒中以剂量单位的 形式提供呼肠孤病毒、免疫抑制剂或呼肠孤病毒和/或免疫抑制剂的组合物。例如，在试剂 盒中提供一个剂量单位的免疫抑制剂和多至5个剂量单位的呼肠孤病毒。本文还提供的是含有一种或多种溶瘤病毒和一种或多种B-细胞调节剂的试剂 盒。可选择地，试剂盒包括含有一种或多种溶瘤病毒的组合物和含有一种或多种B-细胞调 节剂的组合物。任选地，在试剂盒中以剂量单位提供组合物。所提供的试剂盒任选地含有例如另一种药学活性剂，例如诸如化学治疗剂、缓冲 齐U、防腐剂、蛋白稳定剂或者对于实行所提供的方法来说必须的另外的剂或组分。试剂盒的每种组分通常包装在单独的容器中。然而，可在一个容器中含有试剂盒的两种或更多种组 分。此外，可在一个或多个包装中包含所有不同的容器。试剂盒任选地包括使用试剂盒的 组分的说明书。如本文所用的，术语治疗(treatment)、治疗(treat)、治疗(treating)或改善是 指减少病症或病况或病症或病况的一种或多种症状的影响的方法。这些术语还指减缓病症 或病况的一种或多种症状的发展速率。因此，在所公开的方法中，治疗可指确认的病症或病 况或病症或病况的症状的严重度上的10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90% 或100%的减少或改善。例如，如果与对照相比，受治疗者中的病症的一种或多种症状上有 10%的减少或病症的一种或多种症状的发展速率上有10%的减少，那么治疗增殖性疾病 的方法被认为是治疗。因此，减少可以是与天然或对照水平相比，10 %、20 %、30 %、40 %、 50%、60%、70%、80%、90%、100%或在10和100之间的任何百分比的减少。应当理解的 是，治疗不必须指病症、病况或病症或病况的症状的治愈或彻底根除。
如本文所使用的，术语受治疗者包括脊椎动物，更特别地哺乳动物(例如人类、 马、猪、兔、犬、绵羊、山羊、非人类灵长目动物、牛、猫、豚鼠或啮齿动物)，鱼类、鸟类或爬行 动物或两栖动物。术语未指示特定的年龄或性别。因此，成体或新生的受治疗者以及胎儿， 无论雄性还是雌性都被包括。如本文所用的，患者或受治疗者可被交替使用并可指患有病 症或疾病的受治疗者。术语患者或受治疗者包括人类和脊椎动物受治疗者。这一申请中，引用了不同的出版物。这些出版物的公开内容以它们的全文通过引 用被并入这一申请中。已经描述了许多方面。然而，应当理解的是可进行不同的修饰。而且，当描述一种 表征或步骤时，其可与本文任何其他的表征或步骤组合，即便组合没有被明确说明。相应 地，其他方面在本权利要求的范围内。
实施例在向患有晚期癌症的患者静脉内施用呼肠孤病毒(RE0LYSIN )的I期研究中观 察到抗肿瘤活性。用 1 X 108、3X 108、1X 109、3X 109、1X IO1 或 3X IOici(TCID50)的呼肠孤 病毒治疗患者。除了一个患者之外，在呼肠孤病毒治疗后患者具有中和抗体上的显著增加， 具有> 1/10000的峰终点滴度。中位倍数增加是250，具有9-6437的范围。来自四个不同 的剂量组的患者的血清被用来中和抗L929细胞的呼肠孤病毒细胞毒性作用。来自仍有待 于用呼肠孤病毒处理的患者的血清在中和抗L929细胞的呼肠孤病毒细胞毒性中与山羊多 克隆抗体同样有效，暗示了预先存在的免疫力的存在。然而，一些患者血清没有显示出对呼 肠孤病毒的免疫力。上文的结果支持了其中在癌症的治疗中免疫抑制药物与系统地施用的呼肠孤病 毒组合的流程的开发。
权利要求
一种治疗受治疗者中增殖性疾病的方法，所述方法包括以下步骤a)向所述受治疗者施用一剂量的免疫抑制剂；以及b)向所述受治疗者施用一剂量至五剂量的呼肠孤病毒，其中在所述呼肠孤病毒的施用之前至少约72小时施用所述免疫抑制剂。
2.如权利要求1所述的方法，其中在所述呼肠孤病毒的施用之前从约96小时至72小 时施用所述免疫抑制剂。
3.如权利要求1所述的方法，其中在所述呼肠孤病毒的施用之前72小时施用所述免疫 抑制剂。
4.如权利要求1所述的方法，其中在所述呼肠孤病毒的施用之前96小时施用所述免疫 抑制剂。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述免疫抑制剂不是环孢菌素A、抗-CD4抗体或 抗-CD8抗体。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述免疫抑制剂选自由雷帕霉素、他克莫司、麦考酚 酸、硫唑嘌呤、环磷酰胺和其类似物所组成的组。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述免疫抑制剂是环磷酰胺。
8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中施用一剂量的呼肠孤病毒。
9.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中施用两剂量的呼肠孤病毒。
10.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中施用三剂量的呼肠孤病毒。
11.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中施用四剂量的呼肠孤病毒。
12.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中施用五剂量的呼肠孤病毒。
13.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中系统地施用所述呼肠孤病毒。
14.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中口服地、局部地、经鼻地、皮下地或腹 膜内地施用所述呼肠孤病毒。
15.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中呼肠孤病毒的剂量是约1至IO15蚀 斑形成单位的呼肠孤病毒/kg体重。
16.如权利要求15所述的方法，其中呼肠孤病毒的剂量是约IO8至IO12蚀斑形成单位 的呼肠孤病毒/kg体重。
17.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中通过注射将所述呼肠孤病毒施用至所 述增殖性疾病的部位中或附近。
18.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述增殖性疾病是瘤。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述瘤是实体瘤。
20.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述增殖性疾病选自由肺癌、前列腺 癌、结肠直肠癌、甲状腺癌、肾癌、肾上腺癌、肝癌、胰腺癌、乳癌、脑癌以及中央和外周神经 系统癌所组成的组。
21.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中以杀死所述增殖性疾病的瘤细胞的有 效量施用所述呼肠孤病毒。
22.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述增殖性疾病是ras介导的增殖性疾病。
23.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒是哺乳动物呼肠孤病毒
24.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒是人类呼肠孤病毒。
25.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒选自由血清型1呼肠 孤病毒、血清型2呼肠孤病毒和血清型3呼肠孤病毒组成的组。
26.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒是血清型3呼肠孤病毒
27.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒是重组呼肠孤病毒。
28.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒是实地分离株。
29.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒是免疫保护的呼肠孤病毒。
30.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒是修饰的呼肠孤病毒
31.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒是化学修饰的呼肠孤病毒。
32.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒在向所述受治疗者施 用前经化学或生物化学处理。
33.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒含有突变的外壳蛋白。
34.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒被包封在脂质体或胶束中。
35.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒是重排的呼肠孤病毒
36.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒具有增强的溶瘤活性。
37.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中施用不止一种类型的呼肠孤病毒。
38.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中施用不止一种的呼肠孤病毒的毒株。
39.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒具有IDAC登录号 190907-01 ο
40.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒含有具有一个或多个 氨基酸修饰的λ 3多肽。
41.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述呼肠孤病毒含有包含一个或多个 核酸修饰的Ll基因组区段。
42.一种治疗受治疗者中增殖性疾病的方法，所述方法包括以下步骤a)向所述受治疗者施用溶瘤病毒；以及b)向所述受治疗者施用至少一种B-细胞调节剂，其中所述B-细胞调节剂选自由抗 B-细胞抗体、抗_细胞因子抗体和B-细胞的小分子选择性调节剂所组成的组。
43.一种试剂盒，其含有溶瘤病毒和B-细胞调节剂，其中所述B-细胞调节剂选自由抗 B-细胞抗体、抗_细胞因子抗体和B-细胞的小分子选择性调节剂所组成的组。
全文摘要
本文提供了治疗或改善受治疗者中增殖性疾病的方法。所述方法包括向受治疗者施用一剂量的免疫抑制剂，之后向受治疗者施用一剂量至五剂量的呼肠孤病毒的步骤。在呼肠孤病毒的施用前至少约72小时向受治疗者施用免疫抑制剂。本文还提供了用于治疗或改善受治疗者中增殖性疾病的方法，其包括向受治疗者施用溶瘤病毒和B-细胞调节剂的步骤。还提供的是含有溶瘤病毒和至少一种B-细胞调节剂的试剂盒和药物组合物。
文档编号A61K45/06GK101820892SQ200880110743
公开日2010年9月1日 申请日期2008年10月22日 优先权日2007年10月22日
发明者B·G·汤普逊, M·C·戈菲 申请人:昂科利蒂克斯生物科技公司