专利名称：用于炎症性肠疾病的预防剂或治疗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于炎症性肠疾病例如溃疡性结肠炎和节段性回肠炎的预防剂或治 疗剂。具体而言，本发明涉及用于预防或治疗炎症性肠疾病的药物组合物，所述药物组合 物包含7，8-二甲氧基-4(5!1)，10-二氧代-1!1-1，2，3-三唑并[4，5_c][l]苯并吖庚英、其 前体药物或它们的可药用盐或者2-(1_异丙氧基羰基氧基-2-甲基丙基)-7，8_ 二甲氧 基-4(5H)，10-二氧代-2H-1，2，3-三唑并[4，5_c][l]苯并吖庚英或其可药用盐。
背景技术：
炎症性肠疾病(在下文中有时称为“IBD”)表示特发的慢性持续型非特异性肠 炎，即，包括溃疡性结肠炎、节段性回肠炎(Koji Uraushibara, Mamoru Watanabe “炎症 性肠疾病的概念、定义和流行病学”；炎症性肠疾病，9-15页，2005，Norihumi Hibi编辑； Saishin-Igaku (参考文献1))的代表性疾病。认为IBD是由于一些病因瓦解了肠粘膜的免 疫机制而引起的对与肠内细菌群和细菌组分的过度反应、引起肠炎进展和持续化的疾病。 然而，还没有特定该疾病的病因。已知在作为IBD中包含的主要疾病的溃疡性结肠炎和节 段性回肠炎中，表现出如溃疡形成和出血的症状的活跃期和症状缓解或减轻的缓解期反复 出现，且认为这些疾病可以在10年至20年后复发。IBD的发病机制还没有完全阐明。过去虽然提出了变态反应和感染理论来解释发病机制，但现在将IBD解释为自 身免疫性疾病，通过抗嗜中性粒细胞IgG抗体的存在等支持自身免疫理论的报告在增 加(Hibi N.，Introduction Japanese J. Clin. Med. ,63(5) :741_743，2005(参考文献 2) ；Keiichi Mitsuyama, Makoto Toyonaga 和 Michio Sata，“炎症性肠疾病的病理学和 病理生理学”；Inf IammatoryBowel Diseases，2005 年，28-36 页，Norihumi Hibi 编辑； Saishin-Igaku (参考文献3))。另一方面，在1966年，Ishizaka等人已经证实作为变态反 应的原因的IgE抗体的存在，且证明了变态反应是由抗原特异的IgE抗体介导的组胺释放 反应(身体和变态反应的机制，1998 Shuichi Ueno, Nippon Jitsugyo出版(参考文献4)； 和Ishizaka K.，Ishizaka T和Hornbrook MM.人反应素抗体IV的物理化学性质存在独特 的免疫球蛋白作为反应素活性的载体，Journal of Immunology, 97 (1) :75_85，1966 (参考 文献5))。因此，在免疫学发病机制中，在还没有观察到抗原特异性IgE抗体产生的IBD中 变态反应理论被否定。也已经证实，在日本、美国和欧洲三个地区被共同地批准为组胺释放 抑制剂的色甘酸二钠(DSCG ；Akihide Koda，“抗过敏剂的历史和当前情况”，32-39页，1988，Terumasa Miyamoto, Hiroshi Baba 禾口 Minoru Okuda 编辑，Life Science 有限公司(参考 文献6))对IBD是无效的(Crotty B和Jewell DP.溃疡性结肠炎的药物治疗，Br. J. Clin. Pharmc. 34 (3) 189-198，1992 (参考文献 7) ；Binder V, Elsborg L, Greibe J, Hendriksen C，Hoj L, JensenKB, Kristensen Ε, Madsen JR, Marner B, Riis P 禾口 Willumsen L，治疗馈 疡性结肠炎和节段性回肠炎中的色甘酸二钠，22(1) :55-60，1981(参考文献8)；和Buckell NA, Gould SR, Day Dff, Lennard-Jones JE和Edwards AM，在慢性持续型溃疡性结肠炎中色 甘酸二钠的受控试验，Gut, 19(12) :1140-1143，1978 (参考文献9))。在这些情况下，现在一般认为，变态反应在临床和基础研究中均极少参与IBD的 发病机制。此外，最近已经报道，在IL-2敲除小鼠和IL-IO敲除小鼠中自发地形成类似于IBD 的炎症性肠炎(Ma A,Datta M, Margosian E，Chen K和Horak I，T细胞而不是B细胞对在 白介素-2缺陷的小鼠中的肠炎是必需的，J. Exp. Med. 182(5) 1567-1572，1995 (参考文献 10)；禾口 Kuhn R, Lohler J, Rennick D, Rajewsky K 和 Muller W，白介素-10 缺陷的小鼠发 展成慢性小肠结肠炎，Cell, 75 (2) :263_274，1993 (参考文献11))。通过缺失具有T细胞 增殖活性的IL-2或作为抑制性细胞因子已知的IL-IO而引起IBD类似的肠炎发病，该证据 表明了 T细胞介导的免疫反应的异常在显示疾病中的重要性。换言之，在正常肠中，通过增 殖和活化T细胞来预防肠炎的发病，其中所述T细胞对于尽管为非己物质的包括源自食物 的蛋白质和源自正常细菌群的异物，也抑制免疫应答。然而，认为由于一些原因瓦解了局 部肠粘膜中的某些免疫系统，这使对免疫应答本来受到抑制的异物如肠细菌群所产生的免 疫应答无法控制(Ohkusa T, Nomura T和Sato N.，细菌感染在炎症性肠疾病的发病机理中 的作用，InternationalMedicine, 43 (7) :534_539，2004 (参考文献 12)，因此导致了 IBD 的 形成。如上所述，一般认为以T细胞为中心的免疫异常强烈地参与IBD的发病机制(Tadao Baba，炎症性肠疾病，近期趋势，Matsushita MedicalJournal 39(1) :1_14，2000 (参考文献 13))。IBD的治疗目标在于诱导缓解(在活跃期缓和症状)和预防复发。然而在各个国 家中，治疗的准则还没有达到完全的一致，在日本、美国和英国的准则中，共同推荐的治疗 法是以下内容。即，取决于每一患者的疾病的类型、部位和严重程度，将5-氨基水杨酸(5-ASA)或 柳氮磺胺吡啶作为标准的治疗剂用于轻度到中度的患者的治疗。5-ASA是柳氮磺胺吡啶的 分解产物并认为是柳氮磺胺吡啶的活性物质。对于中度或重症患者，除了 5-ASA和柳氮磺 胺吡啶外，还施用类固醇的口服剂或直肠剂。在重症病例中，通过静脉内注射类固醇或免疫 抑制剂环孢菌素来诱导缓解。近年，也已经实施了用抗TNF-α抗体等的治疗。在诱导缓 解后，建议将5-ASA和柳氮磺胺吡啶用于预防复发。同时，建议将免疫抑制剂如硫唑嘌呤 (AZA)或6-巯基嘌呤(6-MP)用于复发的预防。然而，在中度和重症患者中，用于治疗IBD广泛使用的5-ASA和柳氮磺胺吡啶常常 显示出不足的治疗效果。在此类病例中，通过在重症患者中使用免疫抑制剂如类固醇或环 孢菌素来诱导缓解以控制主要由T细胞引起的异常反应，所述T细胞参与疾病的状况和严 重程度。大肠的手术切除运用于难治状态的患者，在所述患者中使用这些药剂诱导缓解是 困难的。已知如果用于预防复发的治疗在诱导缓解后即在消化道的炎症已经改善后没有进行，那么IBD在70%的患者中复发或再发作。因此，在准则中也建议通过继续针对复发的预 防性治疗来维持缓解状态(缓解的维持)。尽管建议施用5-ASA和柳氮磺胺吡啶用于缓解 的维持(防止复发)，但在用5-ASA和柳氮磺胺吡啶没有获得满意的效果的情况下，将使用 AZA或6-MP。然而，AZA和6-MP需要几个月才开始有作用，因此，它们的效力是留下的待解 决的问题。此外，治疗剂如类固醇、环孢菌素、AZA或6-MP显示出强的全身副作用，并因此限 制了它们的用途。举例来说，除了与免疫缺陷相关的副作用外，类固醇还抑制骨生成或生 长，特别是在青春期的患者中；环孢菌素引起肾脏疾病；AZA和6-MP引起流感样症状和严重 的副作用如骨髓抑制和肝病。此外，已经在用类固醇、环孢菌素、AZA和6-MP的动物实验中 报道了致畸性，并因此还没有建立在妊娠期和哺乳期中的安全性，这限制了向易于发生IBD 的10多岁后期到二十几岁的女性患者的施用。在上述的情况下，在治疗领域存在研发用于预防性治疗炎症性肠疾病的新的药物 的需求，所述新的药物能安全并强烈地诱导缓解并在维持疗法中也能长期使用。2-(1_异丙氧基羰基氧基-2-甲基丙基)-7，8_ 二甲氧基-4(5H)，10_ 二氧 代-2H-1，2，3-三唑并[4，5-c][l]苯并吖庚英(在下文中有时称为“化合物A”)和7，8_ 二 甲氧基-4(5H)，10-二氧代-1H-1，2，3-三唑并[4，5_c][l]苯并吖庚英(在下文中有时称 为“化合物B”)具有以下表示的结构(化合物A)(化合物B)已知化合物A是化合物B的前体药物，化合物A在身体中透过多种粘膜(包括消 化道)后快速地转化成化合物B，由此表现出组胺释放抑制作用(参见WO 95/18130 (JP 3，290, 664-B，USP 5，686，442))。也已经揭示，经口施用化合物A具有7倍于化合物B的改 善的吸收性(参见 W099/16770 (JP 3，188，482-B，USP 6，372，735))。
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然而，与变态性疾病的治疗剂和预防剂相关的这些文献都没有提供或教导与变态 性疾病没有关联的炎症性肠疾病(IBD)或其预防性方法或者治疗性方法。当然，在所述文 献的实施例中也没有发现相关的公开。发明概述本发明人现在意外地发现，化合物A和化合物B在预防和治疗炎症性肠疾病(IBD) 中是强烈有效的，且特别地，对于对常规治疗具有抗性的重症病例也显示出强的预防性和 治疗性效果。如上所述，在变态反应极少涉及的IBD发病机制的此类情况中，化合物A和化 合物B特别地显示出积极的对IBD的预防性和治疗性效果。已经意外地表明，不考虑如在 后面描述的实施例中也证实的化合物A和化合物B的抗变态反应活性，化合物A和化合物 B基于其它反应机制显示出积极的对IBD的预防性和治疗性效果。也已经证实，用于治疗 IBD的每一种药物至少具有一种以下活性对在大鼠中角叉菜胶诱发的炎症模型的效力； 抑制来自源于脾脏的白细胞的细胞因子的产生。特别地，熟知的事实是柳氮磺胺吡啶和类 固醇在角叉菜胶诱发的炎症模型中是有效的(Cronstein BN, Montesinos MC和Weissman G，Salitylates和柳氮磺胺吡啶，但不是糖皮质激素，通过不依赖于抑制前列腺素合成和 P105NF-kB的腺苷依赖机制来抑制白细胞积累，Proc. Natl. Acad. Sci.USA，5月25日， 1999，96 (11) 6377-6381 (参考文献14))，且类固醇和免疫抑制剂抑制来自免疫细胞如T细 胞的细胞因子的产生。另一方面，已经证实了化合物A或化合物B在角叉菜胶诱发的炎症 模型中是无效的，且对来自源于脾脏的T细胞的细胞因子的产生没有活性。换言之，目前已 经证实，通过化合物A和化合物B对IBD显示的有效的预防性和治疗性活性的机制与现有 的治疗剂的机制不同。目前，这些事实也由本发明人发现。此外，化合物A和化合物B具 有很少在常规的预防剂和治疗剂中观察到的副作用，且认为对预防和治疗IBD是非常有用 的。本发明基于这些发现。因此，本发明的目的是提供用于炎症性肠疾病的新的预防剂和治疗剂，所述新的 预防剂和治疗剂对预防和治疗炎症性肠疾病是有效的且具有少的副作用。根据本发明的用于预防或治疗炎症性肠疾病(IBD)的药物组合物包含7，8_ 二甲 氧基-4 (5H)，10- 二氧代-IH-1,2,3-三唑并[4，5-c] [1]苯并吖庚英(化合物B)、其前体药 物或它们的可药用盐。另外，根据本发明的用于预防或治疗炎症性肠疾病(IBD)的药物组合物包含 2_ (1-异丙氧基羰基氧基-2-甲基丙基)-7，8- 二甲氧基-4 (5H)，10- 二氧代-2H-1，2，3-三 唑并[4，5-c] [1]苯并吖庚英(化合物A)或其可药用盐。根据本发明的一个优选的实施方案，用于预防或治疗炎症性肠疾病(IBD)的药物 组合物是经口施用的。根据本发明的另一优选的实施方案，药物组合物进一步包含可药用载体。根据本发明的一个优选的实施方案，在用于预防或治疗IBD的药物组合物中的术 语“预防”意为预防炎症性肠疾病的复发。根据本发明进一步优选的实施方案，在药物组合物中，炎症性肠疾病是溃疡性结 肠炎或节段性回肠炎。根据本发明的用于预防或治疗炎症性肠疾病(IBD)的方法包括向哺乳动物施用 预防或治疗有效量的7，8-二甲氧基-4 (5H)，10-二氧代-1H-1，2，3-三唑并[4，5_c][l]苯并吖庚英、其前体药物或它们的可药用盐。根据本发明的另一优选的实施方案，方法包括向哺乳动物施用预防或治疗有效量 的2- (1-异丙氧基羰基氧基-2-甲基丙基)-7，8- 二甲氧基-4 (5H)，10- 二氧代-2H-1，2， 3-三唑并[4，5-c][l]苯并吖庚英或其可药用盐。此外，根据本发明，提供了 7，8- 二甲氧基-4 (5H)，10- 二氧代-1H-1，2，3_三唑并 [4，5-c][l]苯并吖庚英、其前体药物或它们的可药用盐在制备用于炎症性肠疾病(IBD)的 预防剂或治疗剂中的用途。根据本发明进一步另外优选的实施方案，提供了 2-(1-异丙氧基羰基氧基-2-甲 基丙基)-7，8_ 二甲氧基-4(5H)，10-二氧代-2H-1，2，3-三唑并[4,5-c] [1]苯并吖庚英或 其可药用盐在制备用于炎症性肠疾病(IBD)的预防剂或治疗剂中的用途。此外，换而言之，能够说本发明提供了(1)用于炎症性肠疾病的预防剂或治疗剂，所述预防剂或治疗剂包含2-(1_异丙 氧基羰基氧基-2-甲基丙基)-7，8- 二甲氧基-4 (5H)，10- 二氧代-2H-1，2，3-三唑并[4， 5-c] [1]苯并吖庚英或其可药用盐；和(2)用于炎症性肠疾病的预防剂或治疗剂，所述预防剂或治疗剂包含7，8_ 二甲氧 基-4(5H)，10-二氧代-1H-1，2，3-三唑并[4,5-c] [1]苯并吖庚英或其可药用盐。根据本发明，可以获得具有少的副作用且也对于对常规治疗具有抗性的重症病例 显示出强的预防性和治疗性效果的针对炎症性肠疾病的预防性或治疗性药物组合物。另外，可以说本发明的“产业上的可利用性”在于能提供有效的预防和治疗炎症性 肠疾病的且具有少的副作用的有用药物。附图简述
图1显示在实施例的试验例4中，通过DSS处置，各药剂对大肠的缩短的治疗效果 的实验结果(图中，### 相对于未用DSS处置组P < 0. 005 (Student t检验)，* * 相对 于溶剂处理组P < 0. 01 (Dunnett的多重比较检验))。图2显示在实施例的试验例4中，各药剂对直肠重量增加的治疗效果的实验结果 (图中，### :相对于无处置组P < 0.005 (Student t检验)，* * * 相对于溶剂处理组P
<0. 05 (Dunnett的多重比较检验))图3显示在实施例的试验例4中，各药剂对粪便得分恶化的治疗效果的实验结果 (图中，### :相对于无处置组P < 0.005 (Student t检验)，* * * 相对于溶剂处理组P
<0. 005 (Steel的多重比较检验))。图4显示在实施例的试验例4中，各药剂对宏观观察得分恶化的治疗效果的实验 结果(## 相对于无处置组P < 0. 01，* * 相对于溶剂处理组P < 0. 01 (Mann-Whitney的 U检验))。发明详述有效成分本发明中的有效成分7，8-二甲氧基-4 (5H)，10-二氧代-1H-1，2，3-三唑并[4， 5-c] [1]苯并吖庚英(化合物B)是熟知的化合物，且可以根据W095/18130中与用于制备化 合物的方法相关的部分和实施例43中所描述的方法来获得。本发明中的有效成分可以是化合物B的前体药物或所述化合物或者其前体药物的可药用盐。在本文中，化合物B的前体药物是化合物B的1，2，3-三唑基经修饰的类型， 并且可以根据WO 99/16770中描述的方法来制备。本发明中的有效成分2-(1_异丙氧基羰基氧基-2-甲基丙基)-7，8_ 二甲氧 基-4(5H)，10-二氧代-2H-1，2，3-三唑并[4，5_c][l]苯并吖庚英(化合物A)是熟知的化 合物，且可以例如根据WO 95/18130中与用于制备化合物的方法相关的部分和实施例20中 所描述的方法来获得。在本发明中，作为有效成分的化合物A或化合物B可以转化成它们的可药用盐，且 此类盐可以用作为有效成分。化合物A和化合物B的可药用盐包括医药上可接受的无毒 盐。此类无毒盐优选地包括碱金属盐或碱土金属盐如钠盐、钾盐和钙盐；氢商酸盐如氢氟酸 盐、盐酸盐、氢溴酸盐和氢碘酸盐；无机酸盐如硝酸盐、高氯酸盐、硫酸盐和磷酸盐；有机酸 盐如甲磺酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、草酸盐和马来酸盐；和氨基酸盐 如谷氨酸盐和天冬氨酸盐。药物组合物已知在本发明中的作为有效成分的化合物A和化合物B具有如上所述的抗变态反
应活性。然而，本文证实了(i)这些化合物对来自认为是炎症性肠疾病(IBD)成因的中心的T细胞的细胞因 子产生反应不具有直接的抑制效果(试验例8)，和(ii)化合物A在能够敏感地检测到非类固醇抗炎症剂(如吲哚美辛 (indomethacin))、柳氮磺胺吡啶、类固醇的有效性的角叉菜胶诱发的炎症模型中是无效的 (试验例2)。此外，如上所述，代表性的抗变态反应剂DSCG在IBD中是无效的。就本发明人已 知而言，还没有批准用具有DSCG类似的组胺释放抑制作用的抗变态反应剂或用组胺受体 的拮抗剂来用于治疗IBD的例子。这些事项可能表明，化合物A和化合物B与已知的IBD治疗剂的反应机制缺少联 系，且即使这些化合物具有抗变态反应活性，但这些化合物缺乏非特异性抗炎症作用。如上 所述，也已知对IBD的预防性和治疗性效果与变态反应具有最少的联系。可以说，在此类情 况下，对本领域技术人员而言，预期和期望化合物A和化合物B对IBD发挥有效的预防性或 治疗性效果本质上是非常困难的。因此，认为在本发明中目前发现的化合物A和化合物B 对IBD的预防性和治疗性效果是意外的，所述效果是化合物A和化合物B的特征性功能。如将在实施例中所述，已经证实，当将为本发明中的有效成分之一的化合物A预 防性经口施用给作为IBD模型广泛使用的用葡聚糖硫酸酯钠(DSS)诱发的IBD模型大鼠 时，直肠中溃疡的面积比用作为常规治疗剂临床配制的柳氮磺胺吡啶治疗中的面积更大量 的减少。化合物A也显示出与类固醇(氢化泼尼松)相同或更好的效果，且无任一副作用。 另一方面，在氢化泼尼松治疗组中观察到了作为副作用的显著的体重增加抑制作用(试验 例3)。换而言之，已经证实，化合物A具有针对IBD的实际上的预防效果。IBD模型是相当于中度至重度疾病的动物模型，且其中只有柳氮磺胺吡啶显示出 非常轻微的抑制趋势。这与临床结果较好地一致。此外，当制备了 DSS诱发的慢性IBD模型，并分别用化合物A或化合物B经口施用
8时，对IBD的治疗效果和剂量依赖反应得到了确切地证实(试验例4)。即，如在试验例4中 所示，在施用DSS 3天后施用化合物A或化合物B的情况下，在施用化合物A中，病理学条件 受到了显著地和剂量依赖地抑制，且在施用化合物B中，病理学条件受到了等同于化合物A 的显著地抑制(试验例5)。另外，在相同的条件下施用作为免疫抑制剂的环孢菌素时，强烈 抑制体重增加并导致了全部症状的恶化，但是在用5-ASA治疗中没有获得治疗效果。这些 结果强烈地表明化合物A和化合物B可以是针对IBD的安全和强效的经口治疗剂。除了 DSS诱发的模型外，作为IBD的病理学模型，也广泛使用的是2，4，6_三硝基 苯磺酸(TNBS)诱发的模型。当在TNBS诱发的IBD模型中检查化合物A的治疗效果和剂量 依赖反应时，在TNBS处理两天后施用化合物A，剂量依赖地改善了结肠溃疡得分(试验例 6)。然而，在用作为阳性对照化合物的氢化泼尼松的治疗中观察到了显著的(P <0.01)体 重增加的抑制(副反应)，在化合物A施用组中没有观察到此种抑制。此外，已经证实了在本发明中所用的化合物A和化合物B具有高的安全性，因为在 连续26周反复地经口施用化合物中没有观察到异常情况(试验例7)。因此，优选地通过经口施用，本发明中的有效成分对炎症性肠疾病(IBD)发挥了 极好的预防性或治疗性效果。所以，根据本发明，提供了针对IBD的预防性或治疗性药物组 合物，所述预防性或治疗性药物组合物包含化合物B、其前体药物或它们的可药用盐或者化 合物A或其可药用盐。在此处的术语“炎症性肠疾病(IBD) ”指特发的慢性持续型的非特异性肠炎，即，代 表性疾病例如溃疡性结肠炎和节段性回肠炎。因此，根据临床的一般分类，术语IBD不包括 传染性肠炎、由抗生素引起的伪膜性肠炎、缺血性肠炎或伴随通常的变态反应的肠炎或消 化性溃疡。因此，根据本发明优选的实施方案，炎症性肠疾病是溃疡性结肠炎或节段性回肠 炎。在此处的术语“预防”意为在哺乳动物，特别是人类中完全地或部分地防止炎症性 肠疾病或其症状，并包括例如预防或抑制在以前已经患有过和治疗过的患者中的炎症性肠 疾病的复发。此外，在此处的术语“治疗”意为在哺乳动物，特别是人类中完全地或部分地治愈 炎症性肠疾病或其症状或者还有由此引起的不利影响。举例来说，术语“治疗”可以包括抑 制疾病症状，即，抑制或延迟发展、改善疾病症状，即，消退疾病或症状或者逆转症状发展。根据本发明的预防或治疗用药物组合物可以经口地或肠胃外地(例如，通过经静 脉内地、经肌内地、经直肠地和经皮肤地)施用，并可以以适合于在人类和除了人类的哺乳 动物中经口地或肠胃外地地施用的多种剂量形式使用。举例来说，本发明的组合物可以根据其应用以任意一种制剂形式包括经口剂如片 齐U、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、丸剂、细粒剂、锭剂、糖浆剂和乳剂；注射剂如静脉内的和肌内的 注射剂；直肠施用剂、油脂性栓剂、水溶性栓剂、涂布剂如软膏等来制备。这些制剂可以通过 用通常使用的可药用载体如赋形剂、充填剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、 分散剂、缓冲剂、PH调节剂、保存剂、螯合剂、溶解助剂、防腐剂、矫味矫臭剂、无痛化剂、稳定 剂等的常规方法来制备。可用的无毒添加剂包括，例如乳糖、果糖、葡萄糖、淀粉、明胶、碳 酸镁、合成硅酸镁、滑石粉、硬脂酸镁、甲基纤维素、羧甲基纤维素或其盐、羟丙基甲基纤维 素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸或其盐、阿拉伯树胶、橄榄油、丙二醇、聚乙二醇、糖浆、矿脂、甘油、乙醇、柠檬酸、氯化钠、亚硫酸钠、磷酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、酒石酸 盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、磷酸钠、氢氧化钠、氢氧化铵、盐酸、乙酸、磷酸、苯扎氯铵、苄索氯 铵、对羟基苯甲酸酯如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸乙酯等。根据本发明的药物组合物的剂量可以基于其中所含有的有效成分来合适地改变， 并将有效成分的预防性或治疗性有效量施用给患者以预防或治疗作为目标的炎症性肠疾 病。在本文中，术语“预防性或治疗性有效量”指用于对患者中的目标炎症性肠疾病发 挥预防性或治疗性效果所需的量，且通常可以鉴于患者的年龄、体重和性别、疾病、症状的 水平等来个别地确定。当在本发明中使用化合物A时，化合物A在药物组合物中的含量可以根据其剂量 形式进行变化，并且一般地为全组合物中占重量1 %至70 %的浓度，优选地是占重量5 %至 30%的浓度。用于制备药物组合物的特定的方法显示于随后的制造例中。用于预防和治疗 IBD的施用剂量鉴于用法、患者的年龄、性别、症状的程度等来合适地确定，并且一般地对于 成年人，以每天大约0. Img至2000mg的范围，优选地是大约IOmg至lOOOmg，更优选地是大 约25mg至500mg，其可以每天一次或几次地施用。当使用化合物B的时候，化合物B在药物组合物中的含量可以根据其剂量形式进 行变化，并且一般地为全组合物中占重量1 %至70 %的浓度，优选地是占重量5 %至30 % 的浓度。用于制备药物组合物的特定的方法显示于随后的制造例中。用于预防和治疗IBD 的施用剂量鉴于用法、患者的年龄、性别、症状的程度等来合适地确定，并且一般地对于成 年人，以每天大约0. Img至2000mg的范围，优选地是大约IOmg至lOOOmg，更优选地是大约 25mg至500mg，其可以每天一次或几次地施用。
实施例本发明将通过以下并不意为限制本发明的实施例来进一步说明。试验例1 用于转化化合物A成化合物B的测试在禁食条件下，将8周龄的雄性Wistar大鼠(购自日本SLC有限公司)用14C标 记的化合物A以lmg/kg的剂量经口施用，并用Radio-HPLC法分析血浆、尿液和胆汁中化合 物B的量。结果，在经口施用化合物A后15分钟，在血浆中没有检测到化合物A，但是检测到 了作为主要代谢物的化合物B。另外，在施用化合物A后24小时收集的尿液中没有检测到 化合物A，但是检测到了作为主要代谢物的化合物B。此外，在施用化合物A后8小时收集 的胆汁中没有检测到化合物A，但是检测到了作为主要代谢物的化合物B。由上述的结果证实，当将化合物A吸收入身体时，几乎所有的化合物A都代谢成了 化合物B。i式验例2 化合4勿A禾P引卩朵(寸通丄寸角叉菜胶在大薩,足祉树秀发乍用对7周龄的雄性Wistar大鼠(购自日本SLC有限公司)的右后肢足趾皮下地注 射0. Iml的λ -角叉菜胶以引起足趾浮肿反应(η = 5)。在施用角叉菜胶前15分钟和 60分钟，分别将化合物A以lmg/kg至25mg/kg的剂量和吲哚美辛以5mg/kg的剂量经口施用。
在施用角叉菜胶后3小时，当足趾浮肿反应达到最大时，由右后肢足趾浮肿体积 来评价有效性。获得的结果如表1中所示。从结果中发现，任一剂量的化合物A没有显示出抑制效果，但是吲哚美辛显示出 了显著的(P <0.01)抑制效果。表 1化合物A和吲哚美辛对角叉菜胶诱发的大鼠中足趾浮肿的作用 平均值士 SE * * 相对于对照组P < 0. 01试骀例3 在3%葡聚糖硫酸酯钠(DSS)诱发的大鼠IBD急件樽型中的有效件的评 价(预防效果)3%葡聚糖硫酸酯钠(DSS)诱发的IBD模型是最有用的IBD模型之一。允许7周龄的雄性Wistar大鼠(购自日本SLC有限公司)自由饮用3% DSS溶 液来诱发IBD(n = 8)。在开始DSS施用后7天期间，根据以下基准观察软便得分和血便得 分，并且将软便得分和血便得分的总和获得为单个动物的粪便得分。判断基准■软便得分(0至3)
■血便得分(0至3)
在DSS暴露后8天，每只大鼠静脉内注射Iml量的1 %伊文思蓝生理盐水，30分钟 后将动物安乐死，摘出大肠。在用4%福尔马林缓冲液固定从肛门起7cm至8cm长度的大肠20分钟后，将肠从肠系膜侧纵切开用于为直肠部分拍照。通过图像分析来计算溃疡面积。将化合物A (10mg/kg/天)或者作为对照化合物的柳氮磺胺吡啶(100mg/kg/天) 或氢化泼尼松(lmg/kg/天)在玛瑙研钵中制成悬浮液，从施用DSS前一天开始到解剖前一 天，将它们以1日2次，每次5ml/kg的剂量经口施用给每一只大鼠。在本文中，将羟丙 基甲基纤维素溶液(HPMC)用作溶剂，将其以5ml/kg的剂量施用给溶剂处理组。获得的结果如表2和表3所示。特别地，表2显示了在每一处理组的IBD模型中，对粪便得分(平均值士标准误 差)的有效性(抑制率)的结果，并且表3显示了在每一处理组的IBD模型中，溃疡面积的 结果(平均值士标准误差)和其缩小效果(抑制率)。^t 2在DSS诱发的IBD模型中的溃疡面积缩小效果(抑制率) 女相对于溶剂处理组P < 0. 05在DSS诱发的IBD模型中对粪便得分的有效性(抑制率) Umn 4 化合物A ^h DSS i秀发的大鼠IBD ‘障t牛1草型中的有效件的评价(治疗效
在DSS诱发的模型中检查后施用化合物A的治疗效果。允许7周龄的雄性Wistar大鼠(购自日本SLC有限公司)自由饮用3%DSS溶 液3天来诱发结肠炎，并随后从测试的第四天开始，允许自由饮用1 % DSS溶液来诱发慢性 IBD。从测试的第四天开始直到解剖当天，将化合物A(2mg/kg/天，20mg/kg/天)、作为 对照的5-氨基水杨酸(5-ASA :200mg/kg/天)和环孢菌素A(CyA :25mg/kg/天)施用给动 物(η = 8 至 20)。观察单个动物中粪便的特性直到解剖前一日，并根据显示于试验例3中的相同基 准来确定软便得分和血便得分，以获得软便得分和血便得分的总和作为粪便得分。另外，在解剖当天，每只大鼠静脉内注射Iml量的伊文思蓝生理盐水，30分钟 后将动物安乐死，摘出大肠。测定从肛门至盲肠的大肠长度后，用4%福尔马林缓冲液固定 20分钟后，将肠从肠系膜侧纵切开用于为直肠部分拍照并测量直肠重量。根据以下用于宏 观观察得分的基准对直肠部分的糜烂状态和扩大进行评分。判断基准宏观观察得分(0-5)
获得的结果如图1、2、3和4中所示。特别地，图1显示了分别的药物对由于用DSS处置的大肠的缩短的治疗效果的测 试结果，图2显示了分别的药物对直肠重量增加的治疗效果的测试结果，图3显示了分别的 药物对在解剖前一日粪便得分的恶化的治疗效果的测试结果，和图4以平均值士标准误 差，分别显示了分别的药物对宏观观察得分的增加的治疗效果的测试结果。从这些结果中已经证实，通过施用化合物 (20mg/kg/天)显示出了对在溶剂处理 组中观察到的大肠的缩短的显著(P < 0.01)改善效果(图1)，且通过施用化合物A(2mg/ kg/天，20mg/kg/天)显示出了对在溶剂处理组中观察到的直肠重量的显著增加具有显著 (P < 0. 005，P < 0. 05)改善效果(图 2)此外，通过施用化合物A(2mg/kg/天，20mg/kg/天)已经证实了对在解剖前一日的 粪便得分的显著(P < 0. 005)改善效果(图3)。此外，在用类别检验(category test) (U检验)和二值化检验(Fisher检验)评 价宏观观察得分的结果，认为在化合物A(20mg/kg/天)处理组中观察到了显著的改善效果 (P = 0. 0006 类别检验，P = 0. 0003 二值化检验)，且在2mg/kg处理组中观察到了抑制趋 势(P = 0. 0509 类别检验，P = O. 1161 二值化检验)(图4)。由上述的结果已经证实，化合物A在慢性IBD模型中具有剂量依赖的治疗效果。另 一方面，在使用免疫抑制剂CyA和抗炎剂5-ASA的任一评价项目中没有观察到显著的抑制 效果。
itmm 5 :i平价化合物B ^h DSS i秀发的大鼠IBD ‘障t牛1草型中的有效件(治疗效果 的判断)除将化合物A用化合物B(20mg/kg/天)替代外，以与试验例4中相同的方式研究 经口施用化合物B的治疗效果(η = 12)。结果，溶剂处理组中，尽管在解剖前一日的粪便得分显著地(P < 0. 01)增加到了 1. 9士0. 25，但在化合物B处理组中观察到了为0. 9士0. 24的显著的(P < 0. 05)抑制且在 宏观观察得分中也观察到了抑制效果。i式I· 6 石肖;Sag石黄· (TNBS) iH^t^^lf, IBD Φ 白句*豸十牛^li利介 效果)TNBS诱发的模型作为IBD的动物模型广泛地使用为节段性回肠炎的模型。因此， 将TNBS诱发的模型大鼠用于检查化合物A的治疗效果。将8周龄的雄性SD大鼠(购自Charles River Laboratories日本，有限公司) 用TNBS经直肠地施用以诱发肠炎，并在用TNBS处理2天后分组以开始药物的施用。将溶 剂、化合物A(2mg/kg/天，20mg/kg/天，50mg/kg/天)或氢化泼尼松(6mg/kg/天)一天两 次经口施用，并在施用后8天，将大鼠进行尸体解剖以确定宏观观察得分。得分的评价通过 描述于表 4 中的基于 JOHN L.WALLACE 等人(Gastroenterology 1989 ；96 :29_36)的判断方 法的方法来实行。此外，将大肠切成IOcm的长度用于测量肠管的湿重。得分评价的结果显示于表5 中，且测量的湿重的结果显示于表6中。由这些结果，在溶剂处理组中观察到了宏观观察得分的显著增加和大肠湿重的增 加。相反，在化合物A(50mg/kg)处理组中观察到了显著的(P < 0. 05)得分改善和大肠湿重 改善的趋势。另外，在低剂量(2mg/kg，10mg/kg)组中，观察到了改善的得分的趋势。另一 方面，在作为阳性对照的氢化泼尼松处理组中观察到了体重增加的显著抑制(P < 0. 01)。 另外，在化合物A处理组中没有观察到体重增加的显著抑制。表 4
得分判断基准0无局部充血、无出血、无溃疡1局部充血、出血、无溃疡2不伴随充血的溃疡或肠壁的肥厚3伴随炎症的溃疡(1个部位)42个或多个部位的溃疡、炎症或地图状溃疡(溃疡宽度小于 Icm)52个或多个部位的溃疡、炎症或地图状溃疡(溃疡宽度1cm或更宽)6对于肠管，对纵向上超过2cm的溃疡每Icm加1分对横向上每超过Icm的溃疡加1分
在TNBS诱发的IBD模型中对结肠的溃疡得分的影响 ## =P < 0. 01 ；通过Mann-Whitney检验，未处理组相对于溶剂处理组=P < 0. 05 ；通过Steel检验，溶剂处理组相对于化合物A处理组b =P < 0. 05 ；通过Marm-Whitney检验，溶剂处理组相对于氢化泼尼松处理组戲在TNBS诱发的IBD模型中对大肠湿重的效果 ## =P < 0. 01 ；通过Mann-Whitney检验，未处理组相对于溶剂处理组bb =P < 0. 01 ；通过Student t检验，溶剂处理组相对于氢化泼尼松处理组试验例7 在大鼠中化合物A的26周反复地经口施用研究(安全性测试)
向6周龄雄性和雌性SD大鼠(购自Charles River Laboratories日本，有限公 司)经口地并反复地施用溶剂(羟甲基纤维素)或化合物A(100mg/kg/天，300mg/kg/天， 1000mg/kg/ 天)连续 26 周(η = 15)。结果，在任一剂量组中没有观察到动物在一般状态、体重改变、食品消耗和组织病 理学上的异常。已经从这些结果中判断，化合物A的无毒性量是1000mg/kg/天或以上。试验例8 对用化合物B活化T细胞的盲接作用的研究在第1天和第14天，将7周龄雄性Balb/c小鼠(购自日本SLC有限公司)用氢氧 化铝胶化卵清蛋白悬浮液腹腔地或皮下地施用于两腹股沟区域来进行敏化，并在第21天 将脾脏摘出用于制备脾脏细胞悬浮液。在去除红细胞后，向在培养基中悬浮的脾脏细胞加 入化合物B (10 μ Μ)和卵清蛋白，并将混合物在5% CO2的条件下，37°C进行培养。将培养6小时后上清液中的IL-4和培养24小时后上清液中的IL_2、IL-5和IFN γ 通过ELISA(由END0GEN生产的ELISA试剂盒)进行定量地确定。结果，虽然IL-4、IL-2、IL-5和IFN γ在对照组中都增加了，但是化合物B没有抑 制这些因子的产生。此时，氢化泼尼松几乎完全抑制了 IL-2、IL-5和IFN Y，但没有抑制 IL-4。由以上的结果认为，含有作为有效成分的化合物A和化合物B的药物组合物对IBD 比柳氮磺胺吡啶或5-ASA实际上更有效，并具有与氢化泼尼松相等或更高的效力。此外，认 为包含作为有效成分的化合物A和化合物B的经口药物不仅具有预防效果，还能期望地具 有治疗效果。也认为，由于体重增加在氢化泼尼松处理组和环孢菌素处理组中明显地受到 抑制，并且在化合物A和化合物B处理组中没有观察到副作用如体重增加的抑制，所以包含 作为有效成分的化合物A和化合物B的经口药物具有高的安全性。泡丨造仿1丨针)(寸炎症+牛肠疾病的预KT丨牛或治疗+牛組合4勿的泡丨齐I丨例本发明的用于预防或治疗炎症性肠疾病的药物组合物的制剂的制造例和用于制 备组合物的配方显示如下。制造例1 片剂
表7
化合物A2. 5g
羟丙甲纤维素0. 5g
乳糖11. 5g
6% HPC乳糖8g
马铃薯淀粉2g
硬脂酸错0. 5r
总^^25g
制造例2 胶囊剂
表8
化合物A2. 5g
羟丙甲纤维素0. 5g
乳糖17. 5g
马铃薯淀粉4g
硬脂酸镁0. 5g
总^^25g
制诰例3 灌肠剂
表9
化合物B1. Omg/ml
三(羟甲基)氨基甲烷1. 2mg/ml
羟甲基纤维素钠15mg/ml
盐酸縣
PH7. O
权利要求
用于预防或治疗炎症性肠疾病(IBD)的药物组合物，所述药物组合物包含7，8 二甲氧基 4(5H)，10 二氧代 1H 1，2，3 三唑并[4，5 c][1]苯并吖庚英、其前体药物或它们的可药用盐。
2.根据权利要求1的药物组合物，所述药物组合物包含作为前体药物的2-(1_异丙氧 基羰基氧基-2-甲基丙基)_7，8- 二甲氧基-4 (5H)，10- 二氧代-2H-1,2,3-三唑并[4，5-c] [1]苯并吖庚英或其可药用盐。
3.根据权利要求1或2的药物组合物，所述药物组合物是经口施用的。
4.根据权利要求1至3任一项所述的药物组合物，所述药物组合物进一步包含可药用 载体。
5.根据权利要求1至4任一项所述的药物组合物，其中所述预防意指抑制炎症性肠疾 病的复发。
6.根据权利要求1至4任一项所述的药物组合物，其中所述炎症性肠疾病是溃疡性结 肠炎或节段性回肠炎。
7.用于预防或治疗炎症性肠疾病(IBD)的方法，所述方法包括向哺乳动物施用预防或 治疗有效量的7，8-二甲氧基-4 (5H)，10-二氧代-1H-1，2，3-三唑并[4, 5-c] [1]苯并吖庚 英、其前体药物或它们的可药用盐。
8.根据权利要求7的方法，其中施用的所述化合物是2-(1-异丙氧基羰基氧基-2-甲 基丙基)-7，8_ 二甲氧基-4(5H)，10-二氧代-2H-1，2，3-三唑并[4, 5-c] [1]苯并吖庚英或 其可药用盐。
9.根据权利要求7或8的方法，其中所述施用是经口施用。
10.根据权利要求7至9任一项所述的方法，所述方法包括施用有效量的化合物和可药 用载体。
11.根据权利要求7至10任一项所述的方法，其中所述预防意指抑制炎症性肠疾病的复发。
12.根据权利要求7至11任一项所述的方法，其中所述炎症性肠疾病是溃疡性结肠炎 或节段性回肠炎。
13.7,8- 二甲氧基4 (5H)，10- 二氧代-1H-1，2，3-三唑并[4，5-c] [1]苯并吖庚英、其前 体药物或它们的可药用盐在制备用于炎症性肠疾病(IBD)的预防剂或治疗剂中的用途。
14.根据权利要求13的用途，其中所述化合物是2-(1_异丙氧基羰基氧基-2-甲基丙 基)-7，8_ 二甲氧基-4(5H)，10-二氧代-2H-1，2，3-三唑并[4，5_c][l]苯并吖庚英或其可 药用盐。
15.根据权利要求13或14的用途，其中所述预防剂或治疗剂用于经口施用。
16.根据权利要求13至15任一项所述的用途，其中预防剂或治疗剂进一步包含可药用 载体。
17.根据权利要求13至16任一项所述的用途，其中所述预防意指抑制炎症性肠疾病的复发。
18.根据权利要求13至17任一项所述的用途，其中所述炎症性肠疾病是溃疡性结肠炎 或节段性回肠炎。
全文摘要
本发明涉及用于预防或治疗炎症性肠疾病的药物组合物，所述药物组合物包含7，8-二甲氧基-4(5H)，10-二氧代-1H-1，2，3-三唑并[4，5-c][1]苯并吖庚英、其前体药物、优选地包含作为前体药物的2-(1-异丙氧基羰基氧基-2-甲基丙基)-7，8-二甲氧基-4(5H)，10-二氧代-2H-1，2，3-三唑并[4，5-c][1]苯并吖庚英、或者它们的可药用盐。根据本发明的药物组合物在炎症性肠疾病的预防和治疗中是有效的，且具有少的副作用。特别地，根据本发明的药物组合物可以对于对常规治疗药具有抗性的重症病例显示出强的预防效果和治疗效果。
文档编号A61K31/55GK101903027SQ20088012159
公开日2010年12月1日 申请日期2008年12月17日 优先权日2007年12月18日
发明者二宫智尚, 宍仓孝, 打田光宏, 星名由佳利, 河野贤一, 高畑祥 申请人:明治制果株式会社