专利名称：：知母中菝葜皂苷元及其衍生物的制备方法及其医药新用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于医药
技术领域：
，涉及知母中菝葜皂苷元及其衍生物的制备方法，同时涉及菝葜皂苷元衍生物的医药新用途。
背景技术：
：.，中药知母为百合禾斗(Z^7/aceae)植物知母(yiw，"/T/ze/7a"5p/2cxie/0/Jes)的干燥根茎，其异名有蜋母、连母、野蓼、地参、水参、水浚、货母、媞母(《本经》)，芪母(《广雅》)，提母(《范子计然》)，女雷、女理、儿草、鹿列、韭逢、儿踵草、东根、水须、苦心(《别录》)，昌支((唐本草》)，穿地龙(《山东中药》)。知母具有清热泻火、生津润燥之功效，可治疗烦热消渴，骨蒸劳热，肺热咳嗽，大便燥结，小便不利。可用于温热病，邪热亢盛、壮热、烦渴、脉洪大等肺胃实热证，为中药常用的滋阴药之一。知母药材虽为单一品种，但分布较广，广泛分布于华北、东北、西北地区。知母化学成份已知知母中含有甾体皂苷、黄酮、木脂素、生物碱、多糖、甾醇和脂肪油等，其中皂苷为其主要成分。国内外各学者研究发现知母总皂苷及其苷元有很多药理活性，其中包括老年性痴呆，抗抑郁，抗病毒，降血糖等。同时知母皂苷元又是其中的大量成分，对其衍生物的研究有很重要的意义。近年来并没有见报道对其中药知母中菝葜皂苷元高纯度的提取工艺研究，虽有些研究提取工艺的报道，但并不能进行大规模工业生产。也未见其衍生物的制备方法和其医药用途的相关报道。
发明内容本发明的一个目的在于提供知母中菝葜皂苷元及其衍生物的制备方法。本发明的另一个目的在于提供菝葜皂苷元衍生物的医药新用途。本发明是通过如下方案实现的一.知母中高纯度的菝葜皂苷元的制备方法具体步骤如下A.知母药材分别按a-d所述方法浸泡和提取(a)按知母药材于20-80%的乙醇的重量份数比例1:4~1:6向知母药材中加入乙醇，常温浸泡12-24小时，然后加热至沸腾，保持沸腾l-4小时，之后滤渣取液。(b)按所述知母药材于20-80%的乙醇的重量份数比例1:61:8向知母药材中加入乙醇，常温浸泡12-24小时，然后加热至沸腾，保持沸腾l-4小时，之后滤渣取液。(c)按所述知母药材于20-80%的乙醇的重量份数比例1:81:IO向知母药材中加入乙醇，常温浸泡12-24小时，然后加热至沸腾，保持沸腾1-4小时，之后滤渣取液。(d)按所述知母药材于水中的重量份数比例1:6~1:10向知母药材中加入水，常温浸泡12-24小时，然后加热至沸腾，保持沸腾l-4小时，之后滤渣取液。B.药液浓缩将分别通过上述操作的提取液混合一起后，减压浓缩，直至不再有乙醇流出或无醇味为止。C吸附洗脱使浓缩过的液体通过经过活化的极性或非极性大孔吸附树脂柱，使液体中的皂苷吸附到树脂上，并弃去流出液，再用水清洗树脂柱子，直至流出液颜色变浅，并弃出流出液，继用20%-90%的乙醇清洗树脂柱，直到树脂柱子上的皂苷全部被洗脱下来为止，并收集洗脱液。D.水解按洗脱液的重量份数与矿酸(如盐酸、硫酸等)的比例为10:1-1:1，向洗脱液中加入酸，然后加热至沸腾，保持沸腾1-4小时，取出放凉，抽滤得固体物，将其放干，待用。E.重结晶将无水乙醇与氯仿或二氯甲烷等非极性溶剂(两溶剂比例任意)的混合液加入至上述固体中，使其全部溶解，让其自然析出晶体，抽滤得出晶体，按其同样方法多次重结晶，最后得到白色晶体。mpl94195。C,Molish反应阳性，Liebermann-Burchard反应阳性。13C-NMR(300Hz,CDC13)数据如下(C-8),40.1(C-9)，35.5(C-10)，21.4(C-ll),40.1(C-12)，40.2(C-13),56.6((Ll4),32.2(C-15)，81.2(C-16),63.2(C-17)，16.6(C-18),24.2(C-19)，42.5(C-20),14.9(C-21)，F.干燥样品将样品在减压条件下加热干燥。所述的乙醇为工业乙醇。二.菝葜皂苷元的衍生物的制备方法:菝葜皂苷元衍生物的结构通式如下其中R为F,Cl，Br,I，H，=0,S04，SOnR2,O-C(O)-R,5其中R为F,Cl,Br，I，H，=0，S04，，SOnR2,O-C(O)-R,,O-单糖或多糖，含N的生物碱类物质及其金属盐；R，为F，Cl,Br,I,=0,S04,SOnR2，O-C(O)-R,,O-单糖或多糖，含N的生物碱类物质及其金属盐。l.菝葜皂苷元的酯化a.菝葜皂苷元的甲酰化在氩气保护下将菝葜皂苷元溶入重蒸干燥吡啶中，然后将一定浓度甲酸滴加至上述吡啶溶液中，滴加完毕搅拌。减压蒸出吡啶，向剩佘物中加入水，乙酸乙酯萃取三次，有机相碱洗，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥过夜后，蒸出溶剂。柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到甲酯衍生化的菝葜皂苷元。b.菝葜皂苷元的其它酯化反应在氩气保护下将菝葜皂苷元溶入干燥二氯甲烷中，然后加入R-C(O)-OH，DMAP与DCC,—定温度下搅拌，等反应完结束后，过滤出去未反应的DCC和反应后生成的DCU与DMAP等杂质。蒸出溶剂，将反应物研细，用醚溶解搅拌，静置过滤除去杂志，蒸出溶剂。柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到酯化衍生的菝葜皂苷元。2.菝葜皂苷元的卤素取代a.氯代在氩气保护下将菝葜皂苷元溶入干燥二氯甲烷中，然后加入氯化锌，最后加入亚硫酰二氯，一定温度下搅拌。用饱和的碳酸氢钠终止反应,有机层水洗，干燥，蒸干溶剂。柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到氯代衍生化的菝葜皂苷元。b.溴代在氩气保护下，搅拌加入四氢呋喃溶解的NBS，之后滴加四氢呋喃溶解的三苯基磷，一定温度下搅拌反应，减压蒸出溶剂，残渣用水和醚洗,蒸^溶剂。柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到溴代衍生化的菝葜皂苷元。c.碘代向容器中加入菝葜皂苷元，三苯基磷，咪唑，碘与甲苯，氩气保护下搅拌，一定温度下回流。反应后，除去沉淀，加入Na2S203水溶液，除去水层，保留有机层。有机层水洗，无水硫酸钠除水，减压蒸出溶剂。柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到碘代衍生化的菝葜皂苷元。3.菝葜皂苷元的硫酸酯化及其金属盐<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>在装有电动搅拌器与冷凝管的三颈瓶中加入新蒸吡啶和菝葜皂苷元。冷阱控温并开动搅拌器。在搅拌下，向吡嗖溶液中滴加入氯磺酸(缓慢滴加)。滴加完全后，撹拌反应一段时间，然后将溶液倾倒至冰水中，加入无水乙醇，析出沉淀，抽滤得到固体制得硫酸酯化金属盐衍生物。搅拌反应完成后，加入氢氧化钠溶液调至Ph^7,放冷析出沉淀，抽滤得到固体制得硫酸酯化菝葜皂苷元衍、生物。4.菝葜皂苷元的羟基消除成双键<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>在冷凝管的三颈瓶中加入二甲苯，菝葜皂苷元，NaHS04,—定温度下搅拌回流反应。反应完成后，减压蒸出溶剂，柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到脱去羟基成为双键的菝葜皂苷元。5.菝葜皂苷元的羟基的氧化反应<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>向容器中加入菝葜皂苷元，丙酮，氩气保护下搅拌，冰浴温度滴加NBA。反应后加入Na2S03水溶液，加入过量的水使其沉淀，过滤得产物。柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到羟基氧化的菝葜皂苷元。6.菝葜皂苷元及其三位羟基衍生物的F环开环后生成的羟基被R{R为F,Cl,Br，I等卤族元素，=0,S04，SOnR(R为脂肪链等)，O-C(O)-R(R为脂肪族和芳香族化合物或为OH和O成金属盐等)，O-单糖或多糖，含N的生物碱类物质及其金属盐}取代无水条件下，向容器中加入菝葜皂苷元或其三位羟基衍生物无水AlCl3和无水乙醚，冰浴搅拌，滴入溶有LiAlH4的无水乙醚，反应结束后，冰浴下加入10%的硫酸萃取分离有机层，水层用醚多次萃取，合并有机液，过无水碳酸钠干燥除水,减压蒸出溶剂，柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到F环开环的菝葜阜苷元或其三位羟基衍生物。所得开环产物，可通过以上1,2,3,4，5等所述反应继续进行反应得到其产物。三.菝葜皂苷元衍生物的医药新用途将菝葜皂苷元衍生物可与其他药物和一定的药物辅料制成固体或液体制剂，用于抗老年性痴呆，抗衰老，抗抑郁等疾病的预防与治疗。本发明的优点在于所制备的菝葜皂苷元纯度可达98%(高效液相色谱检测)，LOD^).5。/。,且工艺成本较低，提取纯化周期很短，适合大规模的生产知母皂苷元。本发明与已有技术相比具有以下优点1.成本低2.杂质含量低3.工艺稳定，易于操作，易于实现4.生产过程对环境无污染具体实施例方式实施例l:菝葜皂苷元提取A.知母药材的浸泡和提取(a)按知母药材于20%的乙醇的重量份数比例1:6向知母药材中加入乙醇，常温浸泡12小时，然后加热至沸腾，保持沸腾l小时，之后滤渣取液。(b)按所述知母药材于40%的工业乙醇的重量份数比例1:8向知母药材中加入乙醇，常温浸泡14小时，然后加热至沸腾，保持沸腾2小时，之后滤渣取液。9(c)按所述知母药材于60%的工业乙醇的重量份数比例1:IO向知母药材中加入乙醇，常温浸泡20小时，然后加热至沸腾，保持沸腾4小时，之后滤渣取液。(d)按所述知母药材于水中的重量份数比例1:8向知母药材中加入水，常温浸泡18小时，然后加热至沸腾，保持沸腾4小时，之后滤渣取液。B.药液浓缩将分别通过上述搡作的提取液混合一起后，减压浓缩，直至不再有乙醇流出或无醇味为止。C.吸附洗脱使浓缩过的液体通过经过活化的极性或非极性的大孔吸附树脂柱，使液体中的皂苷吸附到树脂上，并弃去流出液，再用水清洗树脂柱子，直至流出液颜色变浅，并弃出流出液，继用30%、60%、80%的乙醇清洗树脂柱，直到树脂柱子上的皂苷全部被洗脱下来为止，并收集洗脱液。D.水解按洗脱液的重量份数与硫酸的比例为3:1，向洗脱液中加入硫酸，然后加热至沸腾，保持沸腾2小时，取出放凉，抽滤得固体物，将其放干，待用。E.重结晶将无水乙醇与二氯甲烷(两溶剂比例任意)的混合液加入至上述固体中，使其全部溶解，让其自然析出晶体，抽滤得出晶体，按其同样方法多次重结晶，最后得到白色晶体。F.干燥样品将样品在减压条件下加热干燥。实施例2:菝葜皂苷元提取A.知母药材的浸泡和提取(a)按知母药材于20%的乙醇的重量份数比例1:4向知母药材中加入乙醇，常温浸泡12小时，然后加热至沸腾，保持沸腾l小时，之后滤渣取液。(b)按所述知母药材于40%的工业乙醇的重量份数比例1:6向知母药材中加入乙醇，常温浸泡14小时，然后加热至沸腾，保持沸腾2小时，之后滤渣取液。(c)按所述知母药材于60%的工业乙醇的重量份数比例1:8向知母药材中加入乙醇，常温浸泡20小时，然后加热至沸腾，保持沸腾4小时，之后滤渣取液。(d)按所述知母药材于水中的重量份数比例1:6向知母药材中加入水，常温浸泡16小时，然后加热至沸腾，保持沸腾2小时，之后滤渣取液。B.药液浓縮将分别通过上述操作的提取液混合一起后，减压浓缩，直至不再有乙醇流出或无醇味为止。C.吸附i先脱使浓縮过的液体通过经过活化的极性或非极性的大孔吸附树脂柱，使液体中的皂苷吸附到树脂上，并弃去流出液，再用水清洗树脂柱子，直至流出液颜色变浅，并弃出流出液，继用20%、50%、90%的乙醇清洗树脂柱，直到树脂柱子上的皂苷全部被洗脱下来为止，并收集洗脱液。D.水解按洗脱液的重量份数与盐酸的比例为9:1，向洗脱液中加入盐酸，然后加热至沸腾，保持沸腾2小时，取出放凉，抽滤得固体物，将其放干，待用。E.重结晶将无水乙醇与三氯甲烷(两溶剂比例任意)的混合液加入至上述固体中，使其全部溶解，让其自然析出晶体，抽滤得出晶体，按其同样方法多次重结晶，，最后得到白色晶体。F.干燥样品将样品在减压条件下加热干燥。实施例3:菝葜皂苷元的衍生物的制备方法l.菝葜皂苷元的甲酰化<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>a.在氬气保护下将lg菝葜皂苷元溶入重蒸干燥吡啶中，然后将70%甲酸(体积比)冰浴温度下滴加至上述吡啶溶液中，滴加完毕后室温搅拌。减压蒸出吡啶，向剩余物中加入水，乙酸乙酯萃取三次，有机相1N的氢氧化钠水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥过夜后，蒸出溶剂。柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到甲酯衍生化的菝葜皂苷元(la)0.88g,收率为80y。。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>b.菝葜皂苷元的碳十六酸酯化反应在氩气保护下将lg菝葜皂苷元溶入干燥二氯甲烷中，然后加入0.6g碳十六酸,0.1gDMAP与0.1gDCC，35'C下搅拌，等反应完结束后，过滤出去未反应的DCC和反应后生成的DCU与DMAP等杂质。蒸出溶剂，将反应物研细，用乙醚溶解搅拌，静置过滤除去杂志，蒸出溶剂。柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到酯化衍生的菝葜皂苷元(lb)0.94g,收率为60%。2.菝葜皂苷元的卤素取代a.氯代在氩气保护下将lg菝葜皂苷元溶入干燥二氯甲烷中，然后加入0.1g氯化锌，最后加入2ml亚硫酰二氯，室温下搅拌。用饱和的碳酸氢钠终止反应，有机层水洗，干燥，蒸干溶剂。柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到氯代衍生化的菝葜皂苷元(2a)0.47g,收率为45%。b.溴代在氩气保护下，搅拌加入40ml四氢呋喃溶解的1.5gNBS，之后滴加40ml四氢吹喃溶解的1.6g三苯基磷，室温下搅拌反应，减压蒸出溶剂，残渣用水和醚洗，蒸出溶剂。柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到溴代衍生化的菝葜皂苷元(2b)0.38，收率为33%。c.碘代向容器中加入lg菝葜皂苷元，1.13g三苯基磷，0.29g咪唑，0.82g碘与50ml甲苯，氩气保护下搅拌，120。C温度下回流。反应后，除去沉淀，加入Na2S203水溶液，除去水层，保留有机层。有机层水洗，无水硫酸钠除水，减压蒸出溶剂。柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到碘代衍生化的菝葜皂苷元(2c)0.33g，收率为26%。3.菝葜皂苷元的硫酸酯化及其金属盐<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>在装有电动搅拌器与冷凝管的三颈瓶中加入20ml新蒸吡啶和lg菝葜皂苷元。冷阱控温-2CrC并开动搅拌器。在搅拌下，向吡啶溶液中滴加入2ml氯磺酸(缓慢滴加)。滴加完全后，搅拌反应16h,然后将溶液倾倒至冰水中，加入100ml无水乙醇，析出沉淀，抽滤得到固体制得硫酸酯化金属盐衍生物。搅拌反应完成后，加入氢氧化钠溶液调至Ph二7，放冷析出沉淀，抽滤得到固体制得硫酸酯化菝葜皂苷元衍生物(3)0.83g,收率为70%。4.菝葜皂苷元的羟基消除成双键<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>在冷凝管的三颈瓶中加入二甲苯，1.467g菝葜皂苷元，0.6gNaHSO4,135°C温度下搅拌回流反应。反应完成后，减压蒸出溶剂，柱色谱分离，以石油醚-丙酮梯度洗脱得到脱去羟基成为双键的菝葜皂苷元(4)0.38g，收率为40%。IR图谱特征B带吸收大于C带，得25位甲基构型为S._<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>实施例4:菝葜皂苷元衍生物的药理作用实验:1.配药母药浓度为10-2，依次稀释为10-3、10-4、10-5，对应终浓度为10-5、10-6、10-7、10-8。la、lb、2a、2b、2c、4的溶剂为氯仿，3的溶剂;DMS0。2.人脐静脉内皮细胞株的培养及处理人脐静脉内皮细胞株自实验室获得，加入含10%小牛血清的DMEM培基制成细胞悬液，分种于培养瓶中置C02(5%)培养箱中静置培养(37°C)。实验前24h换用含2。/。小牛血清的DMEM使细胞同步化，然后按实验要求加入不同的药物和AngII。①对照组(Con组)用10%DMEM培养液孵育内皮细胞；②AnglI损伤组用含lpmol/LAnglI的培养液孵育内皮细胞24h;③AnglI+药物组先加入各药物孵育lh后，加入1mo1/LAnglI继续培养24h;空白组(Blank组)只加2%小牛血清的DMEM培养液；⑤氯仿对照组只加入和药物溶剂相当的氯仿；⑥DMSO对照组只加入和药物溶剂相当的DMSO。3.MTTMTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒根据说明使用。以每孔100pmo1种96孔板，至10000/孔密度，各组内皮细胞给药处理后，每孔加入10微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育4小时。每孔加入100微升Formanzan溶解液，在细胞培养箱内再继续孵育。直至在普通光学显微镜下观察发现formazan全部溶解。用酶标仪595nm波长测定OD值。4.(3-半乳糖苷酶染色卩-半乳糖苷酶染料依据试剂盒(碧云天)进行配制。以每孔lml种12孔板.各组内皮细胞给药处理后，弃去上清，PBS冲洗1次，每次3min，4%多聚甲醛室温固定15min，PBS冲洗3次，每次3min，，X-半乳糖苷酶(X-gal)染液(染液含20mmol/LX-gal、40mmol/L醋酸—磷酸钠、5mmol/L铁氰化钾、5mmol/L亚铁氰化钾、15mmol/L氯化钠、2mmol/L氯化镁)于37T染色36h，显微镜下观察，蓝色为p-半乳糖苷酶阳性染色。随机挑选2个高倍视野，计数全视野细胞中阳性细胞的个数计算阳性率。实验结果(均数士标准差，N=3)组别药物浓度MTT结果(OD595nm)p-gal染色(％)Control0.3262±0.123719.45±0.79AngII52.16±6.58la10-80.200随072724.95±4.8710-70.2825±0.047024.82±3.3710-60.3240±0.068923.49±8.0310-50.2493±0.074122.93±5.08lb10-80.2553±0.051219.40±8.1010-70.2948±0.034429.61±0.2110-60.3234±0扁623.58±5.0610-50.1958±0.016129.85±8.702a10-80.3470±0.081220.00±9.3510-70.3731±0.097515.96±4.8910-60.3761±0.114915.26±2.8110-50.3264±0.044220.62±0.512b10-80.2612±0.01878.98±1.7510-70.3043±0.039310.90±2.0410-60.3357±0.05049.83±.9710-50.2630±0遍512.54士2.1610-80.3457±0.036121.04±0.1610-70.3421±0.035120.76±1.210-60.3648±0.031218.13±0.2410-50.3738±0馬415.47±2.48410-80.2121±0.10118.35±3.6610-70.3062±0細612.77±3.0510-60.2995±0扁012，6±3.831510-50.2650±0,15366.36±1.11"——"为数据缺失，为药物细胞毒作用过大，导致细胞死亡脱落。两种药物溶媒在最高浓度均对MTT和(3-gal染色结果无明显影响。结果综合MTT和(3-gal染色结果，以上各化合物皆具有抗衰老作用。实施例5:菝葜皂苷元衍生物片剂菝葜皂苷元衍生物400g，菝葜皂苷元80g，淀粉40g,10%的淀粉浆24g,干淀粉23g,硬脂酸镁3g,制成1000片。将菝葜皂苷元衍生物400g、菝葜皂苷元衍生物40g过80目筛，与淀粉混匀，加淀粉浆制成软材，以14目筛制粒后，置7(TC8(TC千燥后于2目筛整粒，加入淀粉及硬脂酸镁混匀后，压片，即得。实施例6:菝葜皂苷元衍生物胶囊菝葜皂苷元衍生物300g、知母总皂苷提取物100g，10%淀粉浆适量，制成硬胶囊1000粒。取上述药物过80目筛，将10%淀粉浆与药物混合制成软材后，过14目筛制粒，与70匸干燥至水分3%以下，填入空胶囊中，即得。实施例7:菝葜皂苷元衍生物滴丸菝葜皂苷元衍生物l份、PEG60009份。取PEG6000在油浴上加热至约135°C，加入菝葜皂苷元衍生物洗粉，不断搅拌使全部熔融，趁热过滤，置贮液瓶，135匸下保温，用管口内、外分别为9.0mm、9.8mm的滴管滴制，滴速80滴/min,滴入含43%煤油的液体石蜡冷却液中，冷凝成丸，以液体石蜡洗丸，至无煤油味，用毛边纸吸去粘附的液体石蜡，即得。实施例8:菝葜皂苷元衍生物注射用粉针剂菝葜皂苷元衍生物90g、知母总皂苷提取物20g,甘露醇100g。在无菌条件下将处方量取药品和支持剂甘露醇，加注射用水，加热溶解，加注射用活性炭，加热滤过，-40'C分装1000支，冷冻后，升温、冻干，即得。实施例9:菝葜皂苷元衍生物口服液菝葜皂苷元衍生物8.8g、知母总皂苷提取物2.0g,甘露醇10.0g，制成1000ml。将提取物和支持剂甘露醇，加适量水，加热溶解，加入单糖浆，苯甲酸钠，再加适量的水至1000ml，冷藏，过滤，封装于10ml安瓶中，以IO(TC免菌30分钟，即得。权利要求1、知母中菝葜皂苷元及其衍生物的制备方法，其特征在于所述菝葜皂苷元有以下工艺步骤组成A.知母药材分别按a-d所述方法浸泡和提取(a)按知母药材于20-80％的乙醇的重量份数比例1:4～1:6向知母药材中加入乙醇，常温浸泡12-24小时，然后加热至沸腾，保持沸腾1-4小时，之后滤渣取液；(b)按所述知母药材于20-80％的乙醇的重量份数比例1:6～1:8向知母药材中加入乙醇，常温浸泡12-24小时，然后加热至沸腾，保持沸腾1-4小时，之后滤渣取液；(c)按所述知母药材于20-80％的乙醇的重量份数比例1:8～1:10向知母药材中加入乙醇，常温浸泡12-24小时，然后加热至沸腾，保持沸腾1-4小时，之后滤渣取液；(d)按所述知母药材于水中的重量份数比例1:6～1:10向知母药材中加入水，常温浸泡12-24小时，然后加热至沸腾，保持沸腾1-4小时，之后滤渣取液；B.药液浓缩将分别通过上述操作的提取液混合一起后，减压浓缩，直至不再有乙醇流出或无醇味为止；C.吸附洗脱使浓缩过的液体通过经过活化的极性或非极性的大孔吸附树脂柱，使液体中的皂苷吸附到树脂上，并弃去流出液，再用水清洗树脂柱子，直至流出液颜色变浅，并弃出流出液，继用20％-90％的乙醇清洗树脂柱，直到树脂柱子上的皂苷全部被洗脱下来为止，并收集洗脱液；D.水解按洗脱液的重量份数与矿酸的比例为10:1-1:1，向洗脱液中加入酸，然后加热至沸腾，保持沸腾1-4小时，取出放凉，抽滤得固体物，将其放干，待用；E.重结晶将任意比例的两种非极性溶剂的混合液加入至上述固体中，使其全部溶解，让其自然析出晶体，抽滤得出晶体，按其同样方法多次重结晶，最后得到白色晶体；F.干燥样品将样品在减压条件下加热干燥。2、根据权利要求l所述的知母中菝葜皂苷元及其衍生物的制备方法，其特征在于所述的乙醇为工业乙醇。3、根据权利要求l所述的知母中菝葜皂苷元及其衍生物的制备方法，其特征在于步骤D中所述的矿酸优选盐酸、硫酸。4、根据权利要求l所述的知母中菝葜皂苷元及其衍生物的制备方法，其特征在于所述的非极性溶剂优选无水乙醇、氯仿、二氯甲烷中的两种。5、根据权利要求l所述的知母中菝葜皂苷元及其衍生物的制备方法，其特征在于菝葜皂苷元衍生物为以菝葜皂苷元为前体通过一系列新方法合成的新衍生物，该新衍生物结构如下其中R为F,CI,Br,I,H，=O，S04,SOnR2,O-C(O)-R其中R为F，Cl，Br,I，H,=0，S04，，SOnR2,O-C(O)-R4,O-单糖或多糖，含N的生物碱类物质及其金属盐；R，为F，Cl，Br,I,=0,S04，SOnR2,O-C(O)-RpO-单糖或多糖，含N的生物碱类物质及其金属盐。6、根据权利要求4所述的知母中菝葜皂苷元及其衍生物的制备方法，其特征在于R4为脂肪族和芳香族化合物或为OH和O成金属盐，R2为脂肪链。7、菝葜皂苷元衍生物在制备抗老年性痴呆，抗衰老，抗抑郁药物中的应用。8、菝葜皂苷元衍生物可以和药学上可接受的载体结合制成临床上可接受的剂型。全文摘要本发明属于医药
技术领域：
，涉及知母中高纯度菝葜皂苷元及其衍生物的制备方法，同时涉及到菝葜皂苷元衍生物的医药新用途。将知母药材用含水乙醇或和水提取，采用大孔吸附树脂吸附洗脱，酸水解，重结晶，制备高纯度菝葜皂苷元纯度达98％。与已有技术相比，本发明成本低，产物杂质含量低，制备工艺稳定，易于操作，易于实现，生产过程对环境无污染的优点。本发明还通过化学合成方法合成一系列菝葜皂苷元衍生物，药理实验证明其有抗衰老活性。通过其药理活性开发菝葜皂苷元及其衍生物在制备抗老年性痴呆，抗衰老，抗抑郁药物中的新用途。文档编号A61P17/00GK101531697SQ200910010389公开日2009年9月16日申请日期2009年2月18日优先权日2009年2月18日发明者宋少江,缨彭,李成磊,昉骆申请人:沈阳药科大学