专利名称：黑刺菝葜总皂苷提取物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种黑刺菝葜总皂苷提取物及制备方法、质量控制方法及其 在医药和保健食品领域的应用，属于医药技术领域。
背景技术：
黑刺菝葜(5> //0^"&>^^/& C.H.Wright)又名短梗菝葜，是菝葜科 菝葜属植物，生于低山灌丛或山谷河岸，主产于陕西、甘肃各省，广泛分 布于北方地区，资源十分丰富。其根茎在我国北方代替威灵仙入药，商品 上称为"铁丝威灵仙"、"金刚刺"、"金刚藤"等。煎汤或浸酒内服；研粉、 磨汁调敷或煎水洗外用；具除风湿、活血解毒、镇惊息风和抗癌等功效， 临床上用于治疗风湿性腰腿病、小儿惊风肠炎、瘰疬，疮布、癌肿等病症。研究发现，黑刺菝葜植物中主要含有甾体皂苷、酚类和甾醇类化学成 分，其中皂苷类成分为其主要的活性成分，而且其主要的皂苷成分为含拉 肖皂苷元的甾体皂苷及其类似物，是制备拉肖皂苷元(Laxogenin)极好的 原料(专利"一种从黑刺菝葜植物中制备拉肖皂苷元的方法"，申请号为 200710199224.X)。这些皂苷类成分在其结构中，同时或分别含有羰基、羟 基、甲氧基、双键、环氧醚键等活泼官能团，不稳定，在加热(如煎煮等) 及植物中酸性成分的双重作用下，易发生结构转化，因此研究黑刺菝葜总 皂苷的制备方法具有重要的意义。发明内容本发明的目的是提供一种黑刺菝葜总皂苷提取物及其制备方法。本发 明提出的黑刺菝葜总皂苷提取物，是从中药黑剌菝葜植物中提取的含有多种皂苷类活性成分的组合，其中主要化合物结构如下化合物R英文名称黑刺菝葜皂苷aot-L-Ara-(l46)---D-glu—smilaxin A黑刺菝葜皂苷b/ -D-Glu-( 1 —4)-[ct-L-ara-( 1 —6)]- "-D-glu—smilaxin B本发明所述材料，来源于百合科菝葜属植物黑刺菝葜(Smftoc scoWm'cawfc C.H.Wright)。作为提取黑刺菝葜总皂苷的原材料，可以是市售黑刺菝葜饮 片，也可以是黑刺菝葜块根、须根、根茎、茎、巻须和叶子等任一部位或 全部植株，其中优选的药材部位为黑刺菝葜干燥根及根茎。上述所述的黑 刺菝葜包括未经任何炮制处理的原药材及饮片，还包括各种炮制品。本发明所述的黑刺菝葜总皂苷提取物，是指从上述植物的任何部位提 取得到的，含有多种皂苷类活性成分的组合物。这些皂苷类成分主要包括 以下图所示结构为为母核的一系列衍生物5<formula>formula see original document page 6</formula><formula>formula see original document page 6</formula>作为黑刺菝葜总皂苷提取物，其中各皂苷类成分百分含量的总和为5 100% (W/W)，其中优选的为50 100% (W/W)。本发明所述的黑刺菝葜总皂苷提取物所涵盖的各种皂苷类活性成分之 中，最主要的是黑刺菝葜皂苷a、黑刺菝葜皂苷b及其类似物等成分。本发明还提出了黑剌菝葜总皂苷提取物的制备工艺，它可以采用以下任 意一种方法，或这些方法的任意组合进行制备(1)溶剂提取法；(2)溶 剂萃取法；(3)大孔吸附树脂法；(4)超临界流体萃取法；(5)柱色谱法； (6)液-液逆流分配色谱法。其中优选的方法为大孔吸附树脂法。在使用这些方法进行制备时， 一般包括以下几个步骤(1)提取所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类或酯类溶剂，或这 些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸 性或碱性溶剂。提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漏、 微波提取、高压提取等。优选的提取工艺为黑剌菝葜药材加0 80%乙醇或这些溶剂与碱性物质配成的碱性溶剂，回流提取2 4次，每次提取1 2小时，溶剂用量为5 15倍量(L/kg)。(2)过滤包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法，使用或不使用以下任意一种澄清剂或其组合醇沉剂，明胶，高岭土，各种树脂，聚乙二醇，聚乙三醇，壳聚糖以及天然澄清剂成品如101果汁澄清剂、ZTC+1天然澄 清剂等。(3) 浓縮包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓縮等。(4) 干燥包括真空千燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。 当采用萃取法进行制备进行时， 一般先将提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己垸、汽油、乙酸乙 酯等)萃取除去脂溶性杂质，然后用合适的极性溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、 丙酮、正丁醇等，或是这些溶剂的混合物，萃取获得其中的总皂苷成分， 得到总皂苷提取物。当采用大孔吸附树脂法进行制备时，所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型，如D101、 D4020、 D3500、 D941、 D21、 HP-20、 HP-20、 XDA-1、 AB-8、 HPD400、 S隱8、 HZ-806等，其中优选的为弱极性或中等极性的树脂，如AB-8、 HPD400、 D101等。 所用的洗脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等，其中优选的为70 95% 的乙醇。优选的黑刺菝葜总皂苷提取物树脂纯化工艺为选用DlOl、 AB-8、 HPD400等中等弱极性或中等极性的树脂作为纯化用树脂，黑刺菝葜提取物 上样液稀释倍数1:5 1:18 (以生药量计)，吸附流速2 9BV/h，树脂柱径 高比1:3 1:10，上样量为0.1 0.5g/mL(以生药量计)，0 10。/。乙醇洗脱 1 5倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2 7BV/h，用60 95 %乙醇洗脱3 10倍树脂体积，洗脱流速为2 9BV/h。当采用超临界流体萃取法进行制备时，可以对黑剌菝葜原料直接进行 萃取，也可以对上述任一方法和步骤所获得的产物进行萃取。萃取时可以 使用或不使用以下任一种类溶剂及溶剂混合物水、醇类、酮类及酯类溶 剂。当采用柱色谱法进行制备时，其处理的对象可以是上述提取步骤所获 得的产物，也可以是经上述溶剂提取法、大孔吸附树脂法或超临界流体萃 取法初步纯化后的产物。所用的固定相可以是硅胶、聚酰胺、氧化铝、葡聚糖(Sephadex系列或Sephadex-20系列)、C-8、 C-18、活性碳、纤维素等， 所用的洗脱液因固定相的不同而不同， 一般是水、甲醇、乙醇、丙酮、氯 仿、乙酸乙酯、石油醚等组成的混合溶剂。当采用液-液逆流萃取法进行制备时，其处理的对象可以是上述提取步 骤的产物，也可以是经上述溶剂提取法、大孔吸附树脂法或超临界流体萃 取法初步纯化后的产物。 一般是将提取物混悬于水中，然后用低极性的酯 类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己垸、汽油、乙酸乙酯等)萃 取除去脂溶性杂质，然后用合适极性的溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、 正丁醇等，或是这些溶剂的混合物，萃取获得其中的总皂苷成分，得总皂 苷提取物。该提取物可以单独或与其它任何中西药或食物按任意比例配伍，用于 制备药物或功能性食品，所得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片剂、 丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料 等。本发明质量控制方法可包括以下含量测定方法中的一种或两种 1.溶血指数法测定皂苷含量0.5%药材浸出液的配制黑刺菝葜药材粉末以等渗磷酸盐缓冲液(或 生理食盐水)精确配制成0.5%浓度。溶血指数的测定'.取直径、长短一致的9支小试管，分别精确吸入O.l、0.2、 0.3.......0.9mL黑刺菝葜提取物，精密加缓冲液补足体积为lmL，各试管中再各精密加lmL2X血球悬浮液，各管摇匀后由可以产生完全溶血 的黑刺菝葜提取物最低浓度来计算溶血指数。皂苷含量的测定用标准皂苷黑刺菝葜皂苷a或黑剌菝葜皂苷b配成 适当浓度的溶液，同上法测定溶血指数，从标准皂苷与黑刺菝葜提取物的 溶血指数计算黑刺菝葜皂苷的百分含量。 2. HPLC-ELSD法分析黑刺菝葜皂苷的含量 色谱条件蒸发光散射检测器，色谱柱反相C18 (4.6X150mm，5拜)；流动相乙腈-水梯度洗脱，40 80% (0 70min);流速1.0mL/Min;柱温25 C 。标准曲线绘制分别精密吸取黑刺菝葜标准皂苷黑刺菝葜皂苷a或黑刺 菝葜皂苷b对照品溶液(1.0jLig/jiL) 0、 2、 5、 10、 15、 20^L注入液相色谱 仪，测定各色谱峰峰面积，以对照进样量(Pg)为横坐标，色谱峰面积为 纵坐标，绘制标准曲线。含量测定精密称取3批黑刺菝葜提取物样品各3份，每份约20mg， 置于10mL量瓶中，加70%乙醇超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为黑 刺菝葜皂苷含量测定的供试样品溶液，精密吸取上述供试样品溶液20pL注 入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量。
具体实施例方式实施例1:黑刺菝葜总皂苷提取物制备工艺取黑刺菝葜根茎lkg，干燥，研磨成粗粉，加入4L70X乙醇(V/V)溶 液室温浸提4次，每次4h，合并提取液，将滤液浓縮成浸膏，加水分散溶 解，使水溶液稀释倍数为1:15 (以生药量计)，依次用等体积的石油醚、正 丁醇分别萃取5次，分别减压回收溶剂得萃取物。正丁醇萃取物用去离子 水溶解，按照样品与填料1:7比例在D-lOl型大孔树脂上纯化，先用去离子 水洗脱除杂，直至a-萘酚反应检测洗脱液成阴性为止，除杂流速为3BV/h， 然后用90%乙醇洗脱8倍树脂体积，洗脱流速为2BV/h，收集90%乙醇洗 脱液，回收乙醇，减压干燥得黑刺菝葜总皂苷提取物。测定黑刺菝葜总皂 苷提取物中总皂苷含量为54%，测定黑刺菝葜皂苷a和黑刺菝葜皂苷b两 种成分的含量之和为40%。实施例2:黑刺菝葜总皂苷提取物制备工艺取黑刺菝葜茎lkg，粉碎，加水煮沸提取三次并控制酸碱度，第一次为 药材量的8倍水量和0.7%药材量的NaC03，第二次为药材量的5倍水量和 0.3X药材量的NaC03，第三次为药材量的4倍水量；逆流循环提取，沸后分别保持1.5、 1、 l小时；药液合并并冷至室温，过滤，滤液上己处理好的大孔型弱碱性阴离子D392交换柱，用2倍树脂床体积的2%NaOH溶液冲 洗，冲洗液弃去，再用3倍纯水冲洗，水冲洗液弃去；用7倍树脂床体积 的70%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓縮至稠膏(5(TC下相对密度为1.28 1.33) 干燥，得黑剌菝葜总皂苷提取物。测定黑刺菝葜总皂苷提取物中总皂苷含 量为64%,测定黑刺菝葜皂苷a和黑刺菝葜皂苷b两种成分的含量之和为 45%。实施例3:黑刺菝葜总皂苷提取物制备工艺取黑刺菝葜根粉lkg，加入12倍量95%的乙醇，回流提取3次，每次 提取3小时，合并乙醇提取液，回收乙醇，浓縮至干，然后加入8倍量的 去离子水搅拌溶解，将溶液通过AB-8型大孔吸附树脂层析柱，吸附流速 4BV/h，数值柱径高比为l: 9，上样量为0.1g/mL (以生药量计)；用水洗 剂树脂12BV，洗脱流速为6BV/h，冲洗液弃去；用90%乙醇洗脱8倍树脂 体积，洗脱流速为5BV/h，收集乙醇洗脱液，回收乙醇，减压干燥得黑刺 菝葜总皂苷提取物。测定黑刺菝葜总皂苷提取物中总皂苷含量为65%，测 定黑刺菝葜皂苷a和黑刺菝葜皂苷b两种成分的含量之和为53%。 实施例4:黑刺菝葜总皂苷片的制备 黑刺菝葜总皂苷提取物10g 淀粉 10g 上述组分混合均匀，加滑石粉适量，压制成100片。 实施例5:黑刺菝葜总皂苷复方制剂的制备 黑刺菝葜总皂苷提取物 30g 半技莲水提取物 30g 白花蛇舌草水提取物 30g上述组分混合均匀，装入硬明胶胶囊中，共360粒胶囊。
权利要求
1.一种黑刺菝葜总皂苷提取物，其特征在于该提取物由中药黑刺菝葜植物中获得，并含有以下皂苷类成分黑刺菝葜皂苷a、黑刺菝葜皂苷b及其类似物。
2. 如权利要求1所述的黑刺菝葜总皂苷提取物，其特征在于黑剌菝葜为市售黑剌菝葜饮片或百合科菝葜属植物黑刺菝葜块根、须根、根茎、茎、 巻须和叶子等任一部位或全部植株，包括未经任何炮制处理的原药材及饮 片，还包括各种炮制品。
3. 如权利要求1所述的黑刺菝葜总皂苷提取物，其特征在于上述总皂 苷类成分含量总和以重量计为5 100%。
4. 如权利要求3所述的黑刺菝葜总皂苷提取物，其特征在于各皂苷类 成分中黑刺菝葜皂苷a、黑刺菝葜皂苷b及其类似物等成分的含量的总和占 全部总皂苷含量以重量计为5 100%。
5. 如权利要求1 4所述的黑刺菝葜总皂苷提取物，其特征在于采用 溶剂提取法、溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、超临界流体萃取法、柱色谱 法、液-液逆流分配色谱法等任意一种方法，或这些方法的任意组合进行制 备。
6. 如权利要求5所述的黑刺菝葜总皂苷提取物制备方法，其特征在于 在使用这些方法进行制备时，包括以下一个或几个步骤提取所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类或酯类溶剂，或这些溶 剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或 碱性溶剂。提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漏、微 波提取、高压提取等。过滤包括离心、抽滤、超滤、压滤等方法，使用或不使用以下任意 一种澄清剂或其组合醇沉剂、明胶、高岭土、各种树脂、聚乙二醇、聚乙三醇、壳聚糖以及天然澄清剂成品如101果汁澄清剂、ZTC+1天然澄清剂等。浓縮包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓縮等。干燥包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。
7.如权利要求6所述的黑刺菝葜总皂苷提取物制备方法，其特征在 于当使用大孔吸附树脂法进行制备时，所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型，如D101 、 D4020、 D3500、 D941、 D21、 HP隱20、 XDA-1、 AB扁8、 HPD-400、 S画8、 HZ-806等，其中优选的为弱极性或中等极性的树脂，如AB-8、 HPD400、 D101等。所用的洗 脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等。
8. 如权利要求7所述的黑刺菝葜总皂苷提取物制备方法，其特征在于 选用DIOI、 AB-8、 HPD400等中等弱极性或中等极性的树脂作为纯化用树 脂，黑刺菝葜提取物上样液稀释倍数1:5 1:18 (以生药量计)，吸附流速 2 9BV/h，树脂柱径高比1:3 1:10，上样量为0.1 0.5g/mL(以生药量 计)，0 10%乙醇洗脱1 5倍树脂体积进行除杂，除杂流速为2 7BV/h， 用60 95%乙醇洗脱3 10倍树脂体积，洗脱流速为2 9BV/h。
9. 如权利要求1 4所述的黑刺菝葜总皂苷提取物的应用，其特征在 于该提取物可以单独或与其它任何中西药或食物按任意比例配伍，用于制 备药物或功能性食品，所得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片剂、丸 剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料等。
全文摘要
本发明公开了一种从中药黑刺菝葜中提取得到的总皂苷提取物及其制备方法。该提取物主要包括黑刺菝葜皂苷a、黑刺菝葜皂苷b及其类似物。该提取物可由溶剂提取法、溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、超临界流体萃取法、柱色谱法、液-液逆流分配色谱法等任意一种方法，或这些方法的任意组合进行制备。所制得的黑刺菝葜总皂苷提取物中总皂苷类成分含量总和为5～100％(W/W)，其中黑刺菝葜皂苷a、黑刺菝葜皂苷b及其类似物等成分的含量之和占全部总皂苷含量以重量计为5～100％。
文档编号A61K9/00GK101244220SQ20081001753
公开日2008年8月20日 申请日期2008年2月22日 优先权日2008年2月22日
发明者吴战库, 张存莉, 朱战烨, 桦 管 申请人:西北农林科技大学