专利名称：：六味地黄丸近红外全息指纹图谱的质量控制方法
技术领域：
：本发明属于采用现代分析检测仪器检测中药制剂领域，涉及一种中药质量的控制方法，具体的涉及一种六味地黄丸近红外全息指紋图i普的质量控制方法。
背景技术：
：六味地黄丸是中医补益剂中滋补肾阴的代表方剂，其配方源自经典古方，由熟地黄、山茱萸(制)、牡丹皮、泽泻、山药、茯茶6味药材组成，具有滋阴补肾的主要功能。以肾、肝、脾三阴并补，补肾为主；熟地黄滋补肾阴、填精益髓为主药；山茱萸药性酸温，可补益肝肾，涩精敛汗；山药味甘性平，健脾补肺，固肾益精。而泽泻配熟地黄则泻肾降浊；牡丹皮配山茱萸以清泻肝火；茯茶配山药渗水利湿。配伍组方以补为主，并将补虚与去邪结合，形成"三补三泻"，相反相成之势，适合于肝肾阴虚之症.主治由肾阴亏虚引起的腰膝酸软、头晕目眩、耳鸣耳聋、潮热盗汗、口燥咽干、骨蒸潮热、盗汗遗精、消渴等症状。近年来研究发现六味地黄丸还有许多新功效，如提高实验动物降低的脾脏白细胞介素2活性，拮抗使用醋酸可的松造成的脾脏重量减轻。进一步研究还发现，六卩未地黄丸对多形核白细胞的免疫功能有明显的双向调节作用，且具有一定的防癌作用；对肾功能的影响研究发现，服用六味地黄丸的大鼠其细胞生成溶酶体的速度明显加快，从而提高了细胞的解毒能力而改善肾功能；延緩衰老，六味地黄丸能明显增加阴虚动物体重，增强其抗疲劳、耐低温和耐缺氧能力。有明显的抗氧化作用，对老年性痴呆有一定治疗作用。随着科学技术的发展，现代分析检测仪器的普及应用，使中药检测分析水平有了显著提高，药品质量控制方法不断完善。其中指紋图谱技术在中药质量控制中发挥越来越重要作用。它是釆用光谱、色谱等分析手段对中药材或中成药的成分进行检测，形成特有的专属化学图谱，该图谱能全面反映中药所含内在化学成分的种类与数量，具有相对唯一性，故称之为中药材或中成药的指紋图谱。中药指紋图谱由于体现了中医药的整体、宏观、复杂的特点很快成为国内外广泛接受的中药质量控制方法。六味地黄丸在中药制剂中占有很重要的地位。目前，市场销售有很多厂家生产的六味地黄丸，其质量良莠不齐，因而六味地黄丸的稳定性难以保证。2005版中国药典规定以测定牡丹皮中的丹皮酚和山茱萸中的马钱苷的含量来鉴别六味地黄丸的质量，此方法3不能从整体上评价和控制六味地黄丸的质量，且药典中对六味地黄丸测定的方法步骤烦瑣、耗时、费用高。
发明内容本发明目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供六味地黄丸近红外全息指紋图谱的质量控制方法，以保证六味地黄丸药物的质量更加安全、可靠。本发明是通过以下技术方案实现的六味地黄丸近红外全息指紋图谱的质量控制方法，其特征在于按如下步骤进行1、六味地黄丸近红外全息指紋图i普的质量控制方法，其特征在于按如下步骤进行(1)供试品的制备取市面销售的2-10个六味地黄浓缩丸粉碎，过100目筛，称10g,备用；(2)标准品的制备分别粉碎熟地黄、山药、山茱萸、牡丹皮、泽泻和茯苓，过100目筛；按2005版药典的规定分别取8g熟地黄、4g山药、4g山茱萸、3g牡丹皮、3g泽泻和3g茯苓混合均匀，配成标准六味地黄丸，备用；(3)供试品和标准品图谱分别将10g供试品、标准品置入石英样品杯内，使用积分球漫反射附件采集近红外光谱图，采集条件采集光谱波长范围为10000-4000cm-1,光源采用空门衰减，增益为2倍，以金箔为参比进行扫描，扫描次数为32次，分辨率为8cm—、每份样品采集20张谱(4)六味地黄丸质量分析基本模型的建立将标准品的六味地黄丸和市面销售的2-10个供试品的六味地黄丸采集的近红外光谱图用数据分析软件TQAnalyst8.G进4亍处理，采用化学计量学的主成分分析-距离判别方法建立六味地黄丸质量分析基本模型，计算出标准品到六味地黄丸各味单药的距离D基本标准值，供试品到六味地黄丸各味单药的距离D基本值及D基本平均值，计算置信度为99%时D基本标准值的置信区间和D基本平均值的置信区间，作为对六味地黄丸供试品质量进行评价的标准；(5)六味地黄丸质量分析检验模型的建立及质量评价方法按步骤(3)采集质量待检验的六味地黄丸供试品的近红外图谱，替代六味地黄丸质量分析基本模型中的任何一个基本供试品的近红外图谱数据，用数据分析软件TQAnalyst8.Q进行处理，采用化学计量学的主成分分析-距离判别方法建立六味地黄丸质量分析4会验模型，计算出标准品到六味地黄丸各味单药的距离D检验标准值，供试品到六味地黄丸各味单药的距离D检验值，将六味地黄丸质量分析检验模型中供试品的D检验值乘以校正因子f换算成相当于六味地黄丸质量分析基本模型中的D校正值，其中校正因子f=D基本标准值+D检验标准值，根据六味地黄丸供试品到各味单药的距离D校正值是否处于六味地黄丸质量分析基本模型D基本标准值的置信区间和D基本平均值的置信区间内，对六味地黄丸供试品进行质量评价；若六味地黄丸供试品的判别距离D校正值处于置信区间内，则表明该味药材的用量和品质符合药典要求，按六味药材的符合程度进行整体质量评价，符合药典要求的药材给l颗星号；获得的星号愈多，六味地黄丸的质量愈好，获六星者质量最佳。对上述确定的测定方法进行有效性评价，其中包括专属性、准确度、精密度、重复性、稳定性、测定范围以及耐用性。本发明所述的质量控制方法，可检测含有六味地黄组成的任何一种剂型，包括水蜜丸、大蜜丸、浓缩丸、颗粒或胶嚢。本发明的六味地黄丸近红外全息指紋图谱质量控制方法与现有的中国药典规定的测定方法相比所具有的积极效果在于(1)本发明的质量控制方法，其优点是简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握，能根据六味地黄丸近红外全息指紋图谱的整体特征判断六味地黄丸的质量情况。(2)本发明是将指紋图谱技术，结合被;险测组分的特点，利用近红外光谱可用于对所有含氢基团有关的样品物化性质分析与检测，确保所检测成分准确、可靠。近红外光谱检测与化学计量学方法结合应用，提供了一个适合中药特点的复方多组分含量测定方法，为中药质量控制提供全新的分析方法。(3)本发明采用近红外全息指紋图谱用于六味地黄丸真伪测定，提高了六味地黄丸的质量控制标准，从而有效确保了六味地黄丸的安全、均一、稳定、有效、可控，保证了工艺的规范化和质量的稳定一致。图1为标准品六味地黄丸的近红外光谱图。图2为六^^未单药和标准品六^^木地黄丸近红外光i普图的叠加图。图3标准品六味地黄丸和六个厂家生产的六味地黄丸的近红外光谦图的叠加图。具体实施例方式具体实施方式以下结合较佳实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详细说明如下；同时为了简单和清楚的目的，下文恰当的省略了公知技术的描述，以免那些不必要的细节影响对本技术方案的描述。六味地黄丸近红外全息指紋图谱的质量控制方法，其特征在于按如下步骤进行(1)供试品的制备取市面销售的六味地黄浓缩丸粉碎，过100目筛，称10g，备用；(2)标准品的制备分别粉碎熟地黄、山药、山茱萸、牡丹皮、泽泻和茯苓，过100目筛；按2005版药典的规定分别取8g熟地黄、4g山药、4g山茱萸、3g牡丹皮、3g泽泻和3g茯苓混合均匀，配成标准六味地黄丸，备用；(3)供试品和标准品图谱分别将10g供试品、标准品置入石英样品杯内，使用积分球漫反射附件采集近红外光谱图，采集条件采集光谱波长范围为10000-4000cm-1,光源采用空门衰减，增益为2倍，以金箔为参比进行扫描，扫描次数为32次，分辨率为8cnf1,每份样品采集20张语图；标准品六味地黄丸的近红外光谱图如图l所示，六p木单药和标准品六味地黄丸近红外光谱图的叠加图谱如图2所示，标准品六味地黄丸和六个厂家生产的六味地黄丸的近红外光谱图的叠加图谱如图3所示。(4)六味地黄丸质量分析基本模型的建立及质量评^h将标准品的六味地黄丸和市面销售的六个不同厂家生产的六味地黄丸(分别标记为1，2，3，4,5,6)采集的近红外光谱图数据用数据分析软件TQAnalyst8.0进行处理，采用化学计量学的主成分分析-距离判别方法建立六味地黄丸质量分析基本模型，计算出标准品到六味地黄丸各味单药的距离D基本标准值，供试品到六味地黄丸各味单药的距离D基本值及D基本平均值，计算置信度为99%时D基本标准值的置信区间和D基本平均值的置信区间，结果如表1。根据各厂家生产的六味地黄丸到各味单药的距离D值是否处于置信区间内，对六味地黄丸进行质量评价；若判别距离D值处于置信区间内，则表明该味药材的用量和品质符合药典要求。按六味药材的符合程度进行整体质量评价，符合药典要求的药材给1颗星号。获得的星号愈多，六味地黄丸的质量愈好。表1六味地黄丸质量分析基本模型及质量评价<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>山茱萸232720292928263.726.0±6.13333±6.1牡丹皮43454036394040.53.140.5±5.14040±5.1泽泻54605252495052.83.952.8±6.45151±6.4茯苓78777773747675.81.975.8±3.17070±3.1用D平均值进行质量评价(P=0.99)★用D标准值进行质量评价(P=0.99)实施例1取标记为8、9、10的厂家生产的六味地黄浓缩丸的样品4分碎，过100目筛，称10g,备用；测定方法将10g样品直接置入石英样品杯内，使用积分球漫反射附件采集近红外光谱。采集条件采集光语范围为10000-4000cnT1,光源采用空门衰减，增益为2倍；以金箔为参比进行扫描，扫描次数为32次，分辨率为8cm—1;每份样品釆集20张图谱；质量鉴定把8、9、10三个厂家生产的六味地黄浓缩丸样品测得的近红外图谱数据逐次分别替代质量分析基本模型中的厂家1近红外图谱数据，用数据分析软件TQAnalyst8.O进行处理，采用化学计量学的主成分分析-距离判别方法建立六味地黄丸质量分析检验模型，计算出标准品到六味地黄丸各味单药的距离D检验标准值，供试品到六味地黄丸各味单药的距离D检验值，由于在六味地黄丸的质量分析4企验模型中用厂家待测样品近红外图谱数据替代了六味地黄丸质量分析基本模型中的1号近红外图谱数据，六味地黄丸质量分析检验模型中供试品的D检验值必须乘以校正因子f换算成相当于六味地黄丸质量分析基本模型中的D校正值，其中校正因子『=0基本标准值+D检验标准值，D校正值-fxD检验值。结果如表2所示表2:三个厂家的六"未地黄浓缩丸样品的质量分析、丸D8检D8校正D8校D9检D9校正D9校D检DIODIO\验值因子*正值**验值因子*正值验10校正校正值单味药\**值因子**氺熟地黄9280/7894.39480/8094.08080/8080.0山药3247/4631.74247/4642.94347/4643.9山茱萸2833/3030.83633/3237.12133/3023.1牡丹皮2640/4026.03340/4033.04040/4040.07泽泻4451/5044.94151/5240.25751/5255.9茯苓5770/6660.57370/7370.06570/6372.2D平均值进★行质量评价★(P=0.99)用D标准值进行质量评价(P=0.99)根据六味地黄丸质量分析基本模型表1中D基本平均值的置信区间(P-99W和D基本标准值的置信区间(P=99°/。)进行质量评价，由表2评价结果(星号数目)可知，IO号厂家生产的六味地黄浓缩丸比8、9两个厂家生产的六味地黄浓缩丸的质量好一些，但三个厂家生产的六味地黄丸质量都不完全符合药典要求。实施例2取标记为1的厂家生产的三个批号(批号为071289，080286，080319)的六味地黄浓缩丸粉粹，过100目筛，称10g，备用；测定方法将样品直接置入石英样品杯内，使用积分球漫反射附件采集近红外光镨。采集条件釆集光谱范围为10000~4000cm—1,光源采用空门衰减，增益为2倍；以金箔为参比进行扫描，扫描次数为32次，分辨率为8cnf1，每份样品采集20张图谱；质量鉴定将上述三个批号的六味地黄浓缩丸测得的近红外图谱数据逐次分别替代六味地黄丸质量分析基本模型中的1号近红外图谱数据，用数据分析软件TQAnalyst8.O进行处理，采用化学计量学的主成分分析-距离判别方法建立六味地黄丸质量分析检验模型，计算出标准品到六味地黄丸各味单药的距离D纟企验标准值，供试品到六味地黄丸各味单药的距离D检验值。由于在六味地黄丸的质量分析检验模型中用厂家待测样品近红外图谱替代了六味地黄丸质量分析基本模型中的1号近红外图谱，检验模型中供试品的D检验值必须乘以校正因子f换算成相当于六味地黄丸质量分析基本模型中的D校正值，校正因子f=D基本标准值+D检验标准值，D校正值=fxD检验值。结果如表3所示表3:某厂家(编号1)三个不同批号的六味地黄浓缩丸样品的质量分析\六味地DlDlDlDlDlDlDlDlDl\黄丸肌卿做微。縱《卿厕卿J7\检验校正因校正值6检验6狡iF校正值9检验服正9校正值子***值因子***值因子*值**熟地黄\7480/7282.27680/8274.17880/8078.0山药4047/4541.84347/4445.94547/4547.0山茱萸1733/2423.41933/2525.12333/2431.6牡丹皮3840/3840.04440/3945.14640/3947.28<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>根据六味地黄丸质量分析基本模型表1中D基本平均值的置信区间(P=99%)和D基本标准值的置信区间(P=99%)进行质量评价，由表3评价结果(星号数目)可知，该三个批号的六味地黄浓缩丸样品质量均不完全符合药典要求。本发明进一步对上述确定的测定方法进行有效性评价，其中包括准确度、精密度、重复性、稳定性.准确度实验根据六味地黄丸质量分析基本模型数据来计算此模型的相对标准偏差和置信区间见表4:表4:六味地黄丸质量分析基本模型的相对标准偏差和置信区间<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>②重复性实验平行制备6份供试品，在上述条件下分别测定，重新建模，考察方法的重复性，结果表明建立模型判定结果一致。③稳定性实验同一供试品，分别间隔O、3、6、9、16、24h进行测定，考察方法的样品稳定性，结果表明建立模型判定结果一致。在详细说明的较佳实施例之后，熟悉该项技术人士可清楚地了解，在不脱离上述申请专利范围与精神下可进行各种变化与修改，凡依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修^饰，均属于本发明技术方案的范围。且本发明亦不受限于说明书中所举实例的实施方式。权利要求1、六味地黄丸近红外全息指纹图谱的质量控制方法，其特征在于按如下步骤进行(1)供试品的制备取市面销售的2-10个六味地黄浓缩丸粉碎，过100目筛，称10g，备用；(2)标准品的制备分别粉碎熟地黄、山药、山茱萸、牡丹皮、泽泻和茯苓，过100目筛；按2005版药典的规定分别取8g熟地黄、4g山药、4g山茱萸、3g牡丹皮、3g泽泻和3g茯苓混合均匀，配成标准六味地黄丸，备用；(3)供试品和标准品图谱分别将10g供试品、标准品置入石英样品杯内，使用积分球漫反射附件采集近红外光谱图，采集条件采集光谱波长范围为10000～4000cm-1，光源采用空门衰减，增益为2倍，以金箔为参比进行扫描，扫描次数为32次，分辨率为8cm-1，每份样品采集20张谱图；(4)六味地黄丸质量分析基本模型的建立将标准品的六味地黄丸和市面销售的2-10个供试品的六味地黄丸采集的近红外光谱图用数据分析软件TQAnalyst8.0进行处理，采用化学计量学的主成分分析-距离判别方法建立六味地黄丸质量分析基本模型，计算出标准品到六味地黄丸各味单药的距离D基本标准值，供试品到六味地黄丸各味单药的距离D基本值及D基本平均值，计算置信度为99％时D基本标准值的置信区间和D基本平均值的置信区间；(5)六味地黄丸质量分析检验模型的建立及质量评价方法按步骤(3)采集质量待检验的六味地黄丸供试品的近红外图谱，替代六味地黄丸质量分析基本模型中的任何一个基本供试品的近红外图谱数据，用数据分析软件TQAnalyst8.0进行处理，采用化学计量学的主成分分析-距离判别方法建立六味地黄丸质量分析检验模型，计算出标准品到六味地黄丸各味单药的距离D检验标准值，供试品到六味地黄丸各味单药的距离D检验值，将六味地黄丸质量分析检验模型中供试品的D检验值乘以校正因子f换算成相当于六味地黄丸质量分析基本模型中的D校正值，其中校正因子f＝D基本标准值÷D检验标准值，D校正值＝f×D检验值。根据六味地黄丸供试品到各味单药的距离D校正值是否处于六味地黄丸质量分析基本模型D基本标准值的置信区间和D基本平均值的置信区间内，对六味地黄丸供试品进行整体质量评价；若六味地黄丸供试品的判别距离D校正值处于置信区间内，则表明该味药材的用量和品质符合药典要求，符合药典要求的药材给1颗星号；获得的星号愈多，六味地黄丸的质量愈好，获六星者质量最佳。2、根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于所述的六味地黄丸为含有六味地黄丸组成的任何一种剂型。3、根据权利要求2所述的质量控制方法，其特征在于所述的六味地黄丸的剂型为水蜜丸、大蜜丸、浓缩丸、颗粒或胶嚢。全文摘要本发明涉及一种六味地黄丸近红外全息指纹图谱的质量控制方法，本方法将指纹图谱技术并结合被检测组分的特点，利用近红外光谱可用于对所有含氢基团有关的样品物化性质分析与检测，确保所检测成分准确、可靠。近红外光谱检测和化学计量学方法的应用，可以更加准确地把握有关药品整体的质量，从而有效确保了六味地黄丸的安全、均一、稳定、有效、可控。本发明的质量控制方法简便、结果准确、重现性好，可用于中药质量评价、中药质量控制和中药新药研发中。特别是可将其作为六味地黄丸质量控制及真伪鉴别的指标之一。文档编号A61K36/88GK101485805SQ20091006087公开日2009年7月22日申请日期2009年2月27日优先权日2009年2月27日发明者付友珍,杨天鸣申请人:中南民族大学