一种增加红参中总皂苷、小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量的炮制方法

专利名称：一种增加红参中总皂苷、小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量的炮制方法
技术领域：
本发明属于中药技术领域，具体涉及一种增加红参中总皂苷、 小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量的炮制方法。
背景技术：
人参系五加科植物人参(尸朋oxgwwwgC.A.Meyer)的干燥根， 具有"主补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，明目，开心益智，久服 轻身延年"之功效。鲜参洗净后直接干燥者称为"生晒参"，蒸制后 干燥者称为"红参"。其中白参药性偏凉，适用于气阴不足；红参性 质偏温，适用于气虚阳虚者，久服红参可以提高人体免疫力、抗疲劳、 抗辐射、抑制肿瘤、调整人体内分泌系统。
人参含有多种化学成分，人参皂苷是其中最重要的一类活性成 分，具有多种药理作用，对它的研究也是最深入和广泛的，目前为止 已发现了40多种人参皂苷。其中某些小极性人参皂苷在抗癌、抗氧 化、抗病毒方面有比较明显的效果，但是在普通加工的红参中含量较 低。近年来，对人参非皂苷类成分的研究也很多。精氨酸双糖苷(AFG)
就是在红参加工过程中麦芽糖与精氨酸发生梅拉德反应而生成的有 重要生物活性的非皂苷类水溶性成分，具有增强免疫，扩张血管及抑 制小肠麦芽糖酶活性等作用。实验证明，AFG只有在加热、酸性条 件下才能生成，并且无水环境有利于增加其含量。传统的红参加工方法一般是将鲜参洗净直接放入锅或屉内，在 加热的过程中，人参直接接触水蒸汽，在这种情况下，人参皂苷容易 流失，产生较大损失(娄子恒，张立臣等.蒸参水浓縮物中人参皂苷的
含量测定.人参研究.2003,15 (1) :33);同时还易使麦芽糖和精氨 酸之间的梅拉德反应向反方向即AFG分解的方向进行，造成AFG产 率下降(郑毅男，孟祥颖等.红参中新化合物精氨酸苷的生成机理及生 成条件的研究.中国药物化学杂志.1997，7(3):217-220)。

发明内容
本发明的目的是提供一种一种增加红参中总皂苷、小极性皂苷 和精氨酸双糖苷含量的炮制方法。该方法将鲜参洗净，放入密闭容器 内，然后放入蒸参箱中，经过升温、蒸制、烘干，即得本炮制方法加
工的红参。
本发明经过大量研究发现在红参加工过程中，蒸制温度、蒸制 时间对人参皂苷的种类和含量以及梅拉德反应的进行都有一定的影 响。传统红参在蒸制的过程中有部分皂苷损失，并且含量较多的大极 性皂苷也不易转化为活性好的小极性皂苷；同时温和、多水的环境也 不利于AFG的生成。因此，在红参加工过程中，要不断改善红参加 工工艺，以减少红参总皂苷的损失，并尽量多地生成小极性皂苷和梅 拉德初级反应产物。
实施本发明的技术方案如下:把鲜参清洗干净，密封后置于蒸参 箱的笼屉内，在100-12(TC范围内蒸制1.5-9小时，当蒸制时间结束 时让人参在蒸参箱内自然冷却至60°C，然后取出放入烘箱中以50°C烘干4-5天，得到总皂苷、小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量增加的红
取一部分洗净的鲜参作为对照组直接放入上述的蒸参箱的笼屉 内，按相同的条件蒸制、烘干，得到的红参为传统方法得到的红参。 下面介绍分析检测方法；
样品溶液制备取本发明提供的方法得到的红参和传统方法得到 的对照红参各lg粉末，加入30ml的甲醇，超声提取l小时，过滤； 将甲醇提取液蒸干，加入30ml水溶解，然后加入乙醚、氯仿等有机 溶剂脱脂3次，每次20-40分钟，静止分层，弃去有机层，合并水层 提取液，再用水饱和正丁醇萃取水层提取液3次，每次30-60分钟， 合并萃取液，蒸干，定容10ml，即得红参总皂苷提取物；
将甲醇提取之后的残渣加入30ml水，超声提取l小时，过滤，浓 缩提取液至5ml，得到含精氨酸双糖苷的红参水提取物。
样品检测本发明应用高效液相色谱法分析人参皂苷，条件如下 色谱柱为日本资生堂Shiseido-CAPCELL,C18-ODS 4.6mmx250mm色 谱柱(粒径5Wn)，高效液相色谱仪为Waters 2695，配备Waters 2996 diode array detector检测器。流动相A为乙腈，流动相B为0.05%磷酸 水溶液。洗脱条件为0 50min: 25% 50%A、 75% 50%B; 50 80min: 50% 90%A、 50% 10%B; 80 90min: 90% 100%A、 10% 0%B。流速0.5mL/min;检测波长195 nm;柱温40°C， 进样量20.0 iU。结果测得传统方法得到的红参总皂苷含量为 1.48-5.37%， 20R-Rg3的含量为0.004-0.12%;而本发明提供的方法得到的红参总皂苷含量为2.45-6.69%, 20R-Rg3的含量为0.004-0.20%。 同时以100°C传统蒸制3h得到的红参总皂苷提取物色谱图中的Rf峰 作为内标，比较两种方法得到的总皂苷提取物中各种小极性皂苷的含 量变化。
应用质谱方法半定量分析精氨酸双糖苷含量的变化，方法是将得 到的红参水提取物精密取10rt，稀释至1.5ml;然后取IOW，加入 10(H4红景天苷溶液做内标，采用相同的质谱条件检测，根据相对丰 度比较含量变化。


图1为传统方法得到的红参总皂苷提取物的高效液相色谱图。 图2为本发明提供的方法得到的红参总皂苷提取物的高效液相 色谱图。
其中1-21号色谱峰分别为l:Re、 2:Rgl、 3:Rf、 4:Rb!、 6:Rc、 7:Rb2、 8:Rd、 9:Ro、〗0:未知、11:R1m、 12:Rg6、 13:f4、 14:Rk3、 15:Rh4、 16:20S-Rg3、 17:20R-Rg3、 18:20S-Rs3、 19: 20R-Rs3、 20: Rk!、 21:Rg5。
从色谱图可以看出，本发明提供的方法得到的红参总皂苷含量显著提 高，13-21号峰面积明显增大，说明小极性皂苷种类增多，含量也明 显增加。
图3为传统方法得到的红参水层提取物的质谱图，其中m/z359 为内标红景天苷的分子离子峰，m/z497为精氨酸双糖苷的分子离子峰。
图4为本发明提供的方法得到的红参水层提取物的质谱图，可以看出精氨酸双糖苷的含量明显增加。
具体实施方式
实施例1:
(1) 加工方法
挑选6-8根鲜参清洗干净， 一部分密封后放入蒸参箱的笼屉内， IO(TC蒸制3小时，当蒸制时间结束时让人参在蒸参箱内断电自然冷 却至60。C，然后取出后分别放入烘箱中以5(TC烘干5天，得到总皂 苷、小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量增加的红参。
将上述洗净鲜参一部分作为对照组直接放入上述的屉中，按相 同的条件蒸制、烘干，得到传统方法加工的红参。
(2) 样品溶液制备
取本发明提供的方法得到的红参和传统方法得到的红参对照品各 lg粉末，加入甲醇20ml， 4(TC超声提取lh，过滤，蒸干甲醇提取液， 加入30ml水溶解；然后用60ml乙醚脱脂3次；用90ml水饱和正丁醇 萃取3次，合并正丁醇液，蒸干，用甲醇定容于10ml容量瓶中，即得
红参总皂苷提取物；
残渣加水30ml， 4(TC超声提取lh，过滤，浓縮至5ml，即得红参
水层提取物。
(3) 样品检测
按照技术方案中的样品检测方法对红参总皂苷提取物和水层提 取物进行检测，结果测得本发明提供的方法得到的红参总皂苷和传统 方法相比，含量增加101.55%，小极性皂苷的种类有所增加，含量也增加33.67% 。红参水层提取物中AFG的含量比传统方法增加20.42。/。。 实施例2:
挑选6-8根鲜参清洗干净， 一部分密封后放入蒸参箱的笼屉内， ll(TC蒸制1. 5小时，当蒸制时间结束时让人参在蒸参箱内自然冷却 至60'C，然后取出后分别放入烘箱中以5(TC烘干5天，得到总皂苷、 小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量增加的红参。
将上述洗净鲜参一部分作为对照组直接放入上述的屉中，按相同 的条件蒸制、烘干，得到传统方法加工的红参。 样品溶液制备和样品检测同实施例1.
结果测得本发明提供的方法得到的红参总皂苷含量增加21. 73%， 小极性皂苷含量增加25.41%， AFG含量增加8.05%。 实施例3:
挑选6-8根鲜参清洗干净， 一部分密封后放入蒸参箱的笼屉内， ll(TC蒸制3小时，当蒸制时间结束时让人参在蒸参箱内自然冷却至
6crc，然后取出后分别放入烘箱中以5crc烘干约5天，得到总皂苷、
小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量增加的红参。
将上述洗净鲜参一部分作为对照组直接放入上述的屉中，按相同 的条件蒸制、烘干，得到传统方法加工的红参。 样品溶液制备和样品检测同实施例1.
结果测得本发明提供的方法得到的红参总皂苷含量增加51. 22% ， 小极性皂苷含量增加83. 48% ， AFG含量增加7. 14% 。
实施例4:挑选5-6根鲜参清洗干净， 一部分密封后放入蒸参箱的笼屉内， ll(TC蒸制5小时，当蒸制时间结束时让人参在蒸参箱内自然冷却至 6(TC，然后取出后分别放入烘箱中以5(TC烘干5天，得到总皂苷、 小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量增加的红参。
将上述洗净鲜参一部分作为对照组直接放入上述的屉中，按相同 的条件蒸制、烘干，得到传统方法加工的红参。 样品溶液制备和样品检测同实施例1.
结果测得本发明提供的方法得到的红参总皂苷含量增加4L 94%， 小极性皂苷含量增加60. 15% ， AFG含量增加58. 51% 。 实施例5:
挑选5-6根鲜参清洗干净， 一部分密封后放入蒸参箱的笼屉内， 12(TC蒸制1. 5小时，当蒸制时间结束时让人参在蒸参箱内自然冷却 至6(TC，然后取出后分别放入烘箱中以5(TC烘干5天，得到总皂苷、 小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量增加的红参。
将上述洗净鲜参一部分作为对照组直接放入上述的屉中，按相同 的条件蒸制、烘干，得到传统方法加工的红参。 样品溶液制备和样品检测同实施例1.
结果测得本发明提供的方法得到的红参总皂苷含量增加6. 00%， 小极性皂苷含量没有增加，AFG含量增加311. 6%。
实施例6:
挑选5-6根鲜参清洗干净， 一部分放入2500ml具塞锥形瓶中密 封，然后将锥形瓶放入蒸参箱的笼屉内，12(TC蒸制3小时，当蒸制时间结束时让人参在蒸参箱内自然冷却至60°C，然后取出后分别
放入烘箱中以5(TC烘干5天，得到总皂苷、小极性皂苷和精氨酸双
糖苷含量增加的红参。
将上述洗净鲜参一部分作为对照组直接放入上述的屉中，按相同 的条件蒸制、烘干，得到传统方法加工的红参。
样品溶液制备和样品检测同实施例1.
结果测得本发明提供的方法得到的红参总皂苷含量增加238.15 %，小极性皂苷含量增加150.1%， AFG含量增加281.5%。
实施例7:
挑选6-8根鲜参清洗干净， 一部分密封后放入蒸参箱的笼屉内， 12(TC蒸制4. 5小时，当蒸制时间结束时让人参在蒸参箱内自然冷却 至60°C,然后取出后分别放入烘箱中以5(TC烘干约5天，得到总皂 苷、小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量增加的红参。
将上述洗净鲜参一部分作为对照组直接放入上述的屉中，按相同 的条件蒸制、烘干，，得到传统方法加工的红参。 样品溶液制备和样品检测同实施例1.
结果测得本发明提供的方法得到的红参总皂苷和小极性皂苷含量 均无明显变化，AFG含量增加13.89%。
挑选6-8根鲜参清洗干净， 一部分密封后放入蒸参箱的笼屉内， 12(TC蒸制6小时，当蒸制时间结束时让人参在蒸参箱内自然冷却至 6(TC，然后取出后分别放入烘箱中以5(TC烘干5天，得到总皂苷、小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量增加的红参。
将上述洗净鲜参一部分作为对照组直接放入上述的屉中，按相同 的条件蒸制、烘干，得到传统方法加工的红参。 样品溶液制备和样品检测同实施例1.
结果测得本发明提供的方法得到的红参总皂苷含量增加80. 12%， 小极性皂苷含量增加228. 3%， AFG含量无明显增加。 实施例9:
挑选6-8根鲜参清洗干净， 一部分密封后放入蒸参箱的笼屉内， 120。C蒸制9小时，当蒸制时间结束时让人参在蒸参箱内自然冷却至 60°C，然后取出后分别放入烘箱中以5(TC烘干5天，得到总皂苷、 小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量增加的红参。
将上述洗净鲜参一部分作为对照组直接放入上述的屉中，按相同 的条件蒸制、烘干，得到传统方法加工的红参。 样品溶液制备和样品检测同实施例1.
结果测得本发明提供的方法得到的红参总皂苷含量增加7. 99%, 小极性皂苷含量增加12. 72%， AFG含量增加73. 50%。
权利要求
1、一种增加红参中总皂苷、小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量的炮制方法，其特征在于，把鲜参清洗干净，密封后置于蒸参箱的笼屉内，在100-120℃范围内蒸制1.5-9小时，当蒸制时间结束时让人参在蒸参箱内自然冷却至60℃，然后取出放入烘箱中以50℃烘干4-5天，得到总皂苷、小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量增加的红参。
全文摘要
本发明提供了一种增加红参中总皂苷，小极性皂苷和精氨酸双糖苷含量的炮制方法。把鲜参清洗干净，密封后置于蒸参箱的笼屉内，在100-120℃范围内蒸制1.5-9小时，当蒸制时间结束时让人参在蒸参箱内自然冷却至60℃，然后取出放入烘箱中以50℃烘干4-5天，得到红参。经高压液相色谱检测可知，得到的红参总皂苷含量比传统方法提高6.00-238.15％；小极性皂苷Rk₅，Rg₆，Rk₁，Rh₄，Rg₃，Rs₃的含量也明显提高；应用质谱进行半定量分析可知，精氨酸双糖苷的含量比普通加工的红参高7.14％-311.6％。
文档编号A61P37/04GK101537025SQ20091006690
公开日2009年9月23日 申请日期2009年5月5日 优先权日2009年5月5日
发明者刘志强, 刘淑莹, 宋凤瑞, 杜芹芹, 邢俊鹏 申请人:中国科学院长春应用化学研究所