专利名称：：柠檬酸及复方柠檬酸在制药中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及柠檬酸在制药中的应用，特别是，涉及一种杼檬酸复方在抗畜禽病毒或细菌引起的法氏囊病、呼吸道疾病中的应用。
背景技术：
：近年来，随着畜产品的安全问题越来越受到广大消费者的普遍关注，无公害畜产品的生产已成为畜牧业发展的必然趋势。发达国家对于兽药注册与管理日趋严格，欧盟曾宣布2006年抗生素不再作为促生产添加剂使用，并且禁用了许多兽用药品。酶制剂、益生素、中草药等几类绿色添加剂随之成为兽药生产企业关注的重点。尤其是残留低、毒副作用小的新兽药产品在众多的兽药产品中独树一巾只，具有广阔的巿场前景。2005年农业部发文规定禁止把人类使用的广谱药物(病毒灵、金刚烷胺、金刚乙胺、阿昔洛伟)应用到畜禽药物中，防止抗病毒药物耐药性从畜禽向人类传递，但是，我国某些传染性疾病仍缺乏有效的疫苗来控制(如呼吸繁殖综合症、猪心肌炎、猪无名高热等)，故急需要开发有效药物来预防这些疾病。此外，畜禽生产中禽流感、支原体、大肠杆菌等广泛流行，当前控制这些细菌病主要依赖抗菌素治疗，由于抗菌素的滥用、耐药性出现，导致细菌性传染病预防和治疗难度加大，同时药物残留也威胁着人类食品安全和身体健康。我们前期研究显示中药乌梅提取物具有抗菌、抗病毒活性成分，实验室验证也证实具有良好的预防价值。通过体外及体内试验，追踪活性部位，通过现代色谱方法应用硅胶、SephadexLH-20凝胶等材料，从乌梅中分离获得单体化合物I，利用现代波谱技术等解析出单体结构(中文名称柠檬酸；英文名称citricacid)。临床试验发现复方杼檬酸在防治家禽疾病上表现较好的生物活性，特别是对鸡法氏囊病、鸡毒支原体和鸡大肠杆菌病感染有保护作用。后期进一步优化组方探讨其潜在的临床应用价值。柠檬酸又名枸橼酸，天然的柠檬酸存在于水果中，如柠檬、柑橘等。人工合成的柠檬酸是用砂糖、糖蜜、淀粉、葡萄等含糖物质发酵而制的，可分为无水和水合物两种。柠檬酸现在多用于香料或作为饮料的酸化剂，也可作为油脂的抗氧剂，在医药工业中，它是许多医药品的原材料，如柠檬酸呱吡嗪(驱蛔虫药)、柠檬酸铁铵(补血剂)、此外，柠檬酸还在医药中作酸化剂和医学上用作多价鳌合剂，也是化学中间体；在化学工业中，杼檬酸的酯类可作为无毒增塑剂。杼檬酸与钙离子结合成可溶性络合物，能缓解钙离子促使血液凝固的作用，可预防和治疗高血压和心肌梗死，起抗凝作用。另外，杼檬酸还表现一定的促动物生长等活性梓檬酸的饲用史可以追溯到上个世纪50年代，但在80年代以前，研究者们的研究主要集中在柠檬酸在对抗腹泻的作用上，以后，人们的注意力转移到对促生长和提高饲料利用率的研究上。表1总结了近些年来国外杼檬酸对仔猪作用效果的报道，结果虽然不完全一致，但正效应居大多数。这种不一致可能与曰粮的类型、组成、仔猪日龄和酸的用量等因素有关。我国对仔猪伺粮酸化的研究起步较晚，但柠檬酸一直是我国科研工作者们的研究重点之一。刘作华等(2000)、张恩平(2002)、万伶俐(2006)、朱作民(2006)、张吴平(2007)、温萍(2007)分别报道了柠檬酸对仔猪生产性能等方面的影响，日粮中添加1%-2%的柠檬酸，对防止仔猪腹泻的发生、促进仔猪生长、提高词料转化率等均有良好的作用。表l近年国外对柠檬酸对仔猪作用效果的研究<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>食量效率Giesting(1985)30玉米-豆粕型2+3.2-3.9+7.8B薦ll等(1988)28玉米-豆粕型1+9.3+2.5+6.5B画ll等(1988)28玉米-豆饼-乳清粉1+4.3+1.4+5.9Henry等(1985)10小麦-玉米燕麦SBM+乳制品3+14.3+19.6+1.0Radecki等(1988)28玉米-豆粕型1.5-8.3-5.0-6.0Krause等(1994)28玉米-大豆蛋白浓缩物2.5+5.5+6.60目前未见有关柠檬酸药物复方用于抗畜禽病毒或抗细菌性疾病的报道。
发明内容本发明目的是提供柠檬酸的新用途，即在兽药领域中的新应用。实际上，本发明提供杼檬酸在预防和治疗畜禽病毒病或细菌病药物中的应用。所述的畜禽病毒包括禽流感病毒和法氏囊病毒。所述禽流感病毒是H9亚型禽流感病毒；所述的法氏囊病毒是IBDVBC-6/85型。所述细菌包括牛大肠杆菌、鸡毒支原体和鸡大肠杆菌。所述预防和治疗畜禽病毒病、细菌病药物(以下称为复方杼檬酸)，包括按重量份计的下列组分柠檬酸93-98份、愈创甘油醚0.5-4份和酴磺乙胺1.5~3份。优选地，所述复方柠檬酸，包括按重量份计的下列组分梓檬酸94.5份、愈创甘油醚3.0份和酚磺乙胺2.5份。复方柠檬酸的制备方法如下按上述重量份称取各个组分，粉碎后，混合均匀，分装入瓶，得粉剂。5本发明的复方柠檬酸还可以加入常规的辅料或载体或可以按照本领域的常规制剂方法制备成口服制剂等，例如，可以是粉剂、片剂、颗粒剂、口服液等，优选为口服液或颗粒剂。复方柠檬酸药物按240-480毫克/公斤体重，可通过口服途径给药。本发明还提供复方柠檬酸在制备预防和治疗畜禽病毒病或细菌病药物中的应用。本发明人通过了大量的实验室和临床验证，发现梓檬酸具有抗病毒活性和广谱抗细菌活性，有效防治禽流感、支原体和禽大肠杆菌、牛大肠杆菌病等，可部分替代抗菌素治疗家禽顽固性呼吸道疾病，从而降低发病率，有效提高家禽的成活率和增重率。更具体来说，柠檬酸具有抑制家禽流感病毒、法氏囊病毒等作用，同时可有效杀灭引起动物发病的致病菌，例如牛大肠杆菌、鸡毒支原体和鸡大肠杆菌等细菌。愈创甘油醚异名，愈创木酚甘油醚，白色或浅灰色的结晶性团粒，服用后能刺激胃黏膜，反射性引起支气管分泌增加，使痰液稀释,而产生祛痰作用。本品还具有镇咳、解痉、抗惊厥作用，用于慢性支气管炎的多痰咳嗽、肺脓肿、支气管扩张和继发性哮喘。多与其他镇咳平喘药合用。用于黏液不易咳出的情况，此外，本品还有较弱的消毒防腐作用，可以减少痰液的恶臭味。酚磺乙胺俗称止血敏、阿格鲁明，有促进凝血的作用，适用于预防和治疗外科手术出血过多，血小板减少性紫癜或过敏性紫癜以及其他原因引起的出血，如脑出血、胃肠道出血、泌尿道出血、眼底出血、牙龈出血等。酚磺乙胺是通过促进凝血过程而发挥作用，能够增加血液中血小板数量，增强其聚集性和粘附性，促进凝血物质的释放，以加速凝血。本发明评价复方柠檬酸抗病毒和抗菌的功效，发现其可有效抑制鸡毒支原体、鸡大肠杆菌和牛大肠杆菌。体内试验表明按照480亳克/公斤体重，连续口服5天后，复方柠檬酸能有效抵抗禽流感、法氏囊病毒的攻击，降低死亡率，同时也具有防治大肠杆菌、支原体感染的作用。本发明具有以下有益效果梓檬酸可以广泛应用于养禽业、养牛业，部分替代抗病毒药物和抗菌素，弥补我国目前疫苗预防效果不良造成的损失，替代耐药抗菌素防治畜禽细菌病，控制传染病的流行和解决食品抗菌素残留、保证食品安全，提高动物性产品出口的竟争力。具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。才宁檬酸购自北京化学试剂公司，为分析纯；愈创甘油醚购自北京双鹤药业股份有限公司；酚磺乙胺购自北京双鹤药业股份有限公司。实施例1本发明复方柠檬酸包括下列组分柠檬酸94.5克、愈创甘油醚3.0克、酚磺乙胺2.5克。其制备过程如下按上述重量称取各个组分，粉碎后过80目筛，混合均勻，分装入瓶，得粉剂。实施例2本发明复方柠檬酸包括下列组分柠檬酸93克、愈创甘油醚4克、酚磺乙胺3克。其制备过程如下按上述重量称取各个组分，粉碎后过80目筛，混合均勻，分装入瓶，得粉剂。实施例3本发明复方柠檬酸包括下列组分柠檬酸97.5克、愈创甘油醚l克、酚磺乙胺1.5克。7其制备过程如下按上述重量称取各个组分，粉碎后过80目筛，混合均匀，分装入瓶，得粉剂。下述实验例所用的复方柠檬酸为实施例l所得的复方柠檬酸粉剂。本发明复方村檬酸包括下列组分柠檬酸98克、愈创甘油醚0.5克、酚磺乙胺1.5克。其制备过程如下按上述重量称取各个组分，粉碎后过80目筛，混合均匀，分装入瓶，得粉剂。下述实验例所用的复方梓檬酸为实施例l所得的复方柠檬酸粉剂。实施例5本发明复方狞檬酸包括下列组分柠檬酸95.5克、愈创甘油醚2克、酚磺乙胺2.5克。其制备过程如下按上述重量称取各个组分，粉碎后过80目筛，混合均勻，分装入瓶，得粉剂。下述实验例所用的复方柠檬酸为实施例1所得的复方柠檬酸粉剂。实施例6本发明复方村檬酸包括下列组分柠檬酸94.5克、愈创甘油醚3.0克、酚磺乙胺2.5克。其制备过程如下将称取一定量的复方粉剂用蒸馏水完全溶解，配制成浓度为8mg/mL的液体，即得复方柠檬酸口服液(需闭光保存)。如未有特别说明，下述实验例提到的复方杼檬酸为实施例l所得的复方柠檬酸粉剂。实验例1复方柠檬酸治疗鸡传染性法氏囊病及药物量效关系试验选择25日龄海蓝褐雏鸡，将实施例l所得的复方柠檬酸粉剂分成高剂量组(720亳克/公斤体重)、中剂量组(480亳克〃A斤体重)和低剂量组(240毫克/公斤体重)、高免卵黄抗体对照组、病毒稀释液组(阳性对照组)、空白对照组(阴性对照组)，每组15只，共90只鸡，分组情况如表2所示。以法氏囊北京株BC6/85(中国兽药监察所)为攻毒株，100105()/0.21111通过点眼途径。除空白对照组外，其它各组均攻毒，每只鸡点眼0.21111，攻毒48h后给药。用药组连续给药7天，每天分两次给药，高免卵黄抗体对照组0.5ml/只鸡肌肉注射，连续两天；给完药后观察2天剖检。试验期间观察试验组和对照组的精神状态、采食量、腹泻情况，鸡只的死亡数量等。剖检重点观察法氏囊的病变情况，是否肿大或萎缩、出血、表面是否有胶冻样渗出物。观察胸肌和腿肌病变指数是否出血、出血程度，测定病变指数，结果如下表3、4所示。表2预防试验鸡的分组及处理编号分组数量(只)给药量1复方杼檬酸低剂量15240mg/kg体重2复方柠檬酸中剂量480mg/kg体重3复方柠檬酸高剂量15720mg/kg体重4卵黄抗体组15lml/只感染对照组15-6健康对照组15-表3复方杼檬酸治疗法氏囊感染中体重变化情况实验前平均体重试验后平均体重相对增重率(g)(g)(%)高剂量组105.5±16.91卯.5±24.388.3中剂量组128.8±17.0211.0±32.085.4低剂量组127.2±20.4210.8±40.686.0卵黄抗体组117.2±23.3197.7±38.983.6感染对照组125.0±22.5174.0±38.950.9空白对照组138.7±21.1235.0±31.1100相对增重率根据试验开始及结束时每只鸡的体重，计算增重及每组鸡的平均增重，并以空白对照组增重为100%,各组增重与之相比得到各组相对增重率。表4复方柠檬酸治疗法氏囊试验结果分组剂量(mg/kg)数量(只)存活(只)法氏囊病变指数胸肌和腿肌病变指数高剂量组72015152722中剂量组48015152422低剂量组24015152626卵黄抗体组1015152827感染对照组015123039空白组0151500注法氏囊病变指数测定如下严重出血4分；中度3分；轻度1分；胸肌和腿肌病变指数严重出血3分/侧，中度出血2分/侧，轻度出血l分/侧。由表3、4可见，复方柠檬酸三个剂量组相对增重率均比感染对照组高，并优于卵黄抗体组，表明复方杼檬酸在攻毒后依然能促进生长，表现较高的相对增重率；从法氏囊的出血病变情况可以看出，感染对照组法氏囊病变最严重，复方柠檬酸中剂量组的病变最轻。从胸肌腿肌出血情况看，感染对照组和卵黄抗体组的病变最重，复方杼檬酸中剂量组和高剂量组的病变最轻。综合上述体重变化、法氏囊病变指数、胸肌和腿肌病变指数，复方柠檬酸能促进生长，减轻法氏囊损伤，对治疗鸡传染性法氏囊病效果优于法氏囊抗体组，表现较好的疗效。10实验例2复方柠檬酸体外抑制鸡毒支原体试验按照实施例l所述方法将复方柠檬酸配制成浓度为100mg/ml的溶液。取24h能在培养基中达到对数生长期的鸡毒支原体培养物做适当稀释，使浓度达到lxl0VfU/mL作为本试验用菌液。取22支无菌试管，各管加入KM2培养基0.5mL。取0.5mL的100mg/ml的复方柠檬酸溶液加入第2管，按2倍稀释法依次稀释至第13管，即第2-13管复方柠檬酸浓度分别为50mg/ml、25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml、3.125mg/ml、1.56mg/ml、0,78mg/ml、0.39mg/ml、0.195mg/ml、0.098mg/ml、0.049mg/ml、0.025mg/ml;取0.5ml的1.6mg/ml的磷酸泰乐菌素溶液加入第14管，然后按2倍稀释法依次稀释至第21管，即第14-21管的磷酸泰乐菌素的浓度为0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/ml，然后在第1-21管中各加入0.5mL菌液及第22管中加入KM2培养基0.5mL,37。C培养。第l管为正常对照组，第22管为阴性对照组，把第14-21管作为磷酸泰乐菌素对照；重复3次。当正常对照组发生颜色改变(即培养液中酚红指示剂由红色变为橘黄色)且无混浊时，最小有效抑制MP生长浓度(MIC)。结果如下表5所示。表5复方柠檬酸体外对鸡毒支原体S6株MIC测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>第IO管0.195橘黄色且清亮第ll管0細橘黄色且清亮第12管0.049橘黄色且清亮第13管0,025橘黄色且清亮第14管0.8红色且清亮第15管0.4红色且清亮第16管0.2红色且清亮磷酸泰乐菌素组第17管第18管0.10.05红色且清亮红色且清亮第19管0.025红色且清亮第20管0.0125橘黄色且清亮第21管0.00625橘黄色且清亮阴性对照组第22管无药物无菌夜红色且清亮敏感度标准MIC《7.81g/L为较高敏感；7.8KMIC<250g/L为中度敏感；MIO250g/L为不敏感。根据表5中的试验结果判定复方柠檬酸和磷酸泰乐菌素体外对支原体的MIC分别为6.25mg/ml和0.025mg/ml，其对支原体的抑菌效果与磷酸泰乐菌素对支原体的抑菌效果属于统一敏感度的，均属于高度敏感。实验例3复方柠檬酸治疗鸡毒支原体病试验3.1实验方法1日龄AA肉鸡用于本试验，正常饲养条件下饲养，7日龄时攻毒鸡毒支原体S6株。使用24h能在液体培养基中达到对数生长高峰期(测定培养物含菌浓度约为108CCU/ml)的3代MGS6株培养物，经点眼、滴鼻和气囊注射接种于7曰龄健康的AA型肉鸡，0.5ml/只，21d后当鸡群约有半数发病后，开始投药，各组鸡分别按表6所示给药(实施例1所得复方柠檬酸粉剂)，分上午、下午两次给药，连续5d，停药后继续观察30d，在实验过程中，随时记录各组鸡的临床表现与发病、死亡情况；对病死鸡进行剖检，观察其病理变化，取鼻、气管分泌物、肺和气囊等组织进行MG分离培养，同时进行血清平板凝集试验以确定死亡原因；对未死亡鸡釆血，分离血清，用平板凝集试验检测抗鸡毒支原体抗体。3.2疗效评价指标(1)感染率计算用药和未用药出现临床症状数量占实验鸡数量。(2)血中抗体水平检测试验结束时，每组随机抽检10只，测定血液中鸡毒支原体抗体反应情况。根据抗体反应阳性数计算每组鸡的抗体阳性反应率。(3)平均增重根据试验初和试验结東时各组鸡的体重，计算每组试验鸡的平均增重。(4)气囊损伤减少率试验结束时，各组随机抽取鸡5只，剖检观察气囊、肺、肝、心等主要器官病理变化，并对气囊的损伤程度进行分级评分。按H.W.Yoder将气囊病理损伤划分5级。0级气囊正常，薄而透明，记0分。l级气囊仅有稍增厚的灰色区或黄色渗出斑点，记2分。2级部分气囊易见到灰色至黄色渗出，有时出现泡沬，气囊增厚，记4分。3级大部分气囊增厚，布满大量黄白色干酪样渗出物，记6分。4级几乎整个气囊布满黄白色干酪样渗出物，气囊严重增厚，记8分。鸡气囊平均病理损伤计分=所有鸡气囊损伤度总和/被检鸡数。根据气囊损伤记分结果计算气囊损伤减少百分率。气囊损伤减少百分率-(感染对照组每只鸡气囊损伤平均分-试验组每只鸡气囊损伤平均分)/感染对照组每只鸡气囊损伤平均分。13表6治疗试验分组及处理编号分组数量(只)给药量1复方枰檬酸低剂量组10240mg/kg体重2复方柠檬酸中剂量组10480mg/kg体重3复方梓檬酸高剂量组10720mg/kg体重4泰乐菌素组1010mg/kg感染对照组106空白对照组104.3试验结果(参见表7)表7对肉鸡生产性能的影响分组死亡发病成活率感染后14d感染后21d平均数(只)率(％)(%)平均增重(g/只)增重(g/只)低剂量组122.288.9631.34±17.3715.34±39.7中剂量组018.2100659.86±31.9746.22±17.4高剂量组011.1100729.57±21.5853.53±30.1泰乐预防组084.6100630.34±20.6752.97±18.9感染对照组283.383.3574.50±41.3623.66±24.5健康对照组00100750.32±12.4913.18±19.7结果显示，复方柠檬酸高、中剂量和泰乐菌素组病鸡完全存活，而复方柠檬酸低剂量组死亡率为11.1%,低于感染对照组(16.7%)。测试药物组14d和21d时平均增重值高于感染对照组，高剂量组效果优于泰乐菌素组。表8各组鸡气囊损伤程度比较结果分组剖检数气囊病变气囊平均损气囊损伤减少率数(只)(只)伤积分(%)低剂量组1021.6353.4314中剂量组1030.8276.57高剂量组1030.4487.43泰乐菌素组1061.0869.14感染对照组10103.50-健康对照组1000.0-注:气囊损伤分=(胸气囊损伤分+腹腔气囊损伤分)/剖检鸡只数量；气囊损伤减少率=感染对照组-试验组气囊损伤积分/感染对照组气囊损伤积。表8结果显示，复方柠檬酸三个剂量组气囊损伤计分低于感染对照组，高剂量组效果最佳(气囊平均损伤积分0.44，气囊损伤减少率87.43%)。表9试验鸡毒支原体阳性率分组7d(感染前)14d(感染后第7d)21d(感染后第14d)28d(感染后第21d)35d(感染后第28d)低剂量组-75%91.7%100%80%中剂量组-58.3%100%100%66.7%高剂量组-83.3%100%100%63.6%泰乐治疗组-66.7%91.7%100%80%感染对照组-81.8%100%100%100%健康对照组表9显示高剂量组、中剂量组使用后能有效降低血清的阳性率。而阳性对照组仍保持较高的阳性率。表IO白细胞总数及分类计数(第35d)分组白细胞总数(xlO"L)嗜中性白细胞(%)单核细胞(%)淋巴细胞(%)低剂量组18.5±1.330.33±7.716.67±4.74楊±15.4中剂量组20.3±1.731.67±6.216.67±3.742.67±12.9高剂量组20.9±3.431.67±9.417.67±4.640.67±8.8泰乐治疗组17.8±4.425.67±3.814.67±10.349.33±20.3感染对照组16.9±2.421.33±10.413.00±8.154.67±13.1健康对照组17.2±1.520.33±8.616.67±5.954.0OU1.6中性粒细胞、单核细胞具有游走性和吞噬作用，能吞噬细胞和异物等，表10显示用药组的嗜中性白细胞和单核细胞比感染对照组和健康对照组升高，预示着药物有提高机体非特异性免疫的功能。综上结果显示测试药物组相比泰乐菌素阳性对照组都可以增加感染鸡只的体重；三个测试药物气囊损伤减少率分别53.43%,76.57%,87.43%,泰乐菌素对照组为69.14%,表明复方狞檬酸中、高剂量组比泰乐菌素阳性对照组气囊损伤轻；抗体水平检测发现感染后21天，抗体检测阳性率都为100%,表明鸡毒支原体感染21,天后发病模型成功，而感染后28天，三组测试药物抗体阳性率分别为80%、66.7%、63.6%,泰乐菌素组为80%,感染对照组为100%，抗体阳性率降低预示着药物有助于提高机体免疫力，消除病原微生物感染功效。以上结果显示测试药物可以显著减低鸡毒支原体感染引起的发病率，中、高剂量组还可以增加肉鸡的体重。本产品用于出口商品肉鸡饲养的后期是该产品最大的优势，可实现部分替代抗菌素，减少药物的残留。实验例4复方柠檬酸对鸡大肠杆菌病的治疗试验将25日龄海兰褐鸡随机分为6组，分别为复方柠檬酸高、中、低剂量组、利好(20%复方磺胺间甲氧嘧嚏钠可溶性粉)阳性对照组、阴性对照组，空白对照组。腹腔注射大肠杆菌临床分离株(半数致死量为8xi()SCFU),0.5ml/只，攻毒后立即给药，按下表ll所示口服灌胃。连续给药7天，分上、下午两次给药。停药观察3天后剖检。表ll试验分组及给药情况.分组__给药剂量_给药次数复方柠檬酸高剂量组9480mg/kg体重l次/天复方柠檬酸中剂量组8240mg/kg体重l次/天<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>观察指标死亡率凡在试验期间，出现大肠杆菌病症状并死亡，剖检后气囊、肝脏、心脏有典型病变特征，病料能分离出大肠杆菌的，判断为感染死亡，计算死亡率。相对增重率根据试验开始及结東时每只鸡的体重，计算增重及每组鸡的平均增重，并以空白对照组增重为100%,各组增重与之相比得到各组相对增重率。实验结束后剖检存活鸡，观察心包炎、肝周炎等情况，并取肝脏，无菌取材后分离培养细菌，统计肝脏大肠杆菌检出率情况。实验结果如下表12对肉鸡生产性能的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>相对增重率根据试验开始及结東时每只鸡的体重，计算增重及每组鸡的平均增重，并以空白对照组增重为100%,各组增重与之相比得到各组相对增重率。表13剖检存活鸡，肝脏大肠杆菌检出率情况分组数量存活数(％)肝脏细菌检出率(％)复方高剂量组93(33.3)66.7复方中剂量组81(12.5)0复方低剂量组81(12.5)100利好对照组85(62.5)100阴性对照组101(10.0)100空白对照组88(100.0)0实验结果如表12、13所示，人工感染大肠杆菌7天后，阴性对照组存活率10.0%，复方柠檬酸高剂量组存活率为33.3%，利好阳性对照组存活率达到62.5%;试验发现复方杼檬酸有助于机体杀灭大肠杆菌，复方柠檬酸高剂量组存活的鸡肝脏大肠杆菌检出率为66.7%,中剂量虽然只有一只鸡存活但也未检出大肠杆菌；此外，复方柠檬酸高剂量组相对增重率能达60.1%，高于利好组的55.8%;故在药物治疗蛋鸡大肠杆菌病上，复方柠檬酸能降低死亡率、提高增重率、表现一定的疗效。实验例5复方柠檬酸治疗临床鸡毒支原体、禽流感(H9亚型)混合感染疗效观察一、实验动物及实验分组情况l.l实验动物临床35日龄发病肉鸡，主要表现呼噜、流眼泪、咳嗽、精神不振、食欲不佳，有死亡现象发生，经诊断该鸡群为由鸡毒支原体、禽流感(H9亚型)混合感染引起的呼吸道病。1.2受试药物为实施例4所述复方杼檬酸口服液，大群用黄苠多糖做为药物对照。试验采用饮水给药，在发病鸡群，连续使用五天，分组及用药方法如下表14所示。表14实验分组及给药剂量编号分组数量(只)给药剂量与方法，饮水给药，连续用药五天1复方高剂量组18早、晚两次用药2复方中剂量组18早、晚两次用药183复方低剂量组18中午用药一次4黄芪多糖组2500中午用药一次5不用药组_^_正常伺喂_二、试验方法及观察指标药物饮水连用5d。空白对照组给予正常饮水。每天观察受试动物的精神、采食、饮水、粪便、呼吸情况和死亡情况，并记录。用药完毕后再观察5天，并做如下疗效指标评价2.1死亡率根据死亡鸡数计算死亡率。2.2相对增重率根据试验开始及结束时每只鸡的体重，计算增重及每组鸡的平均增重，并以不用药对照组增重为100%,各组增重与之相比得到各组相对增重率。三、试验结果观察试验组鸡群，复方柠檬酸组鸡群精神较大群好，但依然存在流泪、呼吸困难等症状，试验结東后剖检试验药物组肉鸡发现与大群对照组病鸡相比，复方柠檬酸组病鸡气管出血症状减轻，但依然存在较多黄色粘液，肺脏边缘有轻微渗，肾脏轻微肿胀；而大群剖检病鸡发现气管出血严重，存在较多黄色粘液，部分一形成黄色干络样物质堵塞物，肺脏除边缘有轻微渗外，出血严重(约占4/5面积)，肾脏肿胀明显。表15试验期间发病率、增重率情况药物组别分组数量(只)死亡率(%)初始均重(kg)试验末均重(kg)相对增重率(％)复方高剂量组11811.11.46±0.231.95±0.3453.8复方中剂量组21801.40±0.311.88±0.3652.7复方低剂量组31801.39±0.251.85±0.2750.5黄芪多糖阳性对照42500131.39±0.351.85±0.3150.5不用药组518301.41±0.222.32±0.30100相对增重率根据试验开始及结東时每只鸡的体重，计算增重及每组鸡的平均增重，并以不用药对照组增重为100%,各组增重与之相比得到各组相对增重率。试验各组增重及死亡率情况如表15所示复方柠檬酸组在增重率上表现量效关系，复方高剂量组相对增重率最高，达到53.8%,但有死鸡现象，死亡率为11.1%，低于阳性药物大群对照组13%的死亡率，综上可知，复方柠檬酸在治疗家禽临床鸡毒支原体、禽流感(H9亚型)等引起的呼吸道病上能有助于肉鸡增重，降低死亡率，表现较好疗效，有良好的应用价值。权利要求1、柠檬酸在制备防治畜禽病毒病或细菌病药物中的应用。2、按照权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的畜禽病毒包括禽流感病毒和法氏囊病毒。3、按照权利要求2所述的应用，其特征在于，所述禽流感病毒是H9亚型禽流感病毒；所述的法氏囊病毒是IBDVBC-6/85型。4、按照权利要求1所述的应用，其特征在于，所述细菌包括牛大肠杆菌、鸡毒支原体和鸡大肠杆菌。5、按照权利要求1所述的应用，其特征在于，所述预防和治疗畜禽病毒病、细菌病药物包括按重量份计的下列组分柠檬酸93~98份、愈创甘油醚0.5-4份和酚磺乙胺1.5~3份。6、按照权利要求5所述的应用，其特征在于，所述预防和治疗畜禽病毒病、细菌病药物包括按重量份计的下列组分柠檬酸94.5份、愈创甘油醚3.0份和酚磺乙胺2.5份。7、按照权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述预防和治疗畜禽病毒病、细菌病药物为粉剂、颗粒剂、口服液或片剂。8、一种预防和治疗畜禽病毒病、细菌病的药物，包括按重量份计的下列组分柠檬酸93-98份、愈创甘油醚0.5~4份和酚磺乙胺1.5~3份。9、根据权利要求8所述的预防和治疗畜禽病毒病、细菌病的药物，包括按重量份计的下列组分柠檬酸93~98份、愈创甘油醚0.5~4份和酚磺乙胺1.5~3份。全文摘要本发明涉及柠檬酸以及复方柠檬酸在制药领域中的新用途，该产品能防治畜禽病毒性、细菌性疾病。其中，所述柠檬酸复方包括按重量份计的下列组分柠檬酸93～98份、愈创甘油醚0.5～4份和酚磺乙胺1.5～3份。体内和体外试验表明，复方柠檬酸具有防治家禽鸡毒支原体、禽流感(H9亚型)、法氏囊病毒病等作用，同时可有效杀灭引起动物致病的细菌，例如牛大肠杆菌、鸡毒支原体、鸡大肠杆菌等。文档编号A61P31/16GK101530405SQ20091008233公开日2009年9月16日申请日期2009年4月14日优先权日2009年4月14日发明者诚何,张发明,李应超,李树梅,栗绍文申请人:何诚;张发明;栗绍文;李应超;李树梅