专利名称：一种含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物的制备方法
技术领域：
本发明涉及中药提取物领域，尤其涉及一种含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物的
制备方法。
背景技术：
痔疮是一种常见病、多发病，中国自古就有"十人九痔"之说。发明专利 CN101181283公开了一种抗痔疮药物组合物，含有芦丁、柚皮苷，二者重量百分比为0. 8 4 : l，对于痔疮等疾病具有显著的治疗作用。此外，还具体公开了两种制备该抗痔疮药物 组合物的方法，一是直接混合芦丁、柚皮苷，二是直接水提法。直接混合法所用的芦丁、柚皮 苷均是纯品，这两种化合物纯品可通过中药提取方法得到，但其制备工艺复杂，纯化路线烦 琐，成本代价很高；芦丁、柚皮苷纯品也可通过西药合成方法得到，但其代价成本也很大，使 得制备抗痔疮药物组合物的成本也会比较高。 基于此，我们对其制备方法进行了深入研究，发明专利CN101396460公开了一种
含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物的大孔树脂制备工艺，其中芦丁、柚皮苷二者重量百分比 为0.8 4 : 1，符合发明专利CN101181283公开的质量控制指标。但是大孔树脂制备工艺
步骤相对复杂，成本相对较高。 我们知道，直接水提法制备的组合物中所含其他水溶性成分较多，如蛋白质、糖、 氨基酸等，样品为粘膏状，浓縮、干燥转移操作极其麻烦，转移过程中有效成分损失较大，重 复性不好，形成的样品也不便于保存，极易吸潮，生菌霉变。 本发明正是基于以上制备工艺及分析方法存在的问题，对该抗痔疮组合物的制备 工艺进行了深入系统的研究，发明了新的适合工业化生产的制备工艺，并建立了快速的高 效液相分析方法。
发明内容
本发明提供了一种含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物的制备方法，所述提取物是 以枳壳及槐花(或槐米)为原料提取，包括以下步骤取一定量的原料药材，用一定量的水 提取，浓縮水提取液；向所述水提取液中加一定量的乙醇溶液，静置；取上清液，浓縮干燥， 得到抗痔疮提取物。 本发明所用的原料药材是枳壳和槐花(或槐米)。枳壳为芸香科植物酸橙(Citrus aurantium L.)及其栽培变种的干燥未成熟果实。槐花是豆科植物槐(Sophora J即onica L.)的干燥花，其干燥花蕾为槐米。在制备提取物之前，优选将原料药材进行预处理，即将药 材洗净、晒干、粉碎、过筛。 其中，水提取步骤中，水溶液的体积与原料药材的重量之比(ml/g)是10 15 : 1，优选12 : 1。水提取之后，浓縮液体积与原料药材的重量之比(ml/g)是2 4 : 1， 优选3 : 1。水提取过程中，加热回流提取2 3次，每次2 3小时，优选加热回流提取3 次，每次2小时。
其中，醇沉步骤中，加入乙醇后使乙醇的终浓度达到65% 75% ，优选70% 。静置时间为10 20小时，优选12 18小时。 其中，浓縮干燥步骤采用减压真空干燥，真空度是0.09 0. 10MPa，温度是55t: 60°C，时间是10 14小时。浓縮后提取物的比重是1. 00 1. 25g/cm3。
本发明提供的一种含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物的制备方法提取效率高，能有效地富集主要活性成分总黄酮。应用本发明提供的制备方法得到的含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物，以芦丁为对照品时，测定的提取物中总黄酮含量为26% 28%。以芦丁、柚皮苷为对照品时，芦丁、柚皮苷的重量百分比为2.0 2.5 : 1。 应用本发明提供的制备方法得到的含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物为固体黄色粉末，体积小，提高了中药的内在质量。同时因在制备过程中去除了大量的无机盐、粘液质等，增强了产品的稳定性，不易吸湿，不易吸潮，非常便于保管保存。并且，该提取物易于制备成外观美观的各种剂型，便于直接临床及制剂使用。该制备方法重复性好，工艺参数可控，溶剂安全无污染。 应用本发明提供的制备方法得到的含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物在质量控制方法上可以采用紫外分光光度法和高效液相分析法进行含量测定，以及采用高效液相指纹图谱进行分析。由于提取物在制备过程中去除了大量杂质，使得分析方法前处理简单、方便，从而使建立的高效液相分析方法更加灵敏、准确、快速，简单易控。 应用本发明提供的制备方法得到的含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物具有明显的抗痔疮作用，发明专利CN101181283公开了含芦丁、柚皮苷的重量百分比在0.8 4 : l范围内的提取物的具体试验实施例及数据。 本发明提供的含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物的制备方法步骤简捷、工艺简单，重现性好，污染小，成本低，适合工业化生产，具有很高的应用价值。
具体实施例方式以下所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
实施例一 取中药材枳壳、槐花(或槐米)各10公斤，加入240公斤水溶液，加热回流提取，每次2小时，提取液过滤，滤液待处理；继续向药渣中加入240公斤水溶液，加热回流提取，每次2小时，提取液过滤，滤液待处理；继续向药渣中加入240公斤水溶液，加热回流提取，每次2小时，取滤液；三次过滤液合并，减压浓縮，浓縮到约40升，加乙醇，使乙醇浓度调整为70%，安静放置12小时，取上清液，减压浓縮(55°C 60°C，0. 09 0. lOMPa)，药液比重约1. 25g/cm 真空干燥，真空度为0. 09 0. lOMPa，温度为60。C，时间是12小时，即得。
实施例二 取中药材枳壳、槐花(或槐米)各10公斤，加入200公斤水溶液，加热回流提取，每次2小时，提取液过滤，滤液待处理；继续向药渣中加入200公斤水溶液，加热回流提取，每次2小时，提取液过滤，滤液待处理；继续向药渣中加200公斤水溶液，加热回流提取，每次2小时，提取液过滤，取滤液；三次过滤液合并，减压浓縮，浓縮到约60升，加乙醇，使乙醇浓度调整为70%，安静放置16小时，取上清液，减压浓縮(55°C 60°C，0.09 0. 10MPa)， 药液比重约1. 25g/cm3，真空干燥，真空度是0. 09 0. 10MPa，温度是60°C ，时间为12小时，即得。 实施例三 取中药材枳壳、槐花(或槐米)各10公斤，加入300公斤水溶液，加热回流提取， 每次3小时，提取液过滤，滤液待处理；继续向药渣中加300公斤水溶液，加热回流提取， 每次3小时，提取液过滤，滤液待处理，两次过滤液合并，减压浓縮，浓縮到约80升，加乙 醇，使乙醇浓度调整为70 % ，安静放置18小时，取上清液，减压浓縮(55°C 60°C ， 0. 09 0. lOMPa)，药液比重约1. 25g/cm 真空干燥，真空度是0. 09 0. lOMPa，温度是60°C，时间 为12小时，即得。
含量测定实验 分别取对照品溶液和实施例一、二、三中制备的三批样品，采用紫外分光光度法作 为总黄酮的含量测定方法，高效液相色谱法作为芦丁及柚皮苷的含量测定方法。
—、紫外分光光度法测定总黄酮含量
仪器日本岛津UV-2401紫外分光光度计 对照品溶液的制备取芦丁对照品约13mg，精密称定，置于100ml量瓶中，加甲醇 使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。标准曲线的制备精密量取对照品溶液1. Oml 、 2. Oml 、 3. Oml 、 4. Oml 、 5. Oml 、置
25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。以甲醇为空白溶液，照紫外-可见分光光度法(中 国药典2005版一部附录VA)在257nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘 制标准曲线。 供试品溶液制备及测定法取实施例中制备的样品约30mg，精密称定，置于25ml 量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液lml置 25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，照紫外_可见分光光度法(中国药典2005版一部附录VA) 在257nm处测定吸光度，通过标准曲线算出供试品溶液总黄酮的浓度(P g/ml)，计算供试 品总黄酮含量。 二、高效液相色谱法测定芦丁及柚皮苷的含量
1、高效液相色谱条件 (1)仪器设备及条件AgilentllOO自动进样系列，进样量10iU ;
色谱柱依利特公司Kromasil C18色谱柱5 ii m(4. 6mmX250mm);
DAD检测器，检测波长257nm、283nm ;
柱温30。C ;洗脱流速1. Oml/min ;
(2)流动相的确定 采用乙腈0. 05M醋酸铵(醋酸调pH为3. 8) = 17 : 83为流动相。
2、提取物供试品溶液及对照品溶液的配制 取实施例中制备的样品30mg，精密称定，置于25ml量瓶中，加甲醇适量，超声使溶 解，冷却后，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 精密称取芦丁对照品适量，用甲醇溶解并稀释制成每lml中约含O. lmg的溶液，作 为芦丁对照品溶液；另精密称取柚皮苷对照品适量，用甲醇溶解并稀释制成每lml中约含0. 04mg的溶液，作为柚皮苷对照品溶液；取供试品溶液和对照品溶液各lOiU注入液相色谱仪，记录色谱图，用外标法计算含量。
3、测定方法 分别称取芦丁、柚皮苷对照品溶液，将供试品溶液和上述对照品溶液按上述色谱
条件进行分析。 三、含量测定结果 实施例一、实施例二、实施例三中制备的三批样品含量测定结果见表1。 表1
样品批次芦丁含量(％)柚皮苷含量(％ )总黄酮含量(％ )
实施例一8. 274. 1227. 12
实施例二8. 153. 4328. 06
实施例三8. 123. 2427. 79 测定结果表明，三批样品中总黄酮含量分别为27. 12%、28. 06%、27. 79%，三批样品中芦丁与柚皮苷含量之比为2.0 2.5 : 1。
权利要求
一种含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物的制备方法，所述提取物是以枳壳及槐花(或槐米)为原料提取，其特征在于，包括以下步骤取一定量的原料药材，用一定量的水提取，浓缩水提取液；向所述水提取液中加一定量的乙醇溶液，静置；取上清液，浓缩干燥，得到抗痔疮提取物。
2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述水提步骤中，水溶液的体积与原料药材的重量之比(ml/g)是10 15 : 1。
3. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述水提取后，浓縮液体积与原料药材的重量之比(ml/g)是2 4 : 1。
4. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述水提取过程中，加热回流提取2 3次，每次2 3小时。
5. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述醇沉步骤中，乙醇的终浓度达到65% 75%。
6. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述静置时间是10 20小时。
7. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述浓縮干燥步骤是减压真空干燥，其中真空度是O. 09 0. 10MPa、温度是55°C 6(TC，时间是10 14小时。
8. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述浓縮后提取物的比重是1. 00 1. 25g/cm3。
9. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，以芦丁为对照品，所述提取物中总黄酮含量为26% 28%。
10. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，以芦丁、柚皮苷为对照品，所述提取物含芦丁、柚皮苷的含量之比为2.0 2.5 : 1。
全文摘要
本发明提供了一种含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物的制备方法。该提取物是以枳壳及槐花(或槐米)为原料提取，包括以下步骤取一定量的原料药材，用一定量的水提取，浓缩水提取液；向所述水提取液中加一定量的乙醇溶液，静置；取上清液，浓缩干燥，得到抗痔疮提取物。本发明提供的含有芦丁、柚皮苷的抗痔疮提取物的制备方法步骤简捷，工艺简单，重现性好，污染小，成本低，适合工业化生产，具有很高的应用价值。
文档编号A61K36/752GK101708243SQ20091018880
公开日2010年5月19日 申请日期2009年12月10日 优先权日2009年12月10日
发明者严启新, 李勇, 李姿, 陈萍, 高媛 申请人:深圳海王药业有限公司