专利名称：一种单唾液酸四己糖神经节苷酯微球及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种单唾液酸四己糖神经节苷酯微球及其制备方法。
背景技术：
单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM-1)，是最重要的神经节苷脂之一，可促使体外培 养的神经细胞生长、分化、再生；对神经生长因子有调节作用；能够促进神经元轴突和树突 增生，侧突形成；抑制细胞变性，加强神经营养，减少受损胞体的死亡，促进神经元的再生和 机能恢复。主要用于治疗血管性或外伤性中枢神经系统病变包括脑创伤、脊髓创伤、脑卒 中、缺氧缺血性脑病、早产儿脑白质损伤、帕金森病等。 目前临床上主要经肌肉注射注射或静脉滴注长时间大剂量给药治疗中枢系统疾 病。但普通的GM-1制剂需反复多次给药才能维持脑脊液内的有效浓度，患者顺应性较差。
近年来以聚合物为材料通过乳化包囊等分散技术将药物制备成脂质体、微乳、微 球、纳米囊、纳米粒等微粒分散体系，用作药物缓、控释的研究日益增多。该类制剂数日甚至 数月注射一次，可显著减少用药次数，增强药物的安全性和有效性，提高患者的依从性。
微球(microspheres, MS)是一种以适宜高分子材料为载体将药物溶解或分散在 其中而制成的球形或类球形微粒，粒径一般在1 500iim之间，属于骨架型微小球状实体， 可以供注射、口服、滴鼻、皮下埋植给药使用，达到提高药物靶向性、延缓或控制药物释放、 增加制剂稳定性等目的。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种具有高度选择性、作用强而持久、疗效高、 毒副作用低、可供肌肉或皮下注射的单唾液酸四己糖神经节苷脂微球，本发明还提供了该 微球的制备方法。 本发明是通过以下技术方案实现的 —种单唾液酸四己糖神经节苷酯(GM-1)微球，包括以下组分单唾液酸四己糖 神经节苷酯，载体材料，乳化剂和水，其中，各组分的浓度为单唾液酸四己糖神经节苷酯 80 240mg/mL，载体材料20 200mg/mL，乳化剂10 50mg/mL。 所述微球的粒径范围为1 15iim，单唾液酸四己糖神经节苷酯含量占整个微球 质量的1 30%。 所述载体材料为聚乳酸/羟基乙酸(PLGA)、聚乳酸(PLA) 、PLA-PEG或PLGA-PEG中 的任意一种，优选PLGA。 所述乳化剂为聚乙烯醇(PVA)、泊洛沙姆、明胶、吐温、司盘、甲基纤维素、西黄蓍胶 或阿拉伯胶中的任意一种或任何两种或两种以上任意比例的混合物，优选聚乙烯醇。
—种单唾液酸四己糖神经节苷酯微球的制备方法，步骤为将载体材料溶于有机 溶剂，作为有机相，然后加入单唾液酸四己糖神经节苷酯溶液，作为内水相，超声乳化制得
0/W型初乳液；将其滴加入外水相超纯水溶液中高速剪切搅拌成复乳；低速搅拌1 3小时，使有机溶剂完全挥发；离心，弃去上层液体，用蒸馏水洗涤3 5次，得到单唾液酸四己
糖神经节苷酯微球，真空干燥24 72h，得单唾液酸四己糖神经节苷酯微球干粉。 所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮或乙酸乙酯中的一种或任何两种或两
种以上任意比例的混合物。 所述制备方法中，涡旋时间为30 180s，涡旋速度为800 2800r/min，高速剪切 速度为8000 33000r/min，高速剪切时间为15 120s。 本发明的单唾液酸四己糖神经节苷脂微球，由于单唾液酸四己糖神经节苷脂微球 的载体在肌肉内缓慢水解，可不断释放出包裹在微球中的药物，作用强而持久，提高了药物 的疗效，降低了毒副作用，避免了长期频繁给药的缺点，用于治疗中枢神经系统病能起到很 好的效果。本发明所使用的载体材料为生物可降解高分子材料，本身无毒，代谢产物为C02 和水，其中间产物也是人体正常的代谢产物。无剌激性，具有良好的生物相容性。本发明的 制备方法采用复乳化溶剂挥发法，具有简便可行的特点。
图1为本发明的单唾液酸四己糖神经节苷微球光学显微镜照片(10X40)。
具体实施例方式
下面结合实施例及试验例对本发明作进一步的说明，但不以任何形式限制本发 明。
实施例1 :单唾液酸四己糖神经节苷微球的制备 0. 5ml 20mg/ml PLGA的二氯甲烷溶液作为有机相，加入0. lml 80mg/ml的单唾液 酸四己糖神经节苷酯溶液作为内水相，涡旋乳化60s制得0/W型初乳液；将其滴加入10ml 30mg/mL外水相聚乙烯醇超纯水溶液中高速剪切120s成复乳；低速搅拌3小时，使有机溶 剂完全挥发；离心，弃去上层液体，用蒸馏水洗涤3次，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微 球，真空干燥72h，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微球干粉；其中，涡旋速度为800r/min， 高速剪切速度为20000r/min。 实施例2 :单唾液酸四己糖神经节苷微球的制备 0. 5ml 60mg/ml PLGA的二氯甲烷溶液作为有机相，加入0. 067ml 120mg/ml的单 唾液酸四己糖神经节苷酯溶液作为内水相，涡旋乳化90s制得0/W型初乳液；将其滴加入 10ml50mg/mL外水相聚乙烯醇超纯水溶液中高速剪切15s成复乳；低速搅拌3小时，使有机 溶剂完全挥发；离心，弃去上层液体，用蒸馏水洗涤3次，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯 微球，真空干燥72h，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微球干粉；其中，涡旋速度为1500r/ min，高速剪切速度为33000r/min。 实施例3 :单唾液酸四己糖神经节苷微球的制备 0. 5ml 80mg/ml PLGA的二氯甲烷溶液作为有机相，加入0. 05ml 160mg/ml的单 唾液酸四己糖神经节苷酯溶液作为内水相，涡旋乳化120s制得0/W型初乳液；将其滴加入 10mllOmg/mL外水相聚乙烯醇超纯水溶液中高速剪切30s成复乳；低速搅拌3小时，使有机 溶剂完全挥发；离心，弃去上层液体，用蒸馏水洗涤3次，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯 微球，真空干燥72h，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微球干粉；其中，涡旋速度为2000r/min，高速剪切速度为8000r/min。 实施例4 :单唾液酸四己糖神经节苷微球的制备 0.5ml 100mg/ml PLGA的二氯甲烷溶液作为有机相，加入0. 033ml 240mg/ml的单 唾液酸四己糖神经节苷酯溶液作为内水相，涡旋乳化180s制得0/W型初乳液；将其滴加入 10ml30mg/mL外水相聚乙烯醇超纯水溶液中高速剪切60s成复乳；低速搅拌3小时，使有机 溶剂完全挥发；离心，弃去上层液体，用蒸馏水洗涤3次，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯 微球，真空干燥72h，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微球干粉；其中，涡旋速度为2400r/ min，高速剪切速度为12000r/min。 实施例5 :单唾液酸四己糖神经节苷微球的制备 0.5ml 200mg/ml PLGA的二氯甲烷溶液作为有机相，加入0. 05ml 160mg/ml的单 唾液酸四己糖神经节苷酯溶液作为内水相，涡旋乳化30s制得0/W型初乳液；将其滴加入 10ml50mg/mL外水相聚乙烯醇超纯水溶液中高速剪切90s成复乳；低速搅拌3小时，使有机 溶剂完全挥发；离心，弃去上层液体，用蒸馏水洗涤3次，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯 微球，真空干燥72h，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微球干粉；其中，涡旋速度为2800r/ min，高速剪切速度为20000r/min。 实施例6 :单唾液酸四己糖神经节苷微球的制备 0.5ml 80mg/ml PLA的三氯甲烷溶液作为有机相，加入0. 05ml 160mg/ml的单唾 液酸四己糖神经节苷酯溶液作为内水相，涡旋乳化120s制得0/W型初乳液；将其滴加入 10ml 30mg/mL外水相明胶超纯水溶液中高速剪切30s成复乳；低速搅拌3小时，使有机 溶剂完全挥发；离心，弃去上层液体，用蒸馏水洗涤3次，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯 微球，真空干燥72h，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微球干粉；其中，涡旋速度为2000r/ min，高速剪切速度为8000r/min。 实施例7单唾液酸四己糖神经节苷微球的制备 0.5ml 80mg/ml PLA-PEG的乙酸乙酯溶液作为有机相，加入0. 05ml 160mg/ml的 单唾液酸四己糖神经节苷酯溶液作为内水相，涡旋乳化120s制得0/W型初乳液；将其滴加 入10ml30mg/mL外水相甲基纤维素超纯水溶液中高速剪切30s成复乳；低速搅拌3小时， 使有机溶剂完全挥发；离心，弃去上层液体，用蒸馏水洗涤3次，得到单唾液酸四己糖神经 节苷酯微球，真空干燥72h，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微球干粉；其中，涡旋速度为 2400r/min，高速剪切速度为8000r/min。
实施例8单唾液酸四己糖神经节苷微球的制备0.5ml 80mg/ml PLGA-PEG的二氯甲烷溶液作为有机相，加入0. 05ml 160mg/ml的
单唾液酸四己糖神经节苷酯溶液作为内水相，涡旋乳化120s制得0/W型初乳液；将其滴
加入10ml30mg/mL外水相西黄蓍胶超纯水溶液中高速剪切30s成复乳；低速搅拌3小时，
使有机溶剂完全挥发；离心，弃去上层液体，用蒸馏水洗涤3次，得到单唾液酸四己糖神经
节苷酯微球，真空干燥72h，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微球干粉；其中，涡旋速度为
2800r/min，高速剪切速度为8000r/min。 实施例9单唾液酸四己糖神经节苷微球的制备 0.5ml 80mg/ml PLGA的丙酮溶液作为有机相，加入0. 05ml 160mg/ml的单唾液酸 四己糖神经节苷酯溶液作为内水相，涡旋乳化120s制得0/W型初乳液；将其滴加入10ml
530mg/mL外水相阿拉伯胶超纯水溶液中高速剪切30s成复乳；低速搅拌3小时，使有机溶剂 完全挥发；离心，弃去上层液体，用蒸馏水洗涤3次，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微球， 真空干燥72h，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微球干粉；其中，涡旋速度为2000r/min，高 速剪切速度为8000r/min。 实施例10单唾液酸四己糖神经节苷微球的制备 0.5ml 80mg/ml PLGA的二氯甲烷溶液作为有机相，加入0. 05ml 160mg/ml的单 唾液酸四己糖神经节苷酯溶液作为内水相，涡旋乳化120s制得0/W型初乳液；将其滴加入 10ml30mg/mL外水相吐温80超纯水溶液中高速剪切30s成复乳；低速搅拌3小时，使有机 溶剂完全挥发；离心，弃去上层液体，用蒸馏水洗涤3次，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯 微球，真空干燥72h，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微球干粉；其中，涡旋速度为2000r/ min，高速剪切速度为8000r/min。 试验例1 :单唾液酸四己糖神经节苷微球载药量及包封率的测定 采用高效液相色谱测定单唾液酸四己糖神经节苷的含量色谱柱uBond即akC18
柱(大连依利特科学仪器有限公司；250mmX4.6mm，10iim);流动相乙腈_0.03%三乙胺
(80 :20，用磷酸调pH7. 5);检测波长205nm ;流速1. Oml/min ;进样量:20 ;柱温室温;
理论塔板数不低于6000。 分别取浓度为40 400 ii g/ml的GM_1标准品溶液，按照色谱条件进行测试，以峰 面积对GM-1浓度进行拟合，建立回归方程。采用高效液相色谱测定游离于外水相中GM-1 的浓度，从而计算微球的载药量和包封率。 载药量％=(体系中投入药物总量-游离药物量/载体材料质量)X100X
包封率％=(体系中投入药物总量-游离药物量/体系中投入药物总量)X100X
所得微球的平均包封率为80 95 % ，载药量为1 30 % 。
试验例2 :单唾液酸四己糖神经节苷微球外观形态、粒径大小和分布的测定
取适量单唾液酸四己糖神经节苷微球用少量醋酸甘油均匀分散于载玻片上，通过 光学显微镜观察，如图1所示，并测定微球的粒径并记数。计数500个以上，考察微球的粒 径大小和分布。根据公式dav二End/i:n计算算术平均径。结果微球的平均粒径范围为 1 15iim，可用于注射给药。
权利要求
一种单唾液酸四己糖神经节苷酯微球，其特征在于，包括以下组分单唾液酸四己糖神经节苷酯，载体材料，乳化剂和水，其中，各组分的浓度为单唾液酸四己糖神经节苷酯80～240mg/mL，载体材料20～200mg/mL，乳化剂10～50mg/mL。
2. 根据权利要求1所述的一种单唾液酸四己糖神经节苷酯微球，其特征在于所述微 球的粒径范围为1 15iim，单唾液酸四己糖神经节苷酯含量占整个微球质量的1 30%。
3. 根据权利要求1所述的一种单唾液酸四己糖神经节苷酯微球，其特征在于所述载 体材料为聚乳酸/羟基乙酸、聚乳酸、PLA-PEG或PLGA-PEG中的任意一种。
4. 根据权利要求1所述的一种单唾液酸四己糖神经节苷酯微球，其特征在于所述乳 化剂为聚乙烯醇、泊洛沙姆、明胶、吐温、司盘、甲基纤维素、西黄蓍胶或阿拉伯胶中的任意 一种或任何两种或两种以上任意比例的混合物。
5. 权利要求1所述的一种单唾液酸四己糖神经节苷酯微球的制备方法，其特征在于， 步骤为将载体材料溶于有机溶剂，作为有机相，然后加入单唾液酸四己糖神经节苷酯溶 液，作为内水相，超声乳化制得0/W型初乳液；将其滴加入外水相超纯水溶液中高速剪切搅 拌成复乳；低速搅拌1 3小时，使有机溶剂完全挥发；离心，弃去上层液体，用蒸馏水洗涤 3 5次，得到单唾液酸四己糖神经节苷酯微球，真空干燥24 72h，得单唾液酸四己糖神 经节苷酯微球干粉。
6. 根据权利要求5所述的一种单唾液酸四己糖神经节苷酯微球的制备方法，其特征在 于所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮或乙酸乙酯中的一种或任何两种或两种以上 任意比例的混合物。
7. 根据权利要求5所述的一种单唾液酸四己糖神经节苷酯微球的制备方法，其特征 在于所述涡旋时间为30 180s，涡旋速度为800 2800r/min，高速剪切速度为8000 33000r/min，高速剪切时间为15 120s。
全文摘要
本发明公开了一种单唾液酸四己糖神经节苷酯(GM-1)微球，单唾液酸四己糖神经节苷酯，载体材料，乳化剂和水，其中，各组分的浓度为单唾液酸四己糖神经节苷酯80～240mg/ml，载体材料20～200mg/ml，乳化剂10～50mg/mL。本发明的单唾液酸四己糖神经节苷酯微球，经检测其质量外观均一，平均粒径1～15μm，包封率大于80％，可供注射使用。单唾液酸四己糖神经节苷酯微球具有明显的缓释作用，能够显著减少单唾液酸四己糖神经节苷酯的给药次数，增加患者的顺应性。
文档编号A61K47/34GK101700230SQ20091022977
公开日2010年5月5日 申请日期2009年11月6日 优先权日2009年11月6日
发明者刘永军, 刘莉, 姜书梅, 姜庆城, 张娜 申请人:山东大学