专利名称：：化合物2-n-[(1r,2r)-1,3-二羟基-1-苯丙基]-脂肪酰胺及其制备和应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种化合物，特别是一种小分子神经生长因子神经酰胺类似物2-N-[(1R，2R)-1，3-二羟基-1-苯丙基]-脂肪酰胺化合物及其制备与应用。
背景技术：
：老年痴呆症(AD)是一种进行性认知和记忆功能丧失的疾病，随着社会老年化的加速，老年痴呆症患者在人口中的比例逐渐增加，其发病率随年龄增长而增加，65岁的发病率约为0.5%，85岁以上约达8%。由于老年痴呆症给家庭和社会带来很大负担，其危害性仅次于癌症、心脏病和中风。因此，WHO已将老年痴呆症定为21世纪威胁人类健康的五大主要疾病之一。寻找治疗老年痴呆症的有效药物，成为世界医学界的研究热点之一。目前治疗老年痴呆的药物全部是用于控制发病的最后阶段，作用主要是改善患者的记忆，由于病机病因复杂不清，防治药品效果一般。此外，但时下的对症西药存在诸多副作用。只有研制出真正能够治本的药物来，且副作用低，老年痴呆症才可以真正治愈。神经生长因子(NGF)是一种天然的蛋白质，在神经元的存活、发育、生长、分化、损伤修复、神经再生、突触形成与突触可塑性以及神经退行性疾病的过程中起着非常重要的作用，为目前神经科学领域中的热点之一。NGF有预防和治疗某些如早老性痴呆和帕金森氏综合症等脑疾病的功能。此外，NGF还具有促进PC12细胞族基因表达增加钙电流，用作炎症与免疫反应中的调节剂。神经生长因子是一种天然的蛋白质，不易通过血脑屏障，生物利用度低，易于降解，加上很难从动物体如蛇毒中获得足够的量，从而限制了它在临床上的应用。因此，发掘具有神经生长因子功能的小分子化合物则是非常必要的。
发明内容针对大分子神经生长因子不易通过血脑屏障，生物利用度低，易于降解，限制了它在临床上的应用，本发明的目的是，提供一种神经生长因子类小分子神经酰胺类似物2-N-[(lR，2R)-l，3-二羟基-l-苯丙基]-脂肪酰胺化合物，本发明的2-N-[(lR，2R)-l，3-二羟基-1-苯丙基]-脂肪酰胺化合物是以(1R，2R)-2-氨基-1，3-苯丙二醇为原料加以结构改造而制成，以其能够用于神经营养因子的神经营养再生剂及免疫反应中调节剂的应用。为了实现上述任务，本发明通过以下技术方案予以实现—种化合物2-N-[(1R，2R)_1，3_二羟基_1_苯丙基]-脂肪酰胺，其特征在于，其结构通式为QHHNRO式中，R=戊基、庚基、壬基、十一烷基、十三烷基、十五烷基或十七烷基。本发明还给出了上述化合物2-N-[(1R，2R)-1，3-二羟基-1-苯丙基]-脂肪酰胺的制备方法，其特征在于，将定量的不同脂肪酸对硝基苯酯加入(IR，2R)-2-氨基-1，3-苯丙二醇的无水THF溶液中，室温搅拌，反应48h后用TLC跟踪检测反应完成后，使反应混合物在减压条件下蒸发，其残余物以氯仿和丙酮以85:1580:20的混合溶液为洗脱剂，通过硅胶色谱柱分离纯化，得到化合物2-N-[(1R，2R)-1，3-二羟基-1-苯丙基]-脂肪酰胺。经研究证明，本发明的化合物2-N-[(lR，2R)-l，3-二羟基-l-苯丙基]-脂肪酰胺，能够用于制备具有神经生长因子作用的组合物，或用在制备神经营养剂和制备免疫调节剂中的应用。具体实施例方式按照本发明的技术方案，本发明的化合物2-N-[(1R，2R)-1，3-二羟基-1-苯丙基]-脂肪酰胺，其特征在于，其结构通式为HNRO式中，R=戊基、庚基、壬基、十一烷基、十三烷基、十五烷基或十七烷基。其制备方法是将定量的不同脂肪酸对硝基苯酯加入(1R，2R)_2-氨基_1，3-苯丙二醇的无水THF溶液中，室温搅拌，反应在48h后用TLC跟踪检测反应完成后，使反应混合物在减压条件下蒸发，其残余物以氯仿丙酮(85:15，80:20，v/v)为洗脱剂，通过硅胶色谱柱分离纯化，得到通式(I)化合物。上述不同脂肪酸对硝基苯酯是正己酸对硝基苯酯、正辛酸对硝基苯酯、正十酸对硝基苯酯、正十二酸对硝基苯酯、正十四酸对硝基苯酯、正十六酸对硝基苯酯或正十八酸对硝基苯酯。以下是发明人给出的实施例，需要说明的是，这些实施例是本发明较佳的例子，本发明不限于这些实施例。实施例l:2-N-[(lR，2R)-l，3-二羟基-l-苯丙基]-己酰胺(L-2-6)的合成在100ml圆底烧瓶中加入对硝基苯酚584mg(4.2mmo1)的新蒸二氯甲烷溶液30ml，三乙胺465mg(4.6mmo1)，在冰浴搅拌条件下滴加正己酰氯565mg(4.2mmo1)的二氯甲烷溶液10ml，室温反应lh后结束反应，反应液分别用1M的HC1溶液，饱和NaHC03，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂后得浅黄色液体906mg，即为正己酸对硝基苯酯；向25ml圆底烧瓶中加入制得的正己酸对硝基苯酯474mg(2mmo1)，(lR，2R)-2-氨基-l，3-苯丙二醇167mg(lmmol)，无水THFlOml，室温搅拌反应48h后停止反应。柱层析纯化(CHCl3/acetone，4/l)得白色固体234。该化合物为2-N-[(lR，2R)-l，3-二羟基-l-苯丙基]-己酰胺(L-2-6)，其结构及结构数据为收率90%;mp6465°C;[a]2。D=-48°(c0.36mg/ml，CHC13);TLCRf=0.58(CHC13:MeOH=9:1，v/v);IR(KBr)v:3320，2954，1621，1566，1456，1382，1273，1057，998，764，700cm—、NMR(500MHz，CDC13)S:7.27-7.36(m，5H)，6.20(d，J=7.5Hz，1H)，5.05(d，J=4.0Hz，1H)，4.08-4.12(m，1H)，3.76-3.83(m，2H)，2.08-2.17(m，2H)，1.48-1.54(m，2H)，1.13-1.28(m，4H)，0.86(t，J=7.3Hz，3H)。MS(ESI-Trap)m/z266.0(M+H)+。实施例2:2-N-[(lR，2R)-l，3-二羟基-l-苯丙基]-辛酰胺(L_2_8)的合成在100ml圆底烧瓶中加入对硝基苯酚528mg(3.8mmo1)的新蒸二氯甲烷溶液30ml，三乙胺455mg(4.5mmo1)，在冰浴搅拌条件下滴加正辛酰氯528mg(3.8mmo1)的二氯甲烷溶液10ml，室温反应lh后结束反应，反应液分别用1M的HC1溶液，饱和NaHC03，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂后得浅黄色液体928mg，即为正辛酸对硝基苯酯。向25ml圆底烧瓶中加入制得的正辛酸对硝基苯酯477mg(1.8mmo1)，(IR，2R)_2-氨基-1，3-苯丙二醇150mg(0.90mmol)，无水THF10ml，室温搅拌反应48h后停止反应。柱层析(CHCl3/acetone，4/l)得白色固体220mg。该化合物为2-N-[(1R，2R)-1，3-二羟基_1_苯丙基]-辛酰胺(L-2-8)，其结构及结构数据为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>收率83%，mp7576°C;[a]2。D=-57°(c0.32mg/ml，CHC13);TLCRf=0.58(CHCl3/Me0H，9/l);IR(KBr)v:3303，2930，1642，1615，1547，1467，1366，1053，760，697cm—1,HNMR(500MHz,CDC13)S7.27—7.36(m，5H)，6.17(d，J=7.5Hz，1H)，5.05(d，J=4.OHz，1H)，4.08-4.12(m，1H)，3.78-3.84(m，2H)，2.09-2.17(m，2H)，1.48-1.54(m，2H)，1.16-1.29(m，8H)，0.88(t，J=7.1Hz，3H)。MS(ESI-Trap)m/z294.l(M+H)+。实施例3:2-N-[(lR，2R)-l，3-二羟基-l-苯丙基]-十酰胺(L-2-10)的合成在100ml圆底烧瓶中加入对硝基苯酚1.74g(12.5mmo1)的新蒸二氯甲烷溶液50ml，三乙胺1.32g(13mmo1)，在冰浴搅拌条件下滴加正十酰氯2.38g(12.5mmo1)的二氯甲烷溶液10ml，室温反应lh后结束反应，反应液分别用1M的HC1溶液，饱和NaHC03，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂后得白色固体3.30g，即为正十酸对硝基苯酯。向25ml圆底烧瓶中加入制得的正十酸对硝基苯酯493mg(1.68mmol)，(IR，2R)_2-氨基-1，3-苯丙二醇140mg(0.84mmol)，无水THF10ml，室温搅拌反应48h后停止反应。柱层析(CHCl3/Acetone，4/l)得白色固体244mg。该化合物为2-N-[(IR，2R)_1，3_二羟基_1_苯丙基]-十酰胺(L_2_10)，其结构及结构数据为QHO收率84X;mp6465°C;TLCRf=0.60(CHCl3/MeOH，9/1)。IR(KBr)v:3307，2923，1623，1572，1457，1379，1269，1058，994，764，699cm—1,HNMR(500MHz，CDC13)S:7.27-7.36(m，5H)，6.17(d，J=7.6Hz，1H)，5.05(d，J=4.lHz，1H)，4.08—4.12(m，1H)，3.78-3.84(m，2H)，2.09—2.18(m，2H)，1.48—1.54(m，2H)，1.18—1.31(m，12H)，0.88(t，J=7.2Hz，3H)。MS(ESI-Trap)m/z322.2(M+H)+。实施例4:2-N-[(lR，2R)-l，3-二羟基-l-苯丙基]-十二酰胺(L-2-12)的合成在100ml圆底烧瓶中加入对硝基苯酚417mg(3.Ommol)的新蒸二氯甲烷溶液30ml，三乙胺354mg(3.5mmo1)，在冰浴搅拌条件下滴加正十二酰氯656mg(3.Ommol)的二氯甲烷溶液10ml，室温反应lh后结束反应，反应液分别用1M的HC1溶液，饱和NaHC03，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂后得白色固体937mg，即为正十二酸对硝基苯酯。向25ml圆底烧瓶中加入制得的正十二酸对硝基苯酯501.4mg(l.56mmol)，(IR，2R)_2-氨基-1，3-苯丙二醇130mg(0.78mmol)，无水THF10ml，室温搅拌反应48h后停止反应。柱层析(CHCl3/acetone，85/15)得白色固体179mg。该化合物为2-N-[(IR，2R)_1，3_二羟基_1_苯丙基]-十二酰胺(L_2_12)，其结构及结构数据为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>收率65%;mp6264°C;[a]2。D=-41°(c0.35mg/ml，CHC13);TLCRf=0.58(CHCl3/Me0H，9/l);IR(KBr)3398，3333，2919，1641，1546，1466，1379，1278，1182，1071，992，760，696cm—1,HNMR(500MHz，CDC13)S7.27-7.36(m，5H)，6.18(d，J=7.6Hz，1H)，5.04(d，J=4.OHz，1H)，4.07—4.12(m，1H)，3.77—3.83(m，2H)，2.08—2.18(m，2H)，1.47-1.53(m，2H)，1.18-1.32(m，16H)，0.88(t，J=7.1Hz，3H)。MS(ESI-Trap)m/z350.2(M+H)+;HR-MS(ESI)m/zcalcdforC21H35N03，349.2617(A=3.7ppm)。实施例5:2-N-[(lR，2R)-l，3-二羟基-l-苯丙基]-十四酰胺(L-2-14)的合成在100ml圆底烧瓶中加入对硝基苯酚403.4mg(2.9mmo1)的新蒸二氯甲烷溶液30ml，三乙胺344mg(3.4mmo1)，在冰浴搅拌条件下滴加正十四酰氯705.9mg(2.86mmol)的二氯甲烷溶液10ml，室温反应lh后结束反应，反应液分别用1M的HCl溶液，饱和NaHC03，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂后得白色固体946.8mg，即为正十四酸对硝基苯酯。向25ml圆底烧瓶中加入制得的正十四酸对硝基苯酯503mg(1.44mmo1)，(IR，2R)-2-氨基-l，3-苯丙二醇120mg(0.72mmol)，无水THF10ml，室温搅拌反应48h后停止反应。柱层析(CHCl3/acetone，85/15)得白色固体222mg。该化合物为2-N-[(IR，2R)_1，3_二羟基_1_苯丙基]_十四酰胺(L_2_14)，其结构及结构数据为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>收率83%;mp7879°C;[a]2。D(-39°)(c0.37mg/ml，CHC13);TLCRf=0.58(CHCl3/MeOH，9/l);IR(KBr)v:3399，3333，2919，2849，1641，1545，1462，1379，1181，1071，1050，992，761，696cm—1,HNMR(500MHz,CDC13)S7.27-7.36(m，5H)，6.16(d，J=7.6Hz，1H)，5.04(d，J=4.lHz，1H)，4.08—4.12(m，1H)，3.78—3.84(m，2H)，2.10—2.18(m，2H)，1.48-1.54(m，2H)，1.18-1.32(m，20H)，0.88(t，J=7.1Hz，3H)。MS(ESI—Trap)m/z378.3(M+H)+。实施例6:2-N-[(lR，2R)-l，3-二羟基-l-苯丙基]-十六酰胺(L-2-16)的合成在100ml圆底烧瓶中加入对硝基苯酚361mg(2.6mmo1)的新蒸二氯甲烷溶液30ml，三乙胺314mg(3.lmmol)，在冰浴搅拌条件下滴加正十六酰氯715mg(2.6mmo1)的二氯甲烷溶液10ml，室温反应lh后结束反应，反应液分别用1M的HC1溶液，饱和NaHC03，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂后得白色固体942.7mg，即为正十六酸对硝基苯酯。向25ml圆底烧瓶中加入制得的正十六酸对硝基苯酯528mg(1.4mmo1)，(IR，2R)_2-氨基-1，3-苯丙二醇115mg(0.69mmol)，无水THF10ml，室温搅拌反应48h后停止反应。柱层析(CHCl3/acetone，85/15)得白色固体217mg。该化合物为2-N-[(IR，2R)_1，3_二羟基_1_苯丙基]-十六酰胺(L-2-16)，其结构及结构数据为收率77%;mp8284°C;[a]2。D=-44°(c0.33mg/ml，CHC13);TLCRf=0.59(CHCl3/MeOH，9/l);IR(KBr)v:3404，3333，2920，2848，1641，1545，1461，1181，1072，991，761，696cm—1,HNMR(500MHz，CDC13)S:7.27—7.36(m，5H)，6.16(d，J=7.6Hz，1H)，5.05(d，J=4.0Hz，1H)，4.07—4.12(m，1H)，3.78—3.84(m，2H)，2.10—2.18(m，2H)，1.48-1.53(m，2H)，1.18-1.31(m，24H)，0.88(t，J=7.0Hz，3H)。MS(ESI-Trap)m/z406.3(M+H)+。实施例7:2-N-[(lR，2R)-l，3-二羟基-l-苯丙基]-十八酰胺(L-2-18)的合成在100ml圆底烧瓶中加入对硝基苯酚348mg(2.5mmo1)的新蒸二氯甲烷溶液30ml，三乙胺303mg(3.Ommol)，在冰浴搅拌条件下滴加正十八酰氯757mg(2.5mmo1)的二氯甲烷溶液10ml，室温反应lh后结束反应，反应液分别用1M的HC1溶液，饱和NaHC03，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。旋去溶剂后得白色固体869mg，即为正十八酸对硝基苯酯。向25ml圆底烧瓶中加入制得的正十八酸对硝基苯酯535mg(1.32mmo1)，(IR，2R)_2-氨基-1，3-苯丙二醇110mg(0.66mmol)，无水THF10ml，室温搅拌反应48h后停止反应。柱层析(CHCl3/acetone，85/15)得白色固体227mg。该化合物为2-N-[(IR，2R)_1，3_二羟基_1_苯丙基]-十八酰胺(L_2_18)，其结构及结构数据为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>收率79%;mp8890°C;TLCRf=0.58(CHCl3/MeOH，9/1);IR(KBr)v:3402，3332,2919,2848，1641，1546，1462，1379，1181，1050，991，761，696cm—、NMR(500MHz，CDC13)S:7.27-7.36(m，5H)，6.16(d，J=7.6Hz，1H)，5.05(d，J=4.OHz，1H)，4.07-4.12(m，1H)，3.78-3.84(m，2H)，2.10-2.18(m，2H)，1.48-1.53(m，2H)，1.18-1.31(m，28H)，0.88(t，J=7.0Hz，3H)。MS(ESI-Trap)m/z434.4(M+H)+。上述制备的化合物2-N-[(lR，2R)-l，3-二羟基-l-苯丙基]-脂肪酰胺，对体外PC12细胞生长的影响是通过如下实验得到证实实验方法PC12细胞的培养将PC12细胞置于RPMI1640细胞培养液(内含10%马血清和5%胎牛血清)中培养。培养液中加入10%热灭活马血清和5%胎牛血清。在37°C、5%(A、饱和湿度条件下培养。用机械分散法分开细胞，在24孔培养板接种培养，24孔培养板是用骨胶原类型I(从鼠尾巴中提出)提前覆盖好的。培养24h后，用含2ng/mLNGF的低浓度RPMI1640培养液更换24孔板里培养液。然后将配好浓度(50iiM)的化合物溶液及对照液(DMS0+2ng/mLNGF)加入培养板中培养。重复3次。结果当化合物浓度为20-50iiM，并在2ng/mlNGF存在时，所有化合物能够显著增加神经生长因子NGF介导的PC12细胞轴突(索)生长、分化及PC12细胞数目，结果见下表l。表1:化合物对PC12细胞生长的影响(对照DMS0+2ng/mLNGF)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>权利要求一种化合物2-N-[(1R，2R)-1，3-二羟基-1-苯丙基]-脂肪酰胺，其特征在于，其结构通式为式中，R＝戊基、庚基、壬基、十一烷基、十三烷基、十五烷基或十七烷基。FSA00000048382300011.tif2.权利要求1所述的化合物2-N-[(1R，2R)-1，3-二羟基-1-苯丙基]_脂肪酰胺的制备方法，其特征在于，将定量的不同脂肪酸对硝基苯酯加入(IR，2R)-2-氨基-1，3-苯丙二醇的无水THF溶液中，室温搅拌，反应48h后用TLC跟踪检测反应完成后，使反应混合物在减压条件下蒸发，其残余物以氯仿和丙酮以85:1580:20的混合溶液为洗脱剂，通过硅胶色谱柱分离纯化，得到化合物2_N-[(1R，2R)-1，3-二羟基-1-苯丙基]_脂肪酰胺。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的不同脂肪酸对硝基苯酯是正己酸对硝基苯酯、正辛酸对硝基苯酯、正十酸对硝基苯酯、正十二酸对硝基苯酯、正十四酸对硝基苯酯、正十六酸对硝基苯酯或正十八酸对硝基苯酯。4.权利要求1所述的化合物2-N-[(1R，2R)-1，3-二羟基-1-苯丙基]_脂肪酰胺用于制备具有神经生长因子作用的组合物的应用。5.权利要求1所述的化合物2-N-[(1R，2R)-1，3-二羟基-1-苯丙基]-脂肪酰胺用于在制备神经营养剂中的应用。6.权利要求1所述的化合物2-N-[(1R，2R)-1，3-二羟基-1-苯丙基]-脂肪酰胺用于在制备免疫调节剂中的应用。UH、/R全文摘要本发明公开了一种2-N-[(1R，2R)-1，3-二羟基-1-苯丙基]-脂肪酰胺化合物及制备与应用，它是一种小分子神经生长因子神经酰胺类似物，是以(1R，2R)-2-氨基-1，3-苯丙二醇为原料加以结构改造而制成，其结构通式如下式所示，其中，R＝戊基、庚基、壬基、十一烷基、十三烷基、十五烷基或十七烷基。其制备方法是将定量的不同脂肪酸对硝基苯酯加入(1R，2R)-2-氨基-1，3-苯丙二醇的无水THF溶液中，室温搅拌，反应在48h后用TLC跟踪检测反应完成后，使反应混合物在减压条件下蒸发，其残余物以氯仿和丙酮以85∶15～80∶20的混合溶液为洗脱剂，通过硅胶色谱柱分离纯化，得到化合物2-N-[(1R，2R)-1，3-二羟基-1-苯丙基]-脂肪酰胺。可以作为神经生长因子以及在免疫反应中用作调节剂。文档编号A61P25/00GK101781227SQ20101011612公开日2010年7月21日申请日期2010年3月2日优先权日2010年3月2日发明者刘希望,张鞍灵,高锦明申请人:西北农林科技大学