专利名称：提高大球盖菇子实体中黄酮类化合物含量及提取率的方法
技术领域：
本发明涉及一种提高大球盖菇子实体中黄酮类化合物含量及其提取效率的方法，
属于生物技术领域。
背景技术：
大球盖菇(5^ro/7力ariarwgos( —a/ /w/ate,a/7cw) 隶属于担子菌门 (Zfesiob,C(9te)， 层菌纟冈(,膨/ (9,c/ete51)， 伞菌目 Cfearica/es)， 球盖燕禾斗 C^ro/7fer^ceae)，球盖燕属C^ropferh)。别名铍环球盖燕、铍环盖燕、酒红大球盖燕、 裴氏球盖菇、裴氏假黑伞。是欧美各国人工栽培的著名食用菌之一，也是联合国粮农组织 (FA0)向发展中国家推荐栽培的食用菌之一。大球盖菇肉质细嫩，柄脆，色泽鲜艳，味道鲜 美，清香可口，干菇浓香，含有丰富的的蛋白质、维生素、矿物质和多糖等营养成分，享有"山
林珍品"的美誉。大球盖菇不仅是含有高营养价值的食用真菌，还是一种极其珍贵的药用真 菌，其具有抗氧化、抗肿瘤、预防冠心病、帮助消化、提高人体免疫力、缓解精神疲劳等药用 功效。 近年来，食用菌及其次生代谢产物的抗氧化研究已成为目前研究开发的热点，研 究表明大球盖菇不仅营养丰富，而且含有多种抗氧化活性物质。此外，大球盖菇具有极强的 抗逆抗杂性，易于人工栽培，中国的大球盖菇资源丰富。然而，据文献报导，大球盖菇的黄酮 类化合物成分含量仅约为其干物质成分的1%。，目前尚未见到提高大球盖菇子实体中黄酮 类化合物含量的技术研究文献报道。 目前黄酮类化合物的提取方法主要有三种回流法、微波法和超声波法。与微波法 和超声波法相比，回流法具有设备简单、操作方便、安全环保等优点，虽然该技术存在比较 耗时的缺陷，但也提供了可以进行条件优选优化的潜力。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高大球盖菇子实体中黄酮类化合物含量及其提取 效率的技术。 为了实现这一目的，本发明通过试验发现草腐生食用菌大球盖菇具有降解稻草、 谷壳中多酚类物质并转化为黄酮类物质的生物利用潜力，能够降解转化植物体中人类与动 物都无法充分降解的多酚类木质素、多糖类纤维与半纤维素，成为子实体中与抗氧化能力 相关的功能营养活性成分，因此大球盖菇含有较高含量的黄酮类、皂甙类、酚类及维生素c 等抗氧化生物活性成分，是优良的天然抗氧化物质来源。
本发明的技术方案如下
(-)以大球盖菇的营养代谢特点为依据，改善大球盖菇栽培基质的配方，以期达到提高 大球盖菇子实体中黄酮类化合物含量的目的。所述大球盖菇栽培基质的配方为100%谷壳 或50%谷壳+50%稻草；采用室外生料田园化整畦栽培方式生产种植，得到大球盖菇子实体，使得大球盖菇子实体中黄酮类化合物含量提高10% 35%。 (二)通过优化提取溶剂、物料比、溶剂浓度以及提取时间、提取温度等提取条件，提 高具有抗氧化功能的大球盖菇子实体中黄酮类化合物提取得率。 ①以水、丙酮、乙酸乙酯、乙醇四种溶剂作为提取大球盖菇子实体中黄酮类化合物 的提取溶剂，结果发现提取大球盖菇子实体中黄酮类化合物效率最佳的溶剂是乙醇，因此， 大球盖菇子实体中黄酮类化合物提取以食品级工业酒精作为提取溶剂；
②物料比、溶剂浓度以及提取时间、提取温度等提取条件影响大球盖菇子实体中黄酮 类化合物的提取得率。大球盖菇子实体中黄酮类化合物的提取得率的优化条件如下物料 与溶剂比例为1 :40 70的物料比(W/V);提取溶剂为80% 90% (体积)的食品级工业酒 精；2h 3h的提取时间；7(TC 9(TC的提取温度。采用优化的提取条件可使大球盖菇子实 体中黄酮类化合物的提取得率达4 9%。，较文献提取方法提高了 4倍以上。
本发明所述的大球盖菇子实体中黄酮类化合物的提取物的制备方法如下用大球 盖菇子实体作原料，采用食品级工业酒精作提取溶剂，将大球盖菇子实体或其粉碎料按1 :
40 70的物料与溶剂比(W/V)加入80% 90% (体积)的食品级工业酒精，回流提取2 3h，减压、抽滤、浓縮得到黄酮类化合物浸膏，然后进行冷冻干燥，得到大球盖菇子实体的黄 酮类化合物的提取物。以芦丁为对照，采用比色法，测定大球盖菇子实体提取物中的黄酮类 化合物，其含量占提取物总重量的1 5%。 本发明所述的一种提高大球盖菇子实体中黄酮类化合物含量及其提取效率的技 术，这一技术所获得的大球盖菇子实体中黄酮类化合物的提取物可用于食品保鲜剂，如动、 植物油脂保鲜，水产品保鲜，果、蔬保鲜，各类方便食品保鲜等；还用于膳食补充剂、食品添 加剂等功能营养食品的开发；用于生产具有抗氧化特性的天然抗氧化药物等。大球盖菇 子实体中黄酮类化合物的提取物的抗氧化作用效果明显，且提取工艺简单，成本低，提取率 高，可充分利用稻草、谷壳等废弃资源栽培大球盖菇，以廉价的、丰富的资源作为生产大球 盖菇原料。 本发明的显著优点
a) 本发明提供的提高大球盖菇子实体中黄酮类化合物的栽培主料为稻草、谷壳等废 弃资源，变废为宝，绿色环保。 b)大球盖菇具有较强的抗逆抗杂性，易于栽培，因而大球盖菇资源丰富，本发明提 供了一条开发利用大球盖菇资源的途径。 c)本发明提供的提取方法工序少，操作简便，生产周期短，大球盖菇子实体中提取 的黄酮类化合物含量可提高4倍以上。
具体实施例方式
以下是本发明的几个具体实施例，进一步说明本发明，但是本发明不仅限于此。
实施例1大球盖菇子实体中黄酮类化合物提取及含量测定
大球盖菇子实体中黄酮类化合物提取步骤大球盖菇子实体(干品)6(TC烘干，磨碎过 70目筛网一食品级工业酒精溶液回流法提取一减压、抽滤分离上清液，定容一旋转蒸发浓 縮一冷冻干燥。
4
大球盖菇子实体中黄酮类化合物含量测定方法以芦丁为标样，采用比色法，测定 大球盖菇黄酮类化合物的提取液中黄酮类化合物的含量，计算黄酮类化合物的得率。
黄,类化合物重i 计算公式黄酮类化合物得率％1=
将田间收获的大球盖菇子实体清洗、烘干、粉粹；准确称取15. 25g过70目的大球盖菇 粉末，在物料比1 :40,80% (体积)食品级工业酒精溶液浓度，温度80°C，时间2h的提取条件 下，采用回流法提取，测定大球盖菇黄酮类化合物的提取液的总黄酮含量为5. 98。；。冻干后 获得大球盖菇提取物5. 77g，大球盖菇醇溶性物质含量达37. 8%。 准确称取大球盖菇醇提取物0. 1002g，用80% (体积)食品级工业酒精溶液水溶液， 定容至5mL，得20. 04mg/mL的待测液。准确量取大球盖菇提取液lmL置入10mL螺口具塞小 试管中，以芦丁为对照，采用比色法测定得吸光度。根据标准曲线回归方程计算得黄酮类化 合物中的黄酮含量为3. 02%。 实施例2不同的大球盖菇培养基质配方的比较 (l)栽培
采用大球盖菇室外生料田园化整畦栽培方式种植，选择不同的培养基配方分别以 100%金针菇菌糠、100%谷壳、50%谷壳+50%稻草和33%谷壳+67%木屑为栽培原料。
(2 )黄酮类化合物提取率计算
将田间收获的大球盖菇子实体进行清洗，按照实施例1所述大球盖菇子实体中黄酮类 化合物提取步骤获得大球盖菇子实体中黄酮类化合物的提取液，按照实施例1所述大球盖 菇黄酮类化合物含量测定方法以及黄酮类化合物得率的计算公式，计算得到四种栽培原料 生产的大球盖菇子实体黄酮类化合物的提取率
1) 100%金针菇菌糠黄酮类化合物提取率为4. 35%0
2) 谷壳木屑(33%谷壳和67%木屑)黄酮类化合物提取率为4. 71%0
3) 谷壳稻草(50%谷壳和50%稻草)黄酮类化合物提取率为5. 62°;
4) 100%谷壳黄酮类化合物提取率为5. 82%0
100%谷壳配方生产的大球盖菇子实体黄酮类化合物提取率最高，经济效益最大。
实施例3大球盖菇子实体中黄酮类化合物提取及含量测定
采用大球盖菇室外生料田园化整畦栽培方式种植，以100%谷壳为栽培原料进行栽培， 将田间收获的大球盖菇子实体进行清洗，6(TC烘干，磨碎过70目筛网。准确称取过70目的 大球盖菇粉末lg，在物料比1 :70 (W/V)，90% (体积)的食品级工业酒精，温度9(TC的提取 条件下，回流法提取2h，采用比色法，以芦丁为对照品测定大球盖菇提取物的总黄酮含量为 5. 160;。 实施例4
重复进行实施例3所述的栽培步骤，得到大球盖菇子实体。准确称取过70目的大球盖 菇粉末lg，在物料比1 :40(W/V)，8096(体积)的食品级工业酒精，温度8(TC的提取条件下，回 流法提取3h，采用比色法，以芦丁为对照品测定大球盖菇提取物的总黄酮含量为7. 41%。。
实施例5
重复进行实施例3所述的栽培步骤，得到大球盖菇子实体。准确称取过70目的大球 盖菇粉末lg，在物料比1 :50 (W/V)，85% (体积)的食品级工业酒精，温度9(TC的提取条件
5下，回流法提取2. 5h，采用比色法，以芦丁为对照品测定大球盖菇提取物的总黄酮含量为 8. 23%o。 实施例6大球盖菇子实体中黄酮类化合物的抗氧化活性测定
(1) 体外清除羟自由基的作用邻二氮菲-Fe2+氧化法
(2) 超氧阴离子的清除活性邻苯三酚自氧化法
(3) 不饱和脂肪酸过氧化的抑制作用Fe2+诱发卵黄脂蛋白多不饱和脂肪酸(PUFA) 过氧化体系中抗氧化活性(A0A)的测定
取正交试验中提取率最高的一组大球盖菇黄酮类化合物提取液用于抗氧化力测定，量 取0. 3mL大球盖菇黄酮类化合物提取液，用90%食品级工业酒精定容于50mL容量瓶，作为 抗氧化活性实验的待测液。利用邻二氮菲_Fe2+氧化法、邻苯三酚自氧化法和Fe2+诱发卵 黄脂蛋白多不饱和脂肪酸(PUFA)过氧化体系中抗氧化活性(AOA)的测定方法对待测液进 行抗氧化活性的测定，结果表明大球盖菇黄酮类化合物提取液中黄酮类化合物对羟自由基 ( OH)的清除率为23. 07%，对邻苯三酚自氧化的抑制率为26. 85%，对脂质过氧化的抑制率 为19. 26%。 因此大球盖菇黄酮类化合物具有抗氧化的特征，具有清除羟自由基。OH)、抑制超 氧阴离子(*02—)和抑制脂质过氧化的作用。体外试验结果表明，大球盖菇黄酮类化合物具
有多种的抗氧化作用。
权利要求
一种提高大球盖菇子实体中黄酮类化合物含量的方法，其特征在于所述大球盖菇栽培基质的配方为100%谷壳或50%谷壳+50%稻草；采用室外生料田园化整畦栽培方式生产种植，得到大球盖菇子实体。
2. —种提高权利要求1所述的大球盖菇子实体中黄酮类化合物提取率的方法，其特 征在于以食品级工业酒精溶液为提取溶剂，所述酒精浓度为80% 90% (体积)，大球盖菇 子实体与提取溶剂比例为1 :40 70 (W/V)的物料比，2h 3h的提取时间，7(TC 9(TC的提取温度。
3. 根据权利要求2所述的提高大球盖菇子实体中黄酮类化合物提取率的方法，其特 征在于按照以下步骤进行(1) 回流提取将大球盖菇子实体或其粉碎料按1 :40 70 (W/V)的物料与溶剂比加入80% 90% (体积)的食品级工业酒精，7(TC 9(TC回流提取2 3h，减压、抽滤、浓縮得 到黄酮类化合物浸膏，然后进行冷冻干燥，得到大球盖菇子实体中黄酮类化合物的提取物。(2) 提取率计算以芦丁为对照，采用比色法，80% 90% (体积)的食品级工业酒精为 提取液，测定大球盖菇子实体中黄酮类化合物的提取液中黄酮类化合物的含量，计算黄酮 类化合物的得率。
全文摘要
本发明涉及一种提高大球盖菇子实体中黄酮类化合物含量及其提取效率的方法，属于生物技术领域。本发明以稻草、谷壳、木屑等废弃资源为大球盖菇的培养基质栽培大球盖菇，同时进一步优化影响大球盖菇黄酮类化合物提取的条件，提高大球盖菇黄酮类化合物的含量和提取得率。所述大球盖菇栽培基质的配方为100%谷壳或50%谷壳+50%稻草，采用室外生料田园化整畦栽培方式生产种植，得到大球盖菇子实体。大球盖菇子实体中黄酮类化合物的提取得率的优化条件如下物料与溶剂比例为140～70的物料比(W/V)；提取溶剂为80%～90%(体积)的食品级工业酒精；2h～3h的提取时间；70℃～90℃的提取温度。本发明变废为宝，绿色环保，提取方法操作简便，生产周期短，经济效益显著。
文档编号A61K36/07GK101790938SQ20101011593
公开日2010年8月4日 申请日期2010年3月2日 优先权日2010年3月2日
发明者吴俐, 李怡彬, 汤葆莎, 沈恒胜, 陈君琛 申请人:福建省农业科学院农业工程技术研究所