专利名称：水苏糖在制备防治腹泻药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及水苏糖的用途，特别是涉及水苏糖在制备防治腹泻药物中的应用。
背景技术：
腹泻是一种常见的肠道疾病。目前，治疗腹泻的主要办法是口服补液、纠正水电解 质紊乱、口服蒙脱石散及抗微生物治疗等。这些治疗方法对于腹泻有一定的疗效，也改善了 疾病的预后，但在预防方面还存在一些不足。水苏糖是唇形科水苏属植物中天然存在的，结构明确，分子式C24H42O21,分子量 666. 59，它由果糖、葡萄糖、半乳糖、半乳糖聚合组成，简单的结构表示为果糖_葡萄糖_半 乳糖_半乳糖。它能显著促进人体肠道有益菌群增殖的功能性低聚糖，被誉为“天然超强双 歧因子”。但没有资料显示水苏糖用于制备防治腹泻药物的应用。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供水苏糖在制备防治腹泻药物中的应用。本发明的技术方案概述如下水苏糖在制备防治腹泻药物中的应用。实验证明水苏糖对于肠道感染腹泻、抗生素相关性腹泻、细菌性痢疾腹泻、轮状病 毒感染腹泻、非特异性腹泻等有一定的缓解和治疗作用。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。本发明所述的水苏糖是从唇形科水苏属植物如草石蚕、银条等原料中提取的水苏 糖，可以按常规方法制备提取，也可以按照中国专利申请号为99124982. 8中公开的方法提 取。本发明所述的水苏糖还可由市售得到。实验例1水苏糖在制备防治腹泻药物中的应用1.材料1. 1样品由中国食品发酵工业研究院技术产品服务部提供的p80型水苏糖(水 苏糖质量含量占总物质的80%以上)，水苏糖为白色粉末，供正式试验用。1. 2试剂、培养基、实验器材及动物1.2. IBBL培养基本实验室自制LBs培养基本实验室自制EMB培养基 开封市医学生物研究所叠氮钠-结晶紫-七叶苷培养基本实验室自制1.2. 2实验器材超净台、电子天平、酒精灯、吸管、平皿、试管、温箱
1.2. 3动物由中国人民解放军军事医学院实验动物中心提供的健康成年雄性 BALB/c小鼠40只(批准号军医动字BDW95008号)。2、实验方法2. 1肠道菌群检验方法双歧杆菌BBL培养基37°C、48_72h厌氧培养乳杆菌LBs培养基37°C、48h培养肠杆菌EMB培养基37°C、24h培养肠球菌叠氮钠-结晶紫-七叶苷培养基37°C、48h培养
2. 2剂量选择与步骤水苏糖人体推荐量为每人每日3g，即每人每日3g/日/60kg体重，相当于0.05g/ 日/kg，小鼠等效剂量为人体推荐量的10倍，即每日0. 5g/kg体重(中剂量)，上、下各设一 个剂量组1. 5g/kg体重(高剂量)和0. 25g/kg体重(低剂量)。选用40只雄性小鼠随机 分成4组，每组10只，其中1组为正常对照组，用已消毒的水灌胃，灌胃量按0. 2ml/10g. bw 计算，其余3组以水苏糖溶液灌胃，每日1次，连续7天，于给受试物最后一次24h后，无菌 采取小鼠粪便0. 1-0. 4g，置已称重的带玻璃珠的干燥灭菌小试管中，再称重，计算出小鼠粪 便重量，并加灭菌稀释液，稀释10倍，振荡1分钟，再依次10倍系列稀释，选择合适的稀释 度，分别接种在各培养基上。3、实验数据用t检验，采用ststa软件进行统计。4、结果水苏糖对BALB/c小鼠肠道菌群调节的作用结果见下表。表小鼠肠道菌群检测结果(logCFU/g，每组10只)
组别正常对照组低剂S组中剂S组髙剂量组
__灌服前灌服后灌服前 灌服后灌服前__灌服后灌服前灌服后
肠杆菌 6.49±1.15 6.77+0.58 6.39±1.16 6.36±0.42 6.59±0.616.75±0.58 6.48±0.52 6.22±0.70
脑球苘 8.26±0.48 8.22±0.68 8.20±0.84 7.80±0.40 8.10±0.79 7.68±0.20 8.32±0.64 7.48±0.36
X‘*※※
双歧杆菌 8.51+0.26 8.63 + 0.35 8.28±0.57 8.95±0.55 8.35±0.47 9.20±0.42 8.72 + 0.41 9.40 + 0.42
*”※※材※※
学L 杆菌 8.41±0.86 8.39±0.70 8.27±0.81 8.85±0.42 8.23±0.90 9.28±0.34 8.24±0.99 9.24±0.36
“※※ ‘*※※*与灌服前比较ρ彡0. 05**与灌服前比较ρ彡0. 01※与正常对照组灌服后比较ρ < 0. 05※※与正常对照组灌服后比较ρ < 0. 01由表可知，正常对照组灌服后与灌服前比较，肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、乳杆菌的 数量无明显变化，差异无显著性(P ^ 0. 05)。经口给予小鼠受试物后，小鼠肠道内的四种细菌数量发生变化。低剂量组灌服后 与灌服前比较，双歧杆菌数量明显增加，差异有显著性(P ^ 0. 05)。中剂量组灌服后，肠杆菌的数量变化不大，差异无显著性(p ^ 0. 05)，肠球菌数量 明显增减少，差异有显著性(P <0.05)，双歧杆菌、乳杆菌的数量明显增加，差异有极显著 性(ρ 彡 0. 01)。
高剂量组灌服后与灌服前、正常对照组灌服后比较，双歧杆菌、乳杆菌的数量明显增加，差异有极显著性(P ^ 0.01)；肠球菌的数量明显增减少，差异有极显著性
(P ^ 0. 01)。5、结论根据以上试验结果可知，给予三个剂量水苏糖溶液后，小鼠肠道内的双歧杆菌、乳 杆菌的数量明显增加，差异有极显著性(P <0.01)；说明水苏糖溶液具有一定的调节肠道 菌群、增殖双歧杆菌、乳杆菌的作用，可以作为腹泻的预防和善后制剂。实验例2 水苏糖的毒理学结果1.研究内容北京市疾病预防控制中心利用现代毒理学方法，对水苏糖(中国食品发酵工业研 究院P80型，水苏糖质量含量占总物质的80%以上)进行急性毒性、遗传毒性、亚慢性毒性、 致畸变性等方面系统性研究。2.研究结果2. 2. 1急性毒性急性经口毒性试验(最大耐受剂量法)雌性、雄性小鼠经口 MTD均大于15g/kgBW，在观察期内，受试动物生长良好，进食正常，未见中毒体征及死亡，大 体解剖未见异常。根据食品安全性毒理学评价程序和方法(GB15193-2003)中急性毒性分 级标准判定，水苏糖属实际无毒级。2. 2. 2遗传毒性2. 2. 2. IAmes 试验水苏糖0. 008,0. 04,0. 2,1. 0,5. Omg/皿剂量组回变菌落数均与溶剂对照组菌落 数相差无几，亦无剂量_反应关系，对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株试验 菌株，在加与不加S-9时，均未见水苏糖有致突变作用。2. 2. 2. 2小鼠骨髓细胞微核试验水苏糖以2. 5,5. OUO. Og/kg BW剂量灌胃给予小鼠，各剂量组微核细胞率均在正 常值范围内，阳性对照组与阴性对照组比较，经卡方检验，差异有极显著性(P <0.01)，说 明受试动物敏感，试验可靠。PCE/NCE数值在正常范围内。根据食品安全性毒理学评价程序 和方法(GB15193-2003)中小鼠骨髓细胞微核试验标准判定，水苏糖对小鼠骨髓嗜多染红 细胞无致微核作用，试验结果为阴性；2. 2. 2. 3小鼠精子畸形试验实验动物检疫3d，选用25只健康小鼠，随机分为5组，每组各5只，共设三个剂 量组，剂量设计分别为0. Iml. 5,5. OUO. Og/kg Bff,另设阴性对照及阳性对照组，阳性组按 0. ImVlOgBW腹腔注射给予环磷酰胺40mg/kgBW。实验组及阴性对照组均按0. 2ml/10gBW经 口灌胃，阴性对照组给予去离子水。各剂量组动物精子畸变率均在正常值范围内，阳性对照 组与阴性对照组相比，差异具有极显著性(P <0.01)，说明受试动物敏感，试验可靠。根据 食品安全性毒理学评价程序和方法(GB15193-2003)中小鼠精子畸形试验评价标准判定， 水苏糖对小鼠生殖细胞未显示损伤作用，小鼠精子畸形试验结果为阴性；3.研究结论北京市疾病预防控制中心对水苏糖的毒理学安全性进行了检测，结果为急性经 口毒性试验(最大耐受剂量法)雌性、雄性小鼠经口 MTD均大于15g/kgBW，根据食品安全性毒理学评价程序和方法(GB15193-2003)中急性毒性分级标准判定，水苏糖属实际无毒级；根据食品安全性毒理学评价程序和方法(GB15193-2003)中小鼠骨髓细胞微核试验标 准判定，水苏糖对小鼠骨髓嗜多染红细胞无致微核作用，试验结果为阴性；根据食品安全性 毒理学评价程序和方法(GB15193-2003)中小鼠精子畸形试验评价标准判定，水苏糖对小 鼠生殖细胞未显示损伤作用，小鼠精子畸形试验结果为阴性；根据食品安全性毒理学评价 程序和方法(GB15193-2003)中Ames试验结果标准判定，水苏糖Ames试验结果为阴性。实验例3 水苏糖治疗腹泻的初步临床观察3. 1.研究方法(1)实验对象本研究观察对象共有95例(男女不限)。其中成人55人，男性30 例，女性25例，平均年龄25岁；儿童病例40例，男性28例，女性12例，平均年龄为5岁。感染性腹泻患者57例，其中细菌性痢疾16例(除腹泻外没有其他严重症状)，轮 状病毒感染28例，一般肠道感染13例。抗生素相关性腹泻22例(明确为使用抗生素后引起并排除由于感染引起的)，非 特异性腹泻16例(通常指消化不良引起的)。所有腹泻的患者均有大便常规检查，大便培 养和大便轮状病毒抗体检查。实验室检查感染性腹泻中有16例大便常规中红细胞为1 2个加号，同时脓球 1 2个加号，其中两例大便培养为痢疾杆菌，16例患者均诊断为细菌性痢疾，28例婴幼儿 大便中均检出轮状病毒抗体。感染性腹泻患者大便中均有异常，非感染性腹泻患者大便常 规未检出异常。(2)给药方法水苏糖(中国食品发酵工业研究院P80型，水苏糖质量含量占总物 质的80%以上)成人每天3次，儿童每天1-2次，每次lg。(3)观察指标所有病人均于用药前和用药后如实记录治疗前后体温，腹泻开始 和中止的时间，大便性状和次数，伴随症状药物的不良反应(指用药后出现，停药后消失并 排除疾病引起的症状)。(4)疗效判断显效用药1 2天内腹泻明显减少(< 2次/天和/停止)有效用药后在4天之内腹泻减少并逐渐停止；无效4天后仍腹泻持续或全身情况逐渐加重。3. 2.结果(1)疗效分析本组95例病人用水苏糖治疗后均有效，非感染性腹泻患者(即抗 生素相关性腹泻，非特异性腹泻)38例均为显效。感染性腹泻中细菌性痢疾16例均为显效。 轮状病毒感染性腹泻中有15例为显效，13例为有效，轮状病毒感染有轻度脱水者可给予口 服补液盐治疗。(2)不良反应在我们所有病例中用药期间均未发现有不良反应发生。3. 3.结论根据本研究结果可以得出水苏糖在治疗腹泻时是一种非常有效的制 剂。按实施例3的方法，经本发明人大量的初步临床观察，证明市场上出售的商品化 的水苏糖P60-80型也都具有治疗腹泻的功效。实施例4水苏糖片剂的制备
原料水苏糖粉(中国食品发酵工业研究院P60-80型，水苏糖质量含量占总物质 的60-80%以上)IOOOg抗粘剂5g制法将水苏糖粉与抗粘剂混合均勻，加入80-98%的酒精混勻，过14目筛造粒，干燥后压片，片重2g。实验例5水苏糖散剂的制备原料水苏糖粉(中国食品发酵工业研究院P60-80型，水苏糖质量含量占总物质 的60-80%以上)制法取水苏糖粉过6号筛，将过筛的细粉装入铝箔袋中密封。实验例6水苏糖胶囊的制备原料水苏糖粉(中国食品发酵工业研究院P60-80型，水苏糖质量含量占总物质 的60-80%以上)制法将水苏糖粉装入00号硬胶囊，每粒装量0. 5g。实验例7水苏糖口服液的制备原料水苏糖粉(中国食品发酵工业研究院P60-80型，水苏糖质量含量占总物质 的60-80%以上)制法按150g/L的浓度配置水苏糖水溶液，灌装IOml/瓶，然后在121°C条件下灭 菌15分钟。
权利要求
水苏糖在制备防治腹泻药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了水苏糖在制备防治腹泻药物中的应用。实验证明水苏糖对于肠道感染腹泻、抗生素相关性腹泻、细菌性痢疾腹泻、轮状病毒感染腹泻、非特异性腹泻等有一定的缓解和治疗作用。
文档编号A61K31/702GK101810631SQ20101011605
公开日2010年8月25日 申请日期2010年2月26日 优先权日2010年2月26日
发明者周志桥, 张金泽, 曾明, 林静, 段素芳 申请人:中国食品发酵工业研究院