专利名称：蜘蛛香总黄酮的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及蜘蛛香总黄酮的新用途，具体地，是在制备治疗肝癌或纤维肉瘤的药 物中的用途，属于药物领域。
背景技术：
蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)，为败酱科缬草属植物蜘蛛香的根或根茎， 又名连香草、心叶缬草、马蹄香、养心莲、乌参、香草子、雷公七等。蜘蛛香为多年生草本，生 于海拔2500米以下山顶草地、林中或溪边。分布于河南、湖北、湖南、四川、贵州、云南、西藏 和陕西等地，以根及根状茎入药，味辛、微苦，性温，具有理气和中，散寒除湿，活血消肿的功 效，主治脘腹胀痛，呕吐泄泻，小儿疳积，风寒湿痹，脚气水肿，月经不调，跌打损伤，疮疖等。 文献报道了蜘蛛香中含有挥发油类、环烯醚萜类、黄酮类、生物碱及多酚类等成分。胡轶群， 等，药用植物蜘蛛香化学成分及药理作用研究，《中国现代药物应用》，2009年第3卷第24 期，报道了蜘蛛香的根和根茎中的挥发油类成分有橄榄醇、1，2_去氢香木兰、β-石竹烯、 广藿香醇、α -愈创木烯、α -蛇床烯，(-)-y-云木香醛、乙酸金合欢脂、α -檀香烷、α -菔 烯、龙脑、油酸等70多种；环烯醚萜类成分有缬草三脂、异缬草三脂、乙酰氧基缬草醚脂、二 氢缬草素、缬草苷等15种；黄酮类成分有橙皮苷、蒙花苷和两种2-甲基丁酸脂；多酚类有 咖啡酸及绿原酸。傅亮，等，毛细管电泳-电化学检测法测定蜘蛛香中多元酚类化合物，《分 析化学》，2005年第33卷第2期，报道了蜘蛛香中还含有山奈酚、芹菜素、香叶木素三种黄酮 类成分。目前对蜘蛛香药效的报道的文献较多，如蜘蛛香具有抗轮状病毒的作用，可用于 治疗腹泻。申请号CN200410079545. 2，发明名称用于治疗腹泻的蜘蛛香制剂及其制备方 法，该发明是一种用于治疗腹泻的蜘蛛香制剂及其制备方法，其特征在于制剂中本质含有 蜘蛛香0. 1-99. 9%，其余为药物用辅料0. 1-99.9%。本发明的蜘蛛香制剂对轮状病毒引 起的腹泻及其它各种腹泻有较好的治疗效果，特别对婴幼儿死亡率较高的轮状病毒性腹泻 和老年人秋季腹泻有更为满意的治疗效果。蜘蛛香具有治疗焦虑症的作用。如申请号 CN200510021662.8，发明名称蜘蛛香及其提取物在制备治疗焦虑症的药物中的用途，该发 明提供了蜘蛛香及其提取物在制备治疗焦虑症的药物中的用途。该发明还提供了一种药物 组合物，它是含有蜘蛛香及其提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分 制备而成的药剂。本发明药物有针对性地治疗焦虑症、疗效确切、无成瘾性及依赖性，无明 显的毒副作用。蜘蛛香具有治疗癌症以及镇静、镇痛的作用，其主要有效成分为环烯醚萜类化合 物。申请号CN200410090283.X，发明名称治疗肝癌的中药制剂及其制作方法，该发明是 一种治疗肝癌的中药制剂及其制作方法，是由蜘蛛香经超微粉碎至2 5μπι细粉，用现代 制剂技术制成橡胶膏剂，使用时贴在肝脏部位，使药物透过皮肤，进入病变区域，达到治疗 肝癌的效果或减轻病人的痛苦。经长期临床初步验证结果表明可以抑制或消除原发性肝 癌生长，具有明显的镇痛作用。胡轶群，等，药用植物蜘蛛香化学成分及药理作用研究，《中国现代药物应用》，2009年第3卷第24期，报道了蜘蛛香的二氢缬草素、缬草醚脂及其代谢 产物缬草醛对肝细胞瘤细胞有较强细胞毒性，其中，二氢缬草素对Kreb’ s II腹水癌细胞 有明显而确切的抑制作用，缬草素还对宫颈鳞癌细胞、胃腺癌细胞、肺腺癌细胞均有杀死作 用；蜘蛛香水提液具有镇静，镇痛的作用，其中缬草二醇和缬草素为镇静的有效成分，而缬 草素和二氢缬草素具有解痉活性。目前对蜘蛛香所含黄酮类化合物的药效研究也有报道。李蓉，蜘蛛香中黄酮类化 合物的提取分析及抗炎抑菌活性研究，中国优秀硕士学位论文全文数据库，2009，试验中采 用了小鼠耳肿胀法和纸片扩散法，表明了蜘蛛香总黄酮具有抗炎活性以及抑制猪大肠杆菌 的作用。张占平，蜘蛛香提取物体外抗结肠癌作用研究，中国优秀硕士学位论文全文数据 库，2010，研究表明，蜘蛛香经脱脂后的醇提物能够有效抑制结肠癌SW480细胞的增殖，并 能够提高SW480细胞的凋亡率，其中，提取物中总黄酮含量为3. 47%。现有技术公开了蜘蛛香环烯醚萜类具有抗肿瘤活性，其总黄酮成分具有抗炎抑菌 的作用，总黄酮含量为3. 47%的醇提物具有对抗结肠癌的作用，但是，还没有文献报道将蜘 蛛香总黄酮用于治疗肝癌或纤维肉瘤。
发明内容
本发明的目的是提供蜘蛛香总黄酮的新用途，即在制备治疗肝癌或纤维肉瘤的药 物中的用途。本发明的另一目的是提供了一种治疗肝癌或纤维肉瘤的药物组合物。本发明提供了蜘蛛香总黄酮在制备用于治疗肝癌或纤维肉瘤的药物中的用途。其中，所述的蜘蛛香总黄酮中含有总黄酮40-80% w/w。其中，所述的蜘蛛香总黄酮来源于败酱科缬草属植物蜘蛛香Valerianajatamansi Jones的根或根茎的提取物。其中，所述的提取物的制备方法为将蜘蛛香药材粉碎，石油醚回流脱脂后，用料 液比为1 15-25 (g.mr1)的45%-75%乙醇提取，滤过，合并滤液，回收乙醇至无醇味，再 加水稀释，抽滤，得制备液；将上述制备液通过大孔树酯纯化，收集洗脱液，回收溶剂，干燥， 即得蜘蛛香总黄酮。进一步优选地，所述的制备液是通过以下方法得到的将蜘蛛香药材粉碎， 60-90°C石油醚回流脱脂后，用料液比为1 ZiKgmr1)的70%乙醇，浸泡12h，超声提取3 次，每次30min，抽滤，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，再加适量水稀释，抽滤，得制备液。其中，所述的大孔树酯为HPD600、HPD500、HPD450、D101 或 AB-8。进一步优选地，所述的大孔树酯为HPD600。其中，所述的制备液通过大孔树酯纯化的方法为将上述制备液以 1. 71-4. 27mg · ml-1上样浓度，1. 2-6. OBV · h-1吸附流速通过HPD600大孔树脂，吸附后的树 脂柱先以2-3BV水洗脱，再用3BV以上的65% -95%乙醇以1. 2-6. OBV .h—1流速洗脱，收集 乙醇洗脱部分，回收乙醇，得浓缩液，干燥，即得蜘蛛香总黄酮。进一步地，所述的制备液通过大孔树酯纯化的方法为将上述制备液以 3. 42-4. 27mg · ml-1上样浓度，1. 2-2. 4BV · h-1吸附流速通过HPD600大孔树脂，吸附后的树 脂柱先以2-3BV水洗脱，再用3-4BV65% -80%乙醇以2. 4-3. 6BV · h—1流速洗脱，收集乙醇 洗脱部分，回收乙醇，得浓缩液，干燥，即得蜘蛛香总黄酮。
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进一步优选地，所述的精制的方法为将上述制备液以3. 42mg · πιΓ1上样浓度， 2. 4BV 吸附流速通过HPD600大孔树脂，吸附后的树脂柱先以3BV水洗脱，再用4BV80% 乙醇以2. 4BV · h-1流速洗脱，收集80%乙醇洗脱部分，回收乙醇，得浓缩液，干燥，即得蜘蛛
香总黄酮。本发明还提供了一种治疗肝癌或纤维肉瘤的药物组合物，它是由有效量的蜘蛛香 总黄酮为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。其中，所述的制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、散剂或颗粒剂。本发明药物蜘蛛香总黄酮是以败酱科缬草属植物蜘蛛香的根或根茎提取为活性 成分，对接种肝癌H22和纤维肉瘤S180的小鼠有明显抗肿瘤作用。
图1 总黄酮提取率_不同溶剂考察曲线2 总黄酮提取率_乙醇浓度考察曲线3 总黄酮提取率_提取时间考察曲线4 总黄酮提取率_提取次数考察曲线5 总黄酮提取率_浸泡时间考察曲线6 总黄酮提取率-料液比考察曲线7 正交试验直观分析8 总黄酮收率-溶剂的洗脱用量考察曲线9 橙皮苷对照品波长扫描10 甲醇提取物波长扫描11 水提取物波长扫描12 :60%乙醇提取物波长扫描图
具体实施例方式实施例1本发明蜘蛛香总黄酮的制备取蜘蛛香200g，将蜘蛛香药材粉碎，使用60-90°C石油醚回流脱脂后，用料液比为 1 20 (g· ml—1)的65%乙醇，浸泡12h，超声提取3次，每次40min，抽滤，合并滤液，减压 回收乙醇至无醇味，再加适量水稀释，抽滤，得制备液。将上述制备液以3. 42mg · πιΓ1上样 浓度，2. 4BV · h—1吸附流速通过HPD600大孔树脂，吸附后的树脂柱先以3BV水洗脱，再用 4BV80%乙醇以2. 4BV · h—1流速洗脱，收集80%乙醇洗脱部分，回收乙醇，得浓缩液，干燥， 即得蜘蛛香总黄酮。本发明蜘蛛香总黄酮是经过脱脂处理后再提取得到的，在最终获得的蜘蛛香总黄 酮提取物中未检测到环烯醚萜类化合物。实施例2本发明蜘蛛香总黄酮的提取方法考察试验以提取物中总黄酮的含量为指标，用单因素试验，对乙醇浓度、提取时间、提取次 数、浸泡时间、料液比5个提取因素进行了考察，最后再以正交试验对提取条件的因素进行 筛选。其中，总黄酮的测定方法依照实施例4。1、对溶剂的考察准确称取三份4. OOg脱脂后蜘蛛香于三角烧瓶中，按要求分别加入20BV水、甲醇、60%乙醇溶液，浸泡24h。按以上提取方法，提取三次，每次30min，配置样 品溶液，测吸光度。试验表明以乙醇作溶剂为宜，结果见图1。2、对乙醇浓度的考察准确称取五份4. OOg脱脂后蜘蛛香于三角烧瓶中，按要求分 别加入20BV30%乙醇、45%乙醇、60%乙醇、75%乙醇、95%乙醇溶液，浸泡24h。按以上 提取方法，提取三次，每次30min，配置样品溶液，测定总黄酮含量。试验表明乙醇浓度为 45% -75%为宜，结果见图2。3、提取时间的考察准确称取五份4. OOg脱脂后蜘蛛香于三角烧瓶中，按要求分 别加入20BV 60%乙醇溶液，浸泡24h。按提取方法提取三次，每次依次为10min，20min， 30min, 40min, 50min,配置样品溶液，测定总黄酮含量。试验表明在30min-50min总黄酮提 取率高，以30min为宜，结果见图3。4、提取次数的考察准确称取三份4. OOg脱脂后蜘蛛香于三角烧瓶中，按要求分别 加入20BV 60%乙醇溶液，浸泡24h。按提取方法分别提取一次、两次、三次，每次30min，配 置样品溶液，测定总黄酮含量。试验表明提取次数越多提取率越高，结果见图4。5、浸泡时间的考察准确称取六份4. OOg脱脂后蜘蛛香于三角烧瓶中，按要求分别 加入20BV 60 %乙醇溶液，分别浸泡0、6、12、24、36、48h。按提取方法提取三次，每次依次为 30min，配置样品溶液，测定总黄酮含量。试验表明浸泡时间以6-12h为宜，结果见图5。6、料液比的考察准确称取五份4. OOg脱脂后蜘蛛香于三角烧瓶中，按要求分别加 入5、10、15、20、25BV 60%乙醇溶液，浸泡6h。按提取方法提取三次，每次30min，配置样品 溶液，测定总黄酮含量。试验表明料液比为15-25倍为宜，结果见图6。7、超声提取正交试验的结果按照前述超声提取工艺的考察方案及含量测定方法 进行提取并测定黄酮类成分总含量，对测定结果进行方差分析。准确称取九份4. OOg脱脂后蜘蛛香于三角烧瓶中，按要求分别加入乙醇溶液，浸 泡12h。按正交表提取，抽滤合并滤液，定容到100ml，取4ml蒸干用甲醇溶解过滤，甲醇定 容到50ml，取2ml稀释到IOml测总黄酮含量。正交因素水平见表1，正交试验见表2，方差 分析见表3，直观分析见图7。表1超声提取正交试验因素水平表
权利要求
蜘蛛香总黄酮在制备治疗肝癌或纤维肉瘤的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述的蜘蛛香总黄酮中含有总黄酮以橙 皮苷计为40-80% w/w。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的蜘蛛香总黄酮来源于败酱科 缬草属植物蜘蛛香Valeriana jatamansi Jones的根或根茎。
4.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的蜘蛛香总黄酮的制备方法为 将蜘蛛香药材粉碎，石油醚回流脱脂后，用料液比为1 5-25 (g ^mr1)的30%-95%乙醇 提取，滤过，合并滤液，回收乙醇至无醇味，再加水稀释，抽滤，得制备液；将上述制备液通过 大孔树酯纯化，收集洗脱液，回收溶剂，干燥，即得蜘蛛香总黄酮。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于所述的制备液是通过以下方法得到的将 蜘蛛香药材粉碎，60-90°C石油醚回流脱脂后，用料液比为1 ZiKg^mr1)的65%乙醇，浸 泡12h，超声提取3次，每次40min，抽滤，合并滤液，减压回收乙醇至无醇味，再加水稀释，抽 滤，得制备液。
6.根据权利要求4所述的用途，其特征在于所述的大孔树酯为HPD600、HPD500、 HPD450、D101 或AB-8。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于所述的制备液通过大孔树酯纯化的 方法为将上述制备液以1. 71-4. 27mg · πιΓ1上样浓度，1. 2-6. OBV · 吸附流速通过 HPD600大孔树脂，吸附后的树脂柱先以1-5BV水洗脱，再用3BV以上的65% -95%乙醇以 1. 2-6. OBV · h—1流速洗脱，收集乙醇洗脱部分，回收乙醇，得浓缩液，干燥，即得蜘蛛香总黄 酮。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述的纯化方法为将上述制备液以 3. 42mg · ml—1上样浓度，2. 4BV · h—1吸附流速通过HPD600大孔树脂，吸附后的树脂柱先以 3BV水洗脱，再用4BV80%乙醇以2. 4BV · h—1流速洗脱，收集80%乙醇洗脱部分，回收乙醇， 得浓缩液，干燥，即得蜘蛛香总黄酮。
9.一种治疗肝癌或纤维肉瘤的药物组合物，其特征在于它是由有效量的蜘蛛香总黄 酮为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于所述的制剂为片剂、胶囊剂、丸 剂、散剂或颗粒剂。
全文摘要
本发明提供了蜘蛛香总黄酮的新用途，具体地，是在制备治疗肝癌或纤维肉瘤的药物中的用途。本发明还提供了一种治疗肝癌或纤维肉瘤的药物组合物。本发明蜘蛛香总黄酮对接种肝癌H22和纤维肉瘤S180的小鼠体内的肿瘤生长均有显著抑制作用，表明蜘蛛香总黄酮具有明显抗肝癌和纤维肉瘤的作用，为临床提供了一种新的用药选择。
文档编号A61P35/00GK101972286SQ20101051615
公开日2011年2月16日 申请日期2010年10月22日 优先权日2010年10月22日
发明者左长英, 张占平, 张天娥, 潘玲珍, 肖婷, 闫智勇 申请人:西南交通大学