专利名称：从植物蒙自蕈树中提取的活性成分及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从植物蒙自蕈树中提取的活性成分及其应用，属生物医药技术领 域。
背景技术：
蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)属于芽孢杆菌科，芽孢杆菌属。该菌在自然界 分布极广，研究表明，该菌能产生多种毒性物质，如肠毒素、溶血毒素等，由其引起的食物中 毒涉及的食品种类很多，发生食物中毒潜在危险性大，这种由广泛存在的细菌引起的人的 疾病受到关注。迄今已发现的抗生素主要来源于植物和微生物，其中许多已广泛用于治疗 各种微生物感染性疾病。近年来由于病原菌的耐药性，原有的医用抗菌素在减退，因此不断 开发新的抗生素受到重视。蒙自蕈树(Altingia yunnanensis)属于被子植物门、双子叶植物纲、金缕梅亚纲、 金缕梅目的金缕梅科(Hamamelidaceae)。别名青皮、青皮树(屏边)、白皮树、苦木梨(河 口)，主要分布于云南等地。目前蒙自蕈树(A. yunnanensis)主要用途为当地材用树种，未 见有关该植物具有抗蜡样芽孢杆菌活性的公开报道。
发明内容
本发明的目的是从蒙自蕈树植物产生的代谢产物中，筛选出对人体病原细菌蜡样 芽孢杆菌(Bacillus cereus)具有强烈抑制作用的活性成分，作为制备抑制人体病原细菌 蜡样芽孢杆菌制剂的应用。本发明是这样实现的1活性成分的制备本发明的活性成分经如下步骤得到a.将蒙自蕈树的枝或叶用水洗干净后放入烘箱，在60°C温度下烘烤12小时；b.将烘干后的蒙自蕈树的枝或叶切碎，放入三角瓶内，用100%甲醇浸泡，在40°C 的水浴锅上提取，第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次和第三次的时间分别为4和8小 时；C.将三次浸提的提取液合并后，在60°C温度下浓缩后得浸膏；d.将浸膏用甲醇溶解，定容至10mg/ml，置于冰箱中4°C保存备用。2、制备试验用的病原细菌蜡样芽孢杆菌(B. cereus)将蜡样芽孢杆菌接种于LB液体培养基(牛肉膏3克， 蛋白胨10克，氯化钠5克，自来水1000ml，PH 7.0-7.2)中，于37°C下培养24小时，冻于 4°C冰箱中备用。做活性时将LB固体培养基(牛肉膏3克，蛋白胨10克，氯化钠5克，琼 脂18克，自来水1000ml，pH 7.0-7.2)倒入9cm的平板中，待培养基凝固后，取200 μ L蜡 样芽孢杆菌菌液用涂布棒涂布均勻备用。3、试验方法
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滤纸片扩散法在无菌操作台上用微量注射器将样品注入纸片(做三个剂量， lmg/disc,0. 5mg/disc,0. lmg/disc)，用电吹风将纸片吹干待溶剂挥发后，置于涂布好病原 菌的LB平板上，37°C下培养24小时后，观察抑菌结果，测量抑菌圈的大小(含纸片的直径 0. 6cm)。同时在纸片上加入提取过程中使用过的溶剂甲醇作为对照，同时还做空白纸片对 照。整个实验重复3次，取3次实验结果的平均值。将试验获得的活性浸膏在100°C沸水中加热30分钟后，用甲醇溶解制备成浓度为 10mg/ml的活性成分，用同样的方法做抑菌试验。本发明的活性提取物对人体病原菌蜡样芽孢杆菌具有较强的抑制作用，能作为制 备抑制人体病原细菌蜡样芽孢杆菌制剂的应用，能开发为新的医用抗生素。
具体实施例方式本实施例所用的植物蒙自蕈树，采自中国科学院昆明植物研究所植物园内。实施例一蒙自蕈树的枝用水洗干净后放入烘箱，在60°C温度下烘烤12小时。将10克烘干 后的枝切碎，放入三角瓶内，用IOOml 100%甲醇浸泡，在40°C的水浴锅上提取。第一次浸 泡提取的时间为2小时，第二次和第二次的浸泡提取时间分别为4小时和8小时。将三次 浸提的提取液合并后，在60°C温度下浓缩得浸膏。该浸膏用甲醇溶解，制备成浓度为IOmg/ ml，用于做活性测定。同时做对照，结果见表1。表1蒙自蕈树枝的提取物对蜡样芽孢杆菌的抑菌作用
权利要求
1.一种从植物蒙自蕈树中提取的活性成分，其特征在于从植物蒙自蕈树中提取的活性 成分经如下步骤得到a.将蒙自蕈树的枝或叶用水洗干净后放入烘箱，在60°C温度下烘烤12小时；b.将烘干后的蒙自蕈树的枝或叶切碎，放入三角瓶内，用100%甲醇浸泡，在40°C的水 浴锅上提取，第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次和第三次的时间分别为4和8小时；c.将三次浸提的提取液合并后，在60°C温度下浓缩后得浸膏；d.将浸膏用甲醇溶解，定容至10mg/ml，置于冰箱中4°C保存备用。
2.权利要求1所述的从植物蒙自蕈树中提取的活性成分，其特征在于该活性成分对人 体病原菌蜡样芽孢杆菌具有较强的抑制作用，能作为制备抑制人体病原细菌蜡样芽孢杆菌 制剂的应用，能开发为新的医用抗生素。
全文摘要
本发明涉及一种从植物蒙自蕈树中提取的活性成分及其应用，属生物医药技术领域。从植物蒙自蕈树中提取的活性成分经如下步骤得到a.将蒙自蕈树的枝或叶用水洗干净后放入烘箱，在60℃温度下烘烤12小时；b.将烘干后的蒙自蕈树的枝或叶切碎，放入三角瓶内，用100％甲醇浸泡，在40℃的水浴锅上提取，第一次浸泡提取的时间为2小时，第二次和第三次的时间分别为4和8小时；c.将三次浸提的提取液合并后，在60℃温度下浓缩后得浸膏；d.将浸膏用甲醇溶解，定容至10mg/ml，置于冰箱中4℃保存备用。本发明提取的活性成分对人体病原菌蜡样芽孢杆菌具有较强的抑制作用，能作为制备抑制人体病原细菌蜡样芽孢杆菌制剂的应用，能开发为新的医用抗生素。
文档编号A61P31/04GK102000128SQ20101055645
公开日2011年4月6日 申请日期2010年11月24日 优先权日2010年11月24日
发明者周薇, 张克勤, 李国红 申请人:云南大学