专利名称：一种通过微生物转化黄芪总皂苷制备黄芪甲苷的方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物转化制备黄芪甲苷的方法，尤其是一种利用含有去乙酰酶和糖苷酶的微生物水解黄芪总皂苷中的乙酰基和糖基，以提高黄芪甲苷含量的微生物转化黄芪总皂苷制备黄芪甲苷的方法。
背景技术：
黄芪(Radix Astragali)是常用中药之一，是豆科植物膜荚黄芪Asira^a^Asmembranaceus (Fischer) Bunge 禾口蒙古黄membranaceus (Fisch. ) Bunge var.mongholicus (Bunge)P. K. Hsiao 的干燥f艮。黄芪甲苷(Astragalosides IV, ASI)是从黄芪中分离得到的一种具有多种药理活性的皂苷类化合物，为黄芪制剂质量鉴定的指标成分。研究显示了黄芪甲苷在心血管、免疫、神经、消化、泌尿、循环和内分泌系统等均具有广泛的药理作用，据报道，黄芪甲苷能减轻脑缺血再灌注引起的血脑屏障渗透性增加；对缺血性脑损伤具有保护作用；通过调节癌基因的表达发挥抗癌活性；对糖尿病小鼠具有降血糖作用；具有强的抗乙肝病毒活性；能有效的抑制或逆转PS诱导的小鼠模型的肝纤维化；其中药制剂被开发为心肌保护剂用于冠心病心绞痛的治疗。但实践显示，黄芪甲苷在黄芪中含量极低，并且受产地和季节影响较大，一般约为0. 04%，提取分离困难。黄芪总皂苷(Astragalosides，AST)是黄芪的主要有效成分，占黄芪干重的2_3%。AST为一系列环阿尔庭烷型三萜苷，其化学结构如下图
权利要求
1.一种通过微生物转化黄芪总皂苷制备黄芪甲苷的方法，其特征在于，其包括步骤将微生物菌种制成菌悬液或孢子悬浮液，接种于种子培养基中J8°C、220 rpm培养24^48 h即得种子液，再将种子液接种于发酵培养基中，28°C、220 rpm培养M、8 h，投入黄芪总皂苷，相同条件下转化48、6 h，得转化液；转化液通过有机溶剂萃取和大孔树脂分离纯化得到黄芪甲苷纯品。
2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的黄芪总皂苷，其成分包括如下全部或部分黄芪皂苷单体astragaloside I、II、VI、VL isoastragaloside I、II，acetyIastragaloside I，agroastragaloside III、IY禾口 / 5 Cycloglobiceposide A0
3.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的微生物选自细菌、霉菌或酵母菌。
4.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的微生物是伞枝犁头霉(Absidiacorymbifera)ο
5.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的微生物转化黄芪甲苷是通过含有去乙酰酶和糖苷酶的微生物水解黄芪总皂苷中的乙酰基和糖基，提高黄芪甲苷含量。
6.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的转化液，通过有机溶剂萃取和大孔树脂分离纯化黄芪甲苷，或先采用乙醇浸泡，再用正丁醇提取，所得浸膏再采用DlOl大孔树脂分离纯化，经乙酸乙酯萃取后得到黄芪甲苷纯品。
7.黄芪甲苷注射液，其特征在于，由权利要求1制得的黄芪甲苷1g、乙醇200 mL、丙二醇200 mL、葡萄糖100 g、补足注射用水至1000 m制成L。
8.权利要求7的黄芪甲苷注射液在制备治疗心血管疾病、脑血管疾病、抗癌、抗病毒或糖尿病药物中的用途。
9.按权利要求8所述的用途，其特征在于，所述的心血管疾病是病毒性心肌炎。
全文摘要
本发明公开了一种利用微生物转化黄芪总皂苷制备黄芪甲苷的方法，其包括步骤将细菌、霉菌和酵母菌制成菌悬液或孢子悬浮液，接种于种子培养基中制成种子液，再将种子液接种于发酵培养基中培养，生长好后投入黄芪总皂苷进行转化，TLC扫描分析其他黄芪皂苷转化为黄芪甲苷，使黄芪甲苷的量提高3倍以上，转化液通过有机溶剂萃取和大孔树脂分离纯化得到黄芪甲苷纯品。本发明方法能克服化学法水解黄芪总皂苷存在的对皂苷破坏达、污染严重、目的性差等缺点，以及酶法水解黄芪总皂苷过程中酶不稳定性问题。具有无污染、专一性强、转化率高的优点，制备的黄芪甲苷纯度可达99.9%以上。
文档编号A61P7/04GK102559828SQ20101061526
公开日2012年7月11日 申请日期2010年12月30日 优先权日2010年12月30日
发明者冯美卿, 刘晓会, 史训龙, 叶丽, 周珮, 李继杨, 鞠佃文 申请人:复旦大学