一种六月青木脂素苷的提取、分离方法
【专利摘要】本发明公开了一种六月青木脂素苷(6R，7S，8S)-7α-[(β-glucopyranosyl)oxy]lyoniresinol的提取、分离方法。该方法以六月青为原料，经乙醇或水加热回流提取，浓缩；浓缩液分别用乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，将相同溶剂的萃取液合并，浓缩；取乙酸乙酯萃取液用MCI脱色后，用不同比例的三氯甲烷-甲醇，在开放硅胶柱的条件下洗脱，合并成分相同的洗脱液并浓缩，浓缩液用RP-18进行反相柱层析后，再用制备HPLC进行分离纯化得到化合物六月青木脂素苷。本发明的优点：该方法快速、简便，六月青木脂素苷纯度高，成本低。
【专利说明】-种六月青木脂素苷的提取、分离方法
[0001] 本发明属一种提取、分离、制备方法，具体是一种六月青木脂素苷的提取、分离方 法。
【背景技术】
[0002] 六月青是系爵床科（Acanthaceae)植物肖笼鸡（顶头马蓝）Taraphochlamys affinis (Griff) Bremekhu (Strobilanthes affinis (Griff) Y. C. Tang)的干燥地上部分。产自 广西、云南、贵州和湖南。生于山坡草地或灌木丛中。越南至印度东北部也有分布。
[0003] 顶头马蓝为草本，高达60cm。茎基部多膝曲，多分枝，嫩茎具白色糙毛。叶对生； 具柄；叶片卵形，长3-8cm，先端尖，两面疏具糙毛，边缘有钝齿。穗状花序圆柱状，顶生，长 3-6cm ;荀片覆瓦状排列，宽倒卵形至卵形，长约7mm ;小荀片稍短于苞片，线形；花萼裂片5， 线形，三者均具腺毛和长睫毛；花冠淡紫色，长约2. 5cm，裂片5,略作二唇形；雄蕊二强，伸 出花冠之外，2短雄蕊之间有退化雄蕊残迹，花丝基部有膜相连，膜的两侧边缘具柔毛。蒴果 长约7mm，有微毛。种子4颗。
[0004] 《本草拾遗》记载，该药能活血，凉血，疏肝泻湿，消肿止痛，主要用于急慢性肝炎， 黄疸、流行性腮腺炎、肾性水肿、血尿及高血压等。由六月青、白花蛇舌草、桅子花根等组成 的复方六月青（CLYQ，又称复方六月雪），是根据长时期的临床观察而拟定的治疗急慢性乙 型肝炎的验方，民间常用于治疗急性黄疸性肝炎的湿热黄疸等证。
[0005] 六月青化学成分预试验结果表明：六月青中含有皂苷、强心苷类、内酯类、香豆素 类、酚类、有机酸、氨基酸、多肽、蛋白质、糖和苷类和鞣质类成分。
[0006] 六月青的乙醇提取物、醇提物的皂苷、水提取物的多糖以及醇提液氯仿部位、乙酸 乙酯、正丁醇萃取液等部位具有明显的保肝和抗纤维化的作用。六月青皂苷实验结果表明： 连续给药4周后，六月青皂苷高、中剂量组血清AST含量均低于模型组；各给药组血清ALT 含量均低于模型组，与模型组比较差异有统计学意义（P < 〇. 01和P < 〇. 05);并且可显著 升高肝纤维化大鼠血清SOD及GSH-Px活力，与模型组比较差异有统计学意义（P < 0. 01和 P < 0. 05)。与模型对照组相比较六月青皂苷高、中、低剂量组均可显著降低肝纤维化大鼠 肝组织中Hyp和MDA含量，具有统计学意义（P < 0. 01和P < 0. 05)。本实验研究表明，六 月青皂苷可有效地保护CCl4所致的大鼠肝细胞的损害，并对大鼠肝纤维化具有较好的逆转 作用。其机制可能是通过清除氧自由基，抑制肝脏脂质过氧化反应，从而稳定肝细胞膜，减 轻细胞损伤发挥作用，从而达到对肝纤维化的保护和逆转的效果。
[0007] 六月青多糖实验结果表明，与正常对照组比较，CCl4模型组小鼠肝脏系数、脾脏系 数明显增加（P<〇. 05)，各给药组均能降低肝脏、脾脏系数，并且呈良好的剂量关系。对于 CCl4所致急性肝损伤小鼠，六月青多糖各剂量均能显著降低血清ALT、AST和AKP活性（P <0.05或P <0.01)，提高Alb含量和T-AOC能力（P< 0.05或P <0.01);其中高、中剂 量组作用最明显（P < 〇. 01)。经由CCl4诱导肝损伤后，模型组肝组织中的MDA含量显著升 高（P < 0. 01)，SOD活性降低。六月青多糖各剂量均能降低MDA含量，提高SOD活性，其中 以六月青多糖高剂量组作用最明显（P < 〇. 01)。其机制可能为提高机体总抗氧化能力和提 高SOD酶活性，抑制脂质过氧化反应。
[0008] 以上研究说明六月青提取物具有保肝和抗肝纤维化的功效。目前，六月青的化学 成分研究报导较少。
【发明内容】
[0009] 为了进一步研究六月青内在化学成分的类型、性质及相关的提取、分离技术工艺， 本发明提供一种六月青木脂素苷的提取、分离方法。
[0010] 本发明的技术方案是：
[0011] 一种六月青木脂素苷（6R，7S，8S) _7a_[ ( 0 -glucopyranosyl) oxy] Iyoniresinol 的提取、分离方法。本方法以爵床科（Acanthaceae)植物肖笼鸡（顶头马蓝） Taraphochlamys affinis (Griff) Bremekhu (Strobilanthes affinis (Griff) Y. C. Tang)的干 燥地上部分六月青为原料，经一定浓度乙醇或水提取，合并提取液，浓缩。浓缩液分别用乙 酸乙酯和正丁醇依次萃取，将相同溶剂的萃取液合并，分别浓缩；取乙酸乙酯部分用MCI脱 色后，用3?5倍量不同比例的三氯甲烷-甲醇溶液在开放硅胶柱及室温条件下洗脱，合并 成分相同的洗脱液、浓缩；用RP-18进行反相柱层析后，再以制备HPLC进行分离纯化得到一 个化合物（6R，7S，8S)-7a_[(0 _glucopyranosyl)oxy] Iyoniresinol。具体操作步骤如下：
[0012] 1)将六月青粉碎成粗粉或最粗粉，加6?9倍量的50?80%乙醇，浸泡0. 5?2 小时，常压下直接加热回流提取，提取1?3次，滤过，合并提取液，于50?80°C减压回收乙 醇。
[0013] 2)或将六月青粉碎成粗粉或最粗粉，加6?9倍量的水，浸泡0. 5?2小时，常压 下直接加热回流提取，同法提取1?3次，滤过，合并提取液，浓缩。
[0014] 3)分别将步骤1)、步骤2)浓缩液分别用1?4倍量的乙酸乙酯和正丁醇在室温 条件下，依次萃取1?3次；在室温条件下，将相同溶剂的萃取液分别合并、浓缩。取乙酸乙 酯萃取液用MCI脱色后，用3?5倍量不同比例的三氯甲烷-甲醇溶液在开放硅胶柱及室 温条件下洗脱，合并成分相同的洗脱液、浓缩；用RP-18进行反相柱层析后，再以制备HPLC 进行分离纯化得到一个化合物（6R，7S，8S) _7a_[ ( 0 -glucopyranosyl) oxy] lyoniresinol， 其分子式为C28H38O13，结构式如下：
[0015]
【权利要求】
1. 一种六月青木脂素苷（6R，7S，8S) _7a_[ ( 0-glucopyranosyl) oxy] lyoniresinol 的提取、分离方法。其特征是：以爵床科（Acanthaceae)植物肖笼鸡（顶头马蓝） Taraphochlamys affinis (Griff) Bremekhu (Strobilanthes affinis (Griff) Y. C. Tang)的干 燥地上部分六月青为原料，经一定浓度乙醇或水提取，合并提取液，浓缩。浓缩液分别用乙 酸乙酯和正丁醇依次萃取，将相同溶剂的萃取液合并，分别浓缩；取乙酸乙酯部分用MCI脱 色后，用开放硅胶柱、RP-18反相柱层析以及制备HPLC进行分离纯化得到一个化合物（6R， 7S，8S)-7a_[(0-glucopyranosyl)oxy]lyoniresinol。具体操作步骤如下： 1) 将六月青粉碎成粗粉，加6?9倍量的50?80%乙醇，浸泡0. 5?2小时，常压下 直接加热回流提取，提取1?3次，滤过，合并提取液，于50?80°C减压回收乙醇。 2) 或将六月青粉碎成粗粉，加6?9倍量的水，浸泡0. 5?2小时，常压下直接加热回 流提取，同法提取1?3次，滤过，合并提取液，浓缩。 3) 分别将步骤1)、步骤2)浓缩液分别用1?4倍量的乙酸乙酯和正丁醇在室温条件 下，依次萃取1?3次；在室温条件下，将相同溶剂的萃取液分别合并、浓缩。取乙酸乙酯萃 取液用3?5倍量不同比例的三氯甲烷-甲醇溶液在开放硅胶柱及室温条件下洗脱，合并 成分相同的洗脱液、浓缩；用RP-18进行反相柱层析后，再以制备HPLC进行分离纯化得到一 个化合物（6R，7S，8S) _7a_ [ ( 0 -glucopyranosyl) oxy] lyoniresinol。
【文档编号】C07H15/18GK104356180SQ201310156679
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2013年4月14日 优先权日:2013年4月14日
【发明者】黄仁彬, 周先丽, 焦杨, 梁韬, 郭又嘉, 邱少云, 左巧云, 农志欢 申请人:广西医科大学