专利名称：抗-Siglec-15抗体的制作方法
技术领域：
本发明涉及可用作骨代谢异常的治疗剂和/或预防剂的物质以及治疗和/或预防骨代谢异常的方法。
背景技术：
已知骨骼为动态性器官，其通过重复形成和吸收，进行持续重建，从而改变其本身的形态并维持血钙水平。健康的骨骼维持由成骨细胞进行的骨形成和由破骨细胞进行的骨吸收之间的平衡关系，从而骨量保持恒定。然而，当骨形成和骨吸收之间的平衡被破坏时，则产生诸如骨质疏松症等骨代谢异常(W0 07/093042和Endocrinological Review, (1992) 13，第 66-80 页)。作为调节骨代谢的因子，报道了很多全身性激素以及局部性细胞因子，且这些因子互相合作以形成和维持骨(W0 07/093042和Endocrinological Review, (1996) 17，第 308-332页)。作为因老龄化导致的骨组织的变化，骨质疏松症的发病众所周知，但是其发病机理包含各种因素，如性激素的分泌降低以及该激素受体异常、骨局部细胞因子表达变动、老化基因的表达、破骨细胞或成骨细胞的分化衰退或功能不全，因此，难以将它理解为单纯的年龄相关的生理现象。原发性骨质疏松症主要分为由雌激素分泌降低导致的绝经后骨质疏松症和由老龄化导致的老年性骨质疏松症，为了阐明其发病机理和开发针对它的治疗剂，在骨形成和骨吸收的调节机制方面的基础研究的进展很重要。破骨细胞是源自造血干细胞的多核细胞，通过在破骨细胞粘附的骨表面上释放氯离子和氢离子，破骨细胞使骨表面与破骨细胞之间的间隙成为酸性，并且还分泌作为酸性蛋白酶的组织蛋白酶K 等(American Journal of Physiology, (1991) 260, C1315-C1324)。这引发磷酸钙的降解、酸性蛋白酶的活化以及骨基质蛋白的降解，导致骨吸收。业已发现破骨细胞前体细胞通过存在于骨表面上的成骨细胞/基质细胞的细胞膜上表达的RNAKL (NF-κ B配体的受体活化因子)的刺激，分化为破骨细胞(Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America, (1998)95， 第3597-3602页，和Cell, (1998) 93，第165-176页)。已发现RNAKL是成骨细胞/基质细胞所产生的膜蛋白，其表达受骨吸收因子的调节，RNAKL诱导破骨细胞前体细胞向成熟的多核破骨细胞的分化等(Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America, (1998) 95，第 3597—3602 页，禾口 Journal of Bone and Mineral Research, (199幻23，S222)。此外，已经发现敲除RNAKL的小鼠发生(develop)骨硬化病样疾病，因此，已经证明RNAKL是生理性的破骨细胞分化诱导因子(Nature，(1999) 397，第 315-323 页)。使用二膦酸盐、活性维生素D3、降钙素及其衍生物、激素例如雌二醇、SERM (选择性雌激素受体调节剂)、依普黄酮、维生素K2 (四烯甲萘醌)、PTH和钙制剂等作为治疗骨代谢疾病或缩短治疗时间的药物制剂。但是，这些药物不会总是表现出令人满意的治疗效果，已经需要开发具有更有效的治疗效果的药物。免疫细胞的细胞膜上被多种聚糖(诸如唾液酸化的聚糖)高度覆盖，所述聚糖被各种聚糖结合蛋白识别。结合唾液酸的免疫球蛋白样凝集素(在下文中称为“Siglecs”)为识别并结合唾液酸化的聚糖的I型膜蛋白家族。许多siglecs在免疫细胞的细胞膜上表达，并识别类似地存在于免疫细胞的细胞膜上的唾液酸，调节细胞相互作用或细胞功能，并被认为参与免疫应答(Nature Reviews Immunology, (2007) 7，第 255-266 页)。然而， 也有很多尚未阐明其生理功能的siglec分子。最近报道Siglec-15 (结合唾液酸的免疫球蛋白样凝集素15)为属于Siglecs的分子(参见，例如，非专利文件10)，其与被称为 ⑶33L3 (⑶33分子样3)的分子相同。该分子从鱼类到人类是进化高度保守的，业已发现在人脾和淋巴结的树突细胞和/或巨噬细胞中强表达。此外，使用唾液酸探针的结合测试的结果是已经发现人Siglec-15结合Neu5Ac α 2_6GalNAc，小鼠Siglec-15进一步结合 Neu5Ac α 2_3Gal β l_4Glc 等(参见，例如，Glycobiology, (2007) 17，第 838-846 页)。 直至最近，还未揭示Siglec-15的生理作用，但业已报道，随着破骨细胞的分化和成熟， Siglec-15的表达增加，通过用RNA干扰使Siglec-15的表达下降，可以抑制破骨细胞的分化(参见，例如，WO 07/093042)。此外，在WO 09/48072 (2009年4月16日公开)中已经首次披露了抗-Siglec-15抗体对破骨细胞分化的作用，但是，尚未阐明可以施用给人类的抗体序列。
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的目的在于提供在各种形式的骨代谢异常(可见为骨质疏松症、类风湿性关节炎、癌的骨转移等)中特异表达的基因；抑制破骨细胞的分化和成熟及其活性的物质；以及骨代谢异常的治疗剂和/或预防剂。解决问题的手段
为了找到对骨代谢异常具有治疗和/或预防效果的物质，本发明人以阐明破骨细胞的分化、成熟和活化机制为目标进行了研究。结果本发明人发现随着破骨细胞的分化和成熟， Siglec-15基因的表达增加，还发现特异性地结合Siglec-15的抗体可以抑制破骨细胞的分化。此外，发明人人源化了得到的大鼠抗-小鼠Siglec-15抗体从而完成了本发明。即，本发明包括以下发明。(1) 一种抗体或所述抗体的功能片段，所述抗体结合包含由SEQ ID NO: 2表示的氨基酸序列的氨基酸残基39-165的多肽，并抑制破骨细胞形成和/或破骨性骨吸收。(2)根据(1)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于
重链序列含有具有⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3的可变区，且所述⑶RHl包含由SEQ ID NO: 44表示的氨基酸序列，所述⑶RH2包含由SEQ ID NO: 45和SEQ ID N0: 97表示的任一个氨基酸序列，所述⑶RH3包含由SEQ ID N0: 46表示的氨基酸序列；且
轻链序列含有具有⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3的可变区，且所述⑶RLl包含由SEQ ID N0: 47表示的氨基酸序列，所述⑶RL2包含由SEQ ID NO 48表示的氨基酸序列，且所述⑶RL3 包含由SEQ ID N0: 49表示的氨基酸序列。(3)根据(2)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有包含由SEQID NO: 41表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140的重链可变区序列和包含由SEQ ID NO: 43表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-132的轻链可变区序列。(4)根据(1)至(3)中任一项所述的抗体功能片段，其选自Fab、F(ab，)2, Fab' 禾口 Fv0(5)根据⑴至(3)中任一项所述的抗体，其特征在于是scFv。(6)根据(1)至中任一项所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于所述抗体是嵌合抗体。(7)根据(6)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID NO: 41表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID NO: 43表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-237。(8)根据(1)至(4)和(6)中任一项所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于所述抗体是人源化的。(9)根据(7)或⑶所述的抗体，其中所述重链具有人免疫球蛋白G2重链的恒定区，且所述轻链具有人免疫球蛋白κ轻链的恒定区。(10) 一种抑制破骨细胞形成和/或破骨性骨吸收的抗体或所述抗体的功能片段，其中所述抗体含有
(a)选自下述氨基酸序列的重链可变区
al) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 51表示的氨基酸序列的氨基酸残基 20-140 ；
a2) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 53表示的氨基酸序列的氨基酸残基 20-140 ；
a3) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 55表示的氨基酸序列的氨基酸残基 20-140 ；
a4) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 57表示的氨基酸序列的氨基酸残基 20-140 ；
a5) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 59表示的氨基酸序列的氨基酸残基 20-140 ；
a6) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基 20-140 ；
a7) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 101表示的氨基酸序列的氨基酸残基
20-140；
a8) 一种氨基酸序列，其与选自al)至a7)的任一个氨基酸序列具有至少95%同源性； a9) 一种氨基酸序列，其与选自al)至a7)的任一个氨基酸序列具有至少99%同源性；
和
alO) 一种氨基酸序列，其包含在选自al)至a7)的任一个氨基酸序列中的一个至几个氨基酸残基的置换、删除或添加；和
(b)选自下述氨基酸序列的轻链可变区
bl) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 61表示的氨基酸序列的氨基酸残基
21-133；b2) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 63表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-133 ；
b3) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 65表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-133 ；
b4) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 67表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-132 ；
b5) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-133 ；
b6) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 71表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-133 ；
b7) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 103表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-133 ；
b8) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 105表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-133 ；
b9) 一种氨基酸序列，其与选自bl)至a8)的任一个氨基酸序列具有至少95%同源性； blO) 一种氨基酸序列，其与选自bl)至b8)的任一个氨基酸序列具有至少99%同源性；和
bll) 一种氨基酸序列，其包含在选自bl)至b8)的任一个氨基酸序列中的一个至几个氨基酸残基的置换、删除或添加。(11)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 51表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 61表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。(12)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 53表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 63表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。(13)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 65表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。(14)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 67表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。
(15)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 57表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。(16)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 59表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 71表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。(17)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。(18)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 101表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。(19)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 103表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。(20)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 105表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。(21)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 51表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 61表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。(22)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 53表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 63表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。(23)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 65表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。
(24)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID NO: 55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID NO: 67表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-237。(25)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID NO: 57表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID NO: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。(26)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID NO: 59表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 71表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。(27)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-466，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。(28)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 101表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-466， 且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。(29)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-466，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 103表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。(30)根据(10)所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-466，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 105表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。(31) 一种药物组合物，其特征在于包含至少一种根据(1)至(30)所述的抗体或所述抗体的功能片段。(32)根据(31)所述的药物组合物，其特征在于是骨代谢异常的治疗剂和/或预防剂。(33) 一种用于治疗和/或预防骨代谢异常的药物组合物，其特征在于包含至少一种根据(1)至(30)所述的抗体或所述抗体的功能片段和至少一个选自下述的成员二膦酸盐、活性维生素D3、降钙素及其衍生物、激素例如雌二醇、SERM (选择性雌激素受体调节剂)、依普黄酮、维生素K2 (四烯甲萘醌)、钙制剂、PTH (甲状旁腺激素)、非甾体类抗炎药、可溶性TNF受体、抗-TNF-α抗体或所述抗体的功能片段、抗-PTHrP (甲状旁腺激素相关蛋白)抗体或所述抗体的功能片段、IL-I受体拮抗剂、抗-IL-6受体抗体或所述抗体的功能片段、抗-RANKL抗体或所述抗体的功能片段以及OCIF (破骨细胞生成抑制因子)。(34)根据(3 或(3 所述的药物组合物，其中所述骨代谢异常选自骨质疏松症、伴随类风湿性关节炎的骨破坏、癌性高钙血症、伴随多发性骨髓瘤或癌的骨转移的骨破坏、巨细胞瘤、骨质减少、牙周炎导致的牙缺失、人工关节周围的骨溶解、慢性骨髓炎中的骨破坏、骨佩吉特病、肾性骨营养不良和成骨不全。(35)根据(34)所述的药物组合物，其特征在于所述骨代谢异常是骨质疏松症、 伴随类风湿性关节炎的骨破坏、或伴随癌的骨转移的骨破坏。(36)根据(3 所述的药物组合物，其特征在于所述骨代谢异常是骨质疏松症。
(37)根据(36)所述的药物组合物，其特征在于所述骨质疏松症是绝经后骨质疏松症、老年性骨质疏松症、由使用诸如类固醇或免疫抑制剂等治疗剂导致的继发性骨质疏松症、或伴随类风湿性关节炎的骨质疏松症。(38) 一种治疗和/或预防骨代谢异常的方法，其特征在于施用至少一种根据(1) 至(30)所述的抗体或所述抗体的功能片段。(39) 一种治疗和/或预防骨代谢异常的方法，其特征在于同时或相继施用至少一种根据(1)至(30)所述的抗体或所述抗体的功能片段和至少一个选自下述的成员二膦酸盐、活性维生素D3、降钙素及其衍生物、激素例如雌二醇、SERM (选择性雌激素受体调节剂)、依普黄酮、维生素K2 (四烯甲萘醌)、钙制剂、PTH (甲状旁腺激素)、非甾体类抗炎药、可溶性TNF受体、抗-TNF-α抗体或所述抗体的功能片段、抗-PTHrP (甲状旁腺激素相关蛋白)抗体或所述抗体的功能片段、IL-I受体拮抗剂、抗-IL-6受体抗体或所述抗体的功能片段、抗-RANKL抗体或所述抗体的功能片段以及OCIF (破骨细胞生成抑制因子)。(40)根据(38)或(39)所述的治疗和/或预防方法，其特征在于所述骨代谢异常是骨质疏松症、伴随类风湿性关节炎的骨破坏、或伴随癌的骨转移的骨破坏。(41)根据00)所述的治疗和/或预防方法，其特征在于所述骨代谢异常是骨质疏松症。(42)根据所述的治疗和/或预防方法，其特征在于所述骨质疏松症是绝经后骨质疏松症、老年性骨质疏松症、由使用诸如类固醇或免疫抑制剂等治疗剂导致的继发性骨质疏松症、或伴随类风湿性关节炎的骨质疏松症。(43) 一种多核苷酸，其编码根据(3)、(7)和(10)至(30)中任一项所述的抗体。(44)根据G3)所述的多核苷酸，其特征在于含有包含由SEQ ID NO: 40表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列，和包含由SEQ ID NO: 42表示的核苷酸序列的核苷酸61-396的核苷酸序列。(45)根据G4)所述的多核苷酸，其特征在于含有包含由SEQ ID NO: 40表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列，和包含由SEQ ID NO: 42表示的核苷酸序列的核苷酸61-711的核苷酸序列。(46)根据03)所述的多核苷酸，其特征在于含有
(a)一种多核苷酸，其选自下述的核苷酸序列al)一种核苷丨酸序列，其包含由SEQ ID NO50表示的核苷酸？序列的核苷酸58--420 ；a2)一种核苷丨酸序列，其包含由SEQ ID NO52表示的核苷酸？序列的核苷酸58--420 ；a3)一种核苷丨酸序列，其包含由SEQ ID NO54表示的核苷酸？序列的核苷酸58--420 ；a4)一种核苷丨酸序列，其包含由SEQ ID NO56表示的核苷酸？序列的核苷酸58--420 ；a5)一种核苷丨酸序列，其包含由SEQ ID NO58表示的核苷酸？序列的核苷酸58--420 ；a6)一种核苷丨酸序列，其包含由SEQ ID NO98表示的核苷酸？序列的核苷酸58--420 ；a7)一种核苷丨酸序列，其包含由SEQ ID NO100表示的核苷丨酸序列的核苷環i58-420a8)多核苷酸的核苷酸序列，所述多核苷醛；在严格条件下与包含选自al)至a7)的任
一个核苷酸序列的互补核苷酸序列的多核苷酸杂交；和
a9) 一种核苷酸序列，其包含在选自al)至a7)的任一个核苷酸序列中的一个至几个氨基酸残基的置换、删除或添加；和(b)一种多核苷酸，其选自下述的核苷酸序列bl)一种核苷 骏序列，其包含由SEQ ID NO60表示的核苷酸？序列的核苷酸.61--399 ；b2)一种核苷 骏序列，其包含由SEQ ID NO62表示的核苷酸？序列的核苷酸.61--399 ；b3)一种核苷 骏序列，其包含由SEQ ID NO64表示的核苷酸？序列的核苷酸.61--399 ；b4)一种核苷 骏序列，其包含由SEQ ID NO66表示的核苷酸？序列的核苷酸.61--396 ；b5)一种核苷 骏序列，其包含由SEQ ID NO68表示的核苷酸？序列的核苷酸.61--399 ；b6)一种核苷 骏序列，其包含由SEQ ID NO70表示的核苷酸？序列的核苷酸.61--399 ；b7)一种核苷 骏序列，其包含由SEQ ID NO102表示的核苷丨酸序列的核苷環,61-399 ；b8)一种核苷 骏序列，其包含由SEQ ID NO104表示的核苷丨酸序列的核苷環_61-399 ；b9)多核苷酸的核苷酸序列，所述多核苷醛；在严格条件下与包含选自bl)至b8)的任
一个核苷酸序列的互补核苷酸序列的多核苷酸杂交；和
blO) 一种核苷酸序列，其包含在选自bl)至b8)的任一个核苷酸序列中的一个至几个核苷酸的置换、删除或添加。(47)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: 50表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID NO: 60表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。(48)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: 52表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID NO: 62表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。(49)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: M表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 64表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。(50)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: M表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 66表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。(51)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 56表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。(52)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 58表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 70表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。(53)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。(54)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 100表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。(55)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: 102表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。(56)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID NO: 104表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。(57)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: 50表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID NO: 60表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。(58)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 52表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 62表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。(59)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: M表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 64表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。(60)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: M表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 66表示的核苷酸序列的核苷酸61-711的核苷酸序列。(61)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 56表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。(62)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 58表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 70表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。(63)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-1398的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。(64)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 100表示的核苷酸序列的核苷酸58-1398的核苷酸序列；和这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。(65)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-1398的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 102表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。(66)根据06)所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-1398的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 104表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。(67) 一种载体，其包含根据至(66)所述的任一种多核苷酸。(68) 一种转化的宿主细胞，其包含根据至(66)所述的任一种多核苷酸。(69) 一种转化的宿主细胞，其包含根据(67)所述的载体。(70) 一种生产根据(3)、(7)和(10)至(30)中任一项所述的抗体的方法，所述方法包括培养根据(68)或(69)所述的宿主细胞，并从得到的培养产物纯化抗体。
发明优点
根据本发明，可以得到骨代谢异常的治疗剂和/或预防剂，其作用机制是抑制破骨细胞的分化和成熟及其骨吸收活性。
图1显示了通过SDS-聚丙烯酰胺电泳和银染色评估用HisTrap HP柱色谱法和 Resource Q柱色谱法纯化的小鼠Siglec-15-His纯度的结果。图2显示了通过SDS-聚丙烯酰胺电泳和使用抗-V5-HRP抗体的蛋白印迹法检测用HisTrap HP柱色谱法和Resource Q柱色谱法纯化的小鼠Siglec-15-His特征的结果。图3显示了通过SDS-聚丙烯酰胺电泳和银染色评估用HiTrap蛋白A柱色谱法纯化的小鼠Siglec-15-Fc纯度的结果。图4显示了通过ELISA法测试大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体结合其上固定有小鼠Siglec-15-Fc的板的结果。符号( )表示#1A1抗体，符号(■)表示#3A1抗体，符号(▲)表示#8A1抗体，符号(X)表示#24A1抗体，符号(·)表示#32A1抗体，符号(〇)表示#34A1抗体，符号(+)表示#39A1抗体，符号(_)表示#40A1抗体，符号(一) 表示#41B1抗体，符号( )表示#61A1抗体，且符号(口)表示对照IgG。图5显示了测试添加大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体(#3A1、#8A1或#32A1) 对小鼠骨髓非贴壁细胞向破骨细胞分化(用RANKL刺激)的影响的结果。此外，图中大鼠对照IgG是图5和6共有的阴性对照。图6显示了测试添加大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体(#34A1、#39A1或 #40A1)对小鼠骨髓非贴壁细胞向破骨细胞分化(用RANKL刺激)的影响的结果。此外，图中兔抗-小鼠Siglec-15多克隆抗体No. 3是图5和6共有的阳性对照。图7显示了通过SDS-聚丙烯酰胺电泳和银染色评价用HisTrap HP柱色谱法和 Resource Q柱色谱法纯化的人Siglec-15-His纯度的结果。图8显示了通过SDS-聚丙烯酰胺电泳评价用蛋白A柱色谱法纯化的人 Siglec-15-Fc纯度的结果。图9显示了通过ELISA法测试大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体结合其上固定有人Siglec-15-Fc的板的结果。符号( )表示#1A1抗体，符号(■)表示#3A1抗体， 符号(▲)表示#8A1抗体，符号(X)表示#24A1抗体，符号(·)表示#32A1抗体，符号 (〇)表示#34A1抗体，符号(+)表示#39A1抗体，符号(_)表示#40A1抗体，符号(一)表示#41B1抗体，符号( )表示#61A1抗体，且符号(口)表示对照IgG。图10显示了通过TRAP染色描绘的通过添加大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体抑制从正常人破骨细胞前体细胞形成巨大破骨细胞的显微照片。图11显示了通过TRAP染色描绘的通过添加大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体(#32A1抗体)抑制从正常人破骨细胞前体细胞形成巨大破骨细胞的显微照片。图12的图显示了通过添加大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体(#32A1抗体)抑制正常人破骨细胞的骨吸收活性(N=6)。图13A的图显示了当将大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体施用给卵巢切除的大鼠4周时，增加腰椎骨矿物质密度的效应；且图13B的图显示了当将大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体施用给卵巢切除的大鼠4周时，减少尿脱氧吡啶啉排泄的效应。图14是通过竞争ELISA显示大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体#32A1结合人 Siglec-15的V-组结构域的图。图15是通过竞争ELISA显示大鼠#32A1抗体及其人嵌合抗体具有基本上相同的对小鼠Siglec-15-Fc的亲和力的图。图16显示了用TRAP酶活性描绘的通过添加大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体(#32A1抗体)及其嵌合抗体抑制小鼠破骨细胞形成的图(N=3)。图17显示了通过TRAP染色描绘的通过添加大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体#32A1的人嵌合抗体抑制从正常人破骨细胞前体细胞形成巨大破骨细胞的显微照片。图18是这样的图，其中使用其上面固定化有小鼠Siglec-15-Fc的板通过ELISA 法证实了 6类人源化的大鼠抗-小鼠Siglec-15抗体以抗体浓度依赖性的方式结合小鼠 Siglec-15 蛋白。图19是这样的图，其中使用其上面固定化有人Siglec-15-Fc的板通过ELISA 法证实了 6类人源化的大鼠抗-小鼠Siglec-15抗体以抗体浓度依赖性的方式结合人 Siglec-15 蛋白。图20显示了通过TRAP染色描绘的通过添加大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体(#32A1抗体)或其嵌合抗体抑制在TNFa刺激下形成小鼠巨大破骨细胞的显微照片。图21显示了用TRAP酶活性描绘的通过添加大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体(#32A1抗体)或其嵌合抗体抑制在TNF α刺激下形成小鼠破骨细胞的图(Ν=3)。图22显示了用TRAP酶活性描绘的通过添加大鼠抗-小鼠Siglec-15单克隆抗体(#8A1或#32A1抗体)抑制大鼠破骨细胞形成的图(N=3)。图23显示了克隆的大鼠#32A1重链的核苷酸序列及其氨基酸序列。
图24显示了克隆的大鼠#32A1轻链的核苷酸序列及其氨基酸序列。
图25显示了#32A1人嵌合抗体重链的核苷酸序列及其氨基酸序列。
图26显示了#32A1人嵌合抗体轻链的核苷酸序列及其氨基酸序列。
图27显示了h#32Al-TlH 的核苷·睃序列及其氨基酉I序列。
图28显示了h#32Al-T2H 的核苷·睃序列及其氨基酉I序列。
图29显示了h#32Al-T3H 的核苷·睃序列及其氨基酉I序列。
图30显示了h#32Al-T5H 的核苷!睃序列及其氨基酉I序列。
图31显示了h#32Al-T6H 的核苷!睃序列及其氨基酉I序列。
图32显示了h#32Al-TlL 的核苷·睃序列及其氨基酉I序列。
图33显示了h#32Al-T2L 的核苷·睃序列及其氨基酉I序列。
图34显示了h#32Al-T3L 的核苷·睃序列及其氨基酉I序列。
图35显示了h#32Al-T4L 的核苷!睃序列及其氨基酉I序列。
图36显示了h#32Al-T5L 的核苷·睃序列及其氨基酉I序列。
图37显示了h#32Al-T6L 的核苷!睃序列及其氨基酉I序列。
图38显示了h#32Al-T7H、h#32Al_T8H 和 h#32Al_T9H 的氨基I酸序列。
图39显示了h#32Al-T10H、h#32Al_Tl IH 和 h#32Al_T12H 的氨基酸序列。
图40显示了 h#32Al-T7L、h#32Al-T8L、h#32Al-T9L、h#32Al-T10L 和 h#32Al的氨基酸序列。图 41 显示了 h#32Al-T12L、h#32Al-T13L、h#32Al-T14L、h#32Al-T15L 和 h#32Al-T16L的氨基酸序列。图 42 显示了 h#32Al-T17L、h#32Al-T18L、h#32Al-T19L、h#32Al-T20L 和 h#32Al-T21L的氨基酸序列。图 43 显示了 h#32Al-T22L、h#32Al-T23L、h#32Al-T24L 和 h#32Al_T25L 的氨基酸序列。图44显示了用TRAP酶活性描绘的通过添加人源化的大鼠抗-小鼠Siglec-15 抗体(h#32Al-Tl、h#32Al-T2或h#32Al-T;3)抑制小鼠破骨细胞形成的图。此外，图中大鼠 #32A1抗体是图44和45共有的阳性对照。图45显示了用TRAP酶活性描绘的通过添加人源化的大鼠抗-小鼠Siglec-15抗体(h#32Al-T4、h#32Al-T5或h#32Al-T6)抑制小鼠破骨细胞形成的图。图46显示了用TRAP酶活性描绘的通过添加人源化的大鼠抗-小鼠Siglec-15抗体(h#32Al-Hl-l/L5或h#32Al-H5/L5)抑制小鼠破骨细胞形成的图。此外，图中大鼠#32A1 抗体和#32A1人嵌合抗体是图46和47共有的阳性对照。图47显示了用TRAP酶活性描绘的通过添加人源化的大鼠抗-小鼠Siglec-15抗体(h#32Al-Hl-l/L2-16或h#32Al-H-l/L2-15)抑制小鼠破骨细胞形成的图。图48显示的图描绘了通过添加人源化的大鼠抗-小鼠Siglec-15抗体 (h#32Al-Tl、h#32Al-T2、h#32Al-T3、h#32Al-T4、h#32Al-T5 或 h#32Al_T6)抑制正常人破骨细胞的骨吸收活性。此外，图中大鼠#32A1抗体和#32A1人嵌合抗体是图48和49共有的阳性对照。图49显示的图描绘了通过添加人源化的大鼠抗-小鼠Siglec-15抗体 (h#32Al-Hl-l/L5、h#32Al-H5/L5、h#32Al-Hl-l/L2-16 或 h#32Al-Hl-l/L12_5)抑制正常人破骨细胞的骨吸收活性。图50是为了测定h#32Al_H5/L5抗体的热稳定性而得到的热分析图。图51是为了测定h#32Al-Hl_l/L5抗体的热稳定性而得到的热分析图。图52是为了测定h#32Al-Hl-l/L12_5抗体的热稳定性而得到的热分析图。图53是为了测定h#32Al-Hl-l/L2_16抗体的热稳定性而得到的热分析图。图M显示了 h#32Al-Hl_l的核苷酸序列及其氨基酸序列。图55显示了 h#32Al_H5的核苷酸序列及其氨基酸序列。图56显示了 h#32Al-L2_15的核苷酸序列及其氨基酸序列。图57显示了 h#32Al-L2_16的核苷酸序列及其氨基酸序列。
具体实施例方式本文使用的术语“基因”不仅包括DNA，还包括mRNA、cDNA以及cRNA。本文使用的术语“多核苷酸”用于与核酸相同的含义，并且还包括DNA、RNA、探针、 寡核苷酸以及引物。 本文使用的术语“多肽”和“蛋白，，无区别使用。
本文使用的术语“RNA级分”是指包含RNA的级分。
本文使用的术语“细胞”也包括动物个体内的细胞和培养的细胞。本文使用的术语“Siglec-15”以与“Siglec-15蛋白”相同的含义使用。本文使用的术语“破骨细胞形成”以与“破骨细胞分化”或“破骨细胞成熟”相同的含义使用。本文使用的术语“抗体功能片段”是指具有抗原结合活性的抗体的一部分片段，包括Fab、F(ab’)2、Fv、scFv、双特异抗体、线性抗体、从抗体片段形成的多特异性抗体等。该术语也包括Fab’，其为在还原条件下处理F(ab’)2得到的抗体的可变区的单价片段。但是，该术语不限于这些分子，只要所述片段具有与抗原的结合亲和力。此外，这些功能片段不仅包括用适当的酶处理抗体蛋白的全长分子得到的片段，还包括使用遗传修饰的抗体基因在适当宿主细胞中产生的蛋白。本文使用的术语“表位”是指特定的抗-Siglec-15抗体结合的Siglec-15的部分肽或部分三级结构。通过诸如免疫测定法等本领域技术人员熟知的方法，可以确定作为 Siglec-15的部分肽的上述表位。但是，例如，可以采用以下的方法。制备Siglec-15的各种部分结构。在制备部分结构时，可使用已知的寡肽合成技术。例如，使用本领域技术人员已知的基因重组技术，制备从Siglec-15的C末端或N末端顺次缩短所得到的具有适当的缩短长度的一系列多肽。此后，检测这些多肽的抗体的反应性，并粗略确定识别部位。然后， 合成长度更短的肽，并检测与这些肽的反应性，由此可确定表位。此外，通过χ-射线结构分析描述邻近抗体的Siglec-15的氨基酸残基，可以确定作为Siglec-15的部分三级结构的表位(其结合特定的Siglec-15抗体)。如果第二抗-Siglec-15抗体结合第一抗-Siglec-15 抗体所结合的部分肽或部分三级结构，可以确定第一抗体与第二抗体具有相同的表位。此外，通过证实第二抗-Siglec-15抗体与第一抗-Siglec-15抗体竞争结合Siglec-15 (即第二抗体抑制Siglec-15和第一抗体之间的结合)，可以确定第一抗体和第二抗体具有相同的表位，即使尚未确定特定表位的序列或结构。此外，当第一抗体和第二抗体结合相同的表位，且第一抗体具有诸如抗原中和活性等特殊效应时，可以预期第二抗体具有相同的活性。已知抗体分子的每个重链和轻链具有3个互补性决定区(⑶R)。互补性决定区也称作超变结构域，且存在于抗体的每个重链和轻链的可变区中。它是在它的一级结构中具有非常高的可变性的位点，且在每个重和轻多肽链的一级结构中存在3个单独的CDR。在本说明书中，关于抗体的互补性决定区，重链的互补性决定区由来自重链氨基酸序列的氨基端侧的CDRH1、CDRH2和CDRH3表示，轻链的互补性决定区由来自轻链氨基酸序列的氨基端侧的⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3表示。这些位点在三级结构中彼此邻近，决定了抗体结合的抗原的特异性。本文使用的短语“在严格条件下进行杂交”是指在可实现鉴定的条件下进行杂交， 其中在市售的的杂交溶液ExpressHyb杂交溶液(由Clontech，he.生产)中，在68 °〇进行杂交，或者使用其上固定有DNA的滤器，在0.7-1. OM NaCl存在下，在68°C进行杂交，然后使用0. 1-2X的SSC溶液(1 χ SSC溶液由150 mM NaCl和15 mM柠檬酸钠组成)在68°C 进行洗涤，或在与其等同的条件下杂交。1. Siglec-15
本发明人已经发现Siglec-15基因在巨细胞瘤中特异性表达，还已经发现当单核细胞-衍生的细胞系分化为破骨细胞时，Siglec-15基因的表达水平增加。
关于在本发明中所使用的Siglec-15，Siglec-15直接地从人、非人哺乳动物(例如豚鼠、大鼠、小鼠、兔、猪、绵羊、牛或猴)或鸡的单核细胞或骨髓细胞纯化和使用，或者制备上述细胞的细胞膜级分和使用。此外，通过体外合成Siglec-15或通过基因工程使其在宿主细胞内产生，可以得到Siglec-15。具体地，在基因工程生产中，将Siglec-15 cDNA整合到能表达Siglec-15 cDNA的载体中，然后在含有转录和翻译所需的酶、底物和能量物质的溶液中合成Siglec-15，或者转化另一种原核或真核宿主细胞，以表达Siglec-15，由此可得到该蛋白。人Siglec-15 cDNA的核苷酸序列以登录号NM_213602登记在GenBank中，并表示为序列表的SEQ ID NO: 1，其氨基酸序列以序列表的SEQ ID N0:2表示。小鼠Siglec-15 cDNA的核苷酸序列以登录号XM_884636登记在GenBank中，并表示为序列表的SEQ ID N0:3，其氨基酸序列以序列表的SEQ ID N0:4表示。已经去除了信号序列的成熟的人 Siglec-15对应着包含由SEQ ID NO: 2表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-3 的氨基酸序列。此外，已经去除了信号序列的小鼠Siglec-15对应着包含由SEQ ID NO: 4表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-341的氨基酸序列。此外，Siglec-15有时被称为⑶33抗原-样 3、⑶33分子-样3、⑶33-样3或⑶33L3，这些都表示相同的分子。可以如下得到Siglec-15 cDNA 通过例如所谓的PCR方法，其中使用表达 Siglec-15 cDNA的cDNA文库作为模板，并使用特异性扩增Siglec-15 cDNA的引物，进行聚合酶链式反应(在下文中称作“PCR”)(Saiki, R. K.,等人，kience，(1988) 239， 487-49)。此外，具有下述特征的多核苷酸也视作Siglec-15 cDNA 它在严格条件下与包含至少一个选自序列表中的SEQ ID NO: 1和3所表示的核苷酸序列的互补核苷酸序列的多核苷酸杂交，并且编码具有与Siglec-15相当的生物活性的蛋白。此外，具有下述特征的多核苷酸也视作Siglec-15 cDNA 它是从人或小鼠Siglec-15基因座转录的剪接变体，或与其互补序列在严格条件下杂交，且编码具有与Siglec-15相当的生物活性的蛋白。此外，具有下述特征的蛋白也视作Siglec-15 它包含这样的氨基酸序列，所述序列包含在选自序列表的SEQ ID NO: 2和4表示的氨基酸序列的至少一个氨基酸序列中的一个或几个氨基酸的置换、删除或添加，或通过从这些序列中的任一个去除信号序列所得到的氨基酸序列，且具有与Siglec-15相当的生物活性。此外，具有下述特征的蛋白也视作Siglec-15 它包含由从人或小鼠Siglec-15基因座转录的剪接变体编码的氨基酸序列， 或包含在其中的一个或几个氨基酸的置换、删除或添加的氨基酸序列，且具有与Siglec-15 相当的生物活性。2.骨代谢异常的检测
对来自各种人骨组织的测试样品组中的Siglec-15基因表达水平的分析显示该基因在巨细胞瘤(GCT)中的表达水平显著增加，所述巨细胞瘤是破骨细胞样多核巨大细胞大量出现的骨肿瘤，且其特征是在临床上发现骨溶解性的骨破坏(Bullough等，Atlas of Orthopedic Pathology 第 2 版， 第 17. 6-17. 8 页，Lippincott Williams & Wilkins Publishers (1992))。还发现，当单核细胞-衍生的细胞系分化为破骨细胞时，Siglec-15基因的表达水平增加。
因此，认为Siglec-15与诸如GCT等其中骨吸收增加的人病理学有关。换而言之， 通过测量Siglec-15基因和/或Siglec-15在各细胞和/或各组织中的表达水平，能够确定伴随Siglec-15的过表达的骨代谢异常状态。本文使用的骨代谢异常是指特征在于净骨流失的障碍，其具体实例包括但不限于骨质疏松症(绝经后骨质疏松症、老年性骨质疏松症、由使用诸如类固醇或免疫抑制剂等治疗剂导致的继发性骨质疏松症、或伴随类风湿性关节炎的骨质疏松症)、伴随类风湿性关节炎的骨破坏、癌性高钙血症、伴随多发性骨髓瘤或癌的骨转移的骨破坏、巨细胞瘤、骨质减少、牙周炎导致的牙缺失、人工关节周围的骨溶解、慢性骨髓炎中的骨破坏、骨佩吉特病、肾性骨营养不良和成骨不全。在本发明中，用于检测Siglec-15基因和/或Siglec-15的表达水平的“测试样品”是指从测试受试者得到的下述组织的样品骨髓、骨、前列腺、精巢、阴茎、膀胱、肾脏、 口腔、咽、唇、舌、牙龈、鼻咽、食道、胃、小肠、大肠、结肠、肝脏、胆囊、胰脏、鼻、肺、软组织、皮肤、乳房、子宫、卵巢、脑、甲状腺、淋巴结、肌肉、脂肪组织等，或从测试受试者得到的血液、 体液、排泄物等，临床样本等，但是，在本发明中，更优选血液或骨髓。关于已知与破骨细胞分化有关的RANKL，已经生产了敲除的小鼠，并已经分析了当已经丧失RANKL功能时的表型 Woung-Yun Kong,等人，Nature (1999) 397，第315-323 页)。通过以与上述相同的方式生产缺失Siglec-15的敲除的小鼠，可以分析当已经丧失 Siglec-15功能时的表型。3.抗-Siglec-15抗体的制备
可以如下获得本发明的抗Siglec-15的抗体根据常规的方法，用Siglec-15或选自 Siglec-15的氨基酸序列的任意多肽免疫动物，并采集和纯化体内产生的抗体。用作抗原的Siglec-15的生物物种不限于人，也可以用从诸如小鼠或大鼠等除人以外的动物得到的Siglec-15免疫动物。在这种情况下，通过测试抗体与得到的异源Siglec-15和人 Siglec-15的结合之间的交叉反应性，可以选择可适用于人疾病的抗体。此外，根据已知的方法(例如，Kohler和 Milstein, Nature, (1975) 256，第 495-497 页；Kennet, R.编，Monoclonal Antibody,第 365-367 页，Prenum Press, N. Y. (1980))，通过使生产抗Siglec-15抗体的抗体生产细胞与骨髓瘤细胞融合，建立杂交瘤，可以得到单克隆抗体。此外，可以如下得到要用作抗原的Siglec-15 通过基因工程，使宿主细胞生产 Siglec-15 基因。具体而言，制备能表达Siglec-15基因的载体，将得到的载体转染进宿主细胞中， 以表达所述基因，然后纯化表达的Siglec-15。在下文中具体描述了获得抗Siglec-15抗体的方法。(1)抗原的制备
用于制备抗-Siglec-15抗体的抗原的实例包括Siglec-15，包含含有Siglec-15的至少6个连续氨基酸的部分氨基酸序列的多肽，以及通过向其附加给定的氨基酸序列或载体而得到的衍生物。Siglec-15可从人肿瘤组织或肿瘤细胞中直接纯化，并使用。此外，通过体外合成或通过基因工程造成宿主细胞生产Siglec-15，可以得到Siglec-15。关于基因工程，具体地，将Siglec-15 cDNA整合到能表达Siglec-15 cDNA的载体中，然后在含有转录和翻译所需的酶、底物和能量物质的溶液中合成Siglec-15，或者转化另一种原核或真核宿主细胞，以表达Siglec-15，由此可得到该抗原。此外，通过在适当的宿主-载体系统中表达融合蛋白，所述融合蛋白通过将作为膜蛋白的Siglec-15的胞外结构域连接到抗体的恒定区上而得到，也可以得到作为分泌蛋白的抗原。可以如下得到Siglec-15 cDNA 通过例如所谓的PCR方法，其中使用表达 Siglec-15 cDNA的cDNA文库作为模板，并使用特异性扩增Siglec-15 cDNA的引物，进行聚合酶链式反应(在下文中称作“PCR”)(参见&iiki，R. K.,等人，kience，(1988) 239，第 487-489 页)。作为多肽的体外合成，例如可以例举由Roche Diagnostics, Inc.生产的快速翻译系统(RTS)，但不限于此。 原核宿主的实例包括大肠杆菌(fecAericAia coli )和枯草芽孢杆菌UaciBm subtilis)。为了用靶基因转化宿主细胞，使用含有复制子(即来自与所述宿主相容的物种的复制起点)和调节序列的质粒载体转化宿主细胞。此外，所述载体优选具有能赋予转化细胞表型选择性的序列。真核宿主细胞的实例包括脊椎动物细胞、昆虫细胞和酵母细胞。作为脊椎动物细胞经常使用例如猿COS细胞(Gluzman，Y. , Cell, (1981) 23，第175-182页， ATCC CRL-1650)的二氢叶酸还原酶-缺陷株(Urlaub, G.和 Chasin, L. A. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1980) 77，第 4U6-4220 页)、鼠成纤维细胞 NIH3T3 (ATCC No. CRL-1658)和中国仓鼠卵巢细胞(CH0细胞；ATCC: CCL-61)等，但是它们不限于此。根据常规方法，可以培养这样得到的转化体，并通过培养该转化体，在细胞内或在细胞外生产靶多肽。根据使用的宿主细胞，可以从各种常用的培养基中选择培养使用的合适培养基。 如果使用大肠杆菌，则可以使用例如根据需要在其中添加诸如氨苄西林或IPMG等抗生素的LB培养基。通过多种已知的分离方法中的任一种，利用蛋白的物理性质或化学性质，可以分离和纯化通过这种培养由转化体在细胞内或在细胞外生产的重组蛋白。所述方法的具体实例包括使用常规的蛋白沉淀剂进行处理、超滤、诸如分子筛色谱法(凝胶过滤)、吸附色谱法、离子交换色谱法和亲和色谱法等各类液相色谱法、透析法、 以及它们的组合。此外，通过将6组氨酸残基标签连接到要表达的重组蛋白上，可以使用镍亲和柱有效地纯化蛋白。或者，通过将IgG Fc区连接到要表达的重组蛋白上，可以使用蛋白A柱有效地纯化蛋白。通过组合上述方法，可以高产率、高纯度地容易地制备大量靶多肽。(2)抗-Siglec-15单克隆抗体的制备
特异性地结合Siglec-15的抗体的实例包括特异性地结合Siglec-15的单克隆抗体， 该抗体的获得方法如下所述。单克隆抗体的制备一般需要下述操作步骤 (a)纯化要用作抗原的生物聚合物；(b)如下制备抗体生产细胞通过注射抗原来免疫动物，采集血液，测定其抗体滴度，以确定脾摘除时间；
(C)制备骨髓瘤细胞(在下文中称作“骨髓瘤”)；
(d)将抗体生产细胞和骨髓瘤融合；
(e)筛选生产靶抗体的杂交瘤群；
(f)将杂交瘤分成单细胞克隆(克隆化)；
(g)任选地，培养杂交瘤，或培育植入了杂交瘤的动物，以制备大量单克隆抗体；
(h)检测如此制备的单克隆抗体的生物活性及其结合特异性，或者测定它们作为标记试剂的性质等。在下文中，按照上述步骤对单克隆抗体的制备方法进行详述，但是所述方法不限于此，例如，可以使用除了脾细胞以外的抗体生产细胞和骨髓瘤。(a)抗原的纯化
可以使用按照上述方法制备的Siglec-15或其部分肽作为抗原。此外，由表达Siglec-15的重组细胞制备的膜组分、或表达Siglec-15的重组细胞本身、以及通过本领城技术人员已知的方法化学合成的本发明蛋白的部分肽，也可以用作抗原。(b)抗体生产细胞的制备
将在步骤(a)中得到的抗原与佐剂(如弗氏完全或不完全佐剂、或硫酸钾铝)混合，将得到的混合物用作免疫原，免疫实验动物。在已知的杂交瘤制备方法中所使用的任何动物，可以无困难地用作实验动物。具体而言，例如，可以使用小鼠、大鼠、山羊、绵羊、牛、马等。但是，从容易获得与提取的抗体生产细胞融合的骨髓瘤细胞的角度考虑，优选使用小鼠或大鼠作为被免疫的动物。此外，要使用的小鼠和大鼠的品系没有特别限制，在小鼠的情况下，可以使用诸如 A、AKR、BALB/c、BDP、ΒΑ、CE、C3H、57BL、C57BL、C57L、DBA、FL、HTH、HTU LP、NZB, NZW、RF、 R III、SJL, SWR、WB和129等不同的品系，在大鼠的情况下，可以使用例如Wistar、Low、 Lewis、Sprague> Dawley> ACI> BN> Fischer 等。这些小鼠和大鼠可从实验动物培育商/分销商购得，例如，CLEA Japan, he.和 Charles River Laboratories Japan, Inc0在它们中，考虑到与下述的骨髓瘤细胞的融合相容性，特别优选地作为被免疫的动物的是在小鼠的情况下，BALB/c品系；在小鼠的情况下，Wistar和Low品系。此外，考虑到人和小鼠之间的抗原同源性，还优选使用具有降低的生物功能(以除去自身抗体)的小鼠，即具有自身免疫疾病的小鼠。小鼠或大鼠在免疫时的年龄优选为5-12周龄，更优选6-8周龄。为了使用Siglec-15或其重组体免疫动物，可以使用例如在下述文献中详述的已知方法例如，Weir, D. Μ. , Handbook of Experimental Immunology Vol. I. II. III., Blackwell Scientific Publications, Oxford (1987)， Kabat, Ε. A.禾口Mayer, Μ. Μ., Experimental Immunochemistry, Charles C Thomas Publisher Springfield, Illinois (1964)等。在这些免疫方法中，本发明优选的具体方法例如如下所述。
即，首先，将作为抗原的膜蛋白级分或被造成表达抗原的细胞真皮内地或腹膜内地施用给动物。但是，为提高免疫效率，优选两种施用途径的组合，如果在前半阶段进行真皮内施用，则在后半阶段或只在最后一次给药时进行腹膜内施用，可以特别提高免疫效率。抗原的施用计划随被免疫动物的种类、个体差异等而异。但是，一般而言，优选的施用计划是这样的，其中抗原的施用频率是3-6次，且给药间隔是2-6周；更优选的施用计划是这样的，其中抗原的施用频率是3-4次，且给药间隔是2-4周。此外，抗原剂量随被免疫动物的种类、个体差异等而异。但是，剂量通常设定为 0. 05-5mg，优选约 0. 1-0. 5mg。在如上所述施用抗原后1-6周、优选2-4周、更优选2-3周，进行加强免疫。在进行加强免疫时抗原的剂量随动物的种类或大小等而异。但是，在小鼠的情况下，剂量通常设定为0. 05-5mg，优选0. 1-0. 5mg，更优选约0. 1-0. 2 mg。加强免疫后1-10天、优选2-5天、更优选2-3天，从被免疫的动物无菌摘取包含抗体生产细胞的脾细胞或淋巴细胞。此时，测定抗体滴度，如果将抗体滴度足够升高的动物作为抗体生产细胞供给源， 可以更有效地进行后续操作。这里采用的测定抗体滴度的方法的实例包括RIA法和ELISA法，但所述方法不限于此。例如，如果使用ELISA法，则可以根据如下所述的方法测定本发明中的抗体滴度。首先，将纯化的或部分纯化的抗原吸附于固相(诸如用于ELISA的96孔板)的表面，再用与抗原无关的蛋白(诸如牛血清白蛋白(在下文中称作“BSA”))覆盖未吸附抗原的固相表面。洗涤表面后，使表面接触作为第一抗体的系列稀释的样品(例如小鼠血清)，使样品中的抗体结合抗原。再加入作为第二抗体的用酶标记的针对小鼠抗体的抗体，使之结合小鼠抗体。洗涤后，加入该酶的底物，测量吸光度的变化(其因底物降解等诱导的显色而发生)，并基于测量结果，计算抗体滴度。根据已知的方法(例如，Kohler等人，Nature (1975)，256，第495页；Kohler 等人，Eur. J. Immunol. (1977)，6，第511 页；Milstein 等人，Nature (1977)，266, 第550页；Walsh, Nature (1977)，266,第495页)，可以从脾细胞或淋巴细胞分离抗体
生产细胞。例如，在脾细胞的情况下，可以采用常规方法，其中通过将脾勻浆化，用不锈钢网过滤，得到细胞，然后使细胞悬浮于fegle氏最低基础培养基(MEM)中，从而分离抗体生产细胞。(C)骨髓瘤细胞(在下文中称作“骨髓瘤”)的制备
细胞融合所使用的骨髓瘤细胞没有特别限制，可从已知的细胞系中选择适合的细胞。 但是，基于从融合的细胞中选择杂交瘤时的便利性考虑，优选使用其选择方法已经得到确立的HGPRT (次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶)缺陷品系。更具体地，HGPRT-缺陷品系的实例包括源自小鼠的X63_Ag8 (X63)、 NSl-ANS/1 (NSl)、P3X63-Ag8. Ul (P3U1)、X63-Ag8. 653 (X63. 653)、SP2/0_Agl4 (SP2/0)、MPC11-45. 6TG1.7 05. 6TG)、F0、S149/5XX0 和 BU. 1 ；源自大鼠的 210. RSY3. Ag. 1.2. 3 (Y3)； 和源自人的似66AR(SK0-007)、GM1500 · GTG-A12 (GM1500) ,UC729-6aiCR-L0ff-HMy2 (HMy2) 和 82^AR/NIP4-1 (NP41)。这些HGPRT-缺陷株可从例如美国典型培养物保藏中心(ATCC)等得到。在诸如8-氮杂鸟嘌呤培养基[通过将8-氮杂鸟嘌呤加入添加了谷氨酰胺、2-巯基乙醇、庆大霉素和胎牛血清(在下文中称作“FCS”)的RPMI-1640培养基中所得到的培养基]、Iscove氏改良的Dulbecco氏培养基(在下文中称作“IMDM”)、或Dulbecco氏改良的fegle培养基(在下文中称作“DMEM”)等适当的培养基中，继代培养这些细胞品系。在该情况下，在进行细胞融合之前3-4天，在正常培养基[例如含有10 % FCS的ASF104培养基(Ajinomoto Co., Ltd.生产]中继代培养细胞，以在细胞融合当天得到不少于2 X IO7的细胞。(d)细胞融合
*艮据己知的方法(Weir, D. Μ. Handbook of Experimental Immunology Vol. I. II. III. , Blackwell Scientific Publications, Oxford (1987), Kabat, E. A.禾口 Mayer, Μ. Μ. , Experimental Immunochemistry, Charles C Thomas Publisher, Springfield, Illinois (1964)，等)，在不使细胞存活率过度降低的条件下，可以适当地进行抗体生产细胞与骨髓瘤细胞之间的融合。 作为这样的方法，可以使用在含有高浓度的诸如聚乙二醇等聚合物的溶液中，将抗体生产细胞和骨髓瘤细胞混合的化学方法；利用电刺激的物理方法，等。在这些方法中，化学方法的具体实例如下所述。S卩，在将聚乙二醇用于含有高浓度聚合物的溶液中的情况下，在分子量为 1500-6000、更优选2000-4000的聚乙二醇溶液中，在30_40°C、优选35_38°C的温度，使抗体生产细胞和骨髓瘤细胞混合1-10分钟、优选5-8分钟。(e)杂交瘤群的选择
选择通过上述细胞融合得到的杂交瘤的方法没有特别限制。通常，采用HAT (次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸苷)选择方法(Kohler等人，Nature (1975)，256，第495页；Milstein 等人，Nature (1977), 266,第 55O 页)。当使用在氨基蝶呤存在下无法存活的HGPRT-缺陷品系的骨髓瘤细胞获得杂交瘤时，该方法是有效的。即，通过在HAT培养基中培养未融合的细胞和杂交瘤，选择性地仅容许对氨基蝶呤有抗性的杂交瘤存活并增殖。(f)分成单细胞克隆(克隆化)
作为杂交瘤的克隆方法，可以使用已知的方法，例如甲基纤维素法、软琼脂糖法、或有限稀释法等(参见，例如，Barbargi, B. M.和 Manley, M. S·: Selected Methods in Cellular Immunology, W. H. Freeman 和 Company, San Francisco (1980))。在这些方法中，特别地优选有限稀释法。在该方法中，在微量培养板上接种来自胎大鼠的成纤维细胞品系，或诸如正常小鼠脾细胞、胸腺细胞或腹水细胞等饲养细胞。同时，在培养基中稀释杂交瘤，以得到0.2-0. 5个细胞/0.2ml的细胞密度。向每个孔中加入稀释的杂交瘤悬浮液的0.1 ml等分试样，继续培养约2周，同时在预定的时间间隔(例如每3天)，将约1/3的培养液更换为新鲜培养基，由此可使杂交瘤克隆增殖。使已确定了抗体滴度的孔中的杂交瘤经受克隆化，例如通过有限稀释法，重复2-4 次。选择已确定具有稳定抗体滴度的杂交瘤，作为生产抗-Siglec-15单克隆抗体的杂交瘤品系。这样克隆的杂交瘤品系的实例包括在WO 09/48072中所述的杂交瘤#32A1。于 2008年8月观日，将杂交瘤#32A1保藏在独立行政法人产业技术综合研究所特许生物
中心(International Patent Organism Depositary of the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology,位于:Central 6, 1-1-1 Higashi, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, 305-8566，Japan),并已经在抗-Siglec-15 杂交瘤 #32A1 (anti—Siglec-15 Hybridoma #32A1)的名称下获得登录号 FERM BP-10999。此外，在本说明书中，由杂交瘤#32A1生产的抗体称作“#32A1抗体”，或简称“#32A1”。此外，在本说明书的实施例中得到的除了 #32Α1抗体以外的抗体，也以相同的方式用抗体名称来表示。含有#32Α1抗体的重链可变区的部分片段具有这样的氨基酸序列，其包含序列表中的SEQ ID Ν0: 28的氨基酸残基20-167。此外，含有#32A1抗体的轻链可变区序列的部分片段具有这样的氨基酸序列，其包含序列表中的SEQ ID N0: 30的氨基酸残基21-139。(g)通过培养杂交瘤制备单克隆抗体
通过培养这样选择的杂交瘤，可以有效地获得单克隆抗体。但是，在培养之前，优选地对生产目标单克隆抗体的杂交瘤进行筛选。在这样的筛选中，可采用已知的方法。通过例如在上述(b)项中解释的ELISA法，可以测量本发明的抗体滴度。在液氮中或在-80°C或以下的冷冻箱中，可以以冷冻状态保存由上述方法得到的杂交瘤。完成克隆化以后，将培养基由HT培养基更换为正常培养基，并培养杂交瘤。通过使用大型培养瓶的旋转培养或通过旋动培养，进行大规模培养。从大规模培养得到的上清液中，通过使用诸如凝胶过滤等本领域技术人员已知的方法进行纯化，可以得到特异性地结合本发明的蛋白的单克隆抗体。此外，向与杂交瘤同品系的小鼠(例如上述的BALB/c)或Nu/Nu小鼠的腹腔内注射杂交瘤，使杂交瘤增殖，由此可以获得含有大量本发明的单克隆抗体的腹水。在腹腔内施用杂交瘤的情况下，如果提前3-7天施用诸如2，6，10，14-四甲基十五烷(姥鲛烷)等的矿物油，则可得到更大量的腹水。例如，预先向与杂交瘤同品系的小鼠的腹腔内注射免疫抑制剂，使T细胞失活。20 天后，使IO6-IO7个杂交瘤克隆细胞悬浮于不含血清的培养基中(0.5 ml)，然后向小鼠腹腔内注射该悬浮液。一般而言，当腹部膨胀、充满腹水时，从小鼠采集腹水。通过该方法，可得到比培养液中的浓度高约100倍或更高浓度的单克隆抗体。通过在例如Weir, D. Μ. Handbook of Experimental Immunology Vol. I, II， III, Blackwell Scientific Publications, Oxford (1978)中描述的方法，可以纯化由上述方法得到的单克隆抗体。也就是说，所述方法的实例包括硫酸胺沉淀法、凝胶过滤法、离子交换色谱法和亲和色谱法。作为简单的纯化方法，也可以使用市售的单克隆抗体纯化试剂盒(例如，由 Pharmacia, Inc.生产的 MAbTrap GII 试剂盒)等。这样得到的单克隆抗体对于Siglec-15具有高抗原特异性。(h)单克隆抗体的测定
可以如下确定这样得到的单克隆抗体的同种型和亚类。首先，鉴定方法的实例包括奥脱洛尼(Ouchterlony)法、ELISA法以及RIA法。奥脱洛尼法是简便的，但是当单克隆抗体浓度较低时，需要浓缩操作。另一方面，当使用ELISA法或RIA法时，通过使培养上清液与吸附有抗原的固相直接反应，并使用与各种免疫球蛋白同种型和亚类对应的抗体作为第二抗体，可以鉴定单克隆抗体的同种型和亚类。 此外，作为更简便的方法，也可以使用市售的鉴定试剂盒(例如，由Bio-Rad Laboratories, Inc.生产的小鼠分型试剂盒)等。此外，通过R)lin Lowry法，以及基于在^Onm的吸光度的计算方法[1.4 (0D 280) = 1 mg免疫球蛋白/ml]，可以进行蛋白的定量测定。(3)其它抗体
本发明的抗体不仅包括上述抗Siglec-15的单克隆抗体，而且包括以降低对人的异种抗原性为目的而人工修饰得到的重组抗体，例如嵌合抗体、人源化抗体和人抗体。使用已知的方法，可以制备这些抗体。作为嵌合抗体，可以例举这样的抗体，其中抗体可变区和恒定区源自不同的物种， 例如，其中使小鼠-或大鼠-衍生的抗体可变区与人-衍生的恒定区相连的嵌合抗体(参见 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81，6851-6855，(1984))。作为源自大鼠抗-小鼠抗体#32A1的嵌合抗体的一个实例，可以例举这样的抗体，其包含重链和轻链，所述重链具有包含序列表中的SEQ ID NO: 41的氨基酸残基20-470的氨基酸序列，且所述轻链具有包含序列表中的SEQ ID N0: 43的氨基酸残基21-237的氨基酸序列。作为人源化抗体，可以例举通过只将互补性决定区(OTR)整合到人-衍生的抗体中所得到的抗体(参见Nature (1986) 321，第页522-52 ；以及通过CDR-移植法，将构架的氨基酸残基的一部分和CDR序列移植到人抗体中所得到的抗体(W0 90/07861)。作为大鼠抗体#32A1的人源化抗体的一个实例，可以例举含有下述重链可变区的重链和含有下述轻链可变区的轻链的任意组合，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其含有序列表中的SEQ ID N0: 51的氨基酸残基20-140、SEQ ID N0: 53的氨基酸残基20-140、SEQ ID N0: 55 的氨基酸残基 20-140、SEQ ID NO: 57 的氨基酸残基 20_140、SEQ ID NO: 59 的氨基酸残基20-140、SEQ ID N0: 99的氨基酸残基20-140、SEQ ID N0: 101的氨基酸残基
20-140、或由SEQID N0: 72-77表示的任一个氨基酸序列的氨基酸残基1-121，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其含有序列表中的SEQ ID N0: 61的氨基酸残基21-133、SEQ ID NO: 63 的氨基酸残基 21-133、SEQ ID NO: 65 的氨基酸残基 21_133、SEQ ID NO: 67 的氨基酸残基21-132、SEQ ID N0: 69的氨基酸残基21-133、SEQ ID N0: 71的氨基酸残基
21-133、SEQID N0: 103 的氨基酸残基 21-133、SEQ ID N0: 105 的氨基酸残基 21-133、或由SEQ ID N0: 78-96表示的任一个氨基酸序列的氨基酸残基1-113。
作为一个优选组合，可以例举这样的抗体，其包含含有下述重链可变区的重链和含有下述轻链可变区的轻链，所述重链可变区包含含有SEQ ID NO: 51的氨基酸残基
20-140的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含含有SEQID NO: 61的氨基酸残基21-133的氨基酸序列，或者所述重链可变区包含含有SEQ ID NO: 53的氨基酸残基20-140的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含含有SEQ ID NO: 63的氨基酸残基21-133的氨基酸序列，或者所述重链可变区包含含有SEQ ID NO: 55的氨基酸残基20-140的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含含有SEQ ID N0: 65的氨基酸残基21-133的氨基酸序列，或者所述重链可变区包含含有SEQ ID N0: 55的氨基酸残基20-140的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含含有SEQ ID N0: 67的氨基酸残基21-133的氨基酸序列，或者所述重链可变区包含含有SEQ ID N0: 57的氨基酸残基20-140的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含含有SEQ ID N0: 69的氨基酸残基21-133的氨基酸序列，或者所述重链可变区包含含有SEQ ID N0: 59的氨基酸残基20-140的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含含有SEQ ID N0: 71的氨基酸残基
21-133的氨基酸序列，或者所述重链可变区包含含有SEQID N0: 99的氨基酸残基20-140 的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含含有SEQ ID N0: 69的氨基酸残基21-133的氨基酸序列，或者所述重链可变区包含含有SEQ ID N0: 101的氨基酸残基20-140的氨基酸序列， 且所述轻链可变区包含含有SEQ ID N0: 69的氨基酸残基21-133的氨基酸序列，或者所述重链可变区包含含有SEQ ID N0: 99的氨基酸残基20-140的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含含有SEQ ID N0: 103的氨基酸残基21-133的氨基酸序列，或者所述重链可变区包含含有SEQ ID N0: 99的氨基酸残基20-140的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含含有 SEQ ID N0: 105的氨基酸残基21-133的氨基酸序列。作为一个更优选的组合，可以例举包含重链和轻链的抗体，所述重链具有包含SEQ ID N0: 51的氨基酸残基20-470的氨基酸序列，且所述轻链具有包含SEQ ID N0: 61的氨基酸残基21-238的氨基酸序列，或者所述重链具有包含SEQ ID N0: 53的氨基酸残基 20-470的氨基酸序列，且所述轻链具有包含SEQ ID N0: 63的氨基酸残基21-238的氨基酸序列，或者所述重链具有包含SEQ ID N0: 55的氨基酸残基20-470的氨基酸序列，且所述轻链具有包含SEQ ID N0: 65的氨基酸残基21-238的氨基酸序列，或者所述重链具有包含 SEQ ID N0: 55的氨基酸残基20-470的氨基酸序列，且所述轻链具有包含SEQ ID N0: 67 的氨基酸残基21-237的氨基酸序列，或者所述重链具有包含SEQ ID N0: 57的氨基酸残基 20-470的氨基酸序列，且所述轻链具有包含SEQ ID N0: 69的氨基酸残基21-238的氨基酸序列，或者所述重链具有包含SEQ ID N0: 59的氨基酸残基20-470的氨基酸序列，且所述轻链具有包含SEQ ID N0: 71的氨基酸残基21-238的氨基酸序列，或者所述重链具有包含 SEQ ID N0: 99的氨基酸残基20-466的氨基酸序列，且所述轻链具有包含SEQ ID N0: 69 的氨基酸残基21-238的氨基酸序列，或者所述重链具有包含SEQ ID N0: 101的氨基酸残基20-466的氨基酸序列，且所述轻链具有包含SEQ ID N0: 69的氨基酸残基21-238的氨基酸序列，或者所述重链具有包含SEQ ID N0: 99的氨基酸残基20-466的氨基酸序列，且所述轻链具有包含SEQ ID N0: 103的氨基酸残基21-238的氨基酸序列，或者所述重链具有包含SEQ ID N0: 99的氨基酸残基20-466的氨基酸序列，且所述轻链具有包含SEQ ID N0: 105的氨基酸残基21-238的氨基酸序列。但是，源自#32A1抗体的人源化抗体不限于上述的人源化抗体，只要人源化抗体具有#32A1的所有6类⑶R序列，且具有抑制破骨细胞形成的活性。此外，#32A1抗体的重链可变区具有包含由SEQ ID NO: 44表示的氨基酸序列的⑶RHl (DYFMN)，包含由SEQ ID NO: 45 表示的氨基酸序列的 CDRH2 (QIRNKIYTYATFYAESLEG)和由 SEQ ID NO: 97 表示的CDRH2 (QIRNKIYTYATFYA)中的任一个，和包含由SEQ ID NO: 46表示的氨基酸序列的 CDRH3 (SLTGGDYFDY)。由 SEQ ID NO: 45 表示的 CDRH2 是根据 Kabat 定义的(SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST VOL. I，第 5 版(1991))。与 Kabat 定义相比，由SEQ ID NO: 97表示的⑶RH2在C端处缩短了 5个残基。在含有该⑶RH2的重链序列中，源自大鼠的CDR序列被制成更短，掺入更多的人框架序列，因此，当将它施用给人时， 被识别为异种抗原的可能性更低。此外，#32A1抗体的轻链可变区具有包含由SEQ ID NO: 47表示的氨基酸序列的CDRLl (RASQSVTISGYSFIH)、包含由SEQ ID NO: 48表示的氨基酸序列的CDRL2 (RASNLAS)和包含由SEQ ID NO: 49表示的氨基酸序列的CDRL3 (QQSRKSPffT) 此外，本发明的抗体包括人抗体。人抗-Siglec-15抗体是指只具有源自人染色体的抗体基因序列的人抗体。通过使用生产人抗体的小鼠的方法可以获得人抗-Siglec-15 抗体，所述小鼠具有含有人抗体的重链和轻链基因的人染色体片段(参见Tomizuka，K. 等人，Nature Genetics (1997) 16，第 133-143 页；Kuroiwgi，Y.等人，Nucl. Acids Res. (1998) 26，第；3447_3448页；Yoshida, H.等人，Animal Cell Technology: Basic and Applied Aspects vol. 10,第 69-73 页(Kitagawa, Y. , Matuda, Τ.禾口 Iijima, S. 编)，Kluwer Academic Publishers, 1999； Tomizuka, K.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (2000) 97，第 722-727 页，等)。具体地可以如下建立这种生产人抗体的小鼠。通过制备敲除的动物和转基因动物，并使这些动物交配，建立遗传修饰的动物，其中已经破坏了内源免疫球蛋白重链和轻链基因基因座，并替代地，经由酵母人工染色体(YAC)载体等已经导入了人免疫球蛋白重链和轻链基因基因座。此外，根据基因工程技术，通过使用分别编码这样的人抗体的重链和轻链的cDNA， 并优选使用包含该cDNA的载体，转化真核细胞，培养生产重组人单克隆抗体的转化体，由此也可从培养上清液获得该抗体。在这里，例如，可以使用真核细胞、优选哺乳动物细胞，诸如CHO细胞、淋巴细胞或骨髓瘤细胞作为宿主。此外，还已知获得从人抗体文库筛选出来的噬菌体展示-衍生的人抗体的方法 (参见 Wormstone, I. M. 等人，Investigative Ophthalmology & Visual Science. (2002) 43 (J),第 2301-2308 页；Carmen, S.等人，Briefings in Functional Genomics and Proteomics (2002), 1 (2)，第 189—203 页；Siriwardena, D.等人， Opthalmology (2002) 109 (3)，第 427-431 页，等)。例如，可以使用噬菌体展示法，其中在噬菌体表面上表达人抗体的可变区作为单链抗体(scFv)，并选择结合抗原的噬菌体(Nature Biotechnology (2005), 23，(9)，第 1105-1116 页)。通过分析基于与抗原的结合所选择的噬菌体的基因，可以确定编码结合抗原的人抗体的可变区的DNA序列。如果确定了结合抗原的scFv的DNA序列，通过制备具有该序列的表达载体，并将该载体导入适当的宿主中以表达它，可以获得人抗体(W0 92/01047，WO 92/20791，WO 93/06213，WO 93/11236，WO 93/19172，WO 95/01438，WO 95/15388，Annu. Rev. Immunol (1994) 12，第 433-455 页，Nature Biotechnology (2005) 23 (9)，第 1105-1116 页)。通过在实施例25等中所述的方法，可以评价通过上述方法得到的抗体的结合抗原的性质，并可以选择优选的抗体。作为对比抗体的性质时的另一个指标的一个实例，可以例举抗体的稳定性。在实施例33中显示的示差扫描量热法(DSC)是能够快速且准确地测量热变性中点温度(Tm)的仪器，所述热变性中点温度是蛋白的相对结构稳定性的有利指标。通过使用DSC测量Tm值并对比该值，可以对比热稳定性的差异。已知，抗体的储存稳定性显示出与抗体的热稳定性的某种关联性(Lori Burton,等人，！Pharmaceutical Development and Technology (2007) 12，第洸5-273页)，使用热稳定性作为指标，可以选择出优选的抗体。用于选择抗体的其它指标的实例包括下述在适当宿主细胞中的产量较高，在水性溶液中的聚集性较低。例如，显示出最高产量的抗体不总是显示出高热稳定性，因此，通过基于上述指标做出综合性评价来选择最适合施用给人的抗体是必要的。此外，还已知这样的方法，其中使用适当的接头，连接抗体的全长重链和轻链序列，由此得到单链免疫球蛋白(Lee, H-S,等人，Molecular Immunology (1999) 36，第 61-71 页；Shirrmann，Τ.等人，mAbs (2010), 2，(1)第 1-4 页)。通过二聚化这样的单链免疫球蛋白，得到的二聚体可以具有与本身是四聚体的抗体类似的结构和活性。此外， 本发明的抗体可以是具有单个重链可变区且不具有轻链序列的抗体。这样的抗体被称作单结构域抗体(sdAb)或纳米体(nanobody)，实际上，在骆驼和羊驼中观察到它，且已经报道具有抗原结合亲和力(Muyldemans S.等人，Protein Eng. (1994) 7(9)，1129-35, Hamers- Casterman C.等人，Nature (1993) 363 (6428) 446-8)。可以理解，上述的抗体是根据本发明的抗体的功能片段的类型。此外，通过控制糖基化(其中聚糖结合到本发明的抗体上)，可能增强抗体-依赖性的细胞的细胞毒性活性。关于控制抗体的糖基化的技术，已知WO 99/54342.W0 00/61739、 WO 02/31140等。但是，所述技术不限于此。在首先分离抗体基因、然后将该基因导入适当宿主中来制备抗体的情况下，可以使用适当宿主和适当表达载体的组合。抗体基因的具体实例包括编码在本说明书中描述的抗体的重链序列的基因和编码其轻链序列的基因的组合。当转化宿主细胞时，可能将重链序列基因和轻链序列基因插入相同的表达载体中，且也可能分别插入不同的表达载体中。 在使用真核细胞作为宿主的情况下，可使用动物细胞、植物细胞和真核微生物。作为动物细胞，可以例举(1)哺乳动物细胞，例如，猿COS细胞(Gluzman，Y., Cell, (1981) 23， 第 175-182 页，ATCC CRL-1650)的二氢叶酸还原酶-缺陷株(Urlaub, G.和 Chasin, L. A.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1980) 77，第 4U6-4220 页)，鼠成纤维细胞NIH3T3 (ATCC No. CRL-1658)和中国仓鼠卵巢细胞(CH0细胞;ATCC CCL-61)。此外，在使用原核细胞的情况下，例如，可以例举大肠杆菌和枯草芽孢杆菌。通过转化，向这些细胞中导入靶抗体基因，并在体外培养这样转化的细胞，可得到该抗体。在上述的培养方法中，产率有时可能随抗体的序列而变化，因此，可能通过使用产量作为指标，在具有相当的结合活性的抗体中选择可以容易地生产作为药物的抗体。本发明的抗体的同种型没有限制，其实例包括IgG (IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA (IgAUIgA2) ,IgD和IgE，且其优选的实例包括IgG和IgM，进一步，其更优选的实例包括 IgGl 和 IgG2。此外，本发明的抗体可以是具有抗体的抗原结合部位的抗体功能片段或其修饰的片段。通过用诸如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶等蛋白酶处理抗体，或根据基因工程技术修饰抗体基因，并在适当的培养细胞中表达修饰的基因，可以得到抗体的片段。在这些抗体片段中，具有全长抗体分子的全部或部分功能的片段可以称为所述抗体的功能片段。作为抗体的功能，通常可以例举抗原结合活性、中和抗原活性的活性、增强抗原活性的活性、抗体-依赖性的细胞毒性活性、补体-依赖性的细胞毒性活性以及补体-依赖性的细胞的细胞毒性活性。根据本发明的抗体功能片段的功能是对Siglec-15的结合活性，优选抑制破骨细胞形成的活性，更优选抑制破骨细胞的细胞融合过程的活性。抗体片段的实例包括Fab、F (ab，)2、Fv、单链Fv (scFv，其中重链和轻链的Fv分子通过适当的接头相连)、双特异抗体、线性抗体、以及由抗体片段组成的多特异性抗体。此外，Fab'(通过在还原条件下处理F (ab’)2而得到的抗体可变区中的单价片段)也视作抗体片段。此外，本发明的抗体可以是对至少两种不同抗原具有特异性的多特异性抗体。通常，这样的分子结合两种抗原(即，双特异性抗体)，但是，本文使用的“多特异性抗体”包括具有对两种或更多种(例如，3种)抗原的特异性的抗体。本发明的多特异性抗体可以是全长抗体或这样的抗体的片段(例如，F(ab’)2双特异性抗体)。通过连接两类抗体的重链和轻链(HL对)，可以制备双特异性抗体，或者通过融合生产不同单克隆抗体的杂交瘤，以制备生产双特异性抗体的融合细胞，也可以制备双特异性抗体(Millstein 等人，Nature (1983) 305，第 537-539 页)。本发明的抗体可以是单链抗体(也称为scFv)。通过经由多肽接头连接抗体的重链可变区和轻链可变区，可以获得单链抗体(Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 113 ( Rosenburg 禾口 Moore 编，Springer Verlag, New York,第 269-315 页 (1994),Nature Biotechnology (2005)，23，第 1U6-1136 页)。此外，通过经由多肽接头连接两个scFv分子生成的BiscFv片段，也可用作双特异性抗体。制备单链抗体的方法是在本技术领域中已知的(参见，例如，美国专利号 4，946，778,5, 260，203,5,091, 513,5,455,030 等)。在该 scFv 中，通过不形成缀合物的接头，优选通过多肽接头，连接重链可变区和轻链可变区(Huston，J. S.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1988)，85，第 5879-5883 页)。在 scFv 中，重链可变区和轻链可变区可以源自相同抗体或不同抗体。作为用于连接可变区的多肽接头，例如使用由12-19个残基组成的给定单链肽。可如下获得编码scFv的DNA 使用编码全部氨基酸序列或所需的部分氨基酸序列 (选自上述抗体的重链或重链可变区及其轻链或轻链可变区)的DNA作为模板，并使用限定其两端的引物对，通过PCR法进行扩增，并通过组合编码多肽接头部分的DNA和限定其两端的引物对，从而将其两端分别连接重链和轻链，进一步进行扩增。此外，制备编码scFv的DNA以后，根据常规方法，可以获得包含该DNA的表达载体以及用该表达载体转化的宿主。此外，通过使用获得的宿主，根据常规方法，可以获得scFv。 通过以与上述相同的方式获得基因并表达该基因，可以在宿主中生产其抗体片段。
可以使本发明的抗体多聚化，以增加对抗原的亲和性。待多聚化的抗体可以是一类抗体，或识别相同抗原的多个表位的多个抗体。作为多聚化抗体的方法，可以例举的是使 IgG CH3结构域结合两个scFv分子，结合抗生蛋白链菌素，导入螺旋-转角-螺旋基序等。本发明的抗体可以是多克隆抗体，它是具有不同氨基酸序列的多类抗-Siglec-15 抗体的混合物。作为多克隆抗体的一个实例，可以例举具有不同CDR的多类抗体的混合物。 培养生产不同抗体的细胞的混合物，并从得到的培养物纯化抗体可用作这样的多克隆抗体 (参见 WO 2004/061104)。也可使用与诸如聚乙二醇(PEG)等任意不同类型的分子结合的抗体作为修饰的抗体。此外，本发明的抗体可以是任一种这样的抗体和另一种药物之间形成的缀合物的形式(免疫缀合物)。这样的抗体的实例包括其中抗体缀合到放射性物质或具有药理作用的化合物上的那些(Nature Biotechnology (2005) 23，第 1137-1146 页)。可以将所得抗体纯化至同质。使用常规的蛋白分离和纯化方法，可以进行抗体的分离和纯化。例如，通过适当地选择和组合柱色谱法、过滤器过滤、超滤、盐析、透析、制备聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳等，可以分离和纯化抗体(Strategies for protein Purification and Charcterization:A Laboratoy Course Manual, Daniel R. Marshak 等人编，Cold Spring Harbor Laboratory Press (1996) ；Antibodies:A Laboratory Manual. Harlow and David Lane 编，Cold Spring Harbor Laboratory (1988)),但是方法不限于此。这些色谱法的实例包括亲和色谱法、离子交换色谱法、疏水色谱法、凝胶过滤色谱法、反相色谱法和吸附色谱法。使用液相色谱法，诸如HPLC或FPLC，可以进行这些色谱法。作为用于亲和色谱法的柱子，可以例举蛋白A柱和蛋白G柱。例如，作为使用蛋白A柱的柱子，可以例举Hyper D、P0R0S,琼脂糖FF (Pharmacia)等。此外，通过使用其上固定有抗原的载体，利用抗体对抗原的结合性质，也可纯化抗体。4.含有抗-Siglec-15抗体的药物
从在上面的“3.抗-Siglec-15抗体的制备” 一项中所述的方法得到的抗-Siglec-15 抗体，可以获得中和Siglec-15的生物活性的抗体。这些中和Siglec-15的生物活性的抗体会在体内抑制Siglec-15的生物活性，即，破骨细胞的分化和/或成熟，因此可用作药物，用作由破骨细胞的异常分化和/或成熟造成的骨代谢异常的治疗剂和/或预防剂。骨代谢异常可以是任何以净骨流失(骨质减少或骨质溶解)为特征的障碍。一般而言，用抗-Siglec-15抗体的治疗和/或预防应用于需要抑制骨吸收的情况。可用抗-Siglec-15 抗体治疗和/或预防的骨代谢异常的实例包括骨质疏松症(绝经后骨质疏松症、老年性骨质疏松症、由使用诸如类固醇或免疫抑制剂等治疗剂导致的继发性骨质疏松症、或伴随类风湿性关节炎的骨质疏松症)、伴随类风湿性关节炎的骨破坏、癌性高钙血症、伴随多发性骨髓瘤或癌的骨转移的骨破坏、巨细胞瘤、骨质减少、牙周炎导致的牙缺失、人工关节周围的骨溶解、慢性骨髓炎中的骨破坏、骨佩吉特病、肾性骨营养不良和成骨不全，但是，骨代谢异常不限于此，只要它是伴有破骨细胞造成的净骨流失的疾病即可。作为上述药物使用的抗-Siglec-15抗体的实例包括通过在3. “ (3)其它抗体” 一项中所述的方法从#32A1 抗体制备的嵌合抗体和人源化抗体。此外，具有与#32A1抗体相同表位的嵌合抗体、人源化抗体和人抗体也可用作药物。通过观察这些抗体是否结合Siglec-15的相同的特定部分肽，可以证实某种抗-Siglec-15抗体是否具有与#32A1抗体相同的表位。此外，如果某种抗-Siglec-15抗体与#32A1抗体竞争结合Siglec-15，则也可判定这些抗体具有相同的表位。通过例如抑制过表达Siglec-15的细胞分化成破骨细胞的活性，可以测定抗-Siglec-15抗体的中和Siglec-15的生物活性的体外活性。例如，在不同的浓度，向 RAff沈4. 7细胞或RAW 264细胞(小鼠单核细胞-衍生的细胞系)添加抗-Siglec-15抗体， 可以测定RANKL或TNF-α的刺激抑制向破骨细胞分化的活性。此外，在不同的浓度，向骨髓-衍生的原代培养细胞添加抗-Siglec-15抗体，可以测定RANKL、TNF- α或活性维生素 D3的刺激抑制向破骨细胞分化的活性。此外，在不同的浓度，向正常人破骨细胞前体细胞 (正常人天然破骨细胞前体细胞，可从Sanko Junyaku Co.，Ltd.，目录号2T-110得到)添加抗-Siglec-15抗体，可以测定RANKL或M-CSF的刺激抑制向破骨细胞分化的活性。通过使用酒石酸盐-抗性的酸性磷酸酶(TRAP)活性的抑制为指标，可以测定这样的对破骨细胞分化的抑制效应。此外，通过使用TRAP-阳性的多核破骨细胞形成的抑制(即破骨细胞的细胞融合的抑制)为指标，也可以测定对破骨细胞分化的抑制效应。此外，在使用股骨-和/或胫骨-衍生的细胞的陷窝测定实验(Takada等人，Bone和Mineral，(1992) 17，347-359)中，通过以不同浓度向股骨-和/或胫骨-衍生的细胞添加抗-Siglec-15 抗体，并观察牙质切片上的陷窝形成，可以测定抑制破骨细胞的骨吸收的体外活性。作为用于测定抑制破骨细胞导致的骨吸收的体外活性的系统，也可以使用涂有缀合铕的人胶原的板。可以如下确认使用实验动物的抗-Siglec-15抗体对骨代谢异常的体内治疗或预防效应将抗-Siglec-15抗体施用给骨质疏松症动物模型或过表达Siglec-15的转基因动物， 并测量破骨细胞的任何变化。这样得到的的中和Siglec-15的生物活性的抗体可用作药物，特别是用作治疗或预防骨代谢异常的药物组合物，所述骨代谢异常例如骨质疏松症、伴随类风湿性关节炎的骨破坏、或伴随癌的骨转移的骨破坏，或用作这样的疾病的免疫学诊断的抗体。在类风湿性关节炎(RA)的治疗中，一个主要的难题是伴随该疾病的发生的骨流失。业已报道在伴随RA的这种骨流失中破骨细胞起主要作用。认为RANKL和TNF-α对于破骨细胞诱导(分化和成熟)和活化而言是最重要的细胞因子，且是RA中骨破坏的原因 (Romas Ε.等人，Bone 30,第 340-346 页，2002)。作为 RANKL 的诱馆受体的 0CIF/0PG 可抑制由RANKL诱导的破骨细胞形成，但是不抑制由TNF-α诱导的破骨细胞形成。另一方面，根据本发明的抗-Siglec-15抗体会有效地抑制由RANKL和TNF-α诱导的破骨细胞形成。因此，预期本发明的抗-Siglec-15抗体可以比RANKL阻滞剂(0CIF/0PG、抗-RANKL抗体等)更强烈地抑制RA等中的TNF-α诱导的骨流失和骨破坏。作为一个实例，对于骨代谢异常的治疗或预防，抗-Siglec-15抗体可以单独施用或与骨相关疾病的至少一种其它治疗剂组合施用。作为另一个实例，抗-Siglec-15抗体可以与治疗有效量的骨代谢异常的治疗剂组合施用。可与抗-Siglec-15抗体组合施用的治疗剂的实例包括但不限于二膦酸盐(例如，阿仑膦酸盐、依替膦酸盐、伊班膦酸盐、伊卡膦酸盐、帕玛二磷酸盐、利塞膦酸盐和唑来膦酸盐)，活性维生素D3、降钙素及其衍生物、激素例如雌二醇、SERM (选择性雌激素受体调节剂)、依普黄酮、维生素K2 (四烯甲萘醌)、钙制剂、PTH (甲状旁腺激素)、非留体类抗炎药(例如，塞来考昔和罗非昔布)、可溶性TNF 受体(例如，依那西普)、抗-TNF-α抗体或所述抗体的功能片段(例如，英夫利昔单抗)、 抗-PTHrP (甲状旁腺激素相关蛋白)抗体或所述抗体的功能片段、IL-I受体拮抗剂(例如，阿那白滞素)、抗-IL-6受体抗体或所述抗体的功能片段(例如，托珠单抗)、抗-RANKL 抗体或所述抗体的功能片段(例如，denosumab)和OCIF (破骨细胞生成抑制因子)。根据骨代谢异常的状态或希望的治疗和/或预防程度，可以施用2或3或更多种药物类型，通过封装在同一制剂中，可以一起供应这些药物。通过将它们封装在同一制剂中，也可以一起供应这些药物和抗-Siglec-15抗体。此外，通过将它们封装为用于治疗和/或预防的试剂盒，也可以一起供应这些药物。此外，可以分别供应这些药物和抗-Siglec-15抗体。在基因治疗中施用的情况下，可以将蛋白性的骨疾病治疗剂的基因和抗-Siglec-15抗体的基因插入到相同启动子区或不同启动子区的下游，且可以导入到相同载体或不同载体中。
通过使骨疾病治疗剂与抗-Siglec-15抗体或其片段缀合，可以制备如在M. C. Garnet "Targeted drug conjugates: principles and progress，，，Advanced Drug Delivery Reviews, (2001) 53，171-216中所述的靶向药物缀合物。为达到该目的， 可使用除抗体分子外的任何抗体片段，只要其没有完全失去识别破骨细胞的能力，其实例包括诸如Fab、F(ab’)2和Fv等片段。在本发明中，也可以以相同的方式使用抗体和片段。抗-Siglec-15抗体或其片段与骨疾病治疗剂形成的缀合物可以是在下述文献中禾中？ 中的ft—禾中M. C. Garnet "Targeted drug conjugates: principles and progress，，，Advanced Drug Delivery Reviews, (2001) 53, 171-216，G. T. Hermanson "Bioconjugate Techniques，，Academic Press, California (1996), Putnam 禾口J. Kopecek "Polymer Conjugates with Anticancer Activity" Advances in Polymer Science (1995) 122，55-123等。也就是说，可以例举这样的缀合物，其中抗-Siglec-15 抗体和骨疾病治疗剂彼此化学地直接缀合，或经由诸如寡肽等间隔物缀合，以及经由适当的药物载体而形成的缀合物。药物载体的实例包括脂质体和水溶性聚合物。经由这种药物载体形成的缀合物的更具体实例包括这样的缀合物，其中将抗体和骨疾病治疗剂掺入脂质体中，并将脂质体与抗体彼此缀合；和这样的缀合物，其中骨疾病治疗剂与水溶性聚合物(分子量为约1000-100000的化合物)化学地直接缀合，或经由诸如寡肽等间隔物缀合， 并将抗体与水溶性聚合物缀合。通过本领域技术人员已知的方法可以实现抗体(或其片段)与骨疾病治疗剂或药物载体(诸如脂质体或水溶性聚合物)的缀合，所述方法例如描述在下述文献中的方法G. Τ. Hermanson "Bioconjugate Techniques，，Academic Press, California (1996)， Putnam 禾口 J. Kopecek "Polymer Conjugates with Anticancer Activity” Advances in Polymer Science (1995) 122，55-口3。通过本领域技术人员已知的方法，可以实现骨疾病治疗剂在脂质体中的掺入，所述方法例如描述在下述文献中的方法:D. D. Lasic "Liposomes:From Physics to Applications，，Elsevier Science Publishers B. V. , Amsterdam (1993)等。通过本领域技术人员已知的方法，可以实现骨疾病治疗剂与水溶性聚合物的缀合，所述方法例如描述在下述文献中的方法D. Putnam和J. Kopecek "Polymer Conjugates with Anticancer Activity"Advances in Polymer kience( 1995)122，55-123。除上述方法外，通过本领域技术人员已知的方法，通过基因工程，可以制备抗体(或其片段)与蛋白性的骨疾病治疗剂(或其片段)的缀合物。本发明也提供了药物组合物，其含有治疗和/或预防有效量的抗-Siglec-15抗体和药学上可接受的稀释剂、载体、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂。本发明也提供了药物组合物，其含有治疗和/或预防有效量的抗-Siglec-15抗体、治疗和/或预防有效量的至少一种骨疾病治疗剂和药学上可接受的稀释剂、载体、增溶剂、乳化剂、防腐剂和/或佐剂。骨疾病治疗剂的实例包括但不限于二膦酸盐(例如，阿屈膦酸盐、依替膦酸盐、伊班膦酸盐、伊卡膦酸盐、帕玛二磷酸盐、利塞膦酸盐和唑来膦酸盐)、 活性维生素D3、降钙素及其衍生物、激素例如雌二醇、SERM (选择性雌激素受体调节剂)、 依普黄酮、维生素1(2 (四烯甲萘醌)、钙制剂、PTH (甲状旁腺激素)、非甾体类抗炎药(例如，塞来考昔和罗非昔布)、可溶性TNF受体(例如，依那西普)、抗-TNF-α抗体或所述抗体的功能片段(例如，英夫利昔单抗)、抗-PTHrP (甲状旁腺激素相关蛋白)抗体或所述抗体的功能片段、IL-I受体拮抗剂(例如，阿那白滞素)、抗-IL-6受体抗体或所述抗体的功能片段(例如，托珠单抗)、抗-RANKL抗体或所述抗体的功能片段(例如，denosumab) 和OCIF (破骨细胞生成抑制因子)。在根据本发明的药物组合物中可接受的、用于制剂中的物质优选地在其施用量和施用浓度对施用药物组合物的人没有毒性。本发明的药物组合物可以包含能改变或维持pH、渗透压、粘度、透明度、颜色、等张性、无菌状态、稳定性、溶解度、释放速率、吸收速率及其渗透性的药用物质。这样的药用物质的实例包括但不限于氨基酸诸如甘氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸和赖氨酸；抗微生物剂；抗氧化剂诸如抗坏血酸、硫酸钠和亚硫酸氢钠；缓冲剂诸如磷酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐缓冲剂、碳酸氢钠和Tris-HCl溶液；填充剂诸如甘露醇和甘氨酸；螯合剂诸如四乙酸乙二胺(EDTA)；络合剂诸如咖啡因、聚乙烯吡咯烷、β-环糊精和羟丙基-β-环糊精；增量剂诸如葡萄糖、甘露糖和糊精；其它碳水化合物诸如单糖类和二糖类；着色剂； 矫味剂；稀释剂；乳化剂；亲水聚合物诸如聚乙烯吡咯烷；防腐剂诸如低分子量多肽、成盐抗衡离子、苯扎氯铵、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸和过氧化氢；溶剂诸如甘油、丙二醇和聚乙二醇；糖醇诸如甘露醇和山梨醇；助悬剂；表面活性剂诸如脱水山梨糖醇酯、包括聚山梨酯20和聚山梨酯80在内的聚山梨酯、三硝基甲苯(Triton)、氨丁三醇、卵磷脂和胆固醇；稳定性增强剂诸如蔗糖和山梨醇；弹性增强剂诸如氯化钠、氯化钾和甘露醇和山梨醇；转运剂；赋形剂；和/或药物佐剂。这些为药用加入的物质的量优选为抗-Siglec-15抗体重量的0. 01-100倍，特别优选 0. 1-10倍。根据组合物应用的疾病、应用的施用途径等，本领域技术人员可以适当地确定制剂中药物组合物的优选组成。药物组合物中的赋形剂和载体可以是液体或固体形式。适当的赋形剂或载体可以是注射用水、生理盐水、人工脑脊液或肠胃外施用中常用的其它物质。此外，中性生理盐水或含有血清白蛋白的生理盐水也可以用作载体。药物组合物可以含有PH7. 0-8. 5的Tris 缓冲液、PH4. 0-5. 5的乙酸盐缓冲液或pH 3. 0-6. 2的柠檬酸盐缓冲液。此外，这样的缓冲液可以补充山梨醇或另一种化合物。本发明的药物组合物的实例包括含有抗-Siglec-15抗体的药物组合物、以及含有抗-Siglec-15抗体和至少一种骨疾病治疗剂的药物组合物。将本发明的药物组合物制成冻干产品或液体形式，作为具有所选择的组成和所需的纯度的药物。也可以使用适当的赋形剂(如蔗糖)，使含有抗-Siglec-15抗体的药物组合物以及含有抗-Siglec-15抗体和至少一种骨代谢异常治疗剂的药物组合物形成冻干产品。本发明的药物组合物可以制成用于肠胃外施用或用于经口服给药的胃肠道吸收。 制剂的组成和浓度可根据施用方法确定。本发明的药物组合物中所含的抗-Siglec-15抗体对Siglec-15的亲和力越高，也就是说，其对Siglec-15的解离常数(Kd值)越低，则抗-Siglec-15抗体可以表现出的药物效能越多(甚至在减少给人的剂量时)。因此，基于该考虑，也可以确定本发明的药物组合物对人的剂量。对于剂量，在给人施用人抗-Siglec-15 抗体的情况下，可以以约0. 1-100 mg/kg (每广180天一次)的剂量施用抗体。本发明的药物组合物的剂型的实例包括包括输注在内的注射剂、栓剂、经鼻剂、 舌下剂和经皮吸收剂。
实施例在下文中，参考实施例更具体地描述本发明，然而，本发明不限于此。应当指出，如无特别说明，在下述实施例中的与基因操作有关的各个操作均根据在“Molecular Cloning，，( Sambrook, J. , Fritsch, Ε. F.禾口 Maniatis, Τ.著，Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989年出版)中所述的方法进行，或在使用市售的试剂或试剂盒的情况下，根据附随的说明书使用它们。实施例1可溶性小鼠Siglec-15蛋白表达构建体的制备
编码小鼠Siglec-15蛋白的胞外结构域的部分核苷酸序列由序列表中的SEQ ID N0: 5 表示，其氨基酸序列由序列表中的SEQ ID N0: 6表示。通过利用这样的部分序列，可以在动物细胞等的培养上清液中生产可溶性小鼠Siglec-15蛋白。a)通过PCR扩增可溶性小鼠Siglec-15基因
按照常规方法，合成具有序列 5，-ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggctt caccATGGAG GGGTCCCTCC AACTC-3，(mSiglec-15-ECD-F:序列表中的 SEQ ID N0: 7)的寡核苷酸和具有序列 5，-ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtc TCCGGGGGCG CCGTGGAAGC GGAAC-3， (mSiglec-15-ECD-R:序列表中的SEQ ID N0: 8)的寡核苷酸，作为通过PCR扩增小鼠Siglec-15胞外结构域cDNA的引物。此外，将这些引物设计成用于生产gateway进入克隆(entry clone)的扩增引物，使得在mSiglec-15-ECD_F中添加attBl序列，以及在mSiglec-15-E⑶-R中添加attB2序列。按照常规方法，使用该引物组合和含有小鼠 Siglec-15的开放读码框序列的多核苷酸作为模板，进行PCR。热循环仪的条件设定如下 在94°C加热5分钟后，重复“94°C 0.5分钟、55°C 0.5分钟以及68°C 1.5分钟”的温度循环15次，再在68°C加热5分钟，然后在4°C温育。b)通过(Gateway BP反应制备进入克隆
采用以下方法制备进入克隆，其中通过采用λ噬菌体位点特异性的重组系统的 Gateway技术(Invitrogen，Inc.)整合了小鼠Siglec-15胞外结构域cDNA。首先，在两端带有在a)中制备的attB序列的PCR产物和pDN0R221 (由hvitrogen，he.生产，它是具有attP序列的供体载体)之间，使用BP Clonase进行BP反应。通过使用该反应液，转化大肠杆菌DH10B，针对耐药的克隆进行菌落PCR，并确认插入片段的大小。然后，对已确认具有正确大小的插入片段的克隆，实施插入片段的总DNA序列的序列分析。结果，得到与编码小鼠Siglec-15蛋白的胞外结构域的靶核苷酸序列(序列表中的SEQ ID NO: 5)完全相同的进入克隆。c)通过(Gateway LR反应制备表达克隆
采用以下方法制备表达克隆，其中通过采用λ噬菌体位点特异性的重组系统的 Gateway技术(Invitrogen，Inc.)整合了小鼠Siglec-15胞外结构域cDNA。在b)中制备的进入克隆含有在两端具有attL序列的插入片段。在该进入克隆和具有attR序列的两类目标载体之间，使用LR Clonase进行LR反应。此外，作为目标载体，使用两类目标载体设计成在插入片段的C端添加V5表位标签和6 XHis标签的pDONM，和设计成在插入片段的C 端添加人Fc标签的phlgFc。通过使用由LR反应得到的反应液，转化大肠杆菌DHlOBJim 得耐药的克隆进行菌落PCR，并确认插入片段的大小。然后，对已确认具有正确大小的插入片段的克隆，进行从插入片段侧到载体侧的两端的序列分析。用于序列分析的引物序列
5' -tgcgtgaagg tgcagggcag-3' (mSiglec-15-ECD-seq-upstm:序歹[J表中白勺 SEQ ID NO: 9) 禾口
5' -cctcgcctgg tcgggtc-3' (mSiglec-15-ECD-seq-dnstm:序列表中的 SEQ ID NO:
10)。序列分析的结果是分别得到其中发生pDONM和phlgFc的正确重组的表达克隆 (可溶性小鼠Siglec-15/pDONM和可溶性小鼠Siglec-15/phIgFc)。通过将可溶性小鼠 Siglec-15/pDONM转染进动物细胞等中，具有序列表中的SEQ ID NO: 11表示的碱基序列的 mRNA被转录，并被翻译成具有序列表中的SEQ ID N0:12表示的氨基酸序列的蛋白(小鼠 Siglec-15-His)。此外，通过将可溶性小鼠Siglec-15/phIgFc转染进动物细胞等中，具有序列表中的SEQ ID N0:13表示的碱基序列的mRNA被转录，并被翻译成具有序列表中的SEQ ID N0:14表示的氨基酸序列的蛋白(小鼠Siglec-15-Fc)。实施例2使用293-F细胞大规模制备含有可溶性小鼠Siglec-15蛋白的培养液以约5mg的量，分别制备在实施例1中得到的两类表达质粒(可溶性小鼠Siglec-15/
pDONM和可溶性小鼠Siglec-15/phIgFc)。此外，在纯化来自大规模培养的大肠杆菌的质粒时，使用 Invitrogen PureLink HiPure Plasmid Gigaprep试剂盒(由 Invitrogen, Inc.生产)。将如此制备的质粒与Opti-MEM (由hvitrogen，Inc.生产)混合，将得到的混合物过滤除菌，向其中加入10 ml转染试剂四3作(^丨11 (由hvitrogen，Inc.生产)，将得到的混合物在室温温育20分钟。向在锥形瓶中培养的FreeMyle 293-F细胞(由hvitrogen， Inc.生产)中加入该混合物，使在FreeMyle 293表达培养基(由hvitrogen，Inc.生产)中的细胞密度达到个1. IX IO6个细胞/mlX5L (IL/烧瓶，5瓶)。在8. 0% CO2浓度、在 37°C、振荡(125转/分)培养细胞96小时(4日)后，收集培养液，并离心，以制备培养上清液。认为在这样制备的培养上清液中，分别表达其中在小鼠Siglec-15胞外结构域的C端侧已添加V5表位标签和6XHis标签的蛋白(小鼠Siglec-15-His)和其中在小鼠Siglec-15 胞外结构域的C端侧已添加人Fc标签的蛋白(小鼠Siglec-15-Fc)。
实施例3小鼠Siglec-15-His的纯化
a) HisTrap HP柱色谱法
向2L在实施例2中制备的表达小鼠Siglec-15-His的细胞的培养液中加入225 ml 10 χ 缓冲液(500 mM Tris, 1. 5 M NaCl, 200 mM 咪唑，pH 8.0)，搅拌均勻得到的混合物，并通过Sterivex-GV过滤器(Millipore Co.，Ltd.生产)过滤。以2ml/min的流速，将此培养液加载至串联的3根HisTrap HP 5 ml柱(Amersham Biosciences, Inc.生产)，所述柱预先用热原去除剂PyroCLEAN (ALerCHEK，Inc.生产)处理，并用注射用蒸馏水洗涤。以1 ml/min的流速，使用60 ml含有300mM NaCl的50 mM Tris-HCl缓冲液(pH 8. 0)洗涤该柱，然后使用50 ml含有300 mM NaCl和500 mM咪唑的50 mM Tris-HCl缓冲液(pH 8. 0)，以lml/min的流速，洗脱吸附于柱上的蛋白。在1 ml/级分，将洗脱液分级 (fractionate)到预先加入 10 μ 1 10% 吐温 20 的 Mini-sorp 管(Nunc, Inc.生产)中。使用离心膜浓缩器Amicon Ultra-15 (Millipore Co. , Ltd.生产)，将约20ml通过合并级分 (级分14-20)得到的、含有洗脱蛋白的溶液浓缩至2. 5ml，然后将该浓缩液加载至预先用含有0. 01%吐温20的磷酸盐缓冲盐水(T-PBQ平衡的PD-10脱盐柱(Amersham Biosciences, Inc.生产)，然后用T-PBS洗脱，由此得到3. 5ml样品，其溶剂被替换为T-PBS。b) Resource Q 柱色谱法
向3. 5ml通过HisTrap HP柱色谱法纯化的、其溶剂被替换为T-PBS的样品中加入 22. 5 ml含有0. 1% CHAPS的50 mM Tris-HCl缓冲液(pH 7. 5)，并搅拌得到的混合物。 然后，将该混合物在4°C、3，000 rpm离心30分钟，除去沉淀物。通过Millex-GV过滤器 (Millipore Co., Ltd.生产)过滤得到的上清液后，将滤液以流速lml/min加载至用含有 0. 1% CHAPS 的 50 mM Tris-HCl 缓冲液(pH 7. 5)预先平衡的 Resource Q 6 ml 柱(Amersham Biosciences, Inc.生产)上。此后，使用该缓冲液以流速lml/min洗涤柱，收集未吸附于柱上的蛋白级分。以流速lml/min，用含有0. 1% CHAPS禾Π 1 M NaCl的50 mM Tris-HCl缓冲液(pH 7. 5)洗脱吸附于柱上的蛋白。用离心膜浓缩器Amicon Ultra-15 (Millipore Co.， Ltd.生产)将沈.5!111未吸附于柱上的级分浓缩至2.0!111，然后将该浓缩液在41、3，000 rpm离心10分钟，并除去沉淀物。在-80°C冷冻保存离心后的上清液备用。重复上述纯化操作(HisTrap HP柱色谱法和Resource Q柱色谱法)两次。c)纯化的小鼠Siglec-15-His的检测和纯度分析
使用通过上述纯化操作(HisTrap HP柱色谱法和Resource Q柱色谱法)制备的样品， 进行在还原条件下的SDS-聚丙烯酰胺电泳和银染色。也就是说，向5 μ 1经各纯化步骤纯化的每个样品中加入等量的SDS-处理液，在95°C热处理得到的混合物10分钟。将3 μ 1热处理过的各样品用于SDS-聚丙烯酰胺电泳。使用8-25%聚丙烯酰胺梯度凝胶(Amersham Biosciences, Inc.生产)作为电泳凝胶，并使用 PhastSystem (Amersham Biosciences, Inc.生产)进行电泳。此外，使用彩虹分子量标志物(Amersham Biosciences, Inc.生产) 作为分子量标志物。电泳结束后，使用WiastGel Silver试剂盒(Amersham Biosciences, Inc.生产)和WiastSystem进行银染色。结果如图1所示。经证实，在未吸附于Resource Q柱上的蛋白级分中，分子量为约35 kDa的蛋白(小鼠Siglec-15-His)被有效纯化和浓缩。除使用 ECL DualVue 蛋白印迹标志物(AmershamBiosciences, he.生产)作为分子量标志物以外，在相同的条件下进行电泳。使用WiastTransfer半干转移试剂盒(Amersham Biosciences, Inc.生产)和PhastSystem，将凝胶中的蛋白转移(印迹)到 PVDF 膜(Hybond-P, Amersham Biosciences, Inc.生产)上。将该 PVDF 膜在 IOml 含有 0.1% 吐温 20 的封闭剂(BlockAce, Snow Brand Milk Products, Co. , Ltd.生产)中在室温轻轻振荡1小时。向该封闭溶液中加入10 μ 1 S-蛋白HRP (Amersham Biosciences, Inc.生产)禾Π 10 μ 1 抗-V5-HRP 抗体(Pk-TAG-HRP 的单克隆抗体，Acris Antibodies 生产)，将在溶液中的膜在室温轻轻振荡另外1小时。通过在50ml含有0. 01%吐温20的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中轻轻振荡5分钟，洗涤PVDF膜4次。洗涤后，按照ECL检测试剂盒(Amersham Biosciences, Inc.生产)所附的方法，处理PVDF膜，以使蛋白条带显色，并用 ECL Mini-Camera (Amersham Biosciences, Inc.生产)禾口偏光胶片(Polapan 3200B, Polaroid, Inc.生产)检测显色。结果如图2所示。从该结果也可确认，在未吸附于Resource Q柱的蛋白级分中，分子量为约35kDa并与抗-V5-HRP抗体反应的蛋白(小鼠 Siglec-15-His)被有效纯化和浓缩。d)纯化的小鼠Siglec-15-His的蛋白纯度的测定
对于纯化的小鼠Siglec-15-His (未吸附于Resource Q柱的蛋白级分)，使用牛血清白蛋白作为标准品，用DC蛋白测定试剂盒(Bio-Rad Laboratories, Inc.生产)测定蛋白浓度。如表1所示，通过进行2次纯化操作，得到合计1. 66mg纯化的小鼠Siglec-15-His蛋白。表 权利要求
1.一种抗体或所述抗体的功能片段，所述抗体结合包含由SEQ ID NO: 2表示的氨基酸序列的氨基酸残基39-165的多肽，并抑制破骨细胞形成和/或破骨性骨吸收。
2.根据权利要求1所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于重链序列含有具有⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3的可变区，且所述⑶RHl包含由SEQ ID NO: 44表示的氨基酸序列，所述⑶RH2包含由SEQ ID NO: 45和SEQ ID NO: 97表示的任一个氨基酸序列，所述⑶RH3包含由SEQ ID NO: 46表示的氨基酸序列；且轻链序列含有具有⑶RL1、⑶RL2和⑶RL3的可变区，且所述⑶RLl包含由SEQ ID NO: 47表示的氨基酸序列，所述⑶RL2包含由SEQ ID NO: 48表示的氨基酸序列，且所述⑶RL3 包含由SEQ ID NO: 49表示的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有包含由SEQ ID NO: 41表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140的重链可变区序列和包含由SEQ ID NO: 43表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-132的轻链可变区序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体功能片段，其选自Fab、F(ab')2、Fab'和Fv0
5.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体，其特征在于它是scFv。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于所述抗体是嵌合抗体。
7.根据权利要求6所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID NO: 41表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 43表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-237。
8.根据权利要求1-4和6中任一项所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于所述抗体是人源化的。
9.根据权利要求7或8所述的抗体，其中所述重链具有人免疫球蛋白G2重链的恒定区，且所述轻链具有人免疫球蛋白κ轻链的恒定区。
10.一种抑制破骨细胞形成和/或破骨性骨吸收的抗体或所述抗体的功能片段，其中所述抗体含有(a)选自下述氨基酸序列的重链可变区al) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 51表示的氨基酸序列的氨基酸残基 20-140 ；a2) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 53表示的氨基酸序列的氨基酸残基 20-140 ；a3) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 55表示的氨基酸序列的氨基酸残基 20-140 ；a4) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 57表示的氨基酸序列的氨基酸残基 20-140 ；a5) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 59表示的氨基酸序列的氨基酸残基 20-140 ；a6) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基 20-140 ；a7) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 101表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140；a8) 一种氨基酸序列，其与选自al)至a7)的任一个氨基酸序列具有至少95%同源性； a9) 一种氨基酸序列，其与选自al)至a7)的任一个氨基酸序列具有至少99%同源性；和alO) 一种氨基酸序列，其包含在选自al)至a7)的任一个氨基酸序列中的一个至几个氨基酸残基的置换、删除或添加；和(b)选自下述氨基酸序列的轻链可变区bl) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 61表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133；b2) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 63表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-133 ；b3) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 65表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-133 ；b4) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 67表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-132 ；b5) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-133 ；b6) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 71表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-133 ；b7) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 103表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-133 ；b8) 一种氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 105表示的氨基酸序列的氨基酸残基 21-133 ；b9) 一种氨基酸序列，其与选自bl)至a8)的任一个氨基酸序列具有至少95%同源性； blO) 一种氨基酸序列，其与选自bl)至b8)的任一个氨基酸序列具有至少99%同源性；和bll) 一种氨基酸序列，其包含在选自bl)至b8)的任一个氨基酸序列中的一个至几个氨基酸残基的置换、删除或添加。
11.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 51表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 61表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。
12.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 53表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 63表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。
13.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 65表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。
14.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 67表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。
15.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID NO: 57表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。
16.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 59表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 71表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。
17.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。
18.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 101表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。
19.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 103表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。
20.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列含有重链可变区，所述重链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-140，且所述轻链序列含有轻链可变区，所述轻链可变区包含这样的氨基酸序列，其包含由SEQ ID N0: 105表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-133。
21.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID NO: 51表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID NO: 61表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。
22.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID NO: 53表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID NO: 63表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。
23.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID NO: 55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 65表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。
24.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 55表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 67表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-237。
25.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 57表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。
26.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 59表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-470，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 71表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。
27.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-466，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。
28.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 101表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-466， 且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 69表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。
29.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-466，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 103表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。
30.根据权利要求10所述的抗体或所述抗体的功能片段，其特征在于含有重链序列和轻链序列，所述重链序列包含由SEQ ID N0: 99表示的氨基酸序列的氨基酸残基20-466，且所述轻链序列包含由SEQ ID N0: 105表示的氨基酸序列的氨基酸残基21-238。
31.一种药物组合物，其特征在于包含至少一种根据权利要求1-30所述的抗体或所述抗体的功能片段。
32.根据权利要求31所述的药物组合物，其特征在于是骨代谢异常的治疗剂和/或预防剂。
33.一种用于治疗和/或预防骨代谢异常的药物组合物，其特征在于包含至少一种根据权利要求1-30所述的抗体或所述抗体的功能片段和至少一个选自下述的成员二膦酸盐、活性维生素D3、降钙素及其衍生物、激素例如雌二醇、SERM (选择性雌激素受体调节剂)、依普黄酮、维生素K2 (四烯甲萘醌)、钙制剂、PTH (甲状旁腺激素)、非甾体类抗炎药、可溶性TNF受体、抗-TNF- α抗体或所述抗体的功能片段、抗-PTHrP (甲状旁腺激素相关蛋白)抗体或所述抗体的功能片段、IL-I受体拮抗剂、抗-IL-6受体抗体或所述抗体的功能片段、抗-RANKL抗体或所述抗体的功能片段以及OCIF (破骨细胞生成抑制因子)。
34.根据权利要求32或33所述的药物组合物，其中所述骨代谢异常选自骨质疏松症、伴随类风湿性关节炎的骨破坏、癌性高钙血症、伴随多发性骨髓瘤或癌的骨转移的骨破坏、巨细胞瘤、骨质减少、牙周炎导致的牙缺失、人工关节周围的骨溶解、慢性骨髓炎中的骨破坏、骨佩吉特病、肾性骨营养不良和成骨不全。
35.根据权利要求34所述的药物组合物，其特征在于所述骨代谢异常是骨质疏松症、 伴随类风湿性关节炎的骨破坏或伴随癌的骨转移的骨破坏。
36.根据权利要求35所述的药物组合物，其特征在于所述骨代谢异常是骨质疏松症。
37.根据权利要求36所述的药物组合物，其特征在于所述骨质疏松症是绝经后骨质疏松症、老年性骨质疏松症、由使用诸如类固醇或免疫抑制剂等治疗剂导致的继发性骨质疏松症或伴随类风湿性关节炎的骨质疏松症。
38.一种治疗和/或预防骨代谢异常的方法，其特征在于施用至少一种根据权利要求 1-30所述的抗体或所述抗体的功能片段。
39.一种治疗和/或预防骨代谢异常的方法，其特征在于同时或相继施用至少一种根据权利要求1-30所述的抗体或所述抗体的功能片段和至少一个选自下述的成员二膦酸盐、活性维生素D3、降钙素及其衍生物、激素例如雌二醇、SERM (选择性雌激素受体调节剂)、依普黄酮、维生素K2 (四烯甲萘醌)、钙制剂、PTH (甲状旁腺激素)、非甾体类抗炎药、 可溶性TNF受体、抗-TNF- α抗体或所述抗体的功能片段、抗-PTHrP (甲状旁腺激素相关蛋白)抗体或所述抗体的功能片段、IL-I受体拮抗剂、抗-IL-6受体抗体或所述抗体的功能片段、抗-RANKL抗体或所述抗体的功能片段以及OCIF (破骨细胞生成抑制因子)。
40.根据权利要求38或39所述的治疗和/或预防方法，其特征在于所述骨代谢异常是骨质疏松症、伴随类风湿性关节炎的骨破坏或伴随癌的骨转移的骨破坏。
41.根据权利要求40所述的治疗和/或预防方法，其特征在于所述骨代谢异常是骨质疏松症。
42.根据权利要求41所述的治疗和/或预防方法，其特征在于所述骨质疏松症是绝经后骨质疏松症、老年性骨质疏松症、由使用诸如类固醇或免疫抑制剂等治疗剂导致的继发性骨质疏松症或伴随类风湿性关节炎的骨质疏松症。
43.一种多核苷酸，其编码根据权利要求3、7和10-30中任一项所述的抗体。
44.根据权利要求43所述的多核苷酸，其特征在于含有包含由SEQID NO: 40表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列，和包含由SEQ ID NO: 42表示的核苷酸序列的核苷酸61-396的核苷酸序列。
45.根据权利要求44所述的多核苷酸，其特征在于含有包含由SEQID NO: 40表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列，和包含由SEQ ID NO: 42表示的核苷酸序列的核苷酸61-711的核苷酸序列。
46.根据权利要求43所述的多核苷酸，其特征在于含有(a) 一种多核苷酸，其选自下述的核苷酸序列al) 一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NO: 50表示的核苷酸序列的核苷酸58-420 ；a2) 一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NO a3) 一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NO a4) 一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NO a5) 一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NO a6) 一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NO -种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NO52表示的核苷酸序列的核苷酸58-420 54表示的核苷酸序列的核苷酸58-420 56表示的核苷酸序列的核苷酸58-420 58表示的核苷酸序列的核苷酸58-420 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-420 100表示的核苷酸序列的核苷酸58-420 ；a7)a8)多核苷酸的核苷酸序列，所述多核苷酸在严格条件下与包含选自al)至a7)的任一个核苷酸序列的互补核苷酸序列的多核苷酸杂交；和a9) 一种核苷酸序列，其包含在选自al)至a7)的任一个核苷酸序列中的一个至几个氨基酸的置换、删除或添加；和(b) 一种多核苷酸，其选自下述的核苷酸序列bl)一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NOb2)一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NOb3)一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NOb4)一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NOb5)一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NOb6)一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NOb7)一种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NO -种核苷酸序列，其包含由SEQ ID NO60表示的核苷酸序列的核苷酸61-399 62表示的核苷酸序列的核苷酸61-399 64表示的核苷酸序列的核苷酸61-399 66表示的核苷酸序列的核苷酸61-396 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-399 70表示的核苷酸序列的核苷酸61-399 102表示的核苷酸序列的核苷酸61-399 ； 104表示的核苷酸序列的核苷酸61-399 ；b8)b9)多核苷酸的核苷酸序列，所述多核苷酸在严格条件下与包含选自bl)至b8)的任一个核苷酸序列的互补核苷酸序列的多核苷酸杂交；和blO) 一种核苷酸序列，其包含在选自bl)至b8)的任一个核苷酸序列中的一个至几个核苷酸的置换、删除或添加。
47.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: 50表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID NO: 60表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。
48.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: 52表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID NO: 62表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。
49.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: M表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 64表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。
50.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: M表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 66表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。
51.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 56表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。
52.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: 58表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID NO: 70表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。
53.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID NO: 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。
54.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: 100表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。
55.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 102表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。
56.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-420的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 104表示的核苷酸序列的核苷酸61-399的核苷酸序列。
57.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 50表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 60表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。
58.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 52表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 62表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。
59.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: M表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 64表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。
60.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: M表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 66表示的核苷酸序列的核苷酸61-711的核苷酸序列。
61.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 56表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。
62.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 58表示的核苷酸序列的核苷酸58-1410的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 70表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。
63.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-1398的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID N0: 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。
64.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 100表示的核苷酸序列的核苷酸58-1398的核苷酸序列；和这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID N0: 68表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。
65.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-1398的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID NO: 102表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。
66.根据权利要求46所述的多核苷酸，其特征在于含有这样的多核苷酸，其含有包含由SEQ ID NO: 98表示的核苷酸序列的核苷酸58-1398的核苷酸序列；和这样的多核苷酸， 其含有包含由SEQ ID NO: 104表示的核苷酸序列的核苷酸61-714的核苷酸序列。
67.一种载体，其包含根据权利要求43-66所述的任一种多核苷酸。
68.一种转化的宿主细胞，其包含根据权利要求43-66所述的任一种多核苷酸。
69.一种转化的宿主细胞，其包含根据权利要求67所述的载体。
70.一种生产根据权利要求3、7和10-30中任一项所述的抗体的方法，所述方法包括 培养根据权利要求68或69所述的宿主细胞，并从得到的培养产物纯化抗体。
全文摘要
公开了用于治疗和/或预防骨代谢异常的药物组合物，其靶向由在破骨细胞中强烈表达的基因编码的蛋白。具体地，公开了含有抗体等的药物组合物，所述抗体特异性地识别人Siglec-15且具有抑制破骨细胞形成的活性。
文档编号A61P35/04GK102272306SQ201080004195
公开日2011年12月7日 申请日期2010年4月7日 优先权日2009年4月9日
发明者中山麻纪子, 昼间由晴, 泷泽刚, 津田英资 申请人:第一三共株式会社