包含昼夜节奏基因激活物和Sirt1基因激活物的协同组合的皮肤修复组合物的制作方法

专利名称：包含昼夜节奏基因激活物和Sirt1基因激活物的协同组合的皮肤修复组合物的制作方法
技术领域：
本发明在皮肤处理领域中。更具体而言，本发明涉及用于增强皮肤细胞中的损伤DNA修复的组合物和方法。
背景技术：
目前充分理解皮肤处于来自各种环境和生活方式因素的每日袭击下。这些因素的短列举包括UVA辐射、UVB辐射、污染、吸烟、饮食不良、休息不足和心理学应激。这种袭击表现为对皮肤细胞DNA和蛋白质的损伤。皮肤中的皱纹和褶皱在皮肤细胞损伤的较不严重后果中，而黑素瘤是更严重情况之一。DNA 损伤
某些环境和生活方式因素与皮肤细胞DNA和/或蛋白质直接相互作用，以引起损伤，某些因素间接引起损伤，并且某些因素可以引起这两种损伤。直接DNA损伤的一个例子将是当皮肤细胞DNA吸收来自光谱的UVB部分的光子时。光子的吸收可以引起DNA序列中的突变。例如，所有黑素瘤发生中的约8%是由于直接DNA突变。对皮肤细胞DNA和蛋白质的间接损伤的一个例子在紫外线光子进入皮肤且由生色团吸收时可见。在激发状态，生色团进入导致活性氧种类形成的反应内。例如，在人皮肤中，UVB暴露与过氧化氢的产生相关，而UVA与单线态氧的产生相关。如果皮肤不能通过中和活性种类维持稳态，那么活性种类将通过氧化损伤皮肤细胞DNA和蛋白质。对DNA和蛋白质的这种损伤称为氧化性应激且是皮肤衰老的主要原因。此外，所有黑素瘤发生中的约92 %是由于间接、氧化性DNA损伤。DNA损伤预防和谒制与修复比较
含DNA的皮肤细胞包括角化细胞干细胞和黑色素细胞。估计单次日光灼伤导致无数DNA诱变碱基修饰，例如受累细胞中的T-T (硫胺素-硫胺素)二聚物；8_氧代-7，8- 二氢-2’ -脱氧鸟苷(8-氧代-DG) ；06MeG (06-甲基鸟嘌呤)；环丁烷嘧啶二聚体(CPD);和6-4光产物(6-4PP)。这些突变触发在皮肤细胞内的各种应答，这可以导致细胞的进一步DNA损伤或凋亡的预防。例如，黑色素细胞中的黑色素产生已知通过UV辐射上调，作为防护措施。为了处理来自UV的威胁，黑色素通过下表皮中的黑色素细胞产生，并且在向外迁移的角化细胞的帮助下，它分布遍及上和下表面。在第一种情况下，黑色素看起来通过充当UV滤器阻止进一步的UV诱导DNA损伤，所述UV滤器限制穿透至下表皮的UV的量，黑色素细胞和角化细胞干细胞定位于所述下表皮。然而，作为第二线防御，通过诱导角化细胞的凋亡，黑色素含有由于UV辐射的DNA损伤。通过促进凋亡，受损DNA得以包含，所述受损DNA具有传递给子细胞的较少机会(参见例如，Yamaguchi等人，Melanin mediated apoptosisof epidermal cells damaged by ultraviolet radiation: factors influencing theincidence of skin cancer Arch Dermatol Res. 2008 Apr ；300 Suppl I: S43-S50)。除预防和含有DNA损伤外，健康角化细胞和黑色素细胞具有用于修复DNA损害的天然内部机制。这些机制不同于预防和遏制的那些机制，其涉及不同的(尽管有时重叠的)反应级联。本发明的组合物和方法最主要涉及DNA损伤的修复。存在细胞修复机制，以修复来自各种原因的DNA损害，不仅是我们已讨论的UV诱导的损伤。然而，DNA损害的修复花费时间。例如,如果不通过外来影响加速,通过UVB暴露形成的TT 二聚物和6-4PP损伤的修复可以分别花费高达48和8小时。由于UVA或UVB暴露、臭氧或吸烟和污染的8-氧代-dG和06MeG损害的修复可以花费高 达2小时。理想地，DNA损害在细胞分裂发生前修复。如果不如此，那么优选后果是凋亡。但如果DNA损伤碰巧不利地影响凋亡的上调，或如果突变变得未被检测，那么受损DNA可以传递给下一代。本发明的组合物和方法最主要涉及在细胞分裂发生前使DNA损伤的修复达到最大。细胞的预防矛口{I条复梢‘吿1|受.昼夜节春餅KCircadian Clock)控吿l|
在正常条件下，包括DNA表达和修复的细胞功能不在随机时间以等概率发生。相反，每种细胞具有约24小时(即昼夜节律)的内源周期(或钟)，并且细胞的活性受这种内源周期调节。不存在某些外部刺激，每个细胞将根据其内源性钟自由运行。然而，遍及全身的细胞的内源性钟是同步的。为了同步细胞与彼此和环境的活性，身体能够接受来自环境的暗示。最显著的环境暗示是日光的存在或不存在。因此，昼夜节奏周期由与太阳日的时期大致同时的亮和暗时期组成。目前理解昼夜节律允许细胞预期环境中可能影响细胞的改变，且以及时的方式适应那些改变。只要细胞昼夜节律的遗传机制适当起作用，细胞就在对于细胞活力和/或稳态最佳的时候以同步方式执行其多种功能中的每一种。例如，当日光接近时(但甚至是在皮肤处于来自UV的袭击下之前)，某些基因激活以产生保护细胞不受预期UV辐射损伤的蛋白质。随后，当日光减弱时，这些基因关闭。另一方面，昼夜节奏基因自身可以遭受通过环境因素的攻击。对于调节细胞的昼夜节律的一种或多种基因的损伤可以使细胞脱离与环境和其他细胞的同步。核心昼夜节春机制
转录因子是与特异性DNA序列结合，以控制遗传信息从DNA到RNA的转移的蛋白质。核心昼夜节奏机制或“细胞钟”包含参与异相、负和正反馈环的转录因子，这导致摆动基因转录。在哺乳动物的主要负反馈环中，CLOCK和BMALl转录因子的异二聚体激活perioi/(.per)和cryptochrome (cry)基因的转录。在人中，基因实际上是3种基因per\、per2和per >的家族，并且cry基因家族包括crjd和cry2。在其转录后，PER和CRY蛋白质迁移到细胞质内且形成PER/CRY复合物。翻译后调节产生故意延迟，这之后PER/CRY复合物再定位到细胞核内。在核中PER和CRY的浓度在昼夜节奏日间结束时达到峰值，在这时CRY蛋白质随后作用于抑制CL0CK/BMAL1异二聚体的转录活性。因此，CRY看起来关闭其自身转录。另一方面，在一个正反馈环中，在易位至核后，PER2看起来上调BMALl的转录，最终导致和c/y基因的转录。此外，CL0CK/BMAL1 二聚体看起来上调renrA α和rora基因。Rora激活BMALl转录，而rev-erb α抑制CLOCK和BMALl。所谓的“规范时钟基因” iclock、bmall、peri、per2、per >、cry I和c/y2)的峰活性是异相的,从而使得自我维持环产生，其具有约24小时的时期。细朐周期
细胞周期指在细胞中发生的系列事件，其导致细胞的分裂和复制。周期通常描述为需要约24小时完成的4个或5个序贯时期。在细胞周期的每个时期内，存在确保给定时期的所有必要过程在下一个时期起始前完成的检查点。在人细胞中，“第一个”时期是其中拷贝且合成细胞的DNA的合成(S)期。S期一般可以持续6-8小时。在持续3-4小时的G2期中，合成蛋白质且细胞大小加倍。在有丝分裂(M)过程中，核被膜分解， 从而使得遗传物质的每个拷贝可以分离至细胞的相反极。在围绕每组染色体的新核被膜形成后，细胞缩成2个(胞质分裂)。M期约I小时长。第四个和最长的时期(6 - 12小时)是G1，其特征在于RNA和蛋白质合成。从Gl期开始，细胞可再次进入S期或它可进入GO期。在GO中，细胞是静止的。GO可以持续数天或数年。干细胞可以从GO期返回，在Gl进入。分化细胞一般不从GO返回。此外，具有受损DNA的细胞可以进入G0，而不是凋亡。细胞周期检杳点抑制受损DNA传递
在细胞分裂过程中，检查点用于调节细胞通过细胞周期的进展。检查点阻止细胞进展至下一个时期，直至所有必需过程完成，包括受损DNA的任何修复。以这种方式，检查点确保受损或不完全DNA不传递给子细胞。存在几个检查点。G1/S检查点(限制检查点)中断细胞周期，从而使得可以做出进入静止期或不进入的“决定”。在G2/M检查点，如果检测到受损DNA，那么细胞周期停止，这并不罕见。复制后检查点涉及已在合成期中复制的受损DNA。受损DNA的复制触发细胞应答，这阻止细胞周期进展直至复制后修复过程完成。在人细胞中，复制后检查点通过延迟有丝分裂期的开始产生用于修复的时间。chk\基因施加对复制后检查点的控制，而P沿基因在触发G1/S和G2/M检查点处的控制机制中起重要作用。昼夜节春钟还调节细胞增殖
近年来，昼夜节奏钟在调节细胞增殖中的重要性已得到理解。例如
“昼夜节奏定时的破坏…已对细胞分裂的正常调节引起深远后果。”(Reddy等人，2005Circadian clocks: neural and peripheral pacemakers that impact upon the celldivision cycle. Mutation Research 574 76 - 91)
“对钟成分与细胞周期调节机构相互作用的机制的详细洞察来自近期的小鼠研究，例如，…在肝组织的去除(部分肝切除术)与随后的第一波有丝分裂之间的延迟取决于实施手术的日子的时间。”(Vallone 等人,2007 Start the clock! Circadian rhythms anddevelopment. Developmental Dynamics 236 142_ 155)
“从蓝细菌到高级脊椎动物，存在昼夜节奏钟的许多例子，所述昼夜节奏钟“门控”细胞周期的S-期和有丝分裂在夜间期间发生。”(Vallone等人)。[大概，DNA合成和有丝分裂在夜间发生以保护DNA免于有害的UV或来自日光的其他电离辐射]。因此，昼夜节奏钟对DNA和蛋白质合成、有丝分裂和胞质分裂、RNA合成和修复的细胞周期发挥拱形影响。因此，当环境因素干扰细胞的昼夜节奏机制时，细胞功能受损。我们假定当处理可以产生或再次同步细胞的昼夜节奏钟时，或当处理可以恢复昼夜节奏基因表达的“正常”水平时，那么细胞功能可以得到改善，细胞损伤可以以加速方式得到修复，或凋亡可以以更及时的方式发生。环境可以使昼夜节律脱离同步
干扰调节细胞的昼夜节律的一种或多种基因的试剂可以使细胞脱离与环境和其他细胞的同步。例如，在UV暴露后的数小时，可能多达20小时，人角化细胞中clock、bmall和pari基因表达的水平是显著降低的(参见图I)。“显著降低的”意指低于这些基因在其正常昼夜节奏周期中经历的最低表达，如上所述。此外，在UV暴露后，可描述为大致正弦式的基因表达的通常模式丧失。在图I中，水平线标记基因表达的通常平均水平，且在UV暴露 后约44小时时开始，显示关于那条线的一般昼夜节奏变动。相比之下，在UVB暴露后即刻，基因表达的水平下降到充分低于正常，并且不回到正常水平达约20小时。在该20小时过程中，基因表达的正常模式对于所有3种基因是丧失的。并且即使当基因表达的水平不回到接近正常水平时，需要约20小时至约44小时的时期用于表达的正常正弦式模式恢复。因此UV暴露实际上具有2种效应。一种效应是在昼夜节奏基因的表达水平中的显著减退，并且另一种是模式，也就是说，其表达的时机。在UV暴露后O至约44小时，DNA和蛋白质合成、有丝分裂和胞质分裂、RNA合成和修复以及程序性细胞死亡(凋亡)的时机都受损。当然，UV暴露在日间期间发生，特别是在关键的10 a.m.至2 p.m.窗口期间。如已指出的，在核中PER和CRY蛋白质的浓度在昼夜节奏日间结束时达到峰值，在这时CRY蛋白质作用于抑制CL0CK/BMAL1异二聚体的转录。达到关闭clock和Imall表达的临界浓度中的任何延迟将延长昼夜节奏周期。因此，UV暴露趋于延长昼夜节奏周期。这使细胞周期脱离与环境的同步。DNA复制和有丝分裂可能在对于细胞复制是最佳的晚上不发生。此外，昼夜节奏基因对细胞周期施加的门控影响可能是受损的，从而使得DNA损伤可未检测到或可不进行修复，并且可允许传递给子细胞。据报道Sirtuins延迟有丝分裂的发牛
Sirtuin I (也称为SIRTl或沉默信息调节物二直向同源物I)是响应应激调节代谢和细胞存活的酶。它与细胞寿命相关。编码SIRTl酶的I基因不是昼夜节奏基因。Chua等人已建议SIRTl通过停滞细胞周期促进复制性衰老(Chua等人(2005) Mammalian SIRTllimits replicative life span in response to chronic genotoxic stress. CellMetabolism 2，67_76)。US 2009-0082278 (整体引入本文作为参考)进一步描述这种基因和可能上调其的局部皮肤组合物。段落8-13写到
“申请人近期已发现新蛋白质在皮肤细胞机制中的牵涉，其在衰老过程和细胞保护中
有重要作用。”
“申请人已证明，SIRT蛋白质、并且更准确地SIRTl蛋白质在皮肤细胞中表达，并且其表达与皮肤细胞遇到的不同应激有关。他们已具体证明，应用不同试剂对该蛋白质表达的诱导允许细胞保护并且更好地帮助它们对抗应激和内在衰老。”
“SIRT蛋白质是Sirtuin家族的一部分，并且是在组蛋白脱乙酰化中起重要作用的NAD+依赖性核蛋白质。编码SIR蛋白质的SIR基因(沉默信息调节物)在1979年在酿酒酵母(S. cerevisiae)中首次描述(Rine J和 A I. ,Genetics 1979)。其后，证明 SIR2P 蛋白质在秀丽隐杆线虫(C. elegans)中的过量表达允许该生物体的寿命增加(Tissenbaum和AI. , Nature 2001)。该研究允许假设这些蛋白质与寿命有关。”
“SIRT1蛋白质是最佳表征的人sirtuin并且与众多转录调节物相互作用。人SIRTl蛋白质已描述为牵涉p53调节(Cheng H L和A I. Proc Natl Acad Sci USA. 2003),并且在更近期描述为细胞衰老的调节剂(Langley E和A I. ,EMBO J. 2002)。其它人SIRT蛋白质已得到发现(SIRT2、SIRT3、SIRT4-7)。人SIRT2蛋白质被研究得非常少；但一些研究已证明其在有丝分裂活性的控制中的作用(Dryden S C和A I. Mol Cell Bio. 2003)以及其在p53蛋白质的调节中的牵涉(Vaziri H和A I. ,Cell. 2001)。迄今,脱乙酰酶sirtuins被认为是在细胞死亡及其生命周期中起重要作用的酶家族(Porcu M.和Chiarugi A, TrendsPharmacol Sci. ,2005)。” “本发明[即US 2009-0082278]涉及美容或药物组合物，其包含在美容或药学上可接受的介质中的可能激活皮肤细胞中SIRT蛋白质合成的至少一种化合物。优选地，根据本发明，该化合物会激活特定类型的SIRT蛋白质，SIRTl蛋白质。”
“迄今，尚未描述充当皮肤细胞中SIRT家族蛋白质的合成的诱导物的化合物的应用”。本说明书做出下述论点迄今为止，包含与昼夜节奏基因激活物协同的Wril激活物的组合物的使用从未得到描述，即使在US2009-0082278中。就申请人所知，包含一种或多种非昼夜节奏、有丝分裂延迟试剂的，致力于人表皮角化细胞中CLOCK和PERl蛋白质的降低水平的局部组合物是未知的。用于DNA修复的局部(topical)组合物
用于应用于皮肤以促进细胞修复过程的局部产品是已知的。例如，此类产品可以包括用于改善天然细胞DNA修复的有效性的DNA修复酶、用于维持角化细胞水合的保湿成分、用于改善皮肤屏障功能的补水成分等等。虽然这些成分可以改善角化细胞修复自身的能力，但始终存在改善的空间。与现有技术对比，本发明提供了恢复皮肤细胞中未受损昼夜节奏蛋白质的水平的方法，和恢复昼夜节奏基因表达的正常模式的方法，所述方法与抑制受损DNA传递给子细胞的方法组合。发明目的
本发明的一个目的是提供局部组合物，当应用时，所述局部组合物以加速方式恢复皮肤细胞中昼夜节奏蛋白质的正常水平，且恢复昼夜节奏基因表达的正常模式。本发明的一个目的是提供通过上调clock和peri基因表达并且通过延迟皮肤细胞的有丝分裂修复光损伤和/或氧化损伤的皮肤的局部组合物。本发明的一个目的是提供减少增殖性受损皮肤细胞DNA的机会的局部组合物。本发明的一个目的是提供减少已通过环境攻击物特别是UV暴露而损伤的增殖性皮肤细胞DNA的机会的局部组合物。本发明的又一目的是提供用于处理皮肤的组合物，其包含至少一种角化细胞clock或基因激活物、至少一种非昼夜节奏有丝分裂延迟试剂和任选地至少一种DNA修复酶。发明概述
所有前述通过局部组合物实现，所述局部组合物包含上调皮肤细胞中的昼夜节奏基因表达的至少一种试剂和延迟皮肤细胞中的有丝分裂的至少一种非昼夜节奏试剂。已发现，包含上调(或激活)基因和pari基因、同时还增加SIRTl的水平的试剂的组合物协同促进细胞活力、细胞寿命，抑制由于环境攻击物的细胞损伤，改善DNA损伤的修复且协同减少增殖性受损皮肤细胞DNA的机会。任选地，该组合物包含一种或多种DNA修复酶。本发明的优选实施方案是表现上述效应的局部皮肤组合物。优选地，此类组合物包含一种或多种角化细胞和peri基因激活物，连同SIRTl或一种或多种激活物。优选地，此类组合物是易于使用，有效，美容上可接受的，化学、热力学和光稳定的，对于局部使用安全的，具有很少的副作用或无副作用，并且在个人护理市场中商业上可行的。附图描沭
图I显示在UV暴露后72小时，人角化细胞中clock、bmal\和基因表达的水平。
图2显示sirn激活物Orsirtine "和白藜芦醇对人角化细胞存活的作用。图3显示与sirt\激活物Orsirtine 和白藜芦醇组合的昼夜节奏基因激活物的作用。发明详沭
就申请人已知，包含与恢复正常昼夜节奏周期的昼夜节奏基因激活物的局部应用协同，促进细胞周期停滞的sirtl激活物的局部组合物的使用从未得到描述。定义
本文提及的所有百分率是重量百分率，除非另有说明。与基因有关，术语“激活”和“上调”或语源上相关的术语意指引起由该基因编码的一种或多种蛋白质的表达的成分。术语“钟基因(clock gene)”有时在文献中用于指所谓的“规范”昼夜节奏基因中的任何，包括clock、bmal I 'period和ciyptochrome基因。在本说明书中，“clock” (以斜体)总是指编码CLOCK蛋白质的基因。总的来说，基因、bmal I、periot/和cryp tochrome在本文中称为“昼夜节奏基因”。术语“DNA修复酶”意指能够修复DNA碱基诱变损伤的酶。此类酶通常通过其修复的DNA损伤类型分类。例如，BER (碱基切除修复)酶、核苷酸切除修复(NER)酶；错配修复(MMR)酶；DNA解旋酶；DNA聚合酶等等。例如，突变例如8-氧代-7，8- 二氢_2’_脱氧鸟苷可以通过OGGl(8-氧代鸟嘌呤糖基化酶修复。T-T 二聚体可以通过核苷酸切除修复酶光解酶修复。6-4光产物可以通过NER修复。06-甲基鸟嘌呤可以通过06-烷基鸟嘌呤转移酶(AGT)修复。就皮肤或皮肤细胞而言，“修复”意指角化细胞活力、强度和寿命是一般上改善的。修复的例子包括修复受损角化细胞DNA，且逆转由于UV光、吸烟或其他环境攻击物的细胞水合的丧失。“对于局部使用安全的”意指顺应管理美容产品的安全性的所有地区和当地规章。“美容上可接受的”意指组合物的外观、感觉和气味在消费者可接受性的限制内，如由本领域普通技术人员理解的。“化学稳定的”、“热力学稳定的”和“光稳定的”意指从制造到至少6个月(更优选3年)的时期，组合物保持美容上可接受的。“在个人护理市场中商业上可行的”意指组合物的制造和发送成本应不超过个人护理工业中已经历的。CLOCK 和 PERIODI 上调
本发明的组合物含有上调clock和/或pari角化细胞基因的至少一种试剂。总的来说，相对于最终组合物的总重量，这些试剂的建议浓度范围为约O. 000001 -约40%、优选约O. 000005 - 35%、更优选约O. 00001 - 25%。一般而言，这些范围可以理解为是有效量。“有效量”意指在环境袭击下在应用于人皮肤的局部组合物中，这些试剂的浓度足以使角化细胞存活比率改善至少5%。合适的clock或激活物可以以植物提取物、多肽、肽、氨基酸等的形式存在。特别优选的clock和/或per\基因激活物包含式(I)的肽
R1- (AA) n_ X1 _ S - T _ P _ X2 - (AA) p _ R2
其中(AA)n- X1 -S-T-P-X2- (AA)p 是(SEQ ID No. I)和
X1代表苏氨酸或丝氨酸，或等于不存在，
X2代表异亮氨酸或亮氨酸或脯氨酸或缬氨酸或丙氨酸或甘氨酸，或等于不存在，
AA代表任何氨基酸或其衍生物，并且η和P是在O - 4之间(包括O和4在内)的整
数，
R1代表游离或由保护基团取代的N末端氨基酸的伯胺官能，所述保护基团可以选自乙酰基、苯甲酰基、甲苯磺酰基或苄氧羰基，
R2代表由保护基团取代的C末端氨基酸的羧基官能的羟基，所述保护基团可以选自C1-C20烷基链或NH2、NHY或NYY基团，其中Y代表C1 - C4烷基链，
并且其中通式(I)的序列包含约3 - 13个氨基酸残基。通式(I)的序列可以含有氨基酸X1和X2由其他化学等价氨基酸的取代，其中氨基酸是丙氨酸(Α)、精氨酸(R)、天冬酰胺(N)、天冬氨酸(D)、半胱氨酸(C)、谷氨酸(Ε)、谷氨酰胺(Q)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、赖氨酸(K)、甲硫氨酸(Μ)、苯丙氨酸(F)、脯氨酸(P)、丝氨酸(S)、苏氨酸(Τ)、色氨酸(W)、酪氨酸(Y)和缬氨酸(V)。式I的更优选形式是如下的肽
(SEQ ID No. 2) Y - V-S -T -P - Y - N- NH2
Tyr-Val-Ser-Thr-Pro-Tyr-Asn_NH2
(SEQ ID NO. 3) NH2 - V -S -T -P -E - NH2
NH2-Val-Ser-Thr-Pro-Glu-NH2
S -T -P - NH2
Ser-Thr-Pro-NH2
(SEQ ID No. 4) NH2 - L -H -S -T- P - P - NH2
NH2-Leu-HiS-Ser-Thr-Pro-Pro-NH2
(SEQ ID No. 5) CH3NH -R-H -S -T -P -E - NH2
CH3-NH-Arg-His-Ser-Thr-Pro-Glu-NH2
(SEQ ID No. 6) CH3NH - H -S -T -P -E - CH3NH
CH3-NH-His-Ser-Thr-Pro-Gl u-CH3-ML更优选的是S-T-P-NH2肽、SEQ ID No. 4或其混合物。最优选的是在商品名Chronolux 下具有INCI名称三肽-32的由ISP-Vinscience制造的肽。相关申请US12/367，705的

图1、2和3以及描述这些图的正文证实Chronolux 改善针对UV诱导的应激的角化细胞存活的能力，尤其是当与至少一种DNA修复酶组合时。同时应用〃704和/7#1基因激活物将产生有益结果不是立即显而易见的。毕竟，在正常昼夜节律中，CLOCK和Periodl蛋白质的细胞浓度是异相的(out of phase)。然而，有益结果得以实现。可以暗示在环境袭击下皮肤细胞在CLOCK和Periodl蛋白质水平方面被如此耗尽，使得通过尽可能快速上调2种蛋白质来实现益处。SIRTUIN1 h 调
我们已意外地发现，当与角化细胞《siril激活物组合时,通过应用和角化细胞基因激活物实现的有益结果得以修饰，有时得以显著改善。SIRTl趋于诱导细胞周期停滞。考虑到昼夜节奏机制及其与细胞周期的调节相互作用的复杂性，根据现有技术可能未预期诱导细胞周期停滞同时恢复昼夜节奏蛋白质的正常水平将是有利的。尽管不希望受任何一种理论束缚，应当理解除通过昼夜节奏失察外，PERl在细胞周期中具有直接作用。例如，除其作为昼夜节奏周期的核心组分的作用外，据报道PERl能够激活ATM激酶途径，导致细胞周期停滞。ATM (突变的运 动失调性毛细血管扩张症)激酶是响应DNA双链断裂召募的核蛋白激酶。ATM激酶使CHKl和CHK2细胞周期检查点调节物磷酸化，其涉及细胞周期停滞且延迟进入有丝分裂内。由于某些环境应激，当PERl表达不足时，细胞周期停滞可能不发生或可能是延迟的。因此，在有丝分裂或胞质分裂前，可能存在不足够的时间以实现对受损DNA的修复。同时，PERl的表达减少已与凋亡减少相关联。因此，应死亡的受损细胞可能存活且分裂。因此，考虑到环境应激导致PERl水平中的异常减少(这导致不能停滞细胞周期)和减少的凋亡(这导致受损DNA的传播)，可以预期pari激活将校正该问题。然而，我们已观察到当Wril基因激活物与^704和/7#1基因激活物组合使用时，角化细胞活力得到显著改善。虽然不希望受任何一种理论束缚，但这个观察可以暗示peri自身的激活未能足够快速恢复PERl的水平，以在受损DNA可以传播至子细胞前实现修复。“SIRT1激活物”意指可能支持SIRTl蛋白质的内源产生的任何化合物，特别是涉及前体例如DNA或RNA的正面控制的分子。在皮肤细胞中可能激活SIRTl蛋白质的合成的这些化合物中，不同分子例如多酚已得到描述。更具体而言，可以提及反式-芪的衍生物(例如白藜芦醇、白皮杉醇(piceatannol))、查耳酮的衍生物(例如异甘草素、紫铆因)、和黄酮的衍生物(例如漆黄素(fistein)、木犀草素、槲皮素)。与至少一种DNA修复酶组合的白藜芦醇或白藜芦醇衍生物的功效已显示于相关申请US 11/837,658中。然而，由于其与皮肤中的肽的固有结构相似性，某些肽是优选Wril激活物。更优选的是一种或多种肽激活物和白藜芦醇的协同作用(关于这点更多在下文描述)。肽sirt\激活物
由于其与皮肤中的肽的固有结构相似性，肽是优选Wril激活物。在肽性质的化合物中，可以提及蛋白质片段、肽和多肽片段、肽以及通过肽键连接在一起的2个或更多个氨基酸的所有序列。在本发明的一个优选实施方案中，肽片段大小范围为3 - 50个氨基酸，更具体而言3 - 10个氨基酸。所有这些肽片段具有生物学活性。优选肽是
(SEQ ID No. 7) (AA)n- G-L-Y-D-N-L-E - (AA)n(AA)n- Gly - Leu - Tyr - Asp - Asn - Leu- Glu - (AA)n其中(AA)是任何特定氨基酸或其衍生物，并且n是在0 - 3之间(包括O和3在内)的整数。特别优选的肽是
(SEQ ID No. 8) G-L-Y-D-N- L- E Gly-Leu-Tyr-Asp-Asn-Leu-Gluο这种妝可作为可从ISP Vincience获得的Orsirtine GL (INCI名称:水(和)甘油(和)水稻(Oryza Sativa)(稻)提取物)获得。在本发明的组合物中，相对于最终组合物的总重量，肽SIRTl激活物以约O. 000001% - 20%的量、且优选以约O. 0001 - 5%的
量存在。白藜芦醇及其衍生物
白藜芦醇也称为3，5，4’ -三羟基芪，是存在于红葡萄、覆盆子、蓝莓和某些其他植物浆果或提取物中的多羟基取代的芪化合物，其具有通式
权利要求
1.皮肤护理组合物，其包含至少一种角化细胞昼夜节奏基因激活物和至少一种角化细胞sir (I基因激活物。
2.权利要求I的组合物，其中所述角化细胞昼夜节奏基因激活物包含具有3- 13个氨基酸残基且为式(I)的肽 (SEQ ID No. I) R1- (AA)n- X1-S-T-P-X2- (AA)p - R2，其中 X1代表苏氨酸、丝氨酸，或等于不存在； X2代表异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸、缬氨酸、丙氨酸、甘氨酸，或等于不存在； AA代表任何氨基酸或其衍生物； n和p是O - 4的整数； R1代表游离或由保护基团取代的N末端氨基酸的伯胺官能，所述保护基团可以选自乙酰基、苯甲酰基、甲苯磺酰基或苄氧羰基； R2代表可以由保护基团取代的C末端氨基酸的羧基官能的羟基，所述保护基团可以选自C1 - C20烷基链或NH2、NHY或NYY基团，其中Y代表C1 - C4烷基链； 并且其中所述式(I)序列可以含有氨基酸X1和X2由其他化学等价氨基酸的取代。
3.权利要求2的组合物，其中所述昼夜节奏基因激活物选自 (SEQ ID No. 2) Y - V-S -T -P - Y- N- NH2Tyr-Val-Ser-Thr-Pro-Tyr-Asn_NH2 (SEQ ID No. 3) NH2 - V -S -T -P -E - NH2NH2-Val-Ser-Thr-Pro-Glu-NH2 S -T -P - NH2Ser-Thr-Pro-NH2 (SEQ ID No. 4) NH2 - L -H -S -T- P - P - NH2NH2-Leu-HiS-Ser-Thr-Pro-Pro-NH2 (SEQ ID No. 5) CH3NH -R-H -S -T -P -E - NH2CH3-NH-Arg-His-Ser-Thr-Pro-Glu-NH2 (SEQ ID No. 6) CH3NH - H -S -T -P -E - CH3NHCH3-NH-His-Ser-Thr-Pro-Glu-CH3-NH2 及其混合物。
4.权利要求3的组合物，其中所述昼夜节奏基因激活物包含三肽-32。
5.权利要求I的组合物，其中所述角化细胞Sirtl基因激活物是一种或多种反式-芪或其衍生物、能够激活角化细胞Wrd基因的一种或多种肽、或其组合。
6.权利要求5的组合物，其包含白藜芦醇和下列式(II)的肽的协同组合 (SEQ ID No. 7) (AA)n- G-L-Y-D-N-L-E - (AA)n，其中 (AA)是任何特定氨基酸或其衍生物；和 n是0 - 3的整数。
7.权利要求6的组合物，其中所述肽是 (SEQ ID No. 8) G-L-Y-D-N- L- E Gly-Leu-Tyr-Asp-Asn-Leu-Gluo
8.皮肤护理组合物，其包含相对于最终组合物的总重量为0. 00001% - 25%的三肽-32 ； 相对于最终组合物的总重量为0. 0001%- 5%的(SEQ ID No. 8) G - L - Y - D - N-L- E ;和 相对于最终组合物的总重量为0. 001% -约95%的白藜芦醇。
9.根据权利要求8的组合物，其进一步包含相对于最终组合物的总重量为0.0001% -25%的至少一种DNA修复酶。
10.根据权利要求9的组合物，其中所述DNA修复酶选自碱基切除修复(BER)酶、核苷酸切除修复(NER)酶、DNA聚合酶、DNA解旋酶、错配修复(MMR)酶及其混合物。
11.根据权利要求9的组合物，其中所述DNA修复酶选自拟南芥{ArabidopsisThaliana )提取物、乳杆菌属^Lactobacillus')发酵物、微球菌属(.Micrococcus )裂解物、浮游生物提取物、双歧杆菌发酵裂解物及其混合物。
12.预防由于环境攻击物的对人角化细胞的损伤的方法，其包括 对处于角化细胞损伤的危险中的皮肤应用包含0.00001% - 25%的至少一种角化细胞昼夜节奏基因激活物的组合物；和 对处于角化细胞损伤的危险中的皮肤应用包含0. 0001% - 5%的至少一种角化细胞sirtl基因激活物的组合物。
13.权利要求12的方法，其中所述至少一种角化细胞昼夜节奏基因激活物和所述至少一种角化细胞sirtl基因激活物在连续应用的单独组合物中。
14.权利要求12的方法，其中所述至少一种角化细胞昼夜节奏基因激活物和所述至少一种角化细胞Wrd基因激活物是单一组合物的一部分，所述单一组合物是化学、热力学和光稳定的，对于局部使用安全的，具有很少的副作用或无副作用，并且在个人护理市场中商业上可行的。
15.修复由于环境攻击物的对人角化细胞的损伤的方法，其包括 对面部应用包含0.00001% - 25%的至少一种角化细胞昼夜节奏基因激活物的组合物；和 对面部应用包含0. 0001% - 5%的至少一种角化细胞sirtl基因激活物的组合物。
16.权利要求15的方法，其中所述昼夜节奏和基因激活物在上床30分钟内应用。
17.权利要求15的方法，其包括 清洁人皮肤的一部分； 随后将化妆水应用于皮肤的所述部分；和 随后应用所述昼夜节奏和sirt\基因激活物。
18.局部组合物,其为化学、热力学和光稳定的，且对于局部使用安全的,其包含式II和白藜芦醇或其衍生物的协同组合。
19.根据权利要求I的组合物在修复对于人角化细胞的UVB损伤中的应用。
20.根据权利要求18的组合物在修复对于人角化细胞的UVB损伤中的应用。
21.权利要求I的组合物，其进一步包括 包含多糖、丙烯酸聚合物或其混合物的至少一种水相结构试剂； 至少一种非离子型有机表面活性剂，其为烷氧基化醇；和至少一种保湿剂，其为C2_4烷撑二醇或甘 油。
全文摘要
用于增强皮肤细胞中受损DNA修复的组合物和方法。局部组合物包含上调皮肤细胞中的昼夜节奏基因表达的至少一种试剂和延迟皮肤细胞中的有丝分裂的至少一种非昼夜节奏试剂。优选地，此类组合物包含一种或多种角化细胞clock和per1基因激活物，连同SIRT1或一种或多种sirt1激活物。更优选地，sirt1激活物是特异性肽sirt1激活物和白藜芦醇的协同组合。优选地，此类组合物是易于使用，有效，美容上可接受的，化学、热力学和光稳定的，对于局部使用安全的，具有很少的副作用或无副作用，并且在个人护理市场中商业上可行的。
文档编号A61K8/64GK102802656SQ201080028201
公开日2012年11月28日 申请日期2010年6月9日 优先权日2009年6月23日
发明者D.H.梅斯, N.A.佩尔诺代, T.马莫纳, D.F.科林斯, L.斯卢特斯基, K.戈德格拉本, J.T.麦卡锡, E.佩尔里 申请人:Elc 管理有限责任公司