穿心莲内酯和黄连素组合物及其应用的制作方法

专利名称：穿心莲内酯和黄连素组合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种药用组合物及其应用，特别涉及穿心莲内酯和黄连素组合物及其应用。
背景技术：
穿心莲内酯(Andrographolide)是中药穿心莲中的主要有效成分，广泛用于治疗各种炎症性疾病，包括风湿性关节炎、咽喉炎、腹泻、细菌和病毒感染等。近30年来，穿心莲内酯及其3种衍生物穿琥宁、炎琥宁和莲必治已在中国广泛应用于临床，这些药物能够减轻炎症、发热、细菌和病毒感染性疾病的临床症状。因其来源于天然中药且疗效好，这些药物通常称为“绿色抗生素”。虽然穿心莲内酯已被广泛用于临床，但试验证明它并无直接杀菌效果(Singha et al. , Fitoterapia 2003, 74, 692-694; Li et al. , China J. Chinese Materia Medica 2006，12，1015-1017; Xia et al. , J. Immunol. 2004，173，4207-4017)。Li 发现穿心莲内酯衍生物(莲必治)虽不能直接抑制绿脓肝菌(PAOl)生长，但能明显抑制它的QS系统 (China J. Chinese Materia Medica 2006， 12， 1015-
1017)。莲必治12. 5 mg/mL (34 mM)对培养的PAOl生长无影响，但显著抑制绿脓菌素的产生及蛋白水解酶和弹性蛋白酶的活性。该作用机理能够部分解释其抗菌作用。穿心莲内酯解热抗炎作用在炎症反应中，粘附分子表达上调及内皮-白细胞粘附增加是炎症反应发展的重要步骤。在研究穿心莲内酯对ICAM-I表达影响的实验中发现穿心莲内酯(0.6-16. 7 mg/ml)可剂量依赖性抑制由TNF-α引起的ICAM-1表达上调。Shen 等(Br. J. Pharmacol. 2002, 135，399-406)阐明了穿心莲内酯通过鼠嗜中性粒细胞抑制炎症反应的机理是通过调节PKC依赖途径阻止或至少部分阻止活性氧(ROS)的产生，使内酯下调 Mac-I 的高表达。iTsai 等(Euro. J. Pharmacol. 2004, 498，45-52)研究发现穿心莲内酯抗炎作用的机理可能是通过掺入ERK1/2和PII/Akt信号通路的细胞分裂抑制作用。Xia等(J. Immunol. 2004, 173，4207-4217)的研究发现穿心莲内酯抑制细胞核中心转录因子(NF-κ B)的活性。同时 Hidalgo 等(Br. J. Pharmacol. 2005, 144，680-686) 研究发现穿心莲内酯通过抑制NF-K B与DNA连接发挥抗炎作用，进而降低前炎症蛋白如 C0X-2的表达。穿心莲内酯的降血糖作用穿心莲内酯能显著降低糖尿病大鼠的血糖水平。 Zhang和Frei (ASEB J. 2001, 15，M23-2432)在正常和STZ诱导的糖尿病大鼠中研究了穿心莲乙醇提取物的治疗作用，发现口服穿心莲乙醇提取物可呈剂量依赖地降低糖尿病大鼠的血糖水平，当口服剂量达400 mg/kg时，降糖效果与二甲双胍(500 mg/kg，口服)相当，但对正常大鼠的血糖水平无影响。在长期实验中，穿心莲乙醇提取物400 mg/kg或二甲双胍500 mg/kg，口服，每天两次，连续给药14天，发现穿心莲或二甲双胍治疗组糖尿病大鼠较对照组体重明显增加， 治疗组进食和饮水量减少，对正常大鼠无影响。糖尿病大鼠间胰岛素水平无明显差异，说明穿心莲的降糖作用与胰岛素无关。穿心莲治疗组肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性明显降低，推测穿心莲降糖作用可能与增加了葡萄糖代谢有关。研究还发现穿心莲乙醇提取物除有降糖作用外，还具有抗氧化应激效应，可增加糖尿病大鼠肝和肾组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量，减少脂质过氧化反应产物 (MDA)0氧化应激是糖尿病并发症的重要致病因素，因此推断穿心莲可降低糖尿病并发症的发生和组织损伤程度。同样,Rao (Iranian J. Pharmacol. Ther. 2006, 5，47-45)在 alloxan诱导的糖尿病大鼠模型中也证实穿心莲氯仿提取物(300 mg/kg, 口服)具有降血糖作用和肾保护活性，能有效防止蛋白尿、尿毒症的发生。Yu等(Planta Med. 2003，69， 1075-1079)报道穿心莲内酯(1. 5 mg/kg, 口服)对正常大鼠静脉葡萄糖激发实验和STZ诱导的糖尿病大鼠血糖升高有明显抑制作用。体外比目鱼肌葡萄糖摄取实验显示穿心莲内酯能增加放射性葡萄糖的摄取，并进一步证实这可能与穿心莲内酯增加了 4型葡萄糖转运载体(GLUT4)基因表达有关。葡萄糖转运载体是葡萄糖穿过细胞膜转运的介导者，前期研究已发现糖尿病患者GLUT4基因表达减少(Sivitz ffi, et al. Nature 1989，340，72-74)。穿心莲内酯具有抗肿瘤作用Nanduri等(美国专利US 6486196，2002; Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004, 14，4711-4717)研究表明，8，17-环氧化穿心莲内酯保持了内酯的细胞毒性，在此基础上进一步得到的酯化衍生物使活性有相当大的提高。体外实验 IC50范围在5-15 μΜ的穿心莲内酯对多种类型的人肿瘤细胞有抑制活性(Satyanarayana et al. , BMC Cancer 2003，4，26-34)。Rajagopa 等(J. Exp. Ther. Oncol. 2003，3， 147-158)研究表明，穿心莲内酯能抑制多种肿瘤细胞系的增殖。对肿瘤细胞的直接作用是通过诱导细胞周期抑制蛋白P27和降低CDK4的表达使细胞周期阻滞于^l-G1期，通过促进淋巴细胞的增殖和IL-2分泌起免疫刺激作用。穿心莲内酯也增加TNF- α的产生和⑶4标志物的表达导致淋巴细胞对肿瘤细胞的毒性，这可能是其抗肿瘤活性的间接原因。体内试验的结果表明，穿心莲内酯具有抗黑色素瘤(B16F0)和结肠癌(ΗΤ-29) 移植模型的作用(Rajagopal et al. , J. Exp. Ther. Oncol. 2003，3，147-158)。 Satyanarayana ^ (Satyanarayana et al. , BMC Cancer 2003, 4, 26-34) T^iliffl 中空纤维系统荷MCF-7乳腺癌小鼠中穿心莲内酯的抗肿瘤活性。在剂量为100 mg/kg时， 穿心莲内酯可抑制大约50 %的肿瘤生长。穿心莲内酯的抗癌活性也在HT-四人结肠癌裸鼠模型和B16F0骨髓瘤小鼠模型中得到了检验。口服剂量为200 mg/kg，每天两次，穿心莲内酯对骨髓瘤和结肠癌的生长抑制率分别达到39%和52%。黄连素(Berberine)是从毛莨科黄连(coptis Chinese)根状茎中提取的一种季胺类化合物，属于异喹啉生物碱，在中国和印度作为消化道疾病用药已有3000余年的历史，主要用于肠道炎症伴发热。其他的药理学和生物学特性有抗菌(Severina I. I. et al. , Iubmb Life 2001，52，321-324)、抗心律失常(Li B. X，et al. , Acta. Pharmacol. Sin. 2001, 22，125-131)、抗高血压(Liu J. C et al. , Pharmacology 99, 59，283-289)、抗肿瘤(Iizuka N. et al. , Int. J. Cancer. 2002, 99，286-291)等特性。 黄连素与抗菌作用黄连素对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌均有抑制作用，低浓度抑菌而高浓度杀菌。对于葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、霍乱弧菌、炭疽杆菌及除宋内氏以外的痢疾杆菌均有较强的抗菌作用(Hahn et al.，Antibiorirb 1967，3，577-580)。匡铁吉等(中国中药杂志，2001，26，867-868)研究了黄连素对结核分支杆菌的作用，实验结果表明100 μ g/mL的黄连素对结核菌标准株作用M h，能够杀死几乎所有结核杆菌；60 μ g/mL黄连素能杀灭标准株菌群中的大部分菌细胞，部分存活的细胞在匡氏琼脂斜面上的生长延迟1周以上；30 μ g/mL黄连素对所试结核菌标准株无杀灭作用，但对早期生长有弱抑制作用；3 μ g/mL黄连素对结核菌H37PV不但没有抑制作用，还显示出较弱的生长促进作用。在体内抗菌筛选中，黄连素同样显示了较好的抗菌作用，Dong等(Life Sciences 2003，73，1401-1412)研究了 13代烷基小蘖碱对LPS刺激巨噬细胞的C0X-2、TNF- α以及IL-12表达的影响。结果显示，13代烷基小蘖碱能够降低LPS刺激巨噬细胞的亚硝酸盐的产生，PGE2有明显的下降，IL-12产生明显上升；但是iN0S、C0X-2和TNF-α没有太大变化。这些充分说明，黄连素能够介导IL-12的产生，从而产生抗感染和抗肿瘤的作用。黄连素还能抑制微生物的糖代谢，使丙酮酸的氧化过程受到强烈抑制，同时还发现维生素和组氨酸能拮抗黄连素的作用，故认为黄连素抗菌是干扰了细菌对这些物质的利用，同时对细菌蛋白的合成也有抑制作用。黄连素与抗炎作用口服黄连素30、60 mg/kg，可使乙酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加分别被抑制 10. 6%、；35· 5% (Wang et al. , Modern Pharmacology 1997，303)； 腹腔注射黄连素 2 mg/kg 抑制率达 57% (Ivanovska et al.，Int. J. Immunopharmaco 1, 1996，18，553)。黄连素具有抗实验性胃溃疡作用，小鼠灌胃黄连素40、80 mg/kg，可对抗蓖麻油及番泻叶引起的腹泻，但对正常小鼠胃肠墨汁推进功能未有明显影响(Wang et al. , Modern Pharmacology 1997，303)。研究发现黄连素对正常兔小肠的钠离子吸收和分泌没有作用，但能拮抗实验性促离子分泌介质cAMP、cGMP和Ca2+的作用(Guandalini et al. , J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 1987，6，953)，对此有人认为可能与黄连素的抗胆碱作用有关(Tsai et al. , Arch. Int. Pharmacodyn. Ther. 1991，310，116)， 也有人认为这主要是黄连素的局部抗炎和抑制水钠分泌作用所致。近来Rabbani重点研究了 PGE2在弧菌导致的病人腹泻病理过程中的作用和黄连素的治疗效果。结果发现在急性弧菌腹泻的开始阶段空肠PGE2浓度明显增加且PGE2浓度与粪容积和腹泻的持续时间密切相关，口服200 mg黄连素后粪容积减少30% 50%以上而未发现任何副作用，和对照药消炎痛的作用一致(Tanaka et al.，Planta. Med. 1993，59，200)，提示黄连素的抗腹泻作用可能与抑制肠道PGE2的作用有关。上述实验表明，黄连素抑制实验性动物的急慢性炎症，抑制腹腔和皮肤毛细血管通透性的增加，对抗肠道粘膜细胞分泌亢进，对化学因子导致胃粘膜损伤和实验性胃溃疡有保护作用。黄连素与抗肿瘤作用
(1) 一些学者研究认为，黄连素可通过影响某些与肿瘤发生、发展密切相关的酶而发挥其抗肿瘤作用，这些酶包括针对拓扑异构酶(top I、top II) (Kang et al. , Mol. Pharmacol. 2002, 61，879-884)，抑制环氧化酶-2 (C0X-2) (Fukuda et al. , J. Ethnopharmaco 1. 1999，66，227-233)，针对端粒酶(Wu et al.，Int. J. Cancer. 1999， 81，923-拟9)，针对 N-乙酰转移酶(NAT) (Lin et al.，Am. J. Chin. Med. 1999，27， 265-275; Chung et al. , Am. J. Chin. Med. 2000，28，227-238; Chung et al. , Food Chem. Toxicol. 1999， 37， 319—326)。
(2)诱导恶性细胞分化癌分化诱导治疗是在不杀伤肿瘤细胞的基础上，诱导其分化为正常或接近正常细胞。因此避免了一般化疗药物对于肿瘤细胞及正常细胞的“双刃剑”杀伤作用，成为一种替代或补充传统细胞杀伤治疗的新方法。Chang等(Chang et al., J. Formos. Med. Assoc. 1991，90, 10-14)发现黄连素作用 NT2/D1 细胞 M h 后，细胞形态开始发生变化，最终分化成为神经元样细胞，这一过程甚至远快于维甲酸诱导的分化并且RT-PCR显示黄连素诱导NT2-D1细胞分化的同时，可显著降低原癌基因c-ki-ras-mRNA 的表达。马伟等(中药新药与临床药理，1998，9，90-91)认为黄连素抑制MGC-803细胞软琼脂集落的形成、降低其代谢水平及细胞成瘤能力，可能也与其有一定程度的促进细胞分化作用有关。鉴于黄连素能明显抑制肿瘤细胞生长、诱导恶性细胞分化，毒性却很小，因此通过黄连素诱导肿瘤细胞分化而发挥抗癌作用将成为肿瘤治疗中的又一条新思路。(3)抑制转录激活蛋白AP-I近年来，许多研究小组发现转录激活蛋白AP-I与细胞的转化和肿瘤发生密切相关，高水平地活化AP-I对于保持肿瘤的型别有重要作用。AP-I 活性被抑制，细胞的转化也被抑制。Fukuda等(Planta. Med. 1999，65，381-383)发现黄连素降低肝癌H印G2细胞中AP-I活性呈剂量、时间依赖性，0.3 ymol/L黄连素即可降低AP-I活性，10 μ mol/L的黄连素作用48 h即可完全抑制AP-I活性。黄连素降低AP-I 活性还可使与肿瘤转移相关的尿激酶型纤溶酶原激活物(UPA)表达受抑，从而抑制肿瘤转移(Mitani et al.，Cancer Lett. 2001, 165，35-42)。因此，黄连素可通过抑制 AP-1 的活性而抑制细胞转化和肿瘤转移，发挥抗肿瘤作用。(4)大量的研究显示，肿瘤细胞中IL-6分泌水平的降低可改善肿瘤引起的恶病质状况，其机制尚不明确。Iizuka 等(Cancer Lett. 2000, 158，35-41; Iizuka et al. , Int. J. Cancer. 2002, 99，沘6_四1)研究了黄连素对食道YES-2细胞及结肠癌 colon26/colon20细胞的体内外作用。结果显示体内实验中黄连素处理组小鼠瘤块大小与未用药物组并无明显差异，但黄连素处理组的小鼠营养状况明显优于未用药组二8天时黄连素组的小鼠平均体质量比未用药组高出16%，而未用药组小鼠恶病质状况严重。检测肿瘤组织及小鼠血清中IL-6表达发现，黄连素组较未用药组IL-6水平分别下降52. 5%及50% ； 体外实验也显示，黄连素抑制上述两种细胞的IL-6水平，并呈剂量依赖性。因此，可否利用黄连素下调肿瘤细胞分泌IL-6的能力来改善患者恶病质状况值得进一步研究。黄连素与降糖作用
(1)对胰岛素敏感性及其分泌的影响肿瘤坏死因子α是一种有多种生物活性的细胞因子，可干扰周围组织胰岛素作用而导致胰岛素抵抗(Hotamisligil et al. , Int. J. Obes. Relat. Metab. Disord. 2000, 24，23)。游离脂肪酸(FFA)浓度增高可抑制葡萄糖刺激的胰岛素分泌以及抑制胰岛素在肌肉和肝脏中的生物效应(Arner et al. , Diabetes. Metab. Res. Rev. 2002, 18，55)。实验显示黄连素组和对照二甲双胍组都可使胰岛素抵抗大鼠的TNF-α、血清FFA水平明显降低，两组之间无明显差异，提示黄连素可以通过抑制FFA和TNF-α的过度分泌而预防胰岛素抵抗的发生，同时与二甲双胍一样能够使周围组织胰岛素敏感性增强。黄连素可使胰岛素抵抗大鼠的胰岛素敏感指数ISI (ISI为空腹血糖和空腹胰岛素乘积的倒数取自然对数)、体重和内脏脂肪细胞面积数值都明显降低(P < 0.05)，提示黄连素有增加胰岛素生物活性和胰岛素敏感性作用(Leng et al. , Acta. Phar. Macologica. Sinica. 2004， 25， 496)。
(2)对葡萄糖吸收的影响Cac0-2细胞系来源于人结肠癌细胞，Caco-2细胞模型可模拟小肠上皮细胞口服药物的生化屏障，因此广泛应用于药物在小肠吸收的评价和转运机制研究Gumoto et al. , J. Pharmacol. Exp. Ther. 1999，289，149)。用 Caco-2 细胞模型对黄连素的吸收和对肠道葡萄糖吸收酶活性影响的研究表明黄连素在肠道内几乎不吸收，但能有效抑制小肠上皮细胞上二糖酶(主要是蔗糖酶、麦芽糖酶活力，对葡萄糖在 Caco-2细胞上的摄取也有一定抑制作用。提示黄连素的降血糖作用可能并不是在它吸收之后产生，而是象阿卡波糖等α -糖苷酶抑制剂一样在肠道发挥作用，主要是通过抑制蔗糖酶、麦芽糖酶等二糖酶活力，减少葡萄糖吸收，降低餐后高血糖发挥其降糖作用(Pan et al., Journal of Pharmaceutical 2003， 38， 911)。综上所述，中药有效成分穿心莲内酯和黄连素的单独应用已有很长的历史，具有良好的安全性。研究表明单独使用时穿心莲内酯及其衍生物和盐可通过独特的作用机理发挥抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、护肝利胆、降血糖等多种功效；黄连素及其衍生物和盐具有较强的抗菌、抗炎、抗肿瘤、降糖等作用。但是未见有穿心莲内酯和黄连素两者联用的报导。

发明内容
本发明的一个目的在于提供一种穿心莲内酯和黄连素组合物。本发明的另一个目的在于提供该组合物在抗菌、抗炎、抗肿瘤和降血糖等方面的应用。穿心莲内酯和黄连素组合物，由穿心莲内酯及其衍生物及其药学上可接受的盐、 黄连素及其衍生物及其药学上可接受的盐，以及可接受的药用辅料组成。优选的，穿心莲内酯或其衍生物和其药学上可接受的盐与黄连素或其衍生物和其药学上可接受的盐之间的摩尔比为1:10 10 :1。优选的，穿心莲内酯或其衍生物和其药学上可接受的盐与黄连素或其衍生物和其药学上可接受的盐之间的摩尔比为1 :2 2 :1。优选的，穿心莲内酯或其衍生物和其药学上可接受的盐与黄连素或其衍生物和其药学上可接受的盐之间的摩尔比为1:1。穿心莲内酯衍生物为穿心莲内酯的有机或无机酸根取代物、烷基取代物、芳基取代物或杂芳基取代物。穿心莲内酯的取代物包括穿心莲内酯的乙酸根、丙酸根、丁酸根、丙二酸根、丙酮酸根、肉桂酸根、琥珀酸根、柠檬酸根、乳酸根、葡萄糖酸根、硫辛酸根、N-乙酰半胱氨酸根、 氨基酸根、苯甲酸根、硫酸根、硝酸根、磷酸根取代物。药学上可接受的黄连素盐包括黄连素的盐酸盐、硫酸盐、鞣酸盐。本发明的组合物，穿心莲内酯和黄连素之间具有协同作用，其效果明显好于单独使用穿心莲内酯或黄连素及其衍生物和盐，可以在保证疗效的前提下，减少穿心莲内酯或黄连素及其衍生物和盐的用量，有助于减少副作用。本发明的组合物不仅能抑制革兰氏阴性菌绿脓杆菌的QS系统，同时还能抑制和破坏绿脓杆菌生物被膜的形成，具有良好的抗菌、抗炎作用。本发明的组合物，可抑制在肿瘤的发生、发展、血管形成以及转移等过程中发挥重要作用的NF- κ B的表达，从而避免癌症耐药性的产生，在抗肿瘤方面具有良好的辅助作用。本发明的组合物，具有很好的降血糖作用。


图1是本发明组合物的抗菌试验结果图。图2是本发明组合物抑制H2A诱导的RIN-m细胞凋亡试验结果图。
具体实施例方式穿心莲内酯和黄连素组合物，由穿心莲内酯及其衍生物及其药学上可接受的盐、 黄连素及其衍生物及其药学上可接受的盐，以及可接受的药用辅料组成。优选的，穿心莲内酯或其衍生物和其药学上可接受的盐与黄连素或其衍生物和其药学上可接受的盐之间的摩尔比为1 :10 10 :1。优选的，穿心莲内酯或其衍生物和其药学上可接受的盐与黄连素或其衍生物和其药学上可接受的盐之间的摩尔比为1 :2 2 :1。优选的，穿心莲内酯或其衍生物和其药学上可接受的盐与黄连素或其衍生物和其药学上可接受的盐之间的摩尔比为1:1。穿心莲内酯衍生物为穿心莲内酯的有机或无机酸根取代物、烷基取代物、芳基取代物或杂芳基取代物。穿心莲内酯的取代物包括穿心莲内酯的乙酸根、丙酸根、丁酸根、丙二酸根、丙酮酸根、肉桂酸根、琥珀酸根、柠檬酸根、乳酸根、葡萄糖酸根、硫辛酸根、N-乙酰半胱氨酸根、 氨基酸根、苯甲酸根、硫酸根、硝酸根、磷酸根取代物。药学上可接受的黄连素盐包括黄连素的盐酸盐、硫酸盐、鞣酸盐。下面结合实施例，进一步说明本发明。实施例1
将穿心莲内酯(350 g，l mol)加入到黄连素盐酸盐(4075 g，10 mol)中，充分混合均勻，加药用淀粉800 g等，压制成5000片，即得穿心莲内酯组合物片剂。实施例2
将穿心莲内酯(350 g，l mol)加入到黄连素盐酸盐(815 g，2 mol)中，充分混合均勻， 加入200 g蒸馏水和400 g蔗糖粉与糊精的混合物(蔗糖糊精=3:1)，拌合成软材，挤压过筛(12目 14目)制颗粒，60°C干燥，整粒，按每袋相当于穿心莲内酯组合物4 g分装于塑料袋中，密封，即得穿心莲内酯组合物颗粒剂。实施例3
将14-去氧穿心莲内酯(350 g, 1 mol)加入到黄连素盐酸盐(407. 5 g，l mol)中，充分混合均勻，过80目筛，与淀粉150 g混勻，加入10%淀粉浆100 mL，拌和制成软材，压过 80 100目筛制粒，于60°C 70°C干燥，整粒，加入硬脂酸镁0. 2 g，混合均勻，装胶囊1000 个，即得穿心莲内酯组合物胶囊剂。实施例4
将穿心莲内酯琥珀酸半酯钠钾盐(800 g，2 mol)加入到黄连素盐酸盐(407. 5 g，1mol)中，充分混合均勻，用1000 ml无菌蒸馏水溶解，加无菌蒸馏水至2000 ml，灌封包装， 即得每支10 ml的穿心莲内酯组合物口服液200支。实施例5
将穿心莲内酯三马来酸半酯钠盐(4000 g, 10 mol)加入到黄连素硫酸盐(384 g，0. 5 mol)中，过滤，灌封，在100°C下流动蒸汽灭菌30分钟，质量检查，包装，即得穿心莲内酯组合物注射液。实施例6
将14-硫辛酰基穿心莲内酯(538 g, 1 mol)加入到黄连素硫酸盐(384 g，0. 5 mol) 中，充分混合均勻，过80目筛，与淀粉150 g混勻，加入10%淀粉浆100 mL，拌和制成软材， 压过80 100目筛制粒，于60°C 70°C干燥，整粒，加入硬脂酸镁0.2 g，混合均勻，装胶囊 1000个，即得穿心莲内酯组合物胶囊剂。抗菌试验
以实施例1所得穿心莲内酯组合物片剂进行抗菌试验
临床上红霉素(Erythromycin)和环丙沙星(Ciprofloxacin)是治疗绿脓杆菌感染较为有效的药物。如前所述，天然Andro和红霉素类药物及环丙沙星有协同作用。因此， 对悬浮的绿脓杆菌用本发明穿心莲内酯(Andro )和黄连素(Ber )药物组合物(Andro+Ber ) 进行了联合抗菌实验。分别将红霉素(Ery)、环丙沙星(Cip)、穿心莲内酯(Andro)、黄连素(Ber)、红霉素和环丙沙星药物组合物(Ery+Cip)、穿心莲内酯和黄连素药物组合物 (Andro+Ber)以终浓度1 mmol/L加入到含绿脓杆菌的LB液体培养基的96孔板中，37°C， 培养24 h，595 nm测定吸光度。结果如图1所示Andro+Ber联合使用时的效果明显强于 Andro，与Ber相比，其抗菌效果也有显著提高，整体效果与环丙沙星和红霉素合用时效果相当。抑制H2A诱导的RIN-m细胞凋亡试验
以实施例2所得穿心莲内酯组合物颗粒剂进行抑制H2A诱导的RIN-m细胞凋亡实验 在体外RIN-m细胞中考察了本发明穿心莲内酯和黄连素药物组合物(Andro+Ber)的抑制凋亡作用。细胞以每孔IO5个/ml的密度接种于96孔培养板中，37°C，5% C02，饱和湿度条件下培养过夜使细胞完全贴壁。培养液中加入H2A (终浓度500 μΜ)孵育对小时后， RIN-m细胞活性减低到39. 3 士 3. 33%，其结果如图2所示。实验组在用H2O2处理前60 min，先用穿心莲内酯(Andro)、黄连素(Ber)、穿心莲内酯和黄连素药物组合物(Andro+Ber),浓度分别为0. 01,0. 1和1 μΜ分别预保护RIN-m 细胞30 min，显示有明显保护作用，其中1 μΜ浓度下经M h培养后细胞活性情况为穿心莲内酯(Andro) 59. 7士9. 99%、黄连素(Ber) 59. 7士5. 2%、穿心莲内酯和黄连素药物组合物 (Andro+Ber) 62. 2 + 4. 8%。对链尿佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠的血糖的调节作用
以实施例6所得穿心莲内酯组合物胶囊剂进行抑制H2A诱导的RIN-m细胞凋亡实验
1)SD远交群大鼠每组4只，体重180 220 g，禁食16 hrs后腹腔注射链尿佐菌素 (STZ，购自 sigma 公司)60 mg/kg ；
2)72 hrs后剪尾采血，采血之前禁食16 hrs，用血糖仪(强生公司)测定血糖；
3)实验组动物根据分组分别给予Ber、Andr0、Andr0+Ber和格列苯脲(Gli)治疗，以
权利要求
1.穿心莲内酯和黄连素组合物，由穿心莲内酯及其衍生物及其药学上可接受的盐、黄连素及其衍生物及其药学上可接受的盐，以及可接受的药用辅料组成。
2.根据权利要求1所述的穿心莲内酯和黄连素组合物，其特征在于穿心莲内酯或其衍生物和其药学上可接受的盐与黄连素或其衍生物和其药学上可接受的盐之间的摩尔比为 1 :10 10 :1ο
3.根据权利要求2所述的穿心莲内酯和黄连素组合物，其特征在于穿心莲内酯或其衍生物和其药学上可接受的盐与黄连素或其衍生物和其药学上可接受的盐之间的摩尔比为 1 :2 2 :1。
4.根据权利要求3所述的穿心莲内酯和黄连素组合物，其特征在于穿心莲内酯或其衍生物和其药学上可接受的盐与黄连素或其衍生物和其药学上可接受的盐之间的摩尔比为 1 =Io
5.根据权利要求1 4任意一项所述的穿心莲内酯和黄连素组合物，其特征在于穿心莲内酯衍生物为穿心莲内酯的有机或无机酸根取代物、烷基取代物、芳基取代物或杂芳基取代物。
6.根据权利要求5所述的穿心莲内酯和黄连素组合物，其特征在于穿心莲内酯的取代物包括穿心莲内酯的乙酸根、丙酸根、丁酸根、丙二酸根、丙酮酸根、肉桂酸根、琥珀酸根、 柠檬酸根、乳酸根、葡萄糖酸根、硫辛酸根、N-乙酰半胱氨酸根、氨基酸根、苯甲酸根、硫酸根、硝酸根、磷酸根取代物。
7.根据权利要求1 4任意一项所述的穿心莲内酯和黄连素组合物，其特征在于药学上可接受的黄连素盐包括黄连素的盐酸盐、硫酸盐、鞣酸盐。
8.权利要求1 7任意一项权利要求所述的穿心莲内酯和黄连素组合物在抗菌、抗炎方面的应用。
9.权利要求1 7任意一项权利要求所述的穿心莲内酯和黄连素组合物在抗肿瘤方面的应用。
10.权利要求1 7任意一项权利要求所述的穿心莲内酯和黄连素组合物在降血糖方面的应用。
全文摘要
本发明公开了一种药用组合物，由穿心莲内酯及其衍生物及其药学上可接受的盐、黄连素及其衍生物及其药学上可接受的盐，以及可接受的药用辅料组成。本发明的组合物效果好于穿心莲内酯或黄连素单独使用，具有良好的抗菌、抗炎、抗肿瘤和降血糖作用。
文档编号A61P3/10GK102151260SQ20111005899
公开日2011年8月17日 申请日期2011年3月12日 优先权日2011年3月12日
发明者任俊兰, 徐立朋, 杜恩明, 王玉强, 程潜 申请人:广东华南新药创制中心, 暨南大学