专利名称：口炎清新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药制剂技术领域，尤其是口炎清中药制剂的新用途。
背景技术：
口炎清是国家著名的中成药，主要成分天冬、麦冬、玄参、山银花和甘草。功能与主治滋阴清热，解毒消肿；用于阴虚火旺所致的口腔炎症。微生态学认为，人体、动植物体表及体内寄居着大量的正常微生物群，宿主、正常微生物群和外环境构成一个微生态系统。在正常条件下，这个系统处于动态平衡状态。若因抗生素、放射治疗、手术和过敏性疾患等因素引起正常菌群变化，微生态平衡遭到破坏， 生态和菌群遭受失调，引起一系列临床症状，如双重感染和免疫力降低等。微生态制剂是在微生态学理论的指导下，调整生态失调，保持微生态平衡，提高宿主(人、动植物)健康水平或增进健康佳态的生理性活菌制品(微生物)及其代谢产物以及促进这些生理菌群生长繁殖的物质制品。目前国际上已将其分成3个类型，即益生菌 (Probiotics)、益生元(Prebiotics)禾口合生素(Synbiotics)0益生菌常源于人体有益菌，是人体正常菌群的重要组成部分，在形成菌膜屏障肠道微生物定植抗力中起重要作用，具有预防、治疗感染，提高人体免疫力等多项作用。经有益菌治疗后，肠道致病菌大肠杆菌受到抑制，双歧杆菌数量增加，降低内毒素和血氨水平。益生元是一类非吸收性的但能选择性刺激结肠内，对宿主健康起促进作用的一种或若干种细菌的生长的寡糖类物质，如乳果糖等。益生元主要生理功能为促进体内自身双歧杆菌等有益菌成倍增长，促进肠蠕动增加，减少肠内氨的吸收，可提供能源，还有防龋，不升高血糖与降血脂等优点。合生元是益生菌与益生元的组合制剂，可发挥两者的协同作用，大大提高调节微生态的功效。目前，临床上抗生素的过度使用往往会造成一系列不好的结果，如使得机体产生耐药性，造成机体的微生态菌群失调，产生腹泻等并发症等等，微生态制剂克服了应用抗生素所造成的菌群失调、耐药菌株的增加以及药物的毒副反应。近年来，我国研制的中草药作为微生态调节剂引起国内外高度重视，发现一些补益类中草药如阿胶、五味子、剌五加、枸杞子等单味药以及一些中药方剂具有扶植正常菌群生长、调整菌群失调、提高定植抗力作用，起到益生元的效果。
发明内容
本发明针对不足，提出一种口炎清中药制剂的新用途，能有效地调节肠胃和口腔的微生态作用。为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案口炎清中药制剂在制备防治肠胃和口腔微生态调节剂的应用。优选的，所述口炎清中药制剂，由重量份数分别如下的原料构成
山银花麦冬天冬玄参甘草优选的，各原料的重量份数为
山银花麦冬天冬玄参甘草优选的，各原料的重量份数为
山银花30
麦冬25
天冬25
玄参25
甘草12.5。优选的，所述口炎清中药制剂的剂型为糖颗粒剂、无糖颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、口服液、糖浆剂、煎膏剂、滴丸剂、凝胶剂或茶剂。优选的，所述口炎清中药制剂的制备方法，包括以下步骤①、按下述重量份数分别称取各原料
山银花1 ~ 100麦冬1 ~ 98天冬1 ~ 98玄参1 ~ 98甘草1 ~ 80; ②、将步骤①所有原料全部投入蒸煮提取锅中，加水浸过药材，开启蒸汽蒸煮两
1 ~ 100 1 ~ 98 1 ~ 98 1 ~ 98 1 ~80。
5 ~ 80 5 ~ 50 5 ~ 50 5 ~ 50 2~40。次，滤过，合并滤液；③、步骤②滤液浓缩至60°C下相对密度为1. 09 1. 12，冷却至常温，加入乙醇，搅拌均勻，静置至少12小时；取上清液，回收乙醇，浓缩至60°C下相对密度为1. 30 1. 33的
浸膏；④、向步骤③浸膏加入辅料，按所需剂型的制备工艺制成相应的中药剂型。与现有技术相比，本发明口炎清中药制剂在制备具有肠胃和口腔微生态调节作用的药物中的应用。经过实验证明，本发明的中药制剂在肠胃和口腔微生态调节方面上具有很好的疗效，且易于生产、方便服用。
图1-1是本发明人体体外发酵实验中A志愿者的粪便样品发酵液中OD值数据图；图1-2是是本发明人体体外发酵实验中A志愿者的粪便样品发酵液中pH值数据图；图2-1是本发明人体体外发酵实验中B志愿者的粪便样品发酵液中OD值数据图；图2-2是是本发明人体体外发酵实验中B志愿者的粪便样品发酵液中pH值数据图；图3-1是本发明人体体外发酵实验中C志愿者的粪便样品发酵液中OD值数据图；图3-2是是本发明人体体外发酵实验中C志愿者的粪便样品发酵液中pH值数据图；图4-1是本发明人体体外发酵实验中D志愿者的粪便样品发酵液中OD值数据图；图4-2是是本发明人体体外发酵实验中D志愿者的粪便样品发酵液中pH值数据图。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本发明的保护范围有任何的限制作用。实施例1本实施例为有糖颗粒剂，各原料的用量为天冬25kg、麦冬25kg、玄参25kg、甘草 12. 5kg、山银花 30kg。采用下述方法制备(1)按上述配方称取五味药材原料；(2)将上述原料投入蒸煮提取锅中，加水浸过药材，开启蒸汽蒸煮两次，滤过，合并滤液；(3)液滤浓缩至相对密度为1. 09 1. 12(60°C测定)，冷却至常温，加入乙醇，搅拌均勻，静置12小时以上使沉淀，取上清液，回收乙醇，浓缩至相对密度为1. 30 1. 33 (600C 测定)的浸膏(水分35%)；(4)加入白糖粉、淀粉浆及粘合剂、润湿剂等辅料制成软材，辅料用量为所用浸膏重量的9倍，再经过制粒、干燥、整粒分装入袋成为颗粒剂，每袋装药IOg(相当于原生药材 5. 9g)。
服用方法每日1 2次，每次20克(两袋)。实施例2本实施例为无糖颗粒剂，各原料的用量为天冬25kg、麦冬2^g、玄参2^g、甘草 12. 5kg、山银花 30kg。按实施例1中方法提取出浸膏后加入糊精或糊精和甜味剂，再经过制粒、干燥、整粒分装入袋成为颗粒剂，每袋装药3g (相当于原生药材5. 9g)。服用方法为每日1 2次，每次2袋。实施例3本实施例为片剂，各原料的用量为麦冬98kg、玄参1kg、甘草80kg、山银花1kg。按实施例1中方法提取出浸膏后干燥，粉碎，制成颗粒，干燥，压制成片，每片相当于原生药材2. 95g，即得。服用方法为每日1 2次，每次4片。实施例4本实施例为胶囊剂，各原料的用量为天冬1kg、玄参98kg、甘草1kg、山银花 100kg。按实施例1中方法提取出浸膏后干燥，粉碎，装入胶囊，每粒装药相当于原生药材 5. 9g，即得。服用方法为每日1 2次，每次2粒。实施例5本实施例为口服液，各原料的用量为麦冬50kg、玄参25kg、甘草123kg、山银花 30kgo按实施例1中方法提取出浸膏后加单糖浆，加水适量，搅勻，滤过，灌封，每瓶 IOml (相当于原生药材5. 9g)灭菌，即得。服用方法为每日1 2次，每次2瓶。口腔微生态试验实施例1临床研究(一)、由广东省深圳牙科中心、广州市第一人民医院、广州红十字会医院等多家医院应用上述实施例的口炎清口服液、胶囊剂、片剂和颗粒，对多种口腔粘膜并进行治疗近 6000例，临床结果表明口炎清颗粒对复方性口疮、疱疹性口疮、疱疹性口炎等口腔炎症有显著疗效，还同时观察到下列效果现象1、对慢性咽喉炎有明显的效果，相当一部分患者服用口炎清两个月后发现咽喉炎消失或明显消失；2、使肠胃功能异常的病人得到恢复，排便正常；3、对接受放射治疗的癌症病人有改善和增进食欲的作用。(二)、第一军医大学南方医院、桂林医学院附属医院、广州中医药大学第一附属医院三家医院观察了口炎清上述实施例的口炎清口服液、胶囊剂、片剂和颗粒，对362例不同口腔炎症患者的治疗作用，结果所示针对复发性口疮的总有效率为82.5%，疱疹性口腔炎总有效率达到85%。通过上述临床口腔疾病的治疗，说明口炎清各种中药制剂在口腔微生态调节方面具有疗效。肠胃微生态试验实施例2一、药物与试剂1、抗生素盐酸林可霉素注射液(300mg/ml，天津药业集团新郑股份有限公司，国药准字!14102105 、头孢曲松钠(lg/支，山西威奇达药业有限公司，国药准字H14021934)。 造模阶段每天每只小鼠灌胃2次，每次0. 2ml头孢曲松钠G00mg/ml)和0. Iml林可霉素 (300mg/ml)。相当于每只小鼠每次接受80mg头孢曲松钠和30mg林可霉素。2、本发明实施例浸膏按照上述实施例1至5所述制备步骤(3)得到的浸膏，用无菌纯净水配制成不同剂量(实施例1)1. 252g流膏/kg · BW ·天=3. 055g生药/kg · BW ·天(每天灌胃2 次，每次0. 3mL,流膏浓度41. 74mg/mL)；(实施例2)2. 021g流膏/kg · BW ·天=4. 931g生药/kg · BW ·天(每天灌胃2 次，每次0. 3mL,流膏浓度375. 6mg/mL)；(实施例3) 3. 756g 流膏 /kg · BW ·天=9. 165g 生药 2)/kg · BW ·天(每天灌胃 2次，每次0. 3mL,流膏浓度125. 2mg/mL)；(实施例4)8. 652g流膏/kg · BW ·天=21. Ilg生药/kg · BW ·天(每天灌胃2 次，每次0. 3mL,流膏浓度375. 6mg/mL)；(实施例5):11. 27g流膏/kg · BW ·天=27. 50g生药/kg · BW ·天(每天灌胃2 次，每次0. 3mL,流膏浓度375. 6mg/mL)；上述浸膏4°C保存，给药前复温25 30°C。3、菊糖(Inulin)比利时ORAFTI公司进口分装(纯度彡95%，平均聚合度=10) 高剂量(9g/kg · BW ·天)，每只小鼠每次灌胃2次，每次0. 3ml (300mg/ml)。4、丽珠肠乐双歧杆菌活菌，每天2次，每次0. 3ml (0. 25亿活菌/ml)。(丽珠肠乐胶囊，丽珠集团丽珠制药厂，国药准字S10960040)5、0.85%生理盐水=NaCl分析纯天津市化学试剂一厂；生产批号100802称取 8. 5g加入H2O 1L，121°C灭菌20min备用，保存于4°C冰箱。6、Balb/c小鼠，购自南方医科大学实验动物中心，批号N0. 0070566。二、试验方法与结果(一 )动物体内治疗性给药试验挑选检疫合格的SPF级Balb/c小鼠120只，鼠龄6 8w，体重18 22g，雌雄各半，全天供应充足饮水，每晚10点后禁食，次日8时灌胃后给予充足食物。预喂养7天后开始造模，具体方法为随机取出12只作为空白(正常对照)组，其余经抗生素灌胃，每次OJml/只，每日2次，连续3d，制造肠道菌群失调模型。空白(正常对照)组则灌以等量生理盐水；在建模后，随机取出12只作为模型组，立即处死，进行各种指标检测，出现下述情况，说明建模成功A、小鼠灌胃3天抗生素后，体重有明显下降；B、模型组小鼠精神极度低下，毛无光泽，蜷缩畏寒，粪便稀湿。解剖发现模型组肾脏体积大、胸腺脾脏体积小、盲肠肿大且壁薄。从观察角度，肠道微生态失调模型建立成功。C、模型建立后(灌胃抗生素3天)，各种肠道菌群受到显著抑制，利用选择性培养
8的方法确定，粪便中总好氧、总厌氧菌数量在IO5左右，而双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌、肠杆菌、拟杆菌、总梭菌，6种菌的数量低于103。说明所建立模型成功。模型成功后将剩余96只小鼠随机分为8组，分别以本发明各实施例组、丽珠肠乐、 菊糖、生理盐水(自动恢复组)进行灌胃，每次OJml/只，每日2次，连续灌胃7d。各治疗组及空白组于给药7整天时处死小鼠，采集标本进行菌群指标检测和分析收集给药最后一天小鼠的粪便，对微生物指标(菌落计数和分子生物学方法)进行检测和分析。1肠道菌群变化对给药(7整天)最后一天收集到的小鼠粪便中的菌群进行计数和分析，方法和结果如下1. 1选择性培养法分析肠道主要菌群的变化，检测的菌有乳酸杆菌、双歧杆菌、 肠杆菌、肠球菌°通常，在抗生素引起的菌群失调状态下，小鼠肠胃的乳酸杆菌和双歧杆菌的数量会下降，肠球菌、肠杆菌和拟杆菌的数量会上升；总好痒菌和总厌氧菌的数量可能会下降。根据数据显示，本发明各实施例中药制剂流膏可以使乳酸杆菌和双歧杆菌菌群水平恢复，可以使得肠杆菌、肠球菌菌群水平得到抑制，与自动恢复组菌落总数有极显著差异(P < 0.01)。各菌群数量数据如下表1所示表1.双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌、肠球菌的菌群数量数据(单位log(CfU/g粪便))
双歧杆菌乳酸杆菌肠杆菌肠球菌雌性雄性雌性雄性雌性雄性雌性雄性空白9. 809. 626. 046.309. 339. 677. 987. 86自动8. 578. 085. 605.159. 399. 998. 008. 89实施例19. 859. 716. 907.007. 959. 366. 006. 33实施例29. 649. 716. 896.948. 159. 576. 536. 58实施例39. 539. 726. 846.828. 749. 806. 806. 90实施例49. 429. 616. 566.628. 909. 657. 247. 08实施例59. 289. 466. 206.309. 209. 517. 537. 17丽珠肠乐9. 579. 596. 055.569. 319. 516. 407. 02菊糖10. 119. 836. 316.208. 439. 727. 297. 201. 2分子生物学方法分析肠道总菌群谱的变化1.2. 1小鼠粪便DNA提取方法a.无菌操作台中，称取粪便样品各0.5g，分别置于15mL无菌离心管中，每管加入 3. 4mL DNA提取缓冲液(100mmol/L Tris-HCl [pH 8. 0], 100mmol/L sodium EDTA [pH 8.0]， 1 OOmmo 1/L sodium phosphate [pH8. 0], 1. 5mol/L NaC 1,1% CTAB)；b.剧烈漩涡5 lOmin，使粪便颗粒充分分散于缓冲液中；
c.将上述样品置37°C，225r/min,水平振摇45min，使勻质化；d.每管加入ImL 20 % SDS,上下颠倒混勻，65°C水浴3h，其间尽可能温和颠倒混勻；e.水浴裂解过程结束后，立即加入等体积预冷的苯酚/氯仿/异戊醇 (24 24 1，体积比)，上下颠倒，充分混和均勻后，室温下，离心15min (8000rpm)。收集上清，剩余组分加入200 μ L无菌TE缓冲液(IOmmol/LTris, lmmol/L EDTA, pH 8.0)重悬后， 室温下，离心15min(8000rpm)，合并两次的上清液；f.上清液用等体积的氯仿/异戊醇04 1，体积比)抽提2次，室温下，离心 15min(8000rpm)；g.收集上清，加入0.6倍体积的预冷的异丙醇，室温下沉淀Ih后，离心 20min(IlOOOrpm)；h.收集核酸沉淀，用70%冰乙醇洗涤2次，重悬于100 μ L无菌TE缓冲液。1. 2. 2PCR-DGGE 条件PCR 条件引物(工作液浓度为 20pmol/ul)HDAl-GC-5 ‘ -CGCCCGGGGCGCGCC CCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGGACTCCTACGGGAGGCAGCA-GT-3 ‘ ； HDA2-5 ‘ -GTATTACCGCG GCTGCTG-GCAC-3' ；Taq 酶选用 Blend TaqPlus (高保真、热启动酶)；模板50ul 体系，DNA 模板的浓度应为20ng ；扩增条件94C预变性5min，94C变性30s，60C退火10s, 72C延伸 25s (Blend Taq Plus 酶)，72C 延伸 Imin, 30 循环。DGGE条件变性条件35% -60%;电泳条件75V 14小时；上样量如果是菌液的 PCR结果，将PCR产物稀释10倍后上样IOul，如果为环境样品的PCR产物，直接上样PCR产物IOul ；EB显色。经DGGE分析表明，经抗生素灌胃处理后，小鼠粪便微生物区系的优势菌群发生变化(见模型组)。鼠粪便菌群总菌的丰富度和多样性与正常对照相比差异均出现显著性(P < 0.01)，即抗生素作用后，小鼠粪便细菌微生物区系的总体多样性和细菌种类显著降低； 自动恢复组的总体多样性和细菌种类略少于空白组；通过灌胃本发明中药制剂流膏，小鼠粪便微生物区系的丰度已经完全恢复。( 二)动物体内预防性给药实验挑选检疫合格的SPF级Balb/c小鼠108只，鼠龄6 8w，体重18 22g，雌雄各半；全天供应充足饮水，每晚10点后禁食，次日8时灌胃后给予充足食物。小鼠喂养7天， 待肠道菌群稳定后，开始试验。按体重随机均衡分成9组，每组12只，雌雄各半，即空白组、 模型组、丽珠肠乐组、菊糖组、本发明实施例1至5剂量组。小鼠喂养7天后，按照上述各药物组的浓度预给药3天，其中模型对照组、空白对照着预给药期间，灌胃等体积的生理盐水。各组每天2次，每次0. 3ml,间隔他。3天后进行混合给药，持续5天各组继续灌胃灌胃0. :3ml，浓度同预喂药的3天。 另每天8am、8pm试验组均灌胃0. 2ml头孢曲松钠G00mg/ml)和0. Iml林可霉素(300mg/ ml) ο处死小鼠，分别在第1、4、6、9天收集粪便和宰杀，采集标本进行各种指标检测和分析对小鼠粪便微生物指标(菌落计数和分子生物学方法)进行检测和分析1.各检测指标试验方法同动物体内治疗性给药试验。
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2.结果与结论培养法检测肠道菌群变化预给药第3d(即灌胃抗生素之前)，小鼠肠道主要菌群计数结果(见表2.)，显示口炎清可以抑制肠道中有害菌肠杆菌、肠球菌的生长，效果高于菊糖和丽珠肠乐。抗生素连续灌胃5d后肠道菌计数结果显示雌雄性小鼠之间有较大的差异性(见表3)。对于双歧杆菌和乳酸杆菌来说，雌性小鼠口炎清剂量组均低于空白组和菊糖组，而雄性小鼠口炎清剂量组均高于空白组，说明口炎清可以促进雄性小鼠肠道内有益菌双歧杆菌和乳酸杆菌的生长。对于肠杆菌和肠球菌来说雌性小鼠口炎清低剂量低于其他组，雄性小鼠未显示该现象，说明口炎清可以抑制肠道中有害菌肠杆菌、肠球菌的生长。结果显示本发明中药制剂流膏低浓度和中浓度可以促进益生菌双歧杆菌和乳酸杆菌的生长恢复，可抑制有害菌肠杆菌和肠球菌的生长。表2.预给药3天后双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌、肠球菌的菌群数量数据(单位 log(cfu/g 粪便))
权利要求
1.口炎清中药制剂在制备防治肠胃和口腔微生态调节剂的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述口炎清中药制剂，由重量份数分别如下的原料构成山银花1 ~ 100麦冬1 ~ 98天冬1 ~ 98玄参1 ~ 98甘草1~80。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于各原料的重量份数为山银花5 ~ 80麦冬5~50天冬5 ~ 50玄参5 ~ 50甘草2~40。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于各原料的重量份数为山银花30麦冬25天冬25玄参25甘草12.5。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述口炎清中药制剂的剂型为糖颗粒剂、无糖颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂、口服液、糖浆剂、煎膏剂、滴丸剂、凝胶剂或茶剂。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述口炎清中药制剂的制备方法，包括以下步骤①、按下述重量份数分别称取各原料山银花1 ~ 100麦冬1 ~ 98天冬1 ~ 98玄参1 ~ 98甘草1 ~ 80;②、将步骤①所有原料全部投入蒸煮提取锅中，加水浸过药材，开启蒸汽蒸煮两次，滤过，合并滤液；③、步骤②滤液浓缩至60°C下相对密度为1.09 1. 12，冷却至常温，加入乙醇，搅拌均勻，静置至少12小时；取上清液，回收乙醇，浓缩至60°C下相对密度为1. 30 1. 33的浸膏；④、向步骤③浸膏加入辅料，按所需剂型的制备工艺制成相应的中药剂型。
全文摘要
本发明公开了口炎清中药制剂在制备防治肠胃和口腔微生态调节剂的应用。本发明中药制剂经过大量的实验，在用于抗生素引起的肠胃和口腔菌群失调上，具有良好的预防和治疗效果。
文档编号A61P1/02GK102225151SQ201110161188
公开日2011年10月26日 申请日期2011年6月15日 优先权日2011年6月15日
发明者张慧晔, 张永涛, 李楚源, 林青, 王德勤, 覃仁安 申请人:广州白云山和记黄埔中药有限公司