专利名称：一种抗缺血再灌注损伤组合物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药、试剂等技术领域，具体地说是涉及一种药物组合物及其制备方法和用途，更具体地说是涉及一种用于治疗缺血再灌注损伤、特别是肝脏缺血再灌注损伤的药物组合物及其制备方法和用途，再具体地说是涉及一种含有M胆碱受体阻断剂和胆碱脂酶抑制剂的药物组合物及其制备方法和用途。
背景技术：
(一 )缺血再灌注损伤的研究概况I、概述缺血的组织、器官重新获得血液供应后，不仅不能使组织、器官功能恢复，反而加重了功能代谢障碍及结构的破坏，这种现象被称之为缺血再灌注损伤 (ischemia-reperfusion injury)。临床常见于肝脏严重创伤手术、肝脏肿瘤切除、肝移植等。人类不同原因致肝脏损伤，甚至肝脏纤维化过程中凋亡是一个重要的特征。研究表明在缺血再灌注引起的肝损伤过程中存在肝细胞凋亡。但是，缺血再灌注损伤的病理生理过程复杂，涉及细胞凋亡和坏死等途径，迄今尚无明确认识，故对其发生机制的研究已成为热点。2、HIRI的发生机制缺血所引起的组织损伤是致死性疾病的主要原因，诸如冠状动脉硬化导致的心肌梗死、脑卒中等。在缺血性疾病抢救和治疗过程中，医学家们渐渐发现，仅仅缺血还不足以导致组织损伤，而是在缺血一段时间后又突然恢复供血(即再灌注)时，致巨噬细胞、中性粒细胞和血小板活化，继而引发一系列细胞反应，同时由于血管内皮细胞的损害导致微循环障碍，进一步加重组织损伤，这种损伤被称为“组织缺血再灌注损伤”。肝脏缺血再灌注损伤(hepaticischemia-reperfusion injury,简称HIRI)是许多因子参与的复杂的病理生理过程，好发于休克及多种肝脏外科手术中，是影响肝移植、肝脏叶段切除术后肝功能的一个多因素过程(Banga NR, Homer-Vanniasinkam S, Graham A, et al. Ischemic preconditioning in transplantation and major resection of the liver[J]· Br J Surg,2005,92(5) :528-538.)。肝脏缺血再灌注可致枯否式细胞(即Kupffer细胞)(Zeng Z, Huang HF, et al. Heme oxygenase-lprotects donor livers from ischemia/reperfusion injury The role of Kupffer cells[J]. World J Gastroenterol,2010Mar 14,16(10) :1285-92.)、中性粒细胞和血小板活化，继而引发一系列细胞反应，同时由于肝窦内皮细胞的损害导致微循环障碍，进一步加重肝脏缺血、缺氧这些Kupffer细胞、中性粒细胞和单核细胞的激活， 可直接释放大量促炎的细胞因子，如TNF-a、IL-I β、IL_6 ;也可释放脂质炎性介质，如白三烯(简称LTs)、血栓素A2(简称TXA2)、血小板激活因子(简称PAF)等。炎性介质能激活炎症细胞，使之合成和释放多种炎症因子；炎症因子则在肝内既可通过单个形式也可通过彼此间协同作用弓I起肝细胞损伤。例如，TNF-Q直接导致肝窦内皮细胞肿胀；通过中性粒细胞、内皮细胞的相互作用导致肝脏微循环障碍(Zhou ff, Zhang Y, Hosch MS. Subcellular site of superoxide dismutase expression differentialIy controls AP-Iactivity and injury in mouse liver following ischemia/reperfusion[J]. Hepatology,2001,33 (4) :902-914; Tsuchiya Y, Suzuki S, Inaba K, et al. Impact of endothelin—lon microcirculatory disturbance after partial hepatectomy under ischemia/reperfusion in thioacetamide-induced cirrhotic rats [J]. J Surg Res, 2003，111 (I) :100-8.);可激活中性粒细胞释放氧自由基；同时刺激单核巨噬细胞和其它细胞分泌IL-I β、IL-6等炎性因子。IL-I β可诱导IL-8的合成并增加细胞黏附分子选择素、整合素的表达，这些均增强中性粒细胞与内皮细胞的黏附，进一步导致合成更多的细胞因子。缺血组织再灌注时造成的微血管和实质器官的损伤主要是由活性氧自由基引起的，这已在多种器官中得到的证明。多数学者认为，氧自由基在肝脏缺血再灌注时发挥重要作用，其发生机制有(I)细胞缺血缺氧使ATP生成减少，Ca2+进入线粒体增多，使线粒体功能受损，从而使氧自由基生成增加；(2)钙超载又可激活钙离子依赖性蛋白酶，后者可催化黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶.，而黄嘌呤氧化酶在有氧条件下能促进黄嘌呤在分解为尿酸的同时产生大量的氧自由基。在再灌注时大量氧进入的情况下，黄嘌呤氧化酶作用于次黄嘌呤，产生大量超氧阴离子自由基(Liu PG, He SQ, Wu Jian, et al. Protective effects of apocynin and allopurinol on ischemia/reperfusion induced liver injury in mice[J]. World J Gastroenterol,2008,14(18) :2832-2837. ；Liu JN, Zhang JX, Zhang XL, et al.The effect of oxidative stress in myocardial cell injury in mice exposed to chronic intermittent hypoxia [J]. Chin Med J (Engl), 2010,123 (I) :74-8.)。使用 SOD 清除自由基对缺血再灌流组织损伤有保护作用；(3)再灌注时，由于缺氧、ATP减少及钙进入线粒体增多，使细胞色素氧化酶功能失调、细胞内线粒体膜电势丧失、呼吸链功能障碍、电子传递链漏电子增多、超氧化物歧化酶生成减少等，同时可导致大量氧自由基生成(Wang NT, Lin HI, et al. Effects ofthe antioxidants lycium barbarum and ascorbic acid on reperfusion liver injury in rats[J]. Transplant Proc,2009,41 (10) :4110-3.)；(4)缺血期组织细胞含氧量减少，作为电子受体的氧含量不足，再灌注后恢复组织氧供应，使氧自由基在短时间内爆发性增多。氧自由基损伤肝细胞的机制主要有(I)氧化细胞膜，改变膜的流动性和通透性，产生脂质过氧化物，直接损伤细胞；(2)通过直接作用于肝窦内皮细胞膜增加血小板及中性粒细胞的粘附位点，增加血小板及中性粒细胞的的黏附、聚集，造成微循环障碍(GlanemannM,VollmarB,NusslerAK, et al.Ischemic preconditioning protects from hepatic ischemia/reperfusion injury by preservation of microcirculation and mitochondria redox-state[J]. J Hepatol,2003,38(I) :59-66.)；
(3)激活肝实质细胞核内的氧化核酸酶，使DNA双链断裂而造成肝脏结构和功能的损伤；(4)氧自由基抑制线粒体的氧化磷酸化，使能量物质减少。缺血再灌注能导致细胞凋亡的事实已经有所报道。细胞凋亡是指细胞受到某些特殊信号刺激后，由其内部机制调控的主动的细胞死亡，属于机体自身的生理活动，也称为程序性细胞死亡(简称p⑶)。P⑶是导致缺血再灌注损伤的重要机制之一，是肝功能衰竭的重要原因(Malhi H, Gores GJ, Lemasters JJ, et al. Apoptosis and necrosis in the liver a tale oftwo deaths [J]Hepatology，2006，43(2Suppl I) :831-44. ) 缺血再灌注后的细胞凋亡是一个复杂过程，能量代谢障碍、氧自由基、细胞因子、 细胞内钙超载以及Caspase家族、Bcl_2家族均可诱导细胞凋亡，其中氧自由基的爆发性形成是关键因素，在缺血再灌注时氧化磷酸化障碍，线粒体内自由基及其代谢的中心产物增多，而此时自由基防御体系活性下降，自由基介导的DNA损伤可激发多聚ADP核糖转移酶的活化和P53积累，这二者均与凋亡有关。3、HIRI的药物干预但到目前为止，尚无肯定的治疗方法可以改变整个病程。现有技术中，治疗缺血再灌注损伤的方法众多，主要包括缺血适应预处理及术前药物干预。(I)缺血适应预处理缺血适应预处理是指短暂的缺血再灌注过程致使器官对随后的更加持久的缺血再灌注损伤更具耐受力，其可降低持续缺血过程中ATP降解，糖分解中间产物和乳酸产物的聚积(Clavien PA, Yadav S, Sindram D, et al. Protective effects of ischemic preconditioning for liver resection performed under inflow occlusion in humans[J]Ann Surg，2000，232(12) :163-165.)。药物预处理是利用某些活性物质直接或间接的药理作用来达到类似缺血预处理的保护作用，增强组织或细胞对缺血再灌注损伤的耐受性，从而减轻损伤。对HIRI具有预处理效果的药物主要原则有①保护生物膜，改善微循环及细胞能量代谢。缺血组织酵解过程增强，因此补充糖酵解底物能有效保护缺血组织，有利于生物膜功能的恢复。缺血时线粒体氧化磷酸化代谢受阻，鉴于此，可给予外源性ATP、磷酸肌酸、细胞色素C等；②自由基清除剂给予低分子自由基清除剂，例如维生素A、维生素C、维生素E和谷胱甘肽还原酶(简称=GTH-PX)(张厚忠，韩喜春，姜伟栋.谷胱甘肽和缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响[J].中国老年学杂志，2006，26 (10) 91-93.);酶型自由基清除剂，例如过氧化氢酶(简称CAT)、超过氧化物歧化酶(简称S0D)、过氧化物酶；③减轻炎症反应给予具有稳定溶酶体酶膜作用的糖皮质激素、阻断中性粒细胞和内皮细胞间粘附反应的特定粘附分子的单抗等，均可明显减轻缺血再灌注损伤(马兴久，耿振宏，李德春，等.乌司他汀对肝脏缺血再灌注损伤的防护作用[J].医师进修杂志， 2005，28(7) :22-28.)；④减轻钙超载的钙通道阻断剂。(2)术前药物干预
目前，术前进行干预的药物主要以植物提取物为主。中草药以安全范围大、毒副作用小、作用环节较多等优点，成为研究的热点。一些活血化瘀中药能清除氧自由基，对脏器缺血再灌注损伤具有一定的保护作用，如川芎、丹参、参附、银杏叶提取物、大黄素等等(黄博，陈高飞，陈国勇，等.茶多酚对大鼠肝脏缺血灌注损伤的保护作用[J].胃肠病学和肝病学杂志，2006，15 (5) =522-524.;林胜璋，余耀军，游涛，等.大黄素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的预防作用[J].中国中西医结合外科杂志，2006，12 :136-138.;赵珂.银杏叶提取物对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用[J]·中原医刊，2007，34 (3) :5-6.)。川芎可以抑制PMN聚集粘附、减轻钙超载、抗TXA2、合成、阻止血小板聚集、清除自由基、保护线粒体；丹参具有减低OFR脂质过氧化物含量，提高SOD活性，减少钙超载，促进再生修复功能。此外，有研究表明三七总阜苷、阿魏酸钠(当归的有效成分)、绿茶Pingpien Gingseng Rhizome物(简称GTE)、黄苗总黄酮等对肝脏缺血再灌注损伤都具有保护作用 (Ke QH,Zheng SS,Liang TB, et al. Pre-treatment of hypertonic saline can increase endogenous interleukin IOrelease to attenuate hepatic ischemia reperfusion injury [J]. Dig Dis Sc，2006，51 :2257-2263.) 其中许多药物具有较大的毒副作用，临床上一直使用植物的粗提物，对其药品性成分不清、作用机制不明、质量不稳、毒副作用大等不之处，影响了它们在临床上的应用，难以满足临床需要。近年来，高张盐水(简称HS)也开始受到人们的重视。小剂量HS不仅能快速改善休克的血流动力学参数，提高心肌收缩力和心排出量，改善微循环，而且还能抑制应激状态下的过度炎症反应。研究发现(Ke QH, Zheng SS, Liang TB, et al. Pre-treatment ofhypertonic saline can increase endogenous interleukin IOrelease to attenuate hepatic ischemia reperfusion injury[J]. Dig Dis Sc,2006,51 :2257-2263. ；Gonzalez EA, Kozar RA, Suliburk Jff, et al. Conventional dose hypertonic saline provides optimal gut protection and limits remote organ injury after gut ischemia reperfusion [J]. J Trauma, 2006,61 (I) :66-73.), HS 可抑制中性粒细胞过度激活，抑制 TNF-α、IL-6及黏附分子的分泌，同时增加抗炎细胞因子IL-10的释放与表达。高张盐水预处理能明显增强缺血再灌注后肝脏血红素加氧酶-I的mRNA及蛋白表达，明显改善肝脏微循环，对肝脏缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。4、展望肝脏缺血再灌注损伤的防治已经在控制再灌注条件、应用细胞保护剂和调动机体内源性防御能力等方面取得了丰硕成果。随着对胆碱能抗炎通路的研究不断趋于完善，也一定会产生更多相关的应用思路和切实可行的方法服务于临床治疗，为研究防治缺血再灌注损伤提供了一条的新的策略。 科学技术的不断进步，使人们对缺血再灌注损伤的机制研究不断深入，防治疾病的方法也将越来越的有效。但是，肝脏缺血再灌注损伤的机制复杂，是多种因素相互、共同作用的结果，而单一机制的研究往往不能达到满意的效果，因此多种机制的、多药物联合运用的综合性研究有待进一步开展。(二)M胆碱受体阻断剂的研究概况I、概述各种刺激引起内源性乙酰胆碱的释放在诱发哮喘中有重要作用。M胆碱受体阻断剂能阻断乙酰胆碱作用，因此可用于治疗哮喘。例如异丙基阿托品(ipratiOpium)主要用于喘息型慢性支气管炎吸入给药很少吸收，因此有明显扩张支气管作用，增加第一秒钟最大呼气量，而不影响痰液分泌，也无明显全身性不良反应。2、胆碱受体及其分类胆碱受体包括两种(I)胆碱受体胆碱受体包括两种①毒蕈碱型受体(简称M受体)，产生副交感神经兴奋效应，既心脏活动抑制、支气管胃肠平滑肌和膀胱逼尿肌收缩、消化腺分泌增加、瞳孔缩小等。阿托品为毒蕈碱受体阻断剂。②烟碱型受体(简称N受体)，N1位于神经节突触后膜，可引起自主神经节的节后神经元兴奋；N2受体位于骨骼肌终板膜，可引起运动终板电位，导致骨骼肌兴奋。六烃季胺主要阻断N1受体功能，筒箭毒碱阻断N2受体功能。(2)M胆碱受体的亚型和分布①M胆碱受体的药理学分型M胆碱受体的识别位点在各亚型间是相当保守的，虽然目前已得到多种对M胆碱受体有选择性的阻断剂，但仍未发现仅对一种受体亚型具有高选择性的阻断剂。常用的M胆碱受体亚型的选择性阻断剂如下M1胆碱受体亲和力最高的是MT17，它是近年发现的含于非洲绿毒蛇蛇毒中的一种毒素。其它尚有4-DAMP, tripitramine,哌仑西平等。M2胆碱受体亲和力最高的是tripitramine。其他尚有AFDX384, himbacine和 4-DAMP。M3胆碱受体亲和力最高的是4-DAMP。其他尚有darifenacin。外分泌腺、平滑肌、 血管内皮、脑和自主神经节。M4胆碱受体亲和力最高的是MT3。其他尚有4-DAMP，himbacine和AFDX384。M5胆碱受体亲和力最高的是4-DAMP。其他尚有darifenacin。②M胆碱受体的分子生物学分型随着分子生物学克隆技术的发展，通过对克隆到的M受体cDNAs转录成不同的氨基酸序列的分析，发现至少存在五种不同基因编码的M受体亚型，分别命名为m4、 m5受体，较为公认的是M1、M2、和M3三种亚型。③M胆碱受体亚型的分布M1胆碱受体主要分布在胃壁细胞、神经节和中枢神经系统；M2胆碱受体主要分布于心脏、脑、自主神经节和平滑肌；M3胆碱受体主要分布于外分泌腺、平滑肌、血管内皮、脑和自主神经节； (3) N胆碱受体及其分布
N受体根据分布的不同，分为NpN2两种。两者都是配体门控型阳离子通道，当Ach 与N受体结合后，N受体空间构象发生改变，通道开放，发生局部去极化。当去极化水平达到钠通道开放阈值时，钠通道开放，引发动作电位。具有N2受体的骨骼肌细胞表现为细胞外钙内流和细胞内钙释放，肌肉收缩；具有N1受体的神经节次一级神经元表现为兴奋的继续传递。N1受体分布于神经节；N2受体分布于神经肌肉接头(骨骼肌细胞膜)。3、M胆碱受体阻断剂的分类M胆碱受体阻断剂包括三类①天然形成的生物碱，如阿托品和东莨菪碱；阿托品、东莨菪碱和山莨菪碱均可由植物中提取，天然存在的生物碱为不稳定的左旋莨菪碱，在提取过程中可得到稳定的消旋莨菪碱，即为阿托品。东莨菪碱为左旋体，起作用较右旋体强许多倍。阿托品及其类似物基本结构为托品酸的叔胺生物碱脂。②天然生物碱的半合成衍生物，其体内过程和作用时间与母体药物不同；③合成生物碱，其中某些药物对M胆碱受体亚型具有选择性拮抗作用，如后马托品、托吡卡胺等。4、M胆碱受体阻断剂的作用及其机理本类药物作用广泛，具有松弛内脏平滑肌、解除平滑肌痉挛的作用；能抑制唾液腺、汗腺、胃肠腺等的分泌，用药后可引起口干和渴感；解除迷走神经对心脏的抑制，使心跳加快；松弛虹膜括约肌，散大瞳孔，眼压升高；兴奋呼吸中枢。本类药物能与胆碱受体结合但不产生或极少产生拟胆碱作用，却能妨碍乙酰胆碱 (简称ACh)或胆碱受体激动药与平滑肌、心肌、腺体细胞、外周神经节和中枢神经系统的M 胆碱受体结合，从而拮抗其拟胆碱作用。在中枢神经系统，如骨髓、皮层和皮层下中枢水平， 其胆碱能传递均涉及M胆碱受体的功能。有研究资料表明，M胆碱受体阻断剂抗内毒素休克作用涉及迷走神经胆碱能抗炎通路，而尼古丁 α 7乙酰胆碱受体(a 7-nicotinic acetylcholine receptor,简称 a 7nAChR)参与这一过程(Liu C, et al. Antishock effect of anisodamine involves a novel pathway for activating alpha7nicotinic acetylcholine receptor. Crit Care Med. 2009 ；37 :634-641)。近期的相关文献报道指出，烟碱受体激动剂可减轻肝脏缺血再灌注损伤 (Crockett ET, et al. Protection of early phase hepatic ischemia-reperfusion injury by cholinergic agonists. BMC Clin Pathol. 2006Feb 15 ;6 :3);迷走神经切断后，a 7nAChR的特异性激动剂能改善Fas蛋白所致急性重型肝炎的肝细胞凋亡(Hiramoto T，et al. The hepatic vagus nerve attenuates fas—induced apoptosis in the mouse liver via alpha7nicotinic acetylcholine receptor. Gastroenterology.2008 ； 134 2122-2131)。但是，M胆碱受体阻断剂与缺血再灌注损伤的关系未见报道。5、M胆碱受体阻断剂的用途与应用M胆碱受体阻断剂如阿托品常用于麻醉前给药，可减少麻醉过程中支气管粘液分泌，以防呼吸道阻塞及吸入性肺炎；可消除吗啡对呼吸的抑制，解除迷走神经兴奋性，可防止硫喷妥钠的喉痉挛。对中毒性痢疾、中毒性肺炎等所致的感染性休克，可用大剂量M胆碱受体激动剂如阿托品进行治疗，以解除小动脉痉挛而改善微循环，使血压回升而改善症状， 其治疗内毒素休克的常规剂量为常用剂量阿托品I 2mg，每隔15 20分钟静脉注射； 山莨菪碱10 20mg,每隔15 20分钟静脉注射；东莨菪碱O. 01 O. 03mg/kg,每30分钟静推一次；其副作用主要表现为口干、面红、轻度扩瞳、视近物模糊等，个别患者有心率加快及排尿困难。M胆碱受体阻断剂临床主要用于①解胃肠道平滑肌的痉挛性疼痛；②缓用于麻醉前给药，减少麻醉过程中支气管粘液分泌，以防呼吸道阻塞及吸入性肺炎；可消除吗啡对呼吸的抑制，解除迷走神经兴奋性，可防止硫喷妥钠的喉痉挛；③用于感染性中毒休克。对中毒性痢疾、中毒性肺炎等所致的感染性休克，可用大剂量阿托品治疗，以解除小动脉痉挛而改善微循环，使血压回升而改善症状；④治疗心律失常；⑤局部给药用于虹膜睫状体炎，使瞳孔散大，使睫状肌得到松弛休息(调节麻痹)，达到消炎、止痛的目的；并可利用散大瞳孔的作用来检查眼底疾病；⑥解救有机磷酸酯类农药中毒。近年来，通过临床观察，还发现本类药物的新用途①治疗暴发性流行性脑脊髓膜炎；②治疗小儿喘息性支气管炎；③治疗冻伤；④治疗坐骨神经痛。此外，山莨菪碱对小儿冬秋季肠炎、急性出血性坏死性肠炎、局灶性神经征、小儿 “结脑”、重型婴幼儿肺炎、急性弥漫性肾小球肾炎、小儿急性阑尾炎、小儿癫痫持续状态、高血压、冠心病、类风湿性关节炎、胆道蛔虫症、胆囊炎、小儿急性偏瘫症等都有一定疗效。(三)胆碱酯酶抑制剂的研究概况I、概述胆碱酯酶抑制剂与ACh—样，能与乙酰胆碱酯酶(简称AChE)结合，但结合较牢固，水解较慢，是AChE活性受抑制，从而导致胆碱能神经末梢释放的ACh堆积，产生拟胆碱作用。2、胆碱酯酶抑制剂的作用本类药物具有收缩胃肠道平滑肌、增加平滑肌张力作用；刺激瞳孔括约肌和睫状肌收缩，调节睫状肌痉挛；抑制骨骼肌神经肌肉接头AChE，松弛肌肉；能抑制唾液腺、汗腺、 胃肠腺等的分泌；作用于延髓的血管运动中枢，使心率减慢、心输出量下降。3、胆碱酯酶抑制剂的用途与应用胆碱脂酶抑制剂如新斯的明常用来帮助术后胃肠功能恢复；与麻醉剂合用，可用于麻醉后镇痛，不需持续给药即可获得良好和持久的术后镇痛效果，但会引起乙酰胆碱蓄积导致心血管系统和消化系统的副作用(Hofer S. ,Eisenbach C. ,Lukic I. K. , Schneider L，Bode K.，Brueckmann Μ.，Mautner S.，Wente Μ. N.，Encke J.，Werner J.，DalpkeA. H.，Stremmel W.，Nawroth P. P.，Martin E.，Krammer P. H.，Bierhaus A.，Weigand M. A. ,Pharmacologic cholinesterase inhibition improves survival in experimental sepsis. Crit. Care. Med. 2008，36 (2) :404-408)。临床上主要用于①直接或间接兴奋骨骼肌，治疗重症肌无力；②能兴奋肠道平滑肌及膀胱逼尿肌，促进排气和排尿，常用于术后尿潴留；③治疗青光眼，滴眼后可使瞳孔缩小，眼内压下降；④竞争性神经肌肉阻滞药过量时解毒。近年来国内使用该药的新方法与新用途①越来越多的胆碱酯酶抑制剂被美国FDA批准用于阿尔兹海默病(Alzheimer’ s disease，简称AD)的治疗。AD患者的中枢部位，尤其是皮层下区域，如下橄榄核胆碱能神经元完整性缺陷，因此可用胆碱酯酶抑制剂增加中枢神经系统内胆碱能神经递质的方法改善认知功能，延缓AD病情的进展；②穴位注射，帮助胃肠功能恢复；③与麻醉剂合用，用于麻醉后镇痛，不需持续给药即可获得良好和持久的术后镇痛效果。因此，寻找新型、成分明确、疗效确切、不良反应小的抗缺血再灌注损伤仍然势在必行。但是，M胆碱受体阻断剂和胆碱脂酶抑制剂联合使用的药物组合物治疗缺血再灌注损伤尚未见报道。经文献检索等，到目前为止，尚未发现有新的抗缺血再灌注损伤产品及其制备方法和用途等方面的报道。
发明内容
本发现所需要解决的技术问题是公开了一种含有M胆碱受体阻断剂和胆碱脂酶抑制剂的药物组合物及其制备方法和用途，即该药物组合物具有抗缺血再灌注损伤的新作用，能够用于制备抗缺血再灌注损伤产品，以克服现有技术存在的上述缺陷。也就是说，本发明针对现有技术的不足，通过实验研究和理论探索，目的之一意在提供一种新的药物组合物，即提供一种含有M胆碱受体阻断剂和胆碱脂酶抑制剂的药物组合物配方；本发明的目的之二是提供一种抗缺血再灌注损伤组合物的制备方法；本发明的目的之三是提供一种抗缺血再灌注损伤组合物的用途，即提供含有上述药物组合物作为抗缺血再灌注损伤产品方面的应用。本发明所述的抗缺血再灌注损伤产品是指医药等技术领域中，一种直接用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究缺血再灌注损伤及其直接相关疾病的产品；优选直接用于预防、诊断、检测、保护、治疗和研究肝脏缺血再灌注损伤及其直接相关疾病的产品，即抗肝脏缺血再灌注损伤产品。所述的抗缺血再灌注损伤产品是包括药物、试剂等中的一种或多种，优选药物。(一)技术构思自主开发研发创新药物是中国目前的一项紧迫任务，发现新药物、已有药物的新组合或新用途等均是有效的快捷途径，也是中国快捷创新药物研制的优势所在。缺血再灌注损伤的防治是近年来的一个研究热点。在创伤性休克、外科手术、器官移植、烧伤、冻伤和血栓等血液循环障碍时，都会出现缺血后再灌注损伤。组织器官对氧的要求程度越高，越容易发生缺血再灌注损伤，如心、脑、肝脏、肾脏等。但是，缺血再灌注损伤的机制复杂，是多种因素相互、共同作用的结果，而单一机制的研究往往不能达到满意的效果，因此多种机制的、多药物联合运用的综合性研究有待进一步开展。目前，缺血再灌注损伤成为溶栓疗法、搭桥术、断肢再植、器官移植等医疗措施成败的关键因素之一。因此，研制防治缺血再灌注损伤等方面的产品，特别是药物，意义重大， 并具有显著的社会效益和经济效益。随着对胆碱能抗炎通路的研究不断趋于完善，也一定会产生更多相关的应用思路和切实可行的方法服务于临床治疗，同时也为研究防治缺血再灌注损伤提供了一条的新的策略。发明人通过对含有M胆碱受体阻断剂和胆碱脂酶抑制剂的药物组合物进行系统的筛选，并推断该药物组合物在防治缺血再灌注损伤等方面的药效，应主要是通过胆碱能抗炎通路来发挥的，研究结果也证明和证实了该药物组合物具有显著的抗缺血再灌注损伤的药理作用。根据此想法和思路，发明人通过反复的实验研究与分析和理论探索，已成功得到预期的研究结果和应用产品。( 二)抗缺血再灌注损伤组合物及其制备方法所述的抗缺血再灌注损伤组合物是包括M胆碱受体阻断剂和胆碱脂酶抑制剂的药物组合物；所述的M胆碱受体阻断剂与胆碱脂酶抑制剂的重量比为I : O. 005 50 ;进一步优选I : O. I 8 ;最优选为I : 2。所述的M胆碱受体阻断剂是本领域常规使用的M胆碱受体阻断剂，是包括阿托品、 山莨菪碱、含山莨菪碱的植物提取物、东莨菪碱、含东莨菪碱的植物提取物、后马托品或托批卡胺等中的一种或多种，优选阿托品、山莨菪碱、含山莨菪碱的植物提取物、东莨菪碱或含东莨菪碱的植物提取物等中的一种或多种，进一步优选阿托品、山莨菪碱或东莨菪碱等中的一种或多种，最优选阿托品；所述的阿托品的结构式如式I所示，它是由托品酸和有机碱形成的酯类，结构与山莨菪碱和东莨菪碱相类似；
权利要求
1.一种抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的该抗缺血再灌注损伤组合物包括以下组分M胆碱受体阻断剂和胆碱脂酶抑制剂。
2.根据权利要求I所述的抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的M胆碱受体阻断剂与胆碱脂酶抑制剂的重量比为I : O. 005 50。
3.根据权利要求2所述的抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的M胆碱受体阻断剂与胆碱脂酶抑制剂的重量比为I : O. I 8。
4.根据权利要求3所述的抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的M胆碱受体阻断剂与胆碱脂酶抑制剂的重量比为I : 2。
5.根据权利要求I所述的抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的M胆碱受体阻断剂是本领域常规使用的M胆碱受体阻断剂。
6.根据权利要求5所述的抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的M胆碱受体阻断剂是包括阿托品、山莨菪碱、含山莨菪碱的植物提取物、东莨菪碱、含东莨菪碱的植物提取物、后马托品或托吡卡胺中的一种或多种。
7.根据权利要求6所述的抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的M胆碱受体阻断剂是包括阿托品、山莨菪碱或东莨菪碱中的一种或多种。
8.根据权利要求7所述的抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的M胆碱受体阻断剂是阿托品。
9.根据权利要求I所述的抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的胆碱脂酶抑制剂是本领域常规使用的胆碱脂酶抑制剂。
10.根据权利要求9所述的抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的胆碱脂酶抑制剂是包括新斯的明或毒扁豆碱中的一种或多种。
11.根据权利要求10所述的抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的胆碱脂酶抑制剂是新斯的明。
12.根据权利要求I 11任一项所述的抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的该组合物的制备方法如下将所述的M胆碱受体阻断剂、胆碱脂酶抑制剂按比例进行混合，即得所述的抗缺血再灌注损伤组合物。
13.根据权利要求I 11任一项所述的抗缺血再灌注损伤组合物，其特征在于，所述的该组合物的使用方法如下不进行事先的混合，而是直接将M胆碱受体阻断剂与胆碱脂酶抑制剂单品种分别使用，并先后连续使用。
14.根据权利要求I 11任一项所述的抗缺血再灌注损伤组合物用于制备抗缺血再灌注损伤产品。
15.根据权利要求14所述的抗缺血再灌注损伤组合物用于制备抗肝脏缺血再灌注损伤产品。
16.根据权利要求I 11任一项所述的抗缺血再灌注损伤组合物的组合物用于制备抗缺血再灌注损伤产品。
17.根据权利要求16所述的抗缺血再灌注损伤组合物的组合物用于制备抗肝脏缺血再灌注损伤产品。
全文摘要
本发明涉及用于治疗缺血再灌注损伤、特别是肝脏缺血再灌注损伤的药物组合物及其制备方法和用途。该组合物含有M胆碱受体阻断剂和胆碱脂酶抑制剂，制备工艺简便，使用安全，疗效显著，可明显改善缺血再灌注损伤引起的细胞凋亡，克服了现有的常用药物造成的副作用。本发明拓展了现有的毒蕈碱受体阻断剂新的医药用途，也为防治缺血再灌注损伤提供了一种新的药物干预手段。适于医药、试剂等工业和行业的大规模生产和商业应用，具有良好应用前景，具有显著的社会效益、经济效益。
文档编号A61K31/27GK102580099SQ20111032125
公开日2012年7月18日 申请日期2011年10月20日 优先权日2011年10月20日
发明者倪敏, 杨中伟, 沈甫明, 苏定冯, 赵婷 申请人:中国人民解放军第二军医大学