专利名称：一种治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合、制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物组合，更具体的说涉及一种治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合、制备方法及应用。
背景技术：
“肝肾同源”的哲学思想渊源于《易经》，医学基础根源于《内经》，临床实践丰富于汉唐金元，理论体系形成于明代，实验研究发展于现代。“肝肾同源”是指肝肾的结构和功能虽有差异，但其起源相同，生理病理密切相关，可采用“肾肝同治”的治疗法则。中医认为肝肾阴虚证是肝肾两胜阴液不足所致的病证。多由久病及肾，或房事过度，情志内伤，精血不足，损伤肝肾之阴等引起。肝损伤是临床常见的危害人类健康的疾病。肝损伤就是肝脏受到外界因素的入侵，从而引起的肝脏受损。肝损伤分为病理性肝损伤和化学性肝损伤。中医药经过几千年的发展研究，对肝损伤有一定的促再生和修复作用，因此运用中医药综合治疗作用，来减轻或控制非暴力性肝损伤的发生，应当是一种既有效而又切实可行的治疗思路。枸杞子之名始见于《神农本草经》，并列为上品，千百年来深受人们的喜爱。晋朝葛洪单用枸杞子捣汁滴目，治疗眼科疾患；唐代孙思邈用枸杞子配合其他药制成补肝丸，治疗肝经虚寒，目暗不明；唐代李梃《医学入门》中的五子衍宗丸，就是用枸杞配合菟丝子等做成蜜丸，用淡盐水送服，治疗男子阳痿早泄、久不生育，须发早白及小便后余浙不禁。枸杞子在增强性功能方面的具有独特的作用。另外，枸杞子中的甜菜碱盐酸盐能使大鼠血清和肝内的磷脂明显增加，对长期给予四氯化碳所致的大鼠磷脂下降及胆固醇升高具有明显的保护作用，水溶性提取物亦有类似作用。同样，女贞子中富含的齐墩果酸30、50、100mg/kg皮下注射，可抑制四氯化碳引起的大鼠血清谷丙转氨酶(SGPT)的升高，对未经四氯化碳处理的大鼠，齐墩果酸50、100mg/ kg皮下注射，也可使SGPT下降。齐墩果酸70mg/kg皮下注射，可减轻四氯化碳造成的肝损伤，组织学观察，肝细胞空泡变性、疏松变性、肝细胞坏死、小叶间质炎症，均较相应的对照组轻。齐墩果酸ang/只皮下注射，连续6 9周，女贞子对四氯化碳造成的大鼠肝硬变有防治作用。女贞子中既有雌激素样物质，也有雄激素样的物质存在，经放射免疫测定，女贞子含睾丸酮428. 31 μ g/g，雌二醇139. 02 μ g/g。证明女贞子既有睾丸酮样也有雌二醇样的激素类似物，即同一药物具有双向调节作用。用女贞子等补肾阴的中药在无势小白鼠阴道粘膜上产生了雌激素样作用，服药组兔卵巢的大卵泡数明显增多，雌激素升高。自古以来大量的中医经典验方采用枸杞子和女贞子为君药治疗肝肾疾病。
发明内容
为解决上述问题，本发明在参考传统经典验方的基础上结合现代提取工艺，提供了一种治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合、制备方法及应用，具体如下
治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合的制备方法，包括以下步骤1)将女贞子和五味子原药材用原药材重量比5倍量的乙醇回流提取3次，每次2小时， 除去回流提取液中的固体杂质，合并回收乙醇，得到女贞子和五味子提取物；
2)将枸杞子原药材用重量比5倍的水回流提取3次，第1次1小时，第2、3次40分钟， 除去回流提取液中的固体杂质，得到枸杞子提取物；
3)将丹参原药材用重量比为5倍的乙醇回流提取2次，每次2小时，除去回流提取液中的固体杂质，合并回收乙醇得到丹参提取物；
4)将上述步骤获得的女贞子和五味子提取物、枸杞子提取物和丹参提取物真空浓缩成为50 60°C条件下相对水密度1. 20士0. 02的浸膏，得到第一组药物提取物；
5)将上述步骤中丹参、五味子、女贞子的原药材提取后的固体药物残渣与郁金、太子参、柴胡、白花蛇舌草的原药材合并，用药材重量比5倍的水回流提取3次，第1次小时，第 2、3次分别是40分钟，除去回流提取液中的固体杂质得到混合提取液；
6)将步骤5)中的混合提取液过大孔树脂柱，回收乙醇洗脱液，真空浓缩成为50 60°C 条件下相对水密度1. 20士0. 02的浸膏，得到第二组药物提取物；
7)合并干燥第一组药物提取物和第二组药物提取物，得到用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合。步骤1)中回流提取五味子和女贞子的乙醇浓度为75%。步骤3)中提取丹参第1、2次回流的乙醇的浓度为95%，第3、4次回流的乙醇浓度为 60%ο步骤6)中大孔树脂吸附条件为将混合提取液冷却至50士3°C时上样，大孔树脂用量的重量为上样量的重量的5倍，上样后洗脱的水的重量为原药材重量的3倍，乙醇洗脱的浓度为70%，洗脱乙醇的重量为原药材重量的6倍。所述大孔树脂为D1Q1、DM13Q、D201或AB-8中任意一种。一种用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合，所述治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合是由前述的方法制备用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合的方法提取得到的第一组药物提取物和第二组药物提取物混合制备成的混合物；
其中，所述枸杞子、女贞子、五味子、丹参、郁金、柴胡、太子参、白花蛇舌草原药材的重量比为4 6:3 5:2 4:2 4:2 4:2 4:1:3 5。所述枸杞子、女贞子、五味子、丹参、郁金、柴胡、太子参、白花蛇舌草原药材的重量比为 5:4:3:3:3:3:1:4。所述的治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合在制备治疗肝脏损伤的药物中的应用。所述的治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合在制备治疗肾虚的药物中的应用。本发明的有益技术效果是本发明提供的药物组合具备治疗治疗肝脏损伤和肾虚的疗效，对酒精、TAA所致的实验性急性肝损伤模型小鼠血清ALT、AST水平的异常升高具有显著的抑制作用，能明显改善模型动物肝脏组织的病理组织学变化；同时药理实验证明还能提高雌、雄性模型大鼠生育力；同时，本发明所提供的制备方法使中药的有效成分转移率更高，减少了杂质，使患者的服药剂量更小，为该药物组合开发其他的剂型创造了条件。
具体实施方式
实施例1药物组合的制备方法1
按照枸杞子、女贞子、五味子、丹参、郁金、柴胡、太子参、白花蛇舌草原药材的重量比为 5:4:3:3:3:3:1:4，分别称量枸杞子150g、女贞子120g、五味子90g、丹参90g、郁金90g、柴胡 90g、太子参30g、白花蛇舌草120g。将女贞子和五味子原药材用原药材重量比5倍的75%乙醇回流提取3次，每次2 小时，除去回流提取液中的固体杂质，合并回收乙醇，得到女贞子和五味子提取物；
将枸杞子原药材用重量比5倍的水回流提取3次，第1次1小时，第2、3次40分钟，除去回流提取液中的固体杂质，得到枸杞子提取物；
将丹参原药材用重量比为5倍的分别用95%乙醇、60%乙醇回流提取，每次2小时，除去回流提取液中的固体杂质，合并回收乙醇得到丹参提取物；
将上述步骤获得的女贞子和五味子提取物、枸杞子提取物和丹参提取物真空浓缩成为 50 60°C条件下相对水密度1. 20士0. 02的浸膏，得到第一组药物提取物；
将上述步骤中丹参、五味子、女贞子的原药材提取后的固体药物残渣与郁金、太子参、 柴胡、白花蛇舌草的原药材合并，用药材重量比4 6倍的水回流提取3次，第1次小时，第 2、3次分别是40分钟，除去回流提取液中的固体杂质得到混合提取液；
混合提取液过通过上D1(ll、DM130^ D201或AB-8任意一种大孔树脂柱，树脂用重量为药材重量的5倍，待药液流尽后用药材重量3倍水洗脱柱，水洗后续用为药材重量的6倍70%乙醇洗脱树脂柱，收集70%乙醇洗脱液，回收乙醇，真空浓缩，回收乙醇洗脱液，真空浓缩成为 50 60°C条件下相对水密度1. 20士0. 02的浸膏，得到第二组药物提取物；
合并干燥第一组药物提取物和第二组药物提取物，得到用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合I。实施例2药物组合的制备方法2
按照枸杞子、女贞子、五味子、丹参、郁金、柴胡、太子参、白花蛇舌草原药材的重量比为 4:5:3:3:3:3:1:4，分别称量枸杞子120g、女贞子150g、五味子90g、丹参90g、郁金90g、柴胡 90g、太子参30g、白花蛇舌草120g。按实施例1所述的方法制备，得到用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合II。实施例3药物组合的制备方法3
按照枸杞子、女贞子、五味子、丹参、郁金、柴胡、太子参、白花蛇舌草原药材的重量比为 6:3:3:3:3:3:1:4，分别称量枸杞子180g、女贞子90g、五味子90g、丹参90g、郁金90g、柴胡 90 g、太子参30g、白花蛇舌草120g。按实施例1所述的方法制备，得到用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合III。实施例4药物组合的制备方法4
按照枸杞子、女贞子、五味子、丹参、郁金、柴胡、太子参、白花蛇舌草原药材的重量比为 5:4:2:2:2:2:1:3，分别称量枸杞子150g、女贞子120g、五味子60g、丹参60g、郁金60g、柴胡 60g、太子参30g、白花蛇舌草90g。按实施例1所述的方法制备，得到用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合IV。实施例5药物组合的制备方法5
按照枸杞子、女贞子、五味子、丹参、郁金、柴胡、太子参、白花蛇舌草原药材的重量比为 5:4:4:4:4:4:1:5，分别称量枸杞子150g、女贞子120g、五味子120g、丹参120g、郁金120g、柴胡120g、太子参30g、白花蛇舌草150g。按实施例1所述的方法制备，得到用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合V。实施例6实施例1所述贞杞药物组合I的肝损伤药理作用活性考察 1)贞杞药物组合I抗小鼠急性酒精肝损伤的作用
小鼠贞杞药物组合I给药剂量为成人日用量的12、6、3倍，临用前用葡萄糖氯化钠注射液稀释配制成每ImL含有4g、2g、Ig原药材提取物的药液备用。护肝片由黑龙江葵花药业股份有限公司生产。成人(60kg)临床口服12片/日(片重0. 5g)，小鼠用量为成人日用量的 12倍(即12g/kg)，实验前用蒸馏水配制成6%的药液备用，小鼠灌胃体积为(0. 2mL/10g)。60只小鼠随机分为6组，各组灌胃给药。每日给药1次，连续8天。从给药第4天起，每天给药0.证后，小鼠灌胃56度白酒8mL/kg(正常组给同等体积蒸馏水)，2次/天， 两次间隔3 4h，小鼠给药与灌酒之前均禁食。连续5天，末次灌胃白酒后lh，摘除小鼠眼球取血，分离血清，测定血清中ALT和AST水平，解剖分离肝脏，称重，计算肝脏指数，另取相同部位肝组织，10%甲醛固定，切片，HE染色后观察肝脏病理组织学改变；具体结果如表1、 2所示。表1贞杞药物组合I对急性酒精肝损伤模型小鼠肝脏指数与血清ALT、AST水平的影响〔1 士 s)
与模型组比较* P < 0.05，* P < 0.01 (下表同) 表2贞杞药物组合I对急性酒精肝损伤模型小鼠肝脏病理学组织学变化的影响
病变等级标准一，正常，无肝细胞疏松化、气球样变等病变；+，肝小叶不到1/3区域肝细胞轻度肿胀，胞浆疏松化。但肝细胞索基本清楚，肝窦尚可见+ +，中度胞浆疏松化，介于肝细胞轻度肿胀与气球样之间，肝索稍显紊乱，肝窦开始出现现狭窄。通过表1、表2发现，与正常组比较，模型组小鼠肝脏指数呈现升高的趋势，但无统计学意义，贞杞药物组合I各剂量与模型组比较呈现降低趋势。与正常组比较，模型组小鼠血清ALT和AST水平显著升高，贞杞药物组合I各剂量呈现一定降低趋势，其中贞杞药物组合I中高剂量组降低模型小鼠血清AST水平的作用明显；中剂量组降低模型小鼠血清ALT 水平的作用较优。病理组织学检查表明，模型组小鼠肝细胞出现不同程度的胞浆疏松化、细胞水肿、气球样变、溶解性坏死，肝索紊乱、肝窦狭窄等病理改变，贞杞药物组合I连续给药 8天，各剂量均呈现不同程度的改善作用。2)贞杞药物组合I抗小鼠急性TAA肝损伤的作用
60只小鼠随机分为6组，分组与给药方式同实验1 )。各组每日给药1次，连续8天。末次给药0. 后，除正常组外各组小鼠腹腔注射TAA 50mg/kg，禁食16h后，摘除小鼠眼球取血，分离血清，同实验1)方法测定血清ALT和AST水平、肝脏指数，进行肝脏病理组织学检查。具体结果如表3、4所示；
表3贞杞药物组合I对急性TAA肝损伤模型小鼠肝脏指数与血清ALT、AST水平的影
响
权利要求
1.一种治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)将女贞子和五味子原药材用原药材重量比5倍量的乙醇回流提取3次，每次2小时， 除去回流提取液中的固体杂质，合并回收乙醇，得到女贞子和五味子提取物；2)将枸杞子原药材用重量比5倍的水回流提取3次，第1次1小时，第2、3次40分钟， 除去回流提取液中的固体杂质，得到枸杞子提取物；3)将丹参原药材用重量比为5倍的乙醇回流提取4次，每次2小时，除去回流提取液中的固体杂质，合并回收乙醇得到丹参提取物；4)将上述步骤获得的女贞子和五味子提取物、枸杞子提取物和丹参提取物真空浓缩成为50 60°C条件下相对水密度1. 20士0. 02的浸膏，得到第一组药物提取物；5)将上述步骤中丹参、五味子、女贞子的原药材提取后的固体药物残渣与郁金、太子参、柴胡、白花蛇舌草的原药材合并，用药材重量比5倍的水回流提取3次，第1次小时，第 2、3次分别是40分钟，除去回流提取液中的固体杂质得到混合提取液；6)将步骤5)中的混合提取液过大孔树脂柱，回收乙醇洗脱液，真空浓缩成为50 60°C 条件下相对水密度1. 20士0. 02的浸膏，得到第二组药物提取物；7)合并干燥第一组药物提取物和第二组药物提取物，得到用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合。
2.根据权利要求1所述的用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合的制备方法，其特征在于步骤1)中回流提取五味子和女贞子的乙醇浓度为75%。
3.根据权利要求1所述的用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合的制备方法，其特征在于步骤3)中提取丹参第1、2次回流的乙醇的浓度为95%，第3、4次回流的乙醇浓度为 60%。
4.根据权利要求1所述的治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合的制备方法，其特征在于步骤6)中大孔树脂吸附条件为将混合提取液冷却至50士3°C时上样，大孔树脂用量的重量为上样量的重量的5倍，上样后洗脱的水的重量为原药材重量的3倍，乙醇洗脱的浓度为70%，洗脱乙醇的重量为原药材重量的6倍。
5.根据权利要求4所述的治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合的制备方法，其特征在于所述大孔树脂为D1(ll、DM130^ D201或AB-8中任意一种。
6.一种用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合，其特征在于所述治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合是由根据权利要求1、2、3、4或5所述的方法制备用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合的方法提取得到的第一组药物提取物和第二组药物提取物混合制备成的混合物；其中，所述枸杞子、女贞子、五味子、丹参、郁金、柴胡、太子参、白花蛇舌草原药材的重量比为4 6:3 5:2 4:2 4:2 4:2 4:1:3 5。
7.根据权利要求6所述的用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合，其特征在于 所述枸杞子、女贞子、五味子、丹参、郁金、柴胡、太子参、白花蛇舌草原药材的重量比为 5·4·3·3·3·3.1.4ο
8.根据权利1 7之一所述的用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合在制备治疗肝脏损伤的药物中的应用。
9.根据权利1 7之一所述的用于治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合在制备治疗肾虚的药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种治疗肝损伤和肾虚的贞杞药物组合、制备方法及应用；其提供的药物组合具备治疗治疗肝脏损伤和肾虚的疗效，对酒精、TAA所致的实验性急性肝损伤模型小鼠血清ALT、AST水平的异常升高具有显著的抑制作用，能明显改善模型动物肝脏组织的病理组织学变化；同时药理实验证明还能提高雌、雄性模型大鼠生育力；同时，本发明所提供的制备方法使中药的有效成分转移率更高，减少了杂质，使患者的服药剂量更小，为该药物组合开发其他的剂型创造了条件。
文档编号A61P13/12GK102423455SQ20111036547
公开日2012年4月25日 申请日期2011年11月17日 优先权日2011年11月17日
发明者秦剑, 陈用芳 申请人:吉林国药制药有限责任公司