铁筷子总皂苷在制备防治肝损伤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于肝胆科治疗领域，涉及铁筷子总皂苷在制备保护急性肝损伤的药物中 的应用。
【背景技术】
[0002] 肝损伤是由多种病因引起且有多种因素参与的复杂过程。肝损伤引发的肝脏疾病 已成为常见病、多发病，更为严重的是其引发的肝功能衰竭和肝性脑病等，发病率和死亡率 高，极大地威胁着人类的健康。很多因素可引起肝损伤，体内模型特别是化学性肝损伤模 型，在形态学、病理生理学的某些方面与人慢性肝病较为相似。腹腔注射CCl 4植物油溶液是 目前常用的肝炎模型。CCl4引起肝损伤的机制是CCl 4在肝微粒体细胞色素 P450激活下生 成自由基CCl3 ?及Cl ·，这些自由基可与肝细胞内大分子发生共价结合，也可攻击膜下不 饱和脂质，引起脂质过氧化，使肝细胞损伤，细胞质内GPT、GOT渗入血液，结果血清中GPT、 GOT的活性升高，SOD活性及MDA含量常可反映体内脂质过氧化反应程度，间接反映机体组 织、细胞损伤的程度。通过检测小鼠肝匀浆中的SOD活性及MDA含量可反映出药物对肝细 胞的保护作用。因此本申请以血清GPT、G0T、肝组织SOD活性及MDA含量作为指标来探讨 铁筷子总皂苷对肝损伤的保护作用。
[0003]目前，肝损伤的治疗方法有很多，虽然均有一定的疗效，但也存在着明显的不足。 首先，西药具有较大的毒副作用，且疗效并不确切。其次，实验和临床研究证实，中药在抗菌 抗病毒、改善肝功能、抗氧化、改善微循环、调节免疫功能以及抗肝纤维化等方面显示出良 好的疗效，安全、可靠、有效，进一步显示出中医辨证论治的合理性，突显了中药在治疗肝损 伤，尤其是内毒素性急性肝损伤方面的良好前景。国内外尚未见到有关于铁筷子总皂苷对 急性肝损伤小鼠保护作用的报道。
[0004] 铁筷了（H elleborus、thabetanus Franch.)为毛莨科铁筷子属多年生草本植物， 又名嚏根草、小桃儿七等。铁筷子属植物约有20余种，主要分布在欧洲东南部和亚洲西部， 其中，H elleborus thabetanus Franch.为我国西部特产种，主要分布于秦岭和大巴山区。 其根茎为主要药用部位，具活血散癖、消肿止痛、清热解毒之功效，民间主要用于治疗膀胱 炎、尿道炎、疮疖肿毒及跌打损伤等症。国内外的研究表明，铁筷了属植物含有留体皂苷、黄 酮、木质素、多糖、氨基酸等成分。其中铁筷了总皂苷因具有增大心肌收缩力和心搏出量、减 低心律、消除水肿与呼吸道困难的强心作用，促进糖元产生以抑制乳酸生成的胰岛素样作 用，抑制肿瘤细胞的生长，促进白细胞增多以及提高人体系统免疫力等多种生理功能而受 到人们的关注。然未见关于铁筷子总皂苷有保护肝损伤作用的研究。
【发明内容】
[0005] 本发明目的在于提供一种铁筷子总皂苷，该提取物具有保肝护肝作用，可用来制 备保护肝损伤的药物。
[0006] 所述铁筷子总皂苷在制备保肝护肝药物方面的应用，尤其是在制备保护急性肝损 伤药物方面的应用。
[0007] 本发明还提供了一种药物组合物，包含有效量的铁筷子总皂苷和一种或多种药学 上可接受的辅料，所述药物组合物含有重量比为1~99%的铁筷子总皂苷。
[0008] 所述药物组合物还可以包含其他治疗肝损伤的活性成分，包括中药和西药组分。
[0009] 优选的，所述药物组合物含有重量比为10~60%的铁筷子总皂苷。
[0010] 本发明的应用中，所述铁筷子总皂苷制剂剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂或口 服液制剂中的一种，为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料， 例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等，填充剂包括：淀 粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等，崩解剂包括：淀粉、预胶化淀 粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维 素钠等，润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等，助悬剂包括：聚乙 烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等，粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡 咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等，甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等， 矫味剂包括：甜味剂及各种香精，防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐 类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等。
[0011] 本发明所述药物的使用剂量和使用方法取决于诸多因素，包括患者的年龄、体重、 性别、自然健康状况、营养状况、化合物的活性强度、服用时间、代谢速率、病程严重程度以 及诊治医师的主观判断。本领域的技术人员根据上述因素可以容易地决定使用剂量和使用 方法。本发明的活性成分铁筷子总皂苷制成各种剂型的口服药物，成人口服，常用剂量一次 0·l_50mg/kg。
[0012] 为证实上述提取物的保肝护肝作用，本发明以联苯双酯为阳性对照，分别考察了 铁筷子总皂苷对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠的治疗作用。小鼠体内实验结果表明，铁 筷子总皂苷对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠有较好的治疗作用。
[0013] 在现有文献中记载了铁筷子总皂苷的制备方法，例如ZL201410550317,《西北农业 学报》2008年17(6) :262-266,在此将它们全部引入本文。本发明的铁筷子总皂苷可以是 由这些方法制备，或者采用已知的其他方法。
[0014] 下面用具体的实施例来证明铁筷子总皂苷的效果。
【具体实施方式】
[0015] 效果试验
[0016] 以ZL201410550317的实施例2制各铁筷子总皂苷，测定其试验结果。
[0017] (一）主要试剂与仪器：
[0018] 四氯化碳（分析纯）购自烟台三和化学试剂公司；橄榄油购自上海卫辉化学试剂 厂；联苯双酯购自浙江万邦药业有限公司，批号：090205 ;考马斯亮蓝G250购自上海化学试 剂公司分装厂，批号：20050115 ;牛清蛋白购自北京奥博星生物技术有限责任公司，批号： 20100526 ;其它试剂均为分析纯。
[0019] 谷草转氨酶（GOT)试剂盒（20110613)、谷丙转氨酶（GPT)试剂盒（20110808)、丙 二醛（MDA)试剂盒（20110803)、超氧化物歧化酶（SOD)测定试剂盒（20110802)均购于中生 北控生物科技股份有限公司。
[0020] 〇· 4V% CCl4油溶液：取四氯化碳分散到橄榄油中，用磁力搅拌器强力搅拌2h ;现 用现配。
[0021] UV 2000型紫外可见分光光度计（尤尼可上海仪器有限公司）；Multiskan MK3酶 标仪（Thermo Electron) ;LRH-150恒温培养箱（上海一恒科技有限公司）。
[0022] (二）实验方法：
[0023] 取健康的成年雄性昆明小鼠（4~6周龄，体重20±2g)90只，随机分为9组，每 组10只。分别为空白组、模型组、联苯双酯阳性对照组（70mg/kg)、铁筷子总皂苷高、中、 低剂量组（400、200、100mg/kg)。除模型组外，空白组用0.5%的羟甲基纤维素钠水溶液 (CMC-Na)灌胃，其它试验组用0. 5 % CMC-Na分别配制成相应浓度灌胃给药，1次/天，连续 给药8天。于末次给药2h后对小鼠进行造模（空白组除外）。禁食不禁水12h后，摘除小鼠 眼球取血，血浆室温静置30min，待血清分离后离心得到血清，置于冰箱0-3°C保存，测GPT 和GOT。快速分离肝脏，制备10%和1 %的肝脏组织匀浆液，离心取上清液0-3°C保存测MDA 和S0D，并用考马斯亮蓝法测定10%和1 %组织匀浆液的蛋白含量。
[0024] (三）实验结果：
[0025] 表 1
[0027] 与空白组比较，Δ Δ Δρ < 〇· 001 ;与模型组比较，*p < 〇· 05, **p < 0· 001，***p < 0. 001
[0028] 从表1可以看出，模型组与空白组相比，血清中⑶P和GOT含量升高，且具有极显 著性差异（P < 0. 001)，说明造模成功。铁筷子总皂苷）高、中、低剂量组均能够显著的降低 急性肝损伤小鼠血清中的GPT和GOT含量（P < 0. 001)。由此表明铁筷子总皂苷对化学性 肝损伤有很强的保护作用。
[0029] 表 2
[0031] 与空白组比较，Δ Δ Δρ < 〇· 001 ;与模型组比较，*p < 〇· 05, **p < 0· 001，***p < 0. 001
[0032] 表2显示，模型组小鼠 SOD含量显著低于空白对照组（P < 0. 001)，MDA含量显著 高于空白对照组（P < 0. 001)，说明造模成功。与模型组相比，铁筷子总皂苷高、中、低剂量 组均能显著降低四氯化碳致急性肝损伤小鼠肝组织中MDA的含量（P < 0. 001)，并显著升高 SOD 含量（P < 0· 05)。
[0033] 综上说明，铁筷子总皂苷具有较好的保肝护肝作用，可以用来制备保肝护肝药物， 尤其是制备具有保护急性肝损伤的药物。
【主权项】
1. 铁筷子总皂苷在制备保肝护肝药物方面的应用。2. 铁筷子总皂苷在制备保护肝损伤药物方面的应用。3. 铁筷子总皂苷在制备保护急性肝损伤药物方面的应用。4. 一种保肝护肝的药物组合物，包含有效量的铁筷子总皂苷和一种或多种药学上可接 受的辅料，所述药物组合物含有重量比为1~99%的铁筷子总皂苷。5. 权利要求4的药物组合物，还可以包含其他治疗肝损伤的活性成分。6. 权利要求4的药物组合物，含有重量比为10~60%的铁筷子总皂苷。
【专利摘要】本发明涉及铁筷子总皂苷的一种新用途，具体涉及铁筷子总皂苷在保护肝脏功能上的新用途。通过对铁筷子总皂苷的研究，发现其对采用四氯化碳制备的小鼠急性肝损伤模型具有保护作用，进而将其用于防治多种原因引起的肝损伤。
【IPC分类】A61P1/16, A61K36/185
【公开号】CN104997818
【申请号】CN201510471597
【发明人】宫琳, 施露
【申请人】宫琳, 施露
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2015年8月5日