专利名称：萱草花提取物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药的提取物及其制备方法，特别涉及萱草花提取物及其制备方法。
背景技术：
萱草花，即黄花菜(Hemerocallis citrina Baroni)，又名“金针菜”、“一日百合”， 俗称“忘忧草”，属百合科萱草属多年生草本植物植物，在我国各地多有种植，明代李时珍在 《本草纲目》中称其有安神醒脑、增智宽胸、美容养血、解热消毒、除烦通乳之功效。现代研究萱草花具有补脑健智、化瘀止血、通络止痛、抗菌消炎等功效，它具有增强免疫力、活血化瘀、保肝抗炎、抗菌抗病毒、抑制肿瘤、清除氧自由基和抑菌作用等多种功能。其具有丰富的营养成份，主要化学成分有蛋白质、脂肪、碳水化合物，还有多种维生素、生物碱、苷、黄酮类、胡萝卜素、挥发油、鞣质以及无机矿物钙、磷，以黄酮类化合物为主要成分，可以药食两用，鉴于黄酮类化合物具有保肝抗炎、镇定补脑、延缓衰老抗抑郁等多种生理活性功效，黄酮类化合物的研究日益引起人们的关注。为进一步开发和利用萱草花这种药食两用的植物，萱草花的总黄酮的提取工艺是值得研究和开发的。
发明内容
本发明的目的在于公开一种萱草花提取物制备方法；本发明的另一个目的在于公开萱草花提取物的指纹图谱检测方法。本发明的目的是通过如下技术方案实现的本发明所述萱草花提取物的制备方法，包括如下步骤步骤1 萱草花乙醇60°C以下提取；步骤2 乙醇提取液过大孔树脂柱；步骤3 回收乙醇得萱草花提取物。所述步骤1中优选萱草花乙醇30°C以下提取；所述步骤1中萱草花乙醇提取为30°C以下浸提或渗漉；优选的，步骤1浸提加入乙醇的量为药材的6-12体积倍，乙醇为60% -95%乙醇； 最优选为70%乙醇；优选的，步骤1浸提时间为18-48小时；优选的，步骤1乙醇浸提，滤过，滤渣再加入乙醇，浸泡，滤过；合并滤液；步骤1进一步优选为将萱草花中加入8体积倍的70%乙醇，300C以下浸泡24小时，滤过，滤液备用，滤渣再加入8体积倍的70%乙醇，300C以下浸泡24小时，滤过，合并滤液；所述步骤1 渗漉的方法为用70%乙醇作溶剂，30°C以下浸渍24小时，30°C以下以每分钟l_3ml的速度渗漉，收集渗漉液。步骤2优选的，乙醇提取液液过大孔树脂柱，蒸馏水洗至流出液透明，用20% -95%乙醇洗脱2-6倍柱体积；步骤2优选的，大孔树脂柱为AB-8大孔树脂柱；乙醇洗脱液的浓度为 55% -65%。步骤2优选的，乙醇冷浸液过AB-8大孔树脂柱，蒸馏水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脱3倍柱体积，回收乙醇。本发明还包括用所述萱草花提取物作为药物活性成分制成的任何一种药物制剂。 可以按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，例如胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂等制剂。本发明进一步提供萱草花提取物的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤步骤1 萱草花乙醇在60°C以下提取，得乙醇提取液；步骤2 乙醇提取液过大孔树脂柱；步骤3 回收乙醇得萱草花提取物。步骤4 萱草花提取物HPLC指纹图谱检测。所述步骤1中优选萱草花乙醇30°C以下提取；所述步骤1 萱草花乙醇提取为30°C以下浸提或渗漉；优选的，步骤1浸提加入乙醇的量为药材的6-12体积倍，乙醇为60% -95%乙醇； 最优选为70%乙醇；优选的，步骤1浸提时间为18-48小时；优选的，步骤1乙醇浸提，滤过，滤渣再加入乙醇，浸泡，滤过；合并滤液；步骤1进一步优选为将萱草花中加入8体积倍的70%乙醇，300C以下浸泡24小时，滤过，滤液备用，滤渣再加入8体积倍的70%乙醇，300C以下浸泡24小时，滤过，合并滤液；所述步骤1 渗漉的方法为用70%乙醇作溶剂，30°C以下浸渍24小时，30°C以下以每分钟l_3ml的速度渗漉，收集渗漉液。步骤2优选的，乙醇提取液液过大孔树脂柱，蒸馏水洗至流出液透明，用 20% -95%乙醇洗脱2-6倍柱体积；步骤2优选的，大孔树脂柱为AB-8大孔树脂柱；乙醇洗脱液的浓度为 55% -65%。步骤2优选的，乙醇冷浸液过AB-8大孔树脂柱，蒸馏水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脱3倍柱体积，回收乙醇。本发明还提供萱草花提取物的HPLC指纹图谱检测方法色谱条件C18色谱柱，流动相甲醇-水(0. 5%冰醋酸)梯度洗，0. 5-1. SmL/mirT1， 检测波长200-300nm，柱温20-30°C ；所述甲醇-水(0.5%冰醋酸)梯度洗脱的条件为第 0-20min 甲醇为20%，0. 5%的冰醋酸水溶液为80% ；第20_30min 甲醇为30%，0. 5%的冰醋酸水溶液为70% ；第30-70min 甲醇为30%，0. 5%的冰醋酸水溶液为70% ；第70min 到最后甲醇为80%，0. 5%的冰醋酸水溶液为20% ；对照品溶液的制备称取芦丁，加甲醇制成对照品溶液；供试品溶液的制备称取萱草花提取物粉末，加甲醇超声提取，静置，取上清液滤过，取滤液，即得。
检测方法吸取对照品、供试品溶液，进样检测。对照品溶液的制备方法优选为称取芦丁，加甲醇制成每ImL含0. 2176mg的溶液， 摇勻，即得；供试品溶液的制备方法优选为精密称取样品粉末2g，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理30分钟，甲醇补足损失的重量，静置放冷，取上清液，0. 22 μ m微孔滤膜滤过，取滤液，即得。所述指纹图谱包括12个共有特征峰，以3号为芦丁为参照峰，相对保留时间及相对峰面积分别为1号峰相对保留时间为0. 232，相对峰面积为0. 051 0. 278 ；2号峰相对保留时间为0. 936，相对峰面积为0. 020-0. 212 ；4号峰相对保留时间为1. 039，相对峰面积为0. 023-0. 041 ；5号峰相对保留时间为1. 079，相对峰面积为0. 008-0. 178 ；，6号峰相对保留时间为1. 095，相对峰面积为0. 005-0. 029 ；7号峰相对保留时间为1. 115，相对峰面积为0. 045-0. 367 ；8号峰相对保留时间为1. 135，相对峰面积为0. 049-0. 269 ；9号峰相对保留时间为1. 159，相对峰面积为0. 004-0. 023 ；10号峰相对保留时间为1. 171，相对峰面积为0. 003-0. 014 ；11号峰相对保留时间为1. 218，相对峰面积为0. 012-0. 062 ；12号峰相对保留时间为1. 326，相对峰面积为0. 002-0. 313。现有技术采用乙醇回流法提取浓缩的药材溶液在DlOl柱分离之前会有大量脂溶性杂质析出，粘稠难以上柱。本发明萱草花提取物制备方法中发现采用乙醇冷浸，杂质少， 特别是水溶性杂质较少，大生产时浸渍药液不会因放置产生沉淀而堵塞大孔树脂柱子，极大的减少了对树脂的污染，利于树脂的再生利用，经济适用，并且突破以往冷浸比加热提取有效成分会减少的认识，提取效率高，不仅经济并有高效率，适于大生产。本发明所提供的萱草花的指纹图谱检测方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，分析方法稳定可靠有效，为萱草花的鉴别和质量评价与控制提供了依据。实验例1紫外分光光度法检测总黄酮含量1测定波长的选择芦丁标准溶液和萱草提取液分别按实验方法显色后，在波长400 600nm范围内扫描，结果芦丁标准溶液显色后在510nm处有最大吸收，萱草提取液显色在此波长下也有吸收，实验选用510nm为测定波长。2供试品溶液的制备精密称取制剂(由实施例1制备)20mg，置IOmL量瓶中，加30%乙醇至刻度，超声处理IOmin,即得。3对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每ImL含0. 2mg的溶液，摇勻，即得。4标准曲线的制备精密量取对照品溶液0. 5ml，Iml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，分别置25ml量瓶中，各加水至6. Oml，加5 %亚硝酸钠溶液Iml，混勻，放置6分钟，加10 %硝酸铝溶液Iml，摇勻，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇勻，放置15分钟，以相应试剂为空白，在 510nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为 Y = 13. 65X+0. 0128，r = 0. 9997，结果表明芦丁浓度在 0. 004026 0. 048312mg/ml 与吸光度具有良好的线性关系。
5测定方法取供试品溶液1ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至 6. 0ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含芦丁的浓度，计算，即得。6方法学考察结果6. 1精密度试验按样品测定项下的方法对批号为20110530的药材处理得供试液，UV法进行测定， 一份样品连续测定6次，结果见表1，RSD为0. 16%。表1精密度试验结果
测定次数吸光度吸光度平均值RSD%10. 552220. 550030. 55150. 551350. 1640. 550750. 552260. 55156. 2稳定性试验取同一样品溶液，每隔10分钟测定一次吸光度，样品在1小时内稳定性良好，结果见表2。表2稳定性试验结果
测定时间(min)吸光度吸光度平均值RSD%00. 61950. 63491. 20100. 6306200. 6376300. 6376400. 6412500. 6403600. 6376结果显示，样品在1小时内稳定性良好，RSD值为1. 20%。6. 3重现性试验，按样品测定项下的方法对批号20110530的样品进行测定，共测定6份，结果见表 3。表3重现性试验结果
权利要求
1.萱草花提取物的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤 步骤1 萱草花乙醇在60°C以下提取，得乙醇提取液；步骤2 乙醇提取液过大孔树脂柱； 步骤3 回收乙醇得萱草花提取物。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤1中乙醇的体积百分浓度为60%-95%。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤1的提取方法为30°C以下浸提或渗漉。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于步骤1的提取方法为用70%乙醇浸提。
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于步骤1的提取方法为用70%乙醇以每分钟 l-3ml的速度渗漉。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于乙醇提取液过大孔树脂柱，蒸馏水洗至流出液透明，用20% -95%乙醇洗脱2-6倍柱体积。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于大孔树脂柱为AB-8大孔树脂柱；乙醇洗脱液的浓度为55% -65%。
8.萱草花提取物的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤 步骤1 萱草花乙醇在60°C以下提取，得乙醇提取液；步骤2 乙醇提取液过大孔树脂柱； 步骤3 回收乙醇得萱草花提取物； 步骤4 萱草花提取物HPLC指纹图谱检测。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于萱草花提取物HPLC指纹图谱检测方法包括如下步骤色谱条件C18色谱柱，流动相甲醇-0. 5%冰醋酸的水溶液梯度洗，0. 5-1. SmL/mirT1， 检测波长200-300nm，柱温20_30°C ；所述甲醇-0. 5%冰醋酸的水溶液梯度洗脱的条件为 第0-20min 甲醇为20%，0. 5%的冰醋酸水溶液为80% ；第20_30min 甲醇为30%，0. 5% 的冰醋酸水溶液为70 % ；第30-70min 甲醇为30 %，0. 5 %的冰醋酸水溶液为70 % ；第70min 到最后甲醇为80%，0. 5%的冰醋酸水溶液为20% ；对照品溶液的制备称取芦丁，加甲醇制成对照品溶液；供试品溶液的制备称取萱草花提取物粉末，加甲醇超声提取，静置，取上清液滤过，取滤液，即得。检测方法吸取对照品、供试品溶液，进样检测。
10.萱草花提取物HPLC指纹图谱检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤色谱条件C18色谱柱，流动相甲醇-0. 5%冰醋酸的水溶液梯度洗，0. 5-1. SmL/mirT1， 检测波长200-300nm，柱温20_30°C ；所述甲醇-0. 5%冰醋酸水溶液梯度洗脱的条件为第 0-20min 甲醇为20%，0. 5%的冰醋酸水溶液为80% ；第20_30min 甲醇为30%，0. 5%的冰醋酸水溶液为70% ；第30-70min 甲醇为30%，0. 5%的冰醋酸水溶液为70% ；第70min 到最后甲醇为80%，0. 5%的冰醋酸水溶液为20% ；对照品溶液的制备称取芦丁，加甲醇制成对照品溶液；供试品溶液的制备称取萱草花提取物粉末，加甲醇超声提取，静置，取上清液滤过，取滤液，即得。检测方法吸取对照品、供试品溶液，进样检测。
全文摘要
本发明公开了萱草花提取物的制备方法，该方法包括萱草花乙醇低温提取、乙醇提取液过大孔树脂柱、回收乙醇得萱草花提取物等步骤，本发明方法成本低、效率高，适于大生产。
文档编号A61K36/896GK102488819SQ20111041082
公开日2012年6月13日 申请日期2011年12月12日 优先权日2011年12月12日
发明者倪健, 朱陵群, 邹忆怀 申请人:倪健