专利名称：一种组织工程化瓣膜的制作方法
技术领域：
本发明属于组织工程学技术领域，具体涉及一种组织工程化瓣膜及其制备方法。
背景技术：
组织工程学应用生命科学和工程学的原理和方法，研究、开发用于修复、增进或改善人体各种组织或器官损伤后功能和形态的生物替代品。所述生物替代品的基本制备方法是将细胞经体外扩增后与可降解生物材料相结合形成细胞-可降解生物材料复合体，用以替代受损组织器官。它具有形成具有生命力的活体组织，少量细胞修复大块缺损，并可按组织、器官缺损情况任意塑型等特点。就组织工程化心瓣膜而言，目前尚存在血管内皮细胞来源及寻找合适的可降解支架材料两大技术难点。组织工程化瓣膜包含血管内皮细胞及成纤维细胞两类种子细胞，目前重建瓣膜实验需取患者大段血管，再通过复杂的技术分离成纤维细胞及内皮细胞，故无法摆脱以创伤修复创伤的模式。此外众所周知体细胞体外培养难度极大，一般传几代即发生变性，而构建瓣膜需要大量血管内皮细胞。对此，既往研究重点大多放在胚胎干细胞与端粒酶上，但前者面临伦理学的异议，后者因其可能诱发肿瘤而鲜有问津。目前认为，组织工程支架材料有如下作用:1)维持组织结构的完整性并防止变形，2)作为屏障抑制周围组织的过度再生，3)作为细胞迁移和增殖的支架，4)通过与细胞表面细胞受体的相互作用促进细胞增殖和分化。理想的支架材料应具备良好的细胞相容性、组织相容性、与 细胞生长速率相匹配的降解速率及一定的强度和可塑性。既往多利用聚羟基乙酸等合成高分子降解材料，但其生物相容性和细胞亲和性不甚理想。
发明内容
针对上述技术问题，本发明提供了一种组织工程化瓣膜的制备方法。本发明所采用的技术方案是:
一种组织工程化瓣膜，其特征在于按下述方法制备:通过多种途径提取种子细胞，进行体外培养、传代和增殖后，分步种植于可降解支架材料，构建成组织工程化瓣膜。所述的可降解支架材料是脱细胞基质。所述的种子细胞是血管内皮细胞和成纤维细胞。所述的脱细胞基质是同种异体和异种瓣膜组织脱细胞基质，心包组织脱细胞基质和血管组织脱细胞基质。所述的血管内皮细胞来源于骨髓，静脉血管、动脉血管和脂肪组织。所述的成纤维细胞来源于骨髓和皮下结缔组织。所述瓣膜制备方法是先接种成纤维细胞于支架材料上，制成成纤维细胞-支架材料复合物，再于复合物表面接种血管内皮细胞。种子细胞接种密度为IO5 — 108/cm。本发明组织工程化瓣膜，具有以下特点:I)具有正常瓣膜组织的组织结构，表面为血管内皮细胞覆盖，中间是以成纤维细胞为主要成分的结缔组织，是具有新陈代谢功能的活组织。2)具备良好的细胞相容性、组织相容性、与细胞生长速率相匹配的降解速率及较好的强度和可塑性。
具体实施方式
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下面通过实施例进一步描述本发明，但本发明并不仅限于此。实施例1
收集成纤维细胞，将其接种于支架材料上，接种密度为105-108/cm。DMEM培养液3天换一次，培养7-10天，构建得成纤维细胞一支架材料复合物。收集血管内皮细胞，将其接种在成纤维细胞一支架材料复合物表面，制备血管内皮细胞一成纤维细胞一支架材料复合物，再将其按瓣膜形状缝合塑型，制成组织工程化瓣膜。
本发明构建的组织工程化瓣膜组织具有正常瓣膜组织组织结构，是可自我更新，自我修复的活组织，并且无抗原性，不会引起免疫排斥反应。
权利要求
1.一种组织工程化瓣膜，其特征在于按下述方法制备:通过多种途径提取种子细胞，进行体外培养、传代和增殖后，分步种植于可降解支架材料，构建成组织工程化瓣膜。
2.如权利要求1所述的组织工程化瓣膜，其特征在于:所述的可降解支架材料是脱细胞基质。
3.如权利要求1所述的组织工程化瓣膜，其特征在于:所述的种子细胞是血管内皮细胞和成纤维细胞。
4.如权利要求1和2所述的组织工程化瓣膜，其特征在于:所述的脱细胞基质是同种异体和异种瓣膜组织脱细胞基质，心包组织脱细胞基质和血管组织脱细胞基质。
5.如权利要求1和3所述的组织工程化瓣膜，其特征在于:所述的血管内皮细胞来源于骨髓，静脉血管、动脉血管和脂肪组织。
6.如权利要求1和3所述的组织工程化瓣膜，其特征在于:所述的成纤维细胞来源于骨髓和皮下结缔组织。
7.如权利要求1所述的组织工程化瓣膜，其特征在于:所述瓣膜制备方法是先接种成纤维细胞于支架材料上，制成成纤维细胞-支架材料复合物，再于复合物表面接种血管内皮细胞。
8.如权利要求1所述的组织工程瓣膜，其特征在于:种子细胞接种密度为IO5— IO8/ cm。
全文摘要
本发明公布了一种组织工程化瓣膜及其制备方法。釆用脱细胞基质作为可降解支架材料，提取血管内皮细胞及成纤维细胞作为种子细胞，由经培养和传代，种植于可降解支架材料，制成组织工程化瓣膜。本发明的可降解支架材料其生物相容性好、易于种植细胞，并能保存正常组织的天然结构和组织强度。本组织工程化瓣膜组织是一种具有正常瓣膜组织组织结构，并可自我更新，自我修复的活组织。无抗原性，不会引起免疫排斥反应。
文档编号A61L27/38GK103157136SQ201110414700
公开日2013年6月19日 申请日期2011年12月13日 优先权日2011年12月13日
发明者陈富林 申请人:西安瑞捷生物科技有限公司