专利名称：榅桲果实降血糖有效部位的制备方法及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种可食植物榲梓果实降糖有效部位的制备及其用途。
背景技术：
榲梓是蔷薇科(Rosaceae)榲梓属(Cydonia)植物。此属植物仅榲梓一种，全世界有50个变种，我国新疆有6个变种。榲梓是一种用途广泛的药食两用植物，新疆群众用于 “抓饭”佐料、果浆，其味鲜美，视为上等食品。除此之外，在我国民族药中，榲梓果、种子、叶等准可入药，已收载在中华人民共和国卫生部《药品标准》维吾尔药分册，果实具有补脑益心，增益精神力，助胃利水，止渴止咳止血止泻等作用，用于头晕心慌，神疲乏力，食少胃弱， 泻痢咳端，口渴尿闭；榲梓子清除胃肠干热、生津止咳，用于烦躁不安、咳嗽、肺结核等作用。 根据《中国医学百科全书-维吾尔医学》中记载，本品性甜者湿热，酸者干寒。功能补胃开胃，止恶，止泻，补脑强心，悦志安神，止咳化痰等。主治胃肠疾病，食欲不振，肝炎，胃炎，消化不良，恶心，腹泻，心慌心悸，烦躁，咳嗽等，对于小儿胃肠疾病有特殊疗效。国内外有关其化学成分的研究仅见，黄酮类、酚酸类、萜类等报道。现代药理研究显示榲梓具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化等活性。经过检索，没有发现榲梓抗糖尿病活性的报告。糖尿病是一种常见的世界性多发病。它是由人体自身分泌的胰岛素不足而引起的。而胰岛素的作用是调节人体内糖的代谢，即促进血糖合成糖元，加速血糖分解，降低血糖浓度。维吾尔医认为，糖尿病的发病原因除与四大“何里提”学说中的胆汁质旺盛引起五脏虚弱有关外，其致病因素大多是综合性的，尤以嗜啖酒醇、过食肥甘和精神过度紧张三者居多，肾虚为本，燥热、瘀血为标。维吾尔医治疗糖尿病给予调理“何里提”，降低血糖，增强体质，止渴，促进胰岛素分泌，改善b细胞环境，增强胰岛素敏感性，改善胰岛素抵抗，改善b细胞凋亡，助消化为基本原则上采取维吾尔医饮食疗法、药物疗法、非药物疗法等系统的治疗方式进行治疗。随着社会的进步以及人们生活水平的提高，糖尿病患者，尤其是非胰岛素依赖型糖尿病(即II型糖尿病)人数成倍增长。已有研究表明蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B， protein tyrosine phosphatase IB)可减弱胰岛素及瘦素信号转导，引起脂代谢异常，是导致胰岛素抵抗和肥胖的关键环节。PTPlB通过对胰岛素受体激酶(insulin receptor kinase, IRK)或IRK活性片段的磷酸化酪氨酸残基去磷酸化作用对胰岛素信号传导进行负调节。在新生肝细胞中，PTPlB的减少增加了 IRA/GLUT2复合物，从而增加葡萄糖的吸收。 在肝脏中特异性删除PTPlB基因，可以改善代谢综合症的状况和削弱饮食引起的内质网压力，Ali MI等人的研究也指出删除PTPlB基因后会明显改善肥胖且瘦素抵抗的小鼠的外周胰岛素抵抗和动脉血管功能。因此PTPlB是治疗II型糖尿病、肥胖等疾病的重要靶点之一。 本发明直接针对PTPlB靶点进行筛选。
发明内容
本发明目的在于，提供一种榲梓降糖有效部位的制备方法及其用途，该方法从榲梓果实中采用有机溶剂提取，大孔树脂分离纯化获得降糖有效部位，并阐明其医学用途，经初步的活性筛选试验证明通过本发明所述的方法获得的榲梓果实有效部位具有蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPlB)抑制作用；该有效部位可用于预防治疗糖尿病的药物或保健品的应用。本发明所述的榲梓果实降糖有效部位的制备方法，按下列步骤进行a、将榲梓果实原料进行清洗、破碎或粉碎，加入10-40倍量体积的浓度为10_95% 的乙醇或甲醇水溶液；b、在温度40°C -溶剂沸点的条件下加热回流提取1-5次，每次1-4小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物；C、将步骤b提取物，用水或浓度1-10%乙醇或甲醇溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂柱，以水洗去杂质，再以10-95%乙醇或甲醇水溶液梯度洗脱，收集流出液，浓缩即可得到具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。步骤a中的乙醇或甲醇提取浓度为60-70%。步骤b中回流提取温度为70_80°C。步骤c洗脱杂质用水量为2-5倍体积。步骤c大孔树脂中洗脱用的乙醇或甲醇水溶液浓度为50-70 %，其用量为4-5倍体积。步骤c 所用的大孔树脂型号为 HPD100、HPD300、HPD450、HPD750、D101、D140、NKA9、 AB-8、X-5、DM130、ADS17。通过该方法获得的榲梓果实有效部位对蛋白质酪氨酸磷酸酶IB具有抑制作用。通过该方法获得的榲梓果实有效部位在制备治疗降血糖的保健品或者其他功能性食品的用途。通过该方法获得的榲梓果实有效部位在制备预防和治疗降血糖的药物中的用途。
具体实施例方式实施例1取榲梓果实300g进行清洗、粉碎，置于圆底烧瓶中，加入10倍体积浓度为70%的乙醇水溶液；温度70°C，加热回流提取4次，每次时间为lh，过滤，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物27. 6g；将提取物加入浓度5%的乙醇水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂 HPD100柱中吸附，用2倍体积水清洗除杂后，再用4倍体积浓度为10-95%乙醇水溶液梯度洗脱，收集50-70%的流出液，浓缩后即可得到3. 82g具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。实施例2取榲梓果实300g进行清洗，粉碎，置于圆底烧瓶中，加入15倍量体积浓度为60% 的甲醇水溶液；温度80°C，加热回流提取3次，每次时间为池，过滤，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物27. 2g；将醇提物加入浓度5%的甲醇水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂HPD300柱中吸附，用3倍体积水清洗除杂后，再用5倍体积浓度10-95%甲醇水溶液梯度洗脱，收集50-70%的流出液，浓缩后即可得到3. 78g具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。实施例3取榲梓果实300g进行清洗，粉碎，置于圆底烧瓶中，加入20倍量体积浓度为50% 的乙醇水溶液；在溶剂沸点的条件下加热回流提取3次，每次3h，过滤，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物沈.2g；将醇提物中加入浓度的乙醇水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂 HPD450柱中吸附，用4倍体积水清洗除杂后，再用4倍体积10-95 %乙醇水溶液梯度洗脱， 收集50-70%的流出液，浓缩后即可得到3. 67g具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。实施例4取榲梓果实300g进行清洗，破碎，置于圆底烧瓶中，加入25倍量体积浓度为40% 的乙醇水溶液；在温度50°C，加热回流提取3次，每次lh，过滤，合并提取液，将提取液放置旋转蒸发仪内减压浓缩至无醇味，得到醇提物25. Sg ；将醇提物中加入浓度8%的乙醇水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂 HPD750柱中吸附，用5倍体积水清洗除杂后，再用5倍体积浓度为10-95%乙醇水溶液梯度洗脱，收集50-70%的流出液，浓缩后即可得到3. Sg具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。实施例5取榲梓果实300g进行清洗，破碎，置于圆底烧瓶中，加入30倍量体积浓度为30% 的乙醇水溶液；在温度60°C，加热回流提取2次，每次池，过滤，合并提取液，将提取液放置旋转蒸发仪内减压浓缩至无醇味，得到醇提物24. 6g ；将醇提物中加入水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂DlOl柱中吸附，用 2倍体积水清洗除杂后，再用4倍体积浓度为10-95 %乙醇水溶液洗脱，收集50-70 %的流出液，浓缩后即可得到4. 2g具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。实施例6取榲梓果实300g进行清洗，粉碎，置于圆底烧瓶中，加入35倍量体积浓度为20% 的甲醇水溶液；在温度70°C，加热回流提取2次，每次池，过滤，合并提取液，将提取液放置旋转蒸发仪内减压浓缩至无醇味，得到醇提物22. 4g ；将醇提物中加入浓度2%的甲醇水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂 D140柱中吸附，用3倍体积水清洗除杂后，再用5倍体积浓度为10-95%甲醇溶液梯度洗脱，收集50-70%的流出液，浓缩后即可得到约3. 3g具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。实施例7取榲梓果实300g进行清洗，破碎，置于圆底烧瓶中，加入40倍体积浓度为10%的甲醇水溶液；在溶剂沸点条件下加热回流提取3，每次池，过滤，合并提取液，将提取液放置旋转蒸发仪内减压浓缩至无醇味，得到醇提物20g ；
将醇提物中加入水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂NKA9柱中吸附，用 5倍体积水清洗除杂后，再用4倍体积浓度为10-95 %甲醇水溶液梯度洗脱，收集50-70 %的流出液，浓缩后即可得到约3. Og具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。实施例8取榲梓果实300g进行清洗，粉碎，置于圆底烧瓶中，加入25倍体积浓度为60%的乙醇水溶液；在温度80°C，加热回流提取1次，每次lh，过滤，收集提取液，将提取液放置旋转蒸发仪内减压浓缩至无醇味，得到醇提物26. 7g ；将醇提物中加入浓度10%的乙醇水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂 AB-8柱中吸附，用2倍体积水清洗除杂后，再用4倍体积浓度为10-95%乙醇水溶液梯度洗脱，收集50-70%的流出液，浓缩后即可得到约5. Ig具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。实施例9取榲梓果实300g进行清洗，粉碎，置于圆底烧瓶中，加入20倍体积浓度为70%的乙醇水溶液；在温度70°C，加热回流提取2次，每次时间为池，过滤，合并提取液，将提取液放置旋转蒸发仪内减压浓缩至无醇味，得到醇提物26. 4g ；将醇提物中加入浓度3%的乙醇水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂X5 柱中吸附，用4倍体积水清洗除杂后，再用4倍体积浓度为10-95%乙醇水溶液洗脱，收集 50-70%的流出液，浓缩后即可得到4. 5g具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。实施例10取榲梓果实300g进行清洗，粉碎，置于圆底烧瓶中，加入15倍量体积浓度为80% 的甲醇水溶液；在温度70°C，加热回流提取5次，每次时间为lh，过滤，合并提取液，将提取液放置旋转蒸发仪内减压浓缩至无醇味，得到醇提物25. 2g ；将醇提物中加入浓度7%的甲醇水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂 DM130柱中吸附，用3倍体积水清洗除杂后，再用5倍体积浓度为10-95%甲醇水溶液洗脱， 收集50-70%的流出液，浓缩后即可得到3. 7g具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。实施例11取榲梓果实300g进行清洗，破碎，置于圆底烧瓶中，加入10倍体积浓度为95%的乙醇水溶液；在温度50°C，加热回流提取2次，每次池，过滤，合并提取液，将提取液放置旋转蒸发仪内减压浓缩至无醇味，得到醇提物23. 6g ；将醇提物中加入浓度9%的乙醇水溶液溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂 ADS17柱中吸附，用5倍体积水清洗除杂后，再用5倍体积浓度为10-95%乙醇水溶液梯度洗脱，收集50-70%的流出液，浓缩后即可得到约2. 3g具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。实施例12 筛选实验PTPlB筛选方法用对-硝基苯基磷酸二钠(pNPP)作为底物，以在阳性药物钒酸钠为对照，利用酶标仪进行PTPlB酶抑制剂的高通量筛选，根据PTPlB水解pNPP的磷酸基团而产生颜色反应来测定PTPlB的活性；酶反应体系组成如下缓冲液(50mM HEPES, pH 7. 3，IOOmM氯化钠，0. 牛血清白蛋白，和ImM 二硫代苏糖醇)，PTPlB融合蛋白，pNPP， PTPlB特异抑制剂钒酸钠(100μ g/mL)；反应体系混勻后在37°C放置30rnin，置比色仪上测定405波长条件下的吸收值(A)，测定结果减去本底值后计算酶活性。不同条件下得到的提取物对PTPlB的IC5tl浓度和抑制率
权利要求
1.一种榲梓果实降糖有效部位的制备方法，其特征在于按下列步骤进行a、将榲梓果实原料进行清洗、粉碎，加入10-40倍量体积的浓度为10-95%的乙醇或甲醇水溶液；b、在温度40-80°C的条件下加热回流提取1-5次，每次1-4小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物；c、将步骤b提取物，用水或浓度1-10%乙醇或甲醇溶解分散，加入预先处理好的大孔树脂柱，以水洗去杂质，再以10-95%乙醇或甲醇水溶液梯度洗脱，收集流出液，浓缩即可得到具有降血糖活性的榲梓果实有效部位。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a中的乙醇或甲醇提取浓度为 60-70%。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤b中回流提取温度为70-80°C。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤c洗脱杂质用水量为2-5倍体积。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤c大孔树脂中洗脱用的乙醇或甲醇水溶液浓度为50-70%，其用量为4-5倍体积。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于步骤c所用的大孔树脂型号为HPD100、 HPD300、HPD450、HPD750、D101、D140、NKA9、AB-8、X_5、DM130、ADS17。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于通过该方法获得的榲梓果实有效部位对蛋白质酪氨酸磷酸酶IB具有抑制作用。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于通过该方法获得的榲梓果实有效部位在制备治疗降血糖的保健品或其他功能性食品的用途。
全文摘要
本发明涉及一种食用植物榅桲的降糖有效部位的制备方法及其用途，该方法从榅桲中采用有机溶剂提取，大孔树脂分离纯化获得降糖有效部位，并阐明其医学用途，经初步的活性筛选试验证明通过本发明所述的方法获得的有效部位具有蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制作用，可作为原料或辅助剂用于防治糖尿病的药物或保健品。
文档编号A61P3/10GK102451251SQ201110441239
公开日2012年5月16日 申请日期2011年12月26日 优先权日2011年12月26日
发明者信学雷, 哈及尼沙, 米热古丽·亚森, 赵海清, 阿吉艾克拜尔·艾萨 申请人:中国科学院新疆理化技术研究所