用于治疗溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)的nAChRα7激动剂和nAChRα7拮抗剂的制作方法

专利名称：用于治疗溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)的nAChRα7激动剂和nAChRα7拮抗剂的制作方法
用于治疗溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)的nAChRa 7激动剂和nAChR a 7拮抗剂相关申请的交叉引用本申请要求于2010年6月25日提交的美国临时申请号为61/358，481的权益，其在此通过引用全部并入。背景炎性肠病(IBD)，包括但不限于克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)，是慢性肠疾患，其仅在西方国家中就影响大约340万人并且导致巨大的患病和健康护理花费。在过去的几十年，科学家和临床医生被如下观察结果所困惑:吸烟的烟草产物对UC的进程有有益的影响并且对CD的进程有有害的影响。但是，吸烟和烟碱在UC和CD的进程中的作用并没有被很好地理解。概述在一些方面，本公开主题提供在有相应治疗需要的受治疗者中治疗炎性肠病(IBD)的方法，所述方法包括以有效调节所述受治疗者中至少一种细胞的nAChRa 7活性的量对所述受治疗者施用烟碱型乙酰胆碱受体a7(nAChRa7)拮抗剂，借此所述至少一种细胞中nAChRa 7活性的调节治疗所述受治疗者的IBD。在特别的方面，IBD包括克罗恩病(CD)。在其他方面，本公开主题提供在有相应治疗需要的受治疗者中治疗炎性肠病(IBD)的方法，所述方法包括以有效调节所述受治疗者中至少一种细胞的nAChRa 7活性的量对受治疗者施用nAChRa 7激动剂，借此所述至少一种细胞中nAChRa 7活性的调节治疗受治疗者的IBD。在特别的方面，IBD包括溃疡性结肠炎(UC)。在另外的方面，本公 开主题提供用于调节至少一种免疫细胞类型中的nAChRa 7活性的方法，所述方法包括使至少一种免疫细胞类型与以有效调节至少一种免疫细胞类型中的nAChR a 7活性的量的nAChR a 7拮抗剂或nAChR a 7激动剂接触。在其他方面，本公开主题提供用于减少在有慢性胃肠道炎症的受治疗者中发展结直肠癌的风险的方法，所述方法包括以有效调节一种或多种胃肠道免疫细胞中nAChRa 7活性的量对所述受治疗者施用nAChR a 7拮抗剂或nAChR a 7激动剂，借此调节nAChR a 7活性改变在一种或多种胃肠道免疫细胞中的炎症反应，因此减少发展结直肠癌的风险。在一些方面，本公开主题提供用于鉴定在表达nAChR a 7的至少一种细胞中调节nAChRa 7活性的化合物或剂的方法，所述方法包括:(i)使表达nAChRa 7的至少一种细胞与候选化合物或剂接触；Qi)确定与所述候选化合物或剂接触的表达nAChRa 7的至少一种细胞中nAChR a 7的活性；(iii)确定没有与所述候选化合物或药剂接触的表达nAChR a 7的至少一种对照细胞中nAChRa 7的活性；和(iv)对比与所述候选化合物或剂接触的至少一种细胞中nAChRa 7的活性和至少一种对照细胞中nAChRa 7的活性；其中在与所述候选化合物或剂接触的至少一种细胞中的nAChR a 7活性与至少一种对照细胞中的nAChR a 7活性的差异鉴定在至少一种细胞中调节nAChRa 7活性的候选化合物或剂。仍然在其他方面，本公开主题提供用于预测对受害于由nAChRa 7的基因或蛋白表达的异常水平导致的IBD的受治疗者施用nAChRa 7表达调节剂的治疗效果的方法，其中nAChR a 7表达调节剂是nAChR a 7拮抗剂或nAChR a 7激动剂，所述方法包括:(a)测量在施用nAChRa 7调节剂之前受治疗者的组织或细胞中nAChRa 7的基因或蛋白表达水平；(b)以有效改变受治疗者的组织或细胞中nAChRa 7基因或蛋白表达水平的量对受治疗者施用nAChR a 7调节剂；(C)测量来自于施用nAChR a 7调节剂之后的受治疗者的组织或细胞中的nAChRa 7的基因或蛋白表达水平；和(d)确定施用nAChRa 7调节剂之后的组织或细胞中nAChRa 7的基因或蛋白表达水平相比较于施用nAChRa 7调节剂之前的组织或细胞中的基因或蛋白表达水平的改变；其中在组织或者细胞中的nAChR a 7基因或蛋白表达水平的改变预测nAChRa 7表达调节剂对受害于IBD的受治疗者的治疗效果。在一些方面，本公开主题提供药物组合物，其包括有效调节nAChR a 7的功能以治疗或预防有相应治疗需要的受治疗者的炎性肠病(IBD)的量的烟碱型乙酰胆碱受体a 7 (nAChR a 7)的特异性激动剂或特异性拮抗剂。本公开主题的某些方面已在上文中陈述，其被本公开主题全部或部分地提及；当与下文中最佳描述的所附实施例和附图联系起来时，其他方面将随着描述进行而变得明显。附图简述已用一般术语这样描述了本公开主题，现在将参考附图，附图不一定按比例绘制，并且其中:

图1显示来自微阵列谱的代表性的分级聚类(hierarchical clustering),显示IBD中不同的表达模式。每一行表不基因，且每一列表不独立的生物样品。免疫细胞中基因表达图谱的聚类分析显示了差异模式，其被聚类为如下显示的四组:正常(N)，CD，UCjPE常(N)。阴影表示下调或者过度表达，而黑色表示类似的表达；图2显示由DFA鉴定的10个基因的判别潜力。DFA被用于选择最大判别变量(maximal discriminatory variable),并且UC、⑶和健康对照被分组为3个不同的位置；图3显示由基因微阵列鉴定并由QRT-PCR确认的nAChRa 7在UC、⑶和未受影响的对照中的差异基因表达模式。左图:微阵列数据:来自免疫细胞的标准化的nAChRa 7表达水平描述在UC和CD中独特的差异基因表达模式。N:嗜中性粒细胞；P =PMBC ；Ctrl:对照。右图=QRT-PCR对微阵列结果的验证。QRT-PCR确认了 nAChRa 7的基因表达结果和来自PBMC的五(5)个其他选择的基因的基因表达结果(数据未显示)；图4证明在⑶相对于UC的淋巴细胞中nAChRa 7介导不同的免疫调节图谱。显示了来自于UC和⑶中处理过的转化的淋巴细胞相比于未处理的细胞的上清液中的细胞因子图谱的比例(至少三个类似实验中的一个)。处理包括烟碱[2μΜ(+)和20μΜ(++)]以及在添加烟碱之前使用选择性拮抗剂α -环蛇毒素(a -bungarotoxin) [2nM(+)和20nM(++)]的预处理。A图:细胞因子IL-10和细胞因子/趋化因子IL-8。图B:趋化因子。对于所有未受影响的对照，加入烟碱或α -环蛇毒素自身表现了非显著性的细胞因子/趋化因子的改变(未显示)。Nic:烟碱。Antg:选择性拮抗剂α -环蛇毒素；图5显示烟碱和nAChR α 7特异性激动剂对“⑶样”TNBS结肠炎和“UC样"DSS结肠炎的进程的相反的效果。这些IBD小鼠模型被认为是“CD样”或“UC样”不仅因为它们的疾病表型分别与人类CD或UC相类似， 而且因为它们的细胞因子图谱与人类CD或UC相类似，尤其是TNBS或DSS模型的慢性模型，如前所述的(Alex等人，2009 IBD, 15 (3)，341-352)。这些实验性小鼠结肠炎模型如前所述的产生(Alex等人，2009 IBD, 15 (3)，341-352)。乙醇:TNBS 的对照；Nic:烟碱；a 7Ag:nAChR α 7 激动剂 PNU282987 (PNU)；图6显示了 nAChRa 7激动剂对于UC样DSS结肠炎不仅是预防性的，而且是治疗性的。在急性模型中，小鼠用或不用nAChR a 7激动剂药物处理，持续5天。然后给予DSS，持续7天。评价临床活动性评分(clinical activity score)。在慢性模型中，小鼠被给予DSS，持续7天，然后给予七天的水。这些DSS-水的循环被继续重复再3次。在第四个循环的末尾，甚至没有DSS下，小鼠发展为慢性结肠炎，其有大约3的临床活动性评分。在这时，nAChRa 7激动剂被给予一组小鼠(one set of mice)并且跟踪所有小鼠11天。在急性模型和慢性模型中，疾病(结肠炎)基本上消失并且小鼠看起来与对照小鼠(无DSS处理)没有差别。箭头指示在慢性模型中nAChRa 7激动剂处理的开始(第53天)；图7显示MLA药物(nAChR a 7特异性拮抗剂)的预处理可以有效预防小鼠发展⑶样TNBS结肠炎。用PBS (对照)、或烟碱、PNU ( a 7激动剂)、或MLA药物通过腹腔注射每天一次持续5天预处理C57BL/6小鼠。然后使用TNBS (在50%乙醇中)或仅50%乙醇作为对照诱导小鼠发展结肠炎，持续7天。每天监控所有小鼠的疾病活动。在使用MLA(a7拮抗剂+TNBS)预处理的TNBS处理的小鼠中，疾病(结肠炎)基本上消失。这些MLA处理的小鼠看起来与无TNBS的对照小鼠(乙醇)没有差别。相反，使用烟碱(烟碱+TNBS)或PNU ( a 7激动剂+TNBS)预处理的小鼠，与仅TNBS处理(TNBS)相比，显示均没有治疗性益处，甚至恶化疾病活动。图8显示使用nAChR a 7特异性拮抗剂(Antg ；MLA)处理有效逆转慢件CD样TNBS诱导的结肠炎的疾病进程。慢性TNBS结肠炎模型的诱导如前所述(Alex等人，2009IBD，15 (3)，341-352) 。拮抗剂处理的结肠炎小鼠的DAI与对照小鼠(使用乙醇(E-OH)处理)相似。nAChRa 7激动剂(Ag5PNU)和烟碱显示无显著性效果。使用ANOVA和Tukey检验(Tukeyj s test)进行统计学分析；p < 0.05。N ^ 12每组；图9显示使用nAChR a 7拮抗剂的处理逆转TNBS诱导的结肠炎症:(A)来自于具有处理的慢性TNBS诱导的结肠炎的小鼠的结肠是更短的，发炎的，并充满了血性和软的粪便；(A-c)，而来自于拮抗剂处理的结肠炎小鼠的结肠是完全正常的外观(A-d)，与对照小鼠(A-a&b)相比几乎没有差别；(B)使用H&E染色进行的组织学分析显示拮抗剂处理的TNBS小鼠有正常的结肠粘膜并且几乎没有炎症迹象(B-c)，如在未经TNBS处理过的小鼠中看到的一样(B-b)。显示了至少十个独立实验的代表；图10显示nAChR α 7特异性激动剂和拮抗剂都对nAChR α 7缺陷性小鼠的DSS或TNBS诱导的结肠炎无任何治疗性效果，表明这些药物的特异性。野生型(WT)nAChRa 7缺陷性(nAChRa 7敲除；a 7K0)小鼠，均以C57B/6为背景，使用DSS(A)或TNBS(B)诱导发展结肠炎。尽管在野生型小鼠中激动剂(PNU)和拮抗剂(MLA)分别有效预防DSS和TNBS诱导的结肠炎，在nAChR a 7K0小鼠中它们对任何一种结肠炎都完全没有展现出任何效果。这些数据进一步说明这些激动剂和拮抗剂对nAChRa 7的靶特异性；测量值中的统计学差异通过ANOVA和Tukey检验以5%显著性水平评价。N彡6每组；图11显示经历了迷走神经切断术的小鼠完全丧失了 nAChRa 7激动剂对结肠炎发展的保护作用:(A)在迷走神经切断术之前和之后:基于在之前的报道(Verma-Gandhu等人，Gut 2007:56:358-364)基础上修改的方案进行迷走神经切断术。简单而言，C57B/6小鼠(7周龄)的胃食管连接处(以白色箭头标出)的左迷走神经分支(大约5-10mm;以双头箭头表示)在显微镜放大下(IOX)被使用电灼术切断(S，胃；E，食管)。手术开口使用可吸收的缝合线缝合。假手术包括除了迷走神经切断以外同样的步骤(仅暴露)。给予经历了迷走神经切断术的小鼠7天的时间恢复。经历了手术(迷走神经切断术和假手术)的所有30只小鼠100%存活而没有并发症，并且恢复至正常。然后以IP给予小鼠nAChRa7激动剂，持续5天，之后进行DSS处理(7天)以诱导结肠炎；(B)经历了迷走神经切断术的小鼠(迷走神经切断术)没有展现nAChRa 7激动剂对结肠炎的任何保护性效果，而经历了假手术的小鼠(假手术)反应与没有经历任何手术的小鼠反应一样良好(见图5和6)。测量值的统计学差异使用Wilcoxon铁和检验(Wilcoxon rank-sums test) (P < 0.05)评价。N彡5每组；图12显示nAChR α 7激动剂对于GPX 1/2DK0结肠炎有治疗效果。缺乏两个谷胱甘肽过氧化物酶(GPX) Gpxl和Gpx2的小鼠[Gpxl/2双敲除(DKO)小鼠]在混合的C57BL/6和129Sl/SvJ(B6.129)基因背景下有回结肠炎的倾向。评价临床活动性评分。对照(来自于混合的C57BL/6和129Sl/SvJ(B6.129)基因背景)未发展严重的结肠炎，而GPX1/2 DKO小鼠被发现发展临床活动性评分大约为9的严重结肠炎。在用nAChRa 7激动剂处理的GPX1/2 DKO小鼠中，疾病(结肠炎)的发展显著减少。然而使用nAChR a 7拮抗剂或盐水处理的GPX1/2 DKO小鼠在结肠炎评分上没有展现显著性改变；图13 显不判别功能分析(Discriminant Functional Analysis) (DFA)鉴定细胞因子/趋向因子的变量，其可以充分的区分一个疾病类型与其他疾病类型以及区分治疗响应者(therapeutic responder)与对照。DSS诱导的和TNBS诱导的结肠炎形成不同的组，其在图谱上与对照相远离，并且彼此相远离。另一方面，用激动剂处理的DSS诱导的小鼠和用拮抗剂处理的TNBS诱导的小鼠在图谱上非常靠近于对照和彼此——在各自药物的有效处理后，细胞因子图谱从疾病状态向正常状态清楚的转移；和图14显示强迫游泳 实验显示nAChR α 7激动剂(PNU)对小鼠行为没有可测量的效果。通过在圆柱形容器中强迫小鼠游泳6分钟进行测试。小鼠被分为4组:(a)对照；(b)接受IP激动剂的小鼠；(c)用DSS诱导的小鼠；和(d)接受IP激动剂并用DSS诱导的小鼠(]1 = 6每组)。在25°C有13cm水的容器中不动(immobility)的总持续时间被评分。不动被定义为当小鼠在水中停止挣扎并保持漂浮静止，仅做出维持其头在水面上所必需的动作时。第O天和第7天表示DSS处理的天。详细描述本公开主题现在将在下文根据附图被更完全的描述，在附图中显示本公开主题的一些但不是所有实施方案。贯穿全文类似的数字指相似的要素。本公开主题可以以很多不同形式被实施并不应该解释为限于本文陈述的实施方案；反而，提供这些实施方案以使本公开满足适用的法律要求。的确，受益于前述描述和相关附图中呈现的教导的本公开主题所属领域技术人员会想到本文陈述的本公开主题的很多修改和其他实施方案。因此，要理解，本公开主题不受限于所公开的具体的实施方案，并且旨在将修改和其他实施方案包括在所附加权利要求的范围内。1.用于治疗溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)的nAChR α 7激动剂和nAChR α 7拮抗剂在一些实施方案中，本公开主题鉴定了烟碱型乙酰胆碱受体α 7 (nAChRa 7)是调节吸烟(烟碱)对CD相比于UC的相反效果的主要的调节因子。因此，本公开主题将nAChRa 7鉴定为IBD的新治疗靶。本公开主题提供nAChR a 7的特异性激动剂和拮抗剂，以及它们作为用于治疗和管理UC和CD的治疗剂的用途。A.在IBD中吸烟(烟碱)的作用炎性肠病(IBD)是一种流行的慢性进行性多因子的胃肠(GI)道炎性疾患，其表现在两个不同的常见实体中:溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(⑶)。Xavier R.J.，PodolskyD.K，“Unravelling the pathopenesis of inflammatory bowel disease，，，Nature 488:427-434(2007)。正如本文使用的短语“炎性肠病”或“IBD”旨在包括两种影响胃肠道的慢性疾病，称为克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)。术语克罗恩病和溃疡性结肠炎的含义是被医学领域的专业技术人员所普遍接受的定义。仅在美国就有超过一百万被诊断的患者，IBD在西方人口中有大约0.2%的患病率并且有大量的患病和健康护理花费。Loftus E.V.，Jr.，“°C linical epidemiologyof inflammatory bowel disease !Incidence，prevalence, and environmentalinfluences, ”Gastroenterology 126:1504-1517 (2004)。结肠的 IBD 的主要并发症是增加的发展结直肠癌(CRC)的风险，主要是由于慢性GI炎症。Shanahan F.，“Review article:colitis-associated cancer—time for new strategies 1，，，Aliment Pharmacol Ther18 Suppl 2:6-9(2003) ； Campbe 11 B.J.，Yu LG.,Rhodes J.M.,“Altered glycosylationin inflammatory bowel disease:a possible role in cancer development，，，GlycoconjJ 18:851-858(2001)。有趣的是，吸烟对UC的进程有有益的影响，并且对CD的进程有有害的影响。Birrenbach T.，Bocker U.，“ Inflammatory bowel disease and smoking:areview of epidemiology, pathophysiology, and therapeutic implication，，，InfIammBowel Dis 10:848-85 9(2004) ；Rubin D.T.，Hanauer S.B.，“Smoking and inflammatorybowel disease，’’Eur J Gastroenterol Hepatol 12:855-862(2000) ；Thomas G.A.，Rhodes J., Ingram J.R.，“Mechanisms of disease:nicotine—a review of its actionsin the context of gastrointestinal disease，，，Nat Clin Pract GastroenterolHepatol 2:536-544 (2005)；和 Ingram J.R.，Rhodes J.，Evans B.K.，Thomas G.A.，“Preliminary observations of oral nicotine therapy for inflammatory boweldisease:an open-label phase 1-1I study of tolerance，，，InfIamm Bowel Dis 11:1092-1096(2005)。溃疡性结肠炎(UC)已经被鉴定为主要是非吸烟者和/或曾吸烟者的疾病，并且，尽管吸烟的开始保护和改善UC的进程，但吸烟的终止恶化UC的进程。尽管烟碱，吸烟中的活性部分，作为治疗在临床试验中展示了对UC的显著临床疗效，但是其应用被可观的耐受性变化和副作用所限制。相反，大约72%的CD患者是吸烟者，而且，尽管吸烟增加了 CD的风险并且恶化了 CD的进程使其达到更严重的形式(结构化或者瘘管化)，但是吸烟的终止显著改善 CD。Birrenbach T.，Bocker U.，‘‘Inflammatory bowel disease and smoking:a review of epidemiology,pathophysiology,and therapeutic implication，，，InfIammBowel Dis 10:848-859(2004)。吸烟在CD和UC上的相反效果的分子机制数十年来仍保持神秘。
B.烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)烟碱已被阐明通过其对nAChR的活性触发炎性级联反应，nAChR是一个配体门控离子通道家族，该家族由多种同源五聚体(homopentameric)或异源五聚体(heteropentameric)受体亚基形成，其由两个亚家族9 α ( α 2- α 10)和3β (β 2-β 4)组成并在神经系统和非神经组织(如免疫细胞和肠上皮细胞)中均有表达。Gaimairi Α.，Moretti M.,Riganti L ,Zanardi A.,Clementi F.，Gotti C.，“Regulation of neuronalnicotinic receptor traffic and expression，，，Brain Res Rev 55:134-143(2007)。烟碱是对UC相比于⑶起相反效果的主要的药理成分。Thomas G.A.，Rhodes J.，IngramJ.R.，“Mechanisms of disease:nicotine—a review of its action in the context ofgastrointestinal disease，，^Nat Clin Prac Gastroenterol Hepatol 2:536-544(2005)。烟碱在UC治疗中的临床疗效表明NAChR是基于烟碱的治疗的最有可能的靶。然而其临床应用，被可观的耐受性的变化和副作用所限制，这很可能是因为烟碱对nAChR的配体特异性。近期研究表明，烟碱特别地通过抑制巨噬细胞中促炎细胞因子的产生而充当抗炎剂。Gallowitsch-Puerta M., Tracey K.J., " Immunologic role of thecholinergic ant1-1nflammatory pathway and the nicotinic acetylcholine alpha7 receptor, " Ann N Y Acad Sci 1062:209-219(2005)。这个现象被定义为“胆碱能抗炎通路”，其中神经肽作为神经免疫轴的分子基础，该通路通过自主神经系统(ANS)向免疫系统提供抗炎反馈。Tracey K.J.，" The inflammatory reflex，" Nature 420:853-859(2002)。这个通路已知通过传出迷走神经从神经胆碱能抗炎信号传递并且受到nAChR的特异性调节；特别是免疫细胞上表达的nAChRa 7。Wang H.，Yu M.，Ochani M.，Amelia C.A.，Tanovic Μ.，Susarla S.，Li J.H.，Wang H.，Yang H.，Ulloa L，Al-AbedY.，Czura C.J.，Tracey K.J.，" Nicotinic acetylcholine receptor alpha7 subunitis an essential regulator of inflammation，" Nature 421:384-388 (2003) ；de JongeW.J.，van der Zanden E.P.，The F.0.，Bijlsma M.F.，van Westerloo D.J.，BenninkR.J.，Berthoud H.R.，Uematsu S.，Akira S.，van den Wijngaard R.M.，BoeckxstaensG.E.， " Stimulation of the vagus nerve attenuates macrophage activation byactivating the Jak2_STAT3 signaling pathway, " Nat Immunol 6:844-851(2005)；Floto R.A.，Smith K.G.，" The vagus nerve, macrophages，and nicotine，" Lancet361:1069-1070(2003) ；Ghia J.E.，Blennerhassett P.，Kumar-Ondiveeran H.，VerduE.F., Collins S.Μ., " The vagus nerve:a tonic inhibitory influence associatedwith inflammatory bowel disease in a murine model，" Gastroenterology 131:1122-1130(2006)。nAChR a 7 是近年来最被广泛研究的 nAChR。Mazurov A.，Hauser T.，Miller
C.Η., " Selective alpha7 nicotinic acetylcholine receptor ligands，" Curr MedChem 13:1567-1584(2006)。最近增加了对nAChR a 7配体和它们的用途的兴趣，并且这些剂中很多在进行临床试验(但不是针对IBD)。这些进展提供鉴定和设计/合成nAChRa 7特异性药物的分子基础。C.代表性实施方案
本公开主题鉴定了 nAChR α 7作为调节吸烟(即烟碱暴露)对⑶相对于UC的相反的效果的主要调节因子。首先，通过来自于IBD患者的淋巴细胞和嗜中性粒细胞的基因表达图谱发现烟碱型乙酰胆碱受体α7亚型(nAChRa 7)，相比于未受影响的对照而言，在克罗恩病(CD)患者中显著过度表达，但在溃疡性结肠炎(UC)患者中被下调。不期望受到任何一种具体理论束缚，假设吸烟可能通过nAChR a 7对UC相比于⑶导致相反的效果。为检验此假设，使用非特异性配体(烟碱)和若干特异性配体(包括PNU 282987 (PNU)，GTS-21，和MLA，如下文所定义的)以检测它们对小鼠IBD模型中UC样DSS结肠炎和CD样TNBS结肠炎的效果，这些小鼠模型是在基本上所有IBD的治疗性药物的临床前研究中最普遍使用的动物模型。在一些实施方案中，本公开主题阐明了 nAChRa 7激动剂PNU282987 (N-[(3R)-1-氮杂双环[2.2.2]辛_3_基]-4-氯苯甲酰胺)和3_(2，4_ 二甲氧基苯亚甲基)假木贼因(3_(2,4-dimethoxybenzylidene) anabaseine,GTS-21,本文也被称为DMXB-A)对UC样结肠炎是高度有效的治疗药，但恶化CD样结肠炎，该观察结果与吸烟对人类UC相比于⑶的效果极其类似。另一方面，在其他的实施方案中，本公开主题阐明了 nAChRa 7拮抗剂甲基牛扁亭(MLA)是对CD样结肠炎高度有效的治疗剂，但对UC样结肠炎无效果。再次重申，不期望受到任何一种具体理论束缚，相信这些激动剂和拮抗剂通过调节抗炎细胞因子和促炎细胞因子的作用而发挥作用。例如，激动剂能够刺激抗炎细胞因子，而抑制促炎细胞因子。而且，本公开主题阐明了 PNU和MLA的效果是特异性通过nAChR a 7的，因为其效果在被诱导产生IBD的nAChRa 7缺陷小鼠中没有被观察到。因此，本公开主题不仅表征吸烟对IBD的效应，而且鉴定了 nAChRa 7作为用于⑶和UC的治疗干预的分子靶。更特别地，在一些实施方案中，本公开主题提供了用于治疗有相应治疗需要的受治疗者的炎性肠病(IBD)的方法，所述方法包括以有效调节所述受治疗者中至少一种细胞中的nAChR a 7的活性的量对受治疗者施用烟碱型乙酰胆碱受体a 7 (nAChR a 7)拮抗剂，借此至少一种细胞中的nAChRa 7活性的调节治疗受治疗者的IBD。在一些实施方案中，IBD包括克罗恩病(⑶)。在其他实施方案中，本公开主题提供用于治疗有相应治疗需要的受治疗者的炎性肠病(IBD)的方法，所述方法包括以有效调节所述受治疗者中至少一种细胞中的nAChRa 7的活性的量对受治疗者施用烟碱型乙酰胆碱受体a7(nAChRa7)激动剂，借此至少一种细胞中的nAChRa 7活性的调节治疗受治疗者的IBD。在一些实施方案中，IBD包括溃疡性结肠炎(UC)。术语活性剂的“有效量”指引出期望的生物学反应所必需的量。正如将被本领域普通技术人员所了解的，剂的有效量可能随各种因素而改变，这些因素例如期望的生物学终点，被递送的剂，药物组合物的组成，靶组织或细胞，诸如此类。更特别地，术语“有效量”指足以产生期望效果的量，所述期望效果例如减少或改善严重性、持续时间、进程，或疾病、病症或疾患(例如与丧失细胞功能相关的疾病，病症或疾患)的发作或其一个或多个症状；预防疾病、病症或疾患的进展；导致疾病、病症或疾患的消退；预防与疾病、病症或疾患有关的症状的复发、发展、发作或进展；或增强或改善另一种治疗的预防或治疗效果。根据本公开方法，化合物的有效量的范围可以是，例如从约0. 0Olmg/kg到约1000mg/kg，或在某些实施方案中，从约0.0lmg/kg到约100mg/kg,或在某些实施方案中，从约0.lmg/kg到约50mg/kg。正如本领域技术人员意识到的，有效剂量还随如下而变化:治疗的疾患，施用途径，赋形剂使用，受治疗者的年龄和性别，和与其他治疗性治疗(例如使用其他药剂)共同使用的可能性。应了解，为到达期望生物学反应所需要的化合物的量可能与化合物对于其他目的有效的量不同。正如本文使用的，术语“激动剂”被定义为刺激或诱导nAChR α 7活性的物质。术语“拮抗剂”被定义为阻断或抑制nAChRa 7活性的物质。在一些实施方案中，nAChR a 7受体激动剂或拮抗剂包括小分子抑制剂，其包括但不限于如下提供的示例性的激动剂和拮抗齐U。但是，nAChRa 7活性可以通过本领域技术人员已知的任何方法调节，包括但不限于生物剂例如特异性抗体的使用，通过基因疗法增加基因表达，或通过RNAi抑制基因表达。在特别的实施方案中，选择性的nAChR a 7激动剂选自由以下组成的组:PNU 282987 (N-[(3R)-1-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基]-4-氯苯甲酰胺)、MEM3454、PH-399733、AR-R1779、SSR180711A(4-溴苯基 1，4 二氮杂双环(3.2.2)壬烷-4-羧酸酯，单盐酸盐(4-bromophenyl 1,4diazabicyclo(3.2.2)nonane-4-carboxylate,monohydrochloride))、ABT_418 (3-甲基 _5_ [ (2S)-1-甲基吡咯烷 _2_ 基]-1，2-噁唑)、甲鹏可卡因(cocaine methiodide)、3-2,4_二甲氧基苯亚甲基假木贼因(GTS-21或DMXB-A)、
3-(4-羟基苯亚甲基)假木贼因、3-(4-甲氧基苯亚甲基)假木贼因、3-(4-氨基苯亚甲基)假木贼因、3-(4-羟基-2-甲氧基苯亚甲基)假木贼因、3-(4-甲氧基-2-羟基苯亚甲基)假木贼因、反式-3-亚肉桂基假木贼因、反式-3-(2-甲氧基-亚肉桂基)假木贼因、和反式-3-(4-甲氧基亚肉桂基)假木贼因。在其他实施方案中，选择性的nAChRa 7激动剂选自由以下组成的组:N-[(3R)-1-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-羟基苯氧基)苯甲酰胺、N_[ (3R)-1-氮杂双环[2.2.2]辛-3- 基]-4-(4-乙酰氨基苯氧基)苯甲酰胺、N-[(3R)-1-氮杂双环[2.2.2]羊 _3_ 基]_4_ (苯基硫烧基苯氧基)苯甲酸胺(N_[ (3R)-l-azabicyclo [2.2.2]oct-3-yl]-4-(phenylsulfanylphenoxy) benzamide)、N_[ (3R)-1-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基]-4_(3_氯苯磺酰基)苯甲酰胺、和(1-氮杂_双环[2.2.2]辛-3-基)氨基甲酸1- (2-氟苯基)-乙酯。在下列专利申请中描述了适用于本公开主题的选择性nAChRa7激动剂:PCT/US2006/022136 ；PCT/US1998/17850 ；PCT/EP2007/005724；W099/62505 ；W099/03859 ；W097/30998 ；W001/36417 ；W002/15662 ；W002/16355 ；W002/16356 ；W002/16357 ；W002/16358 ；W002/17358,美国专利申请公开第 2006/0166974 号；2006/0128676 号；2005/0282823 号；2005/0165047 号；2004/0044026 号；2004/0229868 号，以及 MazurovA.，Hauser Τ., Miller C.H.,“Selective alpha7 nicotinic acetylcholine receptorligands, ” Curr Med Chem 13:1567-1584 (2006),上述每一个均被通过引用全部并入本文。在某些实施方案中，nAChR α 7激动剂选自由nAChR α 7特异性抗体、nAChR α 7特异性抑制性RNA或其组合所组成的组。在一些实施方案中，选择性nAChRa 7拮抗剂包括a-环蛇毒素和甲基牛扁亭(MLA)。在下列文献中描述了另外的选择性nAChRa 7拮抗剂的实例:Mazurov A.,Hauser Τ., Miller C.Η.,“Selective alpha7 nicotinic acetylcholine receptorligands, ^Curr Med Chem 13:1567-1584(2006)，其在此通过引入全部并入。在某些实施方案中，nAChR α 7拮抗剂选自由nAChR α 7特异性抗体、nAChR α 7特异性抑制性RNA或其组合组成的组。在其他实施方案中，nAChRa 7受体的配体包括但不限于二氮杂双环烷衍生物，例如如 W02005/028477 中描述的；螺环奎宁环醚(spirocyclic quinuclidinic ether)衍生物，例如如W02005/066168中描述的；稠合的双环杂环取代的奎宁环衍生物，例如如美国专利申请公开第 US2005/0137184 号；US2005/0137204 号；和 US2005/0245531 号中描述的；
3-奎宁环基氨基-取代的联芳衍生物，例如如W02005/066166中描述的；3_奎宁环基杂原子桥接的联芳衍生物，例如如W02005/066167中描述的；和氨基取代的三环衍生物,例如如W02005/077899中描述的，上述的每一个都被通过引用全部并入。贯穿说明书和权利要求书，给定的化学式或名称应该包括所有互变异构体、同源化合物(congener)、以及光学和立体异构体，和其中存在这种异构体和混合物的消旋混合物。在一些实施方案中，治疗包括预防受治疗者的IBD的发展或预防受治疗者的IBD的进展。术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment) ”及其语法衍生物旨在包括疾病状态和病症的治疗、管理、预防和治愈。术语“受治疗者”指生物体、组织或细胞。受治疗者可以包括用于医学目的的人类受治疗者，医学目的例如现存病症或疾病的诊断和/或治疗，或预防病症或疾病的发作的预防性治疗，或用于医学、兽医学目的或发育目的的动物受治疗者。受治疗者还可以包括来自于组织培养、细胞培养、器官复制、干细胞生产诸如此类的样品材料。合适的动物受治疗者包括哺乳动物和禽类。本文使用的术语“哺乳动物”包括但不限于灵长类，例如人，猴子，猿，和诸如此类；牛类，例如牛，阉牛(ox)，和诸如此类；绵羊类(ovines)，例如绵羊(sheep)和诸如此类；山羊类(caprines),例如山羊(goat)和诸如此类；猪类，例如猪，肉猪(hog)和诸如此类；马类，例如马，驴，斑马和诸如此类；猫类，包括野生和家养的猫；犬类，包括狗；兔类，包括家兔(rabbit),野兔(hare)和诸如此类；和啮齿类,包括小鼠,大鼠,和诸如此类。本文使用的术语“禽类”包括但不限于，鸡，鸭，鹅，鹌鹑，火鸡和野鸡。优选地，受治疗者为哺乳类动物或哺乳类细胞。更优选地，受治疗者是人类或人类细胞。人类受治疗者包括但不限于，胎儿，新生儿，婴儿，青少年，和成人受治疗者。而且，“受治疗者”可以包括受害于或怀疑正受害于病症或疾病的患者。因此，术语“受治疗者”和“患者”在本文可互换使用。受治疗者还可以指实验室中的细胞或细胞收集物或用于活性、分化、标志物生产、表达和诸如此类的测试中的生物处理培养物。在一些实施方案中，受治疗者是啮齿类，例如小鼠，其已被化学诱导为IBD模型。在特定的实施方案中，小鼠模型是下列的一个或多个:(a)暴露于葡聚糖硫酸钠(DSS)以诱导溃疡性结肠炎样病症的 小鼠；(b)暴露于三硝基苯磺酸(TNBS)以诱导克罗恩病样病症的小鼠；(C)诱导产生结肠炎的nAChRa 7缺陷小鼠；或(d)缺失两种谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)Gpxl和Gpx2，[Gpxl/2-双敲除(DKO)小鼠]，并进而发展出回结肠炎的小鼠。在其他的实施方案中，本公开方法针对真核细胞，优选哺乳动物细胞，且更优选人类细胞。细胞或细胞系可以通过商业获得或可以从哺乳动物组织中分离。适合用于本公开方法的细胞还可以作为组织或器官制备物的一部分存在。细胞不限于可以从大鼠、猫、马、小鼠、仓鼠、鸡、绵羊、山羊、猪、牛、兔、非人类灵长类、和人类中获得。在其他的实施方案中，本公开主题提供用于调节至少一种免疫细胞类型中的nAChRa 7活性的方法，所述方法包括使至少一种免疫细胞类型与有效调节至少一种免疫细胞类型中的nAChR a 7活性的量的nAChR a 7拮抗剂或nAChR a 7激动剂接触。正如本文使用的，短语“免疫细胞”意在表示在哺乳动物免疫反应中发挥功能的那些细胞，免疫反应包括细胞介导的免疫反应和体液免疫反应。该短语包括但不限于，淋巴细胞、抗原特异性细胞毒T淋巴细胞、嗜中性粒细胞、外周血单核细胞(PBMC)、巨噬细胞、和自然杀伤细胞。还在其他的实施方案中，本公开主题提供用于减少有慢性胃肠道炎症的受治疗者发展结直肠癌的风险的方法，所述方法包括以有效调节一种或多种胃肠道免疫细胞中的nAChRa 7活性的量对受治疗者施用nAChRa 7拮抗剂或nAChRa 7激动剂，借此调节nAChR a 7活性改变一种或多种胃肠道免疫细胞中的炎症反应，因此减少发展结直肠癌的风险。在另外的实施方案中，本公开主题提供用于鉴定调节表达nAChRa 7的至少一种细胞中nAChRa 7活性的化合物或剂的方法，所述方法包括:(i)使表达nAChR a 7的至少一种细胞与候选化合物或剂接触；Qi)确定与所述候选化合物或剂接触的表达nAChRa 7的至少一种细胞中的nAChRa 7的活性；(iii)确定没有与所述候选化合物或剂接触的表达nAChRa 7的至少一种对照细胞中nAChRa 7的活性；和(iv)对比与所述候选化合物或剂接触的至少一种细胞中nAChRa 7的活性和至少一种对照细胞中nAChRa 7的活性；其中在与所述候选化合物或剂接触的至少一种细胞中的nAChRa 7活性与至少一种对照细胞中的nAChRa 7活性的差异鉴定调节至少一种细胞中的nAChRa 7活性的候选化合物或剂。还在另外的实施方案中，本公开主题提供用于预测对受害于由nAChRa 7的基因或蛋白表达的异常水平导致的IBD的受治疗者施用nAChRa 7表达调节剂的治疗效果的方法，其中所述nAChR a 7表达调节剂是nAChR a 7拮抗剂或nAChR a 7激动剂，所述方法包括:
(a)测量在施用nAChRa 7调节剂之前受治疗者的组织或细胞中nAChRa 7的基因或蛋白表达水平；(b)以有效改变受治疗者的组织或细胞中nAChRa 7基因或蛋白表达水平的量对受治疗者施用nAChRa 7调节剂；(c)测量来自于施用nAChRa 7调节剂之后的受治疗者的组织或细胞中的nAChRa 7的基因或蛋白表达水平；和(d)确定施用nAChRa 7调节剂之后的组织或细胞中nAChRa 7的基因或蛋白表达水平相比较于施用nAChR a 7调节剂之前的组织或细胞中的基因或蛋白表达水平的改变；其中在组织或者细胞中的nAChR a 7基因或蛋白表达水平的改变预测nAChRa 7表达调节剂对受害于IBD的受治疗者的治疗效果。在一些实施方案中，在受害于IBD的受治疗者中nAChRa 7被过度表达至异常水平，且基因或蛋白表达水平的降低预测对施用nAChRa 7调节剂的正反应。在其他实施方案中，在受害于IBD的受治疗者中nAChRa 7的表达被下调至异常水平，且基因或蛋白水平的增加预测对施用nAChRa 7调节剂的正反应。
在一些实施方案中，使用一种或多种方法确定基因表达水平的改变，所述方法选自由RNA印迹法、RT-PCR、实时RT-PCR、原位杂交和微阵列组成的组。在其他的实施方案中，蛋白表达水平的改变使用选自由以下组成的组的一种或多种方法确定:蛋白质印迹法、ELI SA、质谱、免疫组织化学和蛋白质阵列。因此，在一些实施方案中，本公开方法可以用于诊断，用于预后或疾病状态或病症的监控。正如本文使用的，术语“诊断”指预测性的过程，其中评价了疾病、疾患或其他医学病症的存在、不存在、严重性或治疗进程。为了本文的目的，诊断还包括用于确定治疗结果的预测性的过程。类似的，术语“诊断”指确定受治疗者是否展现病症或疾病的一个或多个特征。术语“诊断”包括确立例如靶抗原或结合试剂的靶的存在或不存在，或确立或以其他方式确定病症或疾病的一个或多个特征，包括类型、等级、阶段、或类似情况。正如本文使用的，术语“诊断”可以包括区分疾病的一个形式与另一个形式。术语“诊断”包括最初的诊断或检测，预后，和病症或疾病的监控。另外，例如在“疾病或病症进程的监控”中的术语“监控”指进行中的对从具有或疑似具有疾病或病症的受治疗者获得的样品的诊断。术语“预后”及其衍生形式指确定或预测疾病或病症的进程。疾病或病症的进程可以例如基于生命预期或生命质量来确定。“预后”包括接受治疗或不接受治疗的情况下，疾病或病症的时间进程的确定。在考虑治疗的情况下，预后包括确定对于疾病或病症的疗效。正如本文使用的，术语“风险”指预测性过程，其中评价特定结果的可能性。因此，本公开主题包括监控nAChRa 7基因表达和/或蛋白水平作为IBD患者治疗性反应的预后性测量。响应于治疗剂的对nAChRa 7基因表达和/或蛋白水平的效果可以提供用于确定患者是 否对治疗有反应的手段。在nAChR a 7过度表达的情况下，例如克罗恩病(CD)的患者，基因/蛋白表达水平的降低应该指示对于治疗的正反应。在nAChRa 7下调的情况下，例如溃疡性结肠炎的患者，基因/蛋白的表达水平的增加应该指示对于治疗的正反应。可以使用本领域技术人员已知的任何方法完成检测基因表达水平的方法，包括但不限于上文中刚公开的那些方法。这些方法可以使用任何感兴趣的组织样品中的RNA或蛋白，例如IBD组织活检，新鲜的或存档的外科标本，存在于血液中的循环细胞，血清，尿液，和细胞系。I1.药物组合物、药盒和施用在另一方面，本公开提供了药物组合物，其包括与药学上可接受的赋形剂混合的单独或与一种或多种额外的治疗剂组合的一种或多种nAChR a 7拮抗剂和/或nAChR a 7激动剂。本领域技术人员将意识到，药物组合物包括上述化合物的药学上可接受的盐。更特别的，在一些实施方案中，本公开主题提供了药物组合物，其包括有效调节nAChRa 7功能以治疗或预防有相应治疗需要的受治疗者的炎性肠病(IBD)的量的烟碱型乙酰胆碱受体a7(nAChRa7)的特异性激动剂或特异性拮抗剂。在一些实施方案中，所述药物组合物包括与一种或多种无毒的药学上可接受的载体、佐剂、或赋形剂配制在一起的治疗有效量的nAChRa 7激动剂/拮抗剂。本文所述组合物或其药学上可接受的加成盐或水合物可以根据本公开方法使用各种各样的施用途径或方式被递送至受治疗者以避免或减少不必要的副作用。所述药物组合物可以被配制成以固体或液体形式口服施用。不干扰药学上可接受的载体的功能的本领域技术人员已知的各种成分可以以有效量任选地被包括在药物组合物中。概括的说，润滑剂、粘合剂、明胶、和/或崩解剂是合适的。其他任选的成分包括缓冲液，防腐剂，张力调节剂，抗氧化剂，用于调节粘度或用作于增量剂的聚合物，和赋形剂，和诸如此类。药学领域的普通技术人员已知的其他传统添加剂包括但不限于，湿润剂，软化剂，稳定剂，和染料，且只要这些添加剂不干扰药物组合物的治疗性质就可以被使用。使用药学领域普遍已知的方法容易制备所述药物组合物。可以单独或与其他本公开的化合物组合和/或与其他治疗或预防IBD的治疗剂组合施用所述化合物或其药学上可接受的盐和/或水合物。在其他的实施方案中，本公开主题提供了包括本公开的药物组合物的药盒。药盒包括至少一种包含激动剂或拮抗剂、或其盐的药物组合物。药盒还包括用于容纳组合物的容器。在一些实施方案中，药盒还包括对受治疗者施用至少一种包含激动剂或拮抗剂、或其盐的药物组合物的指南。合适的施用途径包括但不限于，吸入，经皮，口服，直肠，经粘膜，肠道，和肠胃外施用，包括肌肉内，皮下，和静脉注射。在治疗和/或诊断应用中，本公开的化合物可以被配制成用于各种施用方式，包括系统的和外用的(topical)或局部的(localized)施用。技术和配方通常可以在 Remington:The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.)Lippincott, Williams & Wilkins (2000)中找到。根据本公开的化合物在一个宽的剂量范围内有效。例如，在治疗成年人时，剂量从
0.01到lOOOmg，从0.5到lOOmg，和从I到50mg每天。确切的剂量依赖于施用途径，化合物被施用的形式，待治疗的受治疗者，待治疗的受治疗者的体重，以及主治医生的偏好和经验。药学上可接受的盐一般是本领域普通技术人员所熟知的，且可包括，例如但不限于，醋酸盐，苯磺酸盐(benzenesulfonate),苯磺酸盐(besylate),苯甲酸盐,碳酸氢盐，酒石酸氢盐，溴化物，乙二胺四乙酸钙，右旋樟脑磺酸盐，碳酸盐，柠檬酸盐，乙二胺四乙酸盐，乙二磺酸盐(edisylate),丙酸酯十二烧基硫酸盐(estolate),乙磺酸盐(esylate),延胡索酸盐，葡庚糖酸盐(glue印tate)，葡萄糖酸盐，谷氨酸盐，对羟乙酰氨基苯胂酸盐(glycollylarsanilate),己基间苯二酸盐(hexylresorcinate),海巴明盐,氢溴酸盐,盐酸盐，轻萘酸盐(hydroxynaphthoate),碘化物，轻乙基磺酸盐(isethionate),乳酸盐，乳糖酸盐,苹果酸盐,马来酸盐,扁 桃酸盐，甲磺酸盐,粘酸盐(mucate)，萘磺酸盐(napsylate)，硝酸盐，巴莫酸盐(pamoate)(双轻萘酸盐(embonate)),泛酸盐,磷酸/ 二磷酸盐,聚半乳糖醛酸盐，水杨酸盐，硬脂酸盐，碱式醋酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，单宁酸盐，酒石酸盐，或8-氯茶碱盐(teoclate)。其他药学上可接受的盐可以在比如Remington:The Science andPractice of Pharmacy (20th ed.) Lippincott, Williams & Wilkins (2000)中找到。药学上可接受的盐包括，比如，醋酸盐，苯甲酸盐，溴化物，碳酸盐，柠檬酸盐，葡萄糖酸盐，氢溴酸盐，盐酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐，萘磺酸盐，巴莫酸盐(双羟萘酸盐)，磷酸盐，水杨酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，或酒石酸盐。根据被治疗的具体病症，这些剂可以被配制成液体或固体剂型并被系统或局部地施用。本领域技术人员已知，这些剂可以以比如定时或持续的缓释形式被递送。用于配制和施用的技术可以在 Remington:The Science and Practice of Pharmacy (20thed.) Lippincott, Williams & Wilkins (2000)中找到。适当的途径可包括口服、口腔、吸入式喷剂、舌下、直肠、经皮的、阴道、经粘膜、鼻部或肠施用；肠胃外递送，包括肌肉内、皮下、髓内注射，以及鞘内、直接心室内、静脉内、关节内、胸骨内、滑膜内、肝内、病灶内(intralesional)、卢页内、腹膜内、鼻内、或眼内注射或其他递送方式。对于注射，本公开的药剂可以被配制并稀释于水溶液中，比如生理学相容的缓冲液例如Hank’s液，林格氏溶液，或生理盐水缓冲液。对于经粘膜施用，在制剂中使用适合于所需穿透的屏障的渗透剂。这些渗透剂通常是本领域已知的。使用药学上可接受的惰性载体将用于本公开实践的本文所公开的化合物配制成适于系统施用的剂量(dosage)在本公开的范围内。使用适当选择的载体和合适的制造实践，本公开的组合物，特别是那些配制成为溶液的组合物，可以在肠胃外施用，比如通过静脉注射。可以使用被本领域熟知的药学上可接受的载体容易地将化合物配制成适用于口服施用的剂量。这些载体使得本公开的化合物可配制为片、丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液和诸如此类的，以使待治疗的受治疗者(比如患者)口服摄入。对于鼻部或吸入递送，本公开的剂也可以使用本领域技术人员已知的方法配制，且可能包括但不限于，例如溶解、稀释、或分散物质例如盐水，防腐剂(例如苯甲基醇)、吸收促进剂、和碳氟化合物。适合用于本公开的药物组合物包括如下组合物:其中包括有效量的活性成分以达到其预期目的。有效量的确定在本领域技术人员的能力范围内，特别是根据本文提供的详细公开内容。除了活性成分之外，这些药物组合物可以包括帮助活性化合物加工成药学可用的制品的合适的药学上可接受的载体，包括赋形剂和辅助剂。配制成口服施用的制品可以是片剂、糖衣剂、胶囊、或溶液的形式。口服使用的药 物制品可以通过混合活性化合物和固体赋形剂，任选地研磨得到的混合物，并且如果需要，在加入合适的辅助剂之后，加工颗粒混合物，得到药片或糖衣核。合适的赋形剂，特别是，填充剂如糖，包括乳糖，蔗糖，甘露醇，或山梨醇；纤维素制品，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、土豆淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基钠纤维素(CMC)、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP:聚维酮)。如果需要，可以添加崩解剂，例如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或藻酸或其盐例如藻酸钠。给糖衣核提供合适的包衣。为此目的，可使用浓缩的糖溶液，其可任选包括阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡伯波凝胶(carbopol gel)、聚乙二醇(PEG)、和/或二氧化钛、漆用溶液(lacquer solution),和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以给药片或糖衣包衣添加染料或色素，以鉴别或表征活性化合物剂量的不同的组合。可口服使用的药物制品包括由明胶制成的推入配合胶囊，以及由明胶和增塑剂(如甘油或山梨醇)制成的软的密封的胶囊。推入配合胶囊可以包括与填充剂(如乳糖)、粘合剂(如淀粉)、和/或润滑剂(如滑石或硬脂酸镁)和任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可被溶解于或悬浮于合适的液体，例如脂肪油、液体石蜡、或液体聚乙二醇(PEG)。另外，可添加稳定剂。根据要治疗或预防的具体的病症或疾病状态，通常被施用来治疗或预防病症的额外的治疗剂可以与本公开的激动剂和/或拮抗剂一起施用。因此，额外的剂可以与本公开的nAChR α 7拮抗剂和/或nAChR α 7激动剂合并在药物组合物中。这些额外的剂可以作为多次给药方案(multiple dosage regimen)的一部分与包含抑制剂的组合物分开施用。可选地，这些剂可以是与在单一组合物中的抑制剂混合在一起的单剂型的一部分。尽管在此使用了具体的术语，它们仅在普通的和描述的意义上使用且并非出于限制的目的。除非另外定义，在此使用的所有技术和科学术语具有与描述的本主题所属的本领域普通技术人员所通常理解的相同的含义。遵循长时间存在的专利法律传统，术语“一个(a) ”、“一 (an) ”和“该”当在本申请包括权利要求中使用时指“一个或多个”。因此，例如提到“一个受治疗者”包括多个受治疗者，除非上下文清楚地指向相反(例如多个受治疗者)，等等。贯穿此说明书和权利要求书，术语“包括(comprise) ”、“包括(comprises) ”、和“包括(comprising)”在非排除的意义上使用，除非上下文另外要求。类似地，术语“包含”及其语法变形旨在不限定，以使列举的事项枚举不排除可以被替代或添加至所列举的事项中的其他类似的事项。出于本说明书和所附的权利要求书的目的，除非另外指明，所有在本说明书和权利要求书中使用的表示量、大小、尺寸、比例、形状、配方、参数、百分比、参数、数量、特征、和其他数值的数字，应理解为在所有情况下均以术语“大约”修饰，即使术语“大约”可能没有明确地与数值、量或范围同时出现。因此，除非作出相反的说明，在下述说明书和所附的权利要求书中陈述的数字参数不是也不需要是准确的，但可以按需要是近似的和/或更大或更小于所预期的，取决于寻求通过本公开主题得到的所需的性质，其反映公差，转换因素，舍入，测量误差和诸如此类，和本领域技术人员已知的其他因素。例如，术语“大约”，当指值时可旨在包括距指定量值的如下变动:在一些实施方案中为±100%，在一些实施方案中为±50%，在一些实施方案中为±20%，在一些实施方案中为±10%，在一些实施方案中为±5%，在一些实施方案中为±1%，在一些实施方案中为±0.5%，和在一些实施方案中为±0.1%，此类变动适于进行本公开的方法或应用本公开的组合物。而且，当与一个或多个数字或数字的范围联合使用时，术语“大约”应该被理解为指所有这些数字，包括所有在范围内的数字并且通过延伸其界限高于或低于所述数值而修改其范围。借助终点进行的数字范围的枚举包括所有数字，例如全部整数，包括其被包括入所述范围的分数，(例如，I到5的枚举包括1，2，3，4和5，和其分数，例如1.5，2.25，3.75，
4.1，和诸如此类)和在所述范围内的任何范围。 实施例包括下列实施例以向本领域普通技术人员实践本公开主题的代表性实施方案提供指导。考虑到本公开内容和本领域的大致技术水平，技术人员可以理解，下列实施例仅旨在示例，并且许多的变化、修改和改变可以被应用而不脱离本公开主题的范围。下述的合成描述和具体的实施例仅旨在出于阐明的目的，并不应被解释为对以其他方法制备本公开的化合物的任何形式的限制。实施例1某闵表汰图谱显示在IBD中的不同表汰樽式从17个患者中得到外周血和结肠活检，患者平均年龄为46.53 (95%置信水平，
39.65-53.41)且患有记录的IBD (9个⑶和8个UC)。该群组还包括17个年龄和性别匹配的未受影响的健康对照。分离嗜中性粒细胞和外周血单核细胞(PBMC)，并提取总RNA。Cy标记的cDNA与基因组规模的微阵列杂交，所述微阵列包含21，329个基因的探针。将数据标准化后，在进行相关性分析之前，每个样品中大约9，500个基因被表达为在背景值之上的三(3)个标准差。分级聚类显示用于样品分类的分析方法的稳健性，其显示，在每个亚组中存在基因表达图谱的不同聚类(见图1)。使用判别功能分析(DFA)来鉴定在免疫细胞中的表达最大程度区分该群组的基因。Alex P., Szodoray P., Knowlton N., Dozmorov
1.M., Turner M., Frank Μ.B., Arthur R.E., Willis L., Flinn D., Hynd R.F., Carson C,Kumar A.,El-Gabalawy H.S.,Centola M.,“Multiplex serum cytokine monitoring as aprognostic tool in rheumatoid arthritis, ^Clin Exp Rheumatol 25:584-592(2007)。96个差异表达的基因中，使用严格的DFA选择10个基因作为具有最高权力用于患者和对照之间的类别判别。有趣的是，在DFA根值的3D图中，UC和CD患者和对照被分组到3个不同的位置，表明这是直接与全部基因表达和疾病病理的组间基因表达变化和组内异质性成比例的(图2)。nAChRa 7是10个差异表达的基因中的一个。实施例2在⑶相比于UC中鉴定的差异的nAChR a 7表汰樽式基因微阵列分析显示，与对照相比，在⑶患者的嗜中性粒细胞和PBMC中的nAChR a 7被显著上调了，而UC患者的嗜中性粒细胞和PBMC中的nAChR a 7被下调了(图3，左图)。使用QRT-PCT证实在⑶相比于UC中的nAChR a 7的表达水平(图3，右图:⑶相比于UC的变化倍数在统计学上是相同的)。因为烟碱是吸烟中的主要活性组分，并且nAChR a 7是仅有的在UC相比于⑶中被差异表达的nAChR，这些数据显示nAChR a 7可能是调节在吸烟者和非吸烟者中不同的对CD的促炎作用和对UC中的抗炎作用的关键参与者。实施例3在CD相比于UC中通过nAChRa 7介导产生的烟碱的不同免疫调节图谱考虑到⑶相比于UC和健康者中独特的nAChRa 7差异表达(图3)，进行初步的研究以调查nAChRa 7的功 能贡献及其在⑶相比于UC中的免疫调节图谱。尽管IBD大致上被研究为T细胞介导的疾病，同族肠道微生物/B/Τ细胞相互作用对于疾病的发病机理是重要的。研究UC、CD患者和未受影响的对照的永生化(EBV-转化的)B淋巴细胞，以评价nAChR a 7的免疫调节图谱。对细胞进行烟碱(2 μ M和20 μ Μ)和nAChR a 7选择性拮抗剂a -环蛇毒素(Sigma.St.Louis) (2nM和20nM)的刺激和抑制研究，所述细胞被培养并维持在IX IO6个细胞的终浓度。基于夹心免疫测定的蛋白阵列系统(生物测定夹心ELISA，其包括与针对祀蛋白的特异性单克隆抗体偶联的染色的微球)，如前所述，Alex P., SzodorayP.，Knowlton N.，Dozmorov 1.M.，Turner Μ.，Frank Μ.B.，Arthur R.Ε.，Willis L，Flinn D.，Hynd R.F.，Carson C，Kumar A.，El-Gabalawy H.S.，Cento la M.，“Multiplexserum cytokine monitoring as a prognostic tool in rheumatoid arthritis，，，ClinExp Rheumatol 25:584-592(2007) ；Nakayama T.，Hieshima K.，Nagakubo D.，Sato E.，Nakayama M.,Kawa K.，Yoshie 0.，‘‘Selective induction of Th2_attracting chemokinesCCLI7 and CCL22 in human B cells by latent membrane protein I of Epstein-Barrviiois，”J Virol 78:1665-1674(2004),被用于测定在剌激后多个时间点(24、48、72、96和120小时)释放到培养基的22个细胞的、细胞毒的、体液的细胞因子和趋化因子的水平(图4)。使用单一蛋白ELISA进行多个实验的验证。在这22个变量中，EBV转化的淋巴细胞的免疫介质(immune mediator)的分泌在未受影响的对照和IBD之间的显著变化只在5个细胞因子/趋化因子中是明显的(图4)(在两个独立实验中再现)。这一图谱是报道的“低Thl，高Th2趋化性nB淋巴母细胞的免疫生成的典型。Nakayama T.,Hieshima K., NagakuboD.,Sato Ε.,Nakayama Μ.,Kawa K.,Yoshie 0.,“Selective induction of Th2_attractingchemokines CCLI7 and CCL22 in human B cells by latent membrane protein I ofEpstein-Barr virus,，，J Virol 78:1665-1674(2004) ；Burdin N.,Peronne C,BanchereauJ., Rousset F.,“Epstein-Barr virus transformation induces B lymphocytes toproduce human interleukin 10,，，J Exp Med 177:295-304(1993) ；Vockerodt M.,Pinkert
D., Smola-Hess S., Michels A., RansohoffR.Μ., Tesch Η., Kube D.,“The Epstein-Barrvirus oncoprotein latent membrane protein I induces expression of the chemokineIP-10:importance of mRNA half-life regulation,^Int J Cancer 114:598-605(2005)。使用不同剂量的烟碱预处理120小时显示,在⑶相比于UC中，促炎细胞因子/趋化因子IL-8和MIP-1的显著的产生，并且在⑶相比于⑶中，抗炎细胞因子IL-1O生成的显著抑制(图4A)，这表明烟碱在CD中有不同的促炎和趋化效果。烟碱在CD中抑制IL-1O的效果(图4A)还表明了一个潜在的机制,其还与已被广泛验证的在基因革巴向IL-1O敲除的小鼠中发展的慢性CD样回结肠炎相一致，并且与报告的IL-1O对若干结肠炎的动物模型中的疗效相一致。Kuhn R.，Lohler J.，Rennick D.，Rajewsky K.，MullerW.,“Interleukin-lO-deficient mice develop chronic enterocolitis 2, ^ Cell 75:263-274 (1993) ；Ribbons K.A., Thompson J.FL, Liu X., Pennline Κ., Clark D.A.,Miller M.J., “Ant1-1nflammatory properties of interleukin-10 administration inhapten-1nduced colitis,，，Eur J Pharmacol 323:245-254(1997)。由于在 CD 中 α-环蛇毒素以100%显著地逆转烟碱的效果，这些数据还表明⑶中通过nAChRa 7介导的机制的促炎效果。在新鲜分离的淋巴细胞和嗜中性粒细胞中研究nAChRa 7介导的细胞因子图谱的类似的实验正在进行中。上述的发现强烈表明nAChRa 7在调节烟碱效果方面的关键性作用，并且表明nAChRa 7作为⑶治疗的治疗靶的显著潜力。使用烟碱或nAChRa 7特异性激动剂预处理预防DSS诱导的“UC样”小鼠结肠炎(疾病表型与人类UC类似)的发展，而显著恶化“CD样” TNBS诱导的结肠炎(疾病表型与人类CD类似)。

为得到nAChRa 7作为协调烟碱在CD和UC进程中的相反效果的主要调节者的直接证据；使用已建立好的化学诱导的小鼠IBD模型(DSS和TNBS结肠炎)进行了一系列实验(图5-13)，所述小鼠IBD模型被广泛用于IBD治疗性药物的临床前研究。对于CD样小鼠模型，使用BALB/c小鼠诱导DSS结肠炎。对于CD样小鼠模型，使用BALB/c小鼠诱导TNBS结肠炎。C57/B6或BALB/c小鼠，6-8周龄，使用烟碱(nAChRa 7非特异性配体；6mg/kg)或nAChR a 7特异性激动剂(PNU ；8.3mg/kg)预处理(每天腹膜内注射)一星期。对照是没有预处理的小鼠(每个处理组总共有大于10只小鼠)。然后，使用TNBS(600yg)诱导小鼠发展CD样结肠炎，或者使用DSS(2.5%)诱导小鼠发展UC样结肠炎。如图5所示，对于急性结肠炎模型的疾病活动指数(DAI)，烟碱或PNU预处理5天严重恶化⑶样TNBS结肠炎。截然相反，然而烟碱和PNU预防DSS诱导的UC样结肠炎，其中PNU稍微更有效。结肠的形态学和组织学检测进一步证实了 DAI的变化(数据未显示)。这些小鼠模型的临床前研究结果准确模拟了临床上被良好表征的吸烟对人类IBD的相反效果，即吸烟对CD有害却在UC中有益。这些数据确立:⑴烟碱对CD的发病机理的作用和对UC的治疗性益处；和(2)nAChRa7作为主要的开关控制烟碱(吸烟)的不同反应，或者为促炎(如在CD中)或者为抗炎(如在UC中)。激动剂GTS-21具有类似的预防DSS诱导的CD样结肠炎的发展的效果。实施例4nAChR α 7激动剂在慢性“UC样” DSS结肠炎的治疗中高度有效nAChR α 7激动剂(PNU和GTS-21)不仅有能力在急性结肠炎模型中预防DSS诱导的结肠炎(图5)，它们还可以在慢性结肠炎模型中有效逆转疾病进程(图6)，所述慢性结肠炎模型被认为与人类UC更类似。图6的图例中描述了慢性UC样结肠炎的诱导。如图6所示，显示了 PNU对急性和慢性结肠炎模型的DAI的影响。PNU处理基本上消除了两种模型中的炎症。实施例5nAChR α 7拮抗剂MLA对预防CD样TNBS结肠炎高度有效基于nAChR α 7在UC中下调并在⑶中上调的观察结果，不期望受到任何一种特定的理论束缚，假设nAChR α 7特异性拮抗剂会使nAChR α 7的功能失活，并因此对⑶有治疗性效果。因此，使用BALB/c小鼠检测了 nAChR α 7特异性拮抗剂MLA对⑶样TNBS结肠炎的效果。的确，如图7所示，发现对小鼠使用nAChRa 7特异性拮抗剂MLA预处理5天可以有效预防小鼠发展TNBS诱导的结肠炎(图7)。重要地，nAChRa 7激动剂PNU处理不仅对结肠炎的发展没有效果，而且恶化疾病。对nAChRa 7特异性较弱的激动剂烟碱对预防UC样DSS结肠炎有效，但对疾病发展也没有效果(图5)。这些结果模拟了吸烟在UC和⑶中的效果。合并图5和图6所示的数据，这些结果显示nAChRa 7特异性拮抗剂(MLA)对⑶有有效的治疗性益处，但nAChR a 7特异性激动剂(PNU和GTS)对UC有有效的治疗性效果。还表明了 MLA对CD样慢性 TNBS结肠炎(使用BALB/c小鼠)的高度治疗性效果(数据未显示)，其效力与PNU对UC样DSS结肠炎的效力相类似(图6)。实施例6nAChR a 7拮抗剂对慢性“CD样” TNBS结肠炎的治疗高度有效nAChRa 7拮抗剂(MLA)不仅有能力预防急性TNBS结肠炎(图7)，它们还可以有效逆转慢性TNBS结肠炎模型的疾病进程(图8)，其中慢性TNBS结肠炎模型被认为与人类CD更相似。慢性CD样结肠炎的诱导如前所述(Alex等人，2009 IBD, 15 (3)，341-352)。激动剂处理对疾病活动没有影响，然而拮抗剂处理基本上消除了两种模型中的炎症。小鼠看起来正常并与乙醇处理的对照小鼠是不可区分的。使用H&E染色进行的组织学分析(图9)进一步显示了 nAChRa 7特异性拮抗剂对⑶样结肠炎的高度有效的治疗性效果。还可以通过生物化学方法看出治疗性效果，因为对DSS结肠炎使用激动剂或对TNBS结肠炎使用拮抗剂处理，剧烈改变细胞因子图谱从疾病状态至正常健康状态(图13)。实施例7激动剂PNU和拮抗剂MLA在被诱导产生结肠炎的nAChRa 7敲除小鼠中没有治疗性效果，进一步阐明了所述药物对nAChRa 7受体是特异性的。尽管来自于细胞模型和小鼠结肠炎模型的本公开的数据清楚鉴定了 nAChRa 7作为CD响应于烟碱的发病机理的关键点，然而其他nAChR未被包括的可能性不能被完全排除，因为使用的nAChR a 7激动剂/拮抗剂的特异性可能不限于仅nAChR a 7。为了排除这个可能性，在nAChR a 7敲除小鼠(nAChR a 7-K0)中测试nAChR a 7激动剂和拮抗剂，在所述敲除小鼠中，如果所述剂是仅对nAChR α 7特异性的，则化学诱导结肠炎的发展不会被这些剂所影响。发现，nAChRa 7-Κ0小鼠对DSS或TNBS诱导的结肠炎更加敏感(图10)。更重要的是，激动剂(PNU)或拮抗剂(MLA)都不能在nAChRa 7-KO小鼠中作为有效的DSS或TNBS诱导的结肠炎的治疗剂(图10)。这些数据显示，这些药物的靶是对nAChRa 7特异性的。实施例8nAChRa 7激动剂对DSS结肠炎的抗炎效果被迷走神经切断术完全消除，提供在IBD中迷走神经在nAChRa 7介导的抗炎通路中发挥关键作用的第一个确定性的体内证据迷走神经的传出信号可以被大脑网络所控制，通过胆碱能抗炎通路抑制细胞因子的产生，其中胆碱能抗炎通路依赖于非神经细胞特别是巨噬细胞上的nAChRa 7。通过这条通路，迷走神经的刺激预防在多种炎性疾病中细胞因子释放的损害效应，炎性疾病包括败血症、内毒素血症、缺血、出血性休克、关节炎、和术后肠闭塞。尽管已显示经历了迷走神经切除术的小鼠对DSS和TNBS诱导的结肠炎更敏感，但是没有直接的实验性证据将迷走神经和nAChR a 7对IBD的调节特定地联系起来。由于之前所展示的数据清楚显示nAChR a 7对UC的抗炎效果和CD的发病机理的特异性参与，进一步确定这种nAChRa 7的特异性效果是否依赖于迷走神经。对麻醉下的C57B/6小鼠(7周龄)的膈下迷走神经的胃食管连接处的左迷走神经分支(大约5-10_)进行迷走神经切断术(图11A)。给予经历了迷走神经切断术的小鼠7天的时间恢复，然后以IP施用nAChR a 7激动剂，持续5天，之后进行DSS处理(7天)以诱导结肠炎。如图1lB所示，经历了迷走神经切断术的小鼠完全丧失了 nAChRa 7激动剂对结肠炎的保护作用。这些数据显示，nAChR a 7介导的对IBD的抗炎效果完全依赖于具有功能的迷走神经。实施例9激动剂PNU对治疗GPX 1/2 DKO介导的结肠炎高度有效由于之前的体内实验的大部分是在实验性结肠炎模型中进行的，检验了 nAChRa 7激动剂对治疗由基因缺陷介导的结肠炎有效的假设。两个谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)Gpxl和Gpx2缺陷的小鼠[Gpxl/2-双敲除(DKO)小鼠]在混合的C57BL/6和129Sl/SvJ (B6.129)基因背景下自发发展回结肠炎。Lee D.H., Esworthy R.S., Chu C, Pfeifer G.P., ChuF.F.,“Mutation accumulation in the intestine and colon of mice deficient in twointracellular glutathione peroxidases,，，Cancer Res.66 (20):9845-51(2006 年 10 月15日)。B6.129 Gpxl/2-DK0小鼠的亚组到6-8周发展回结肠炎症，并且到6-9个月发展回结肠肿瘤。然而对照(来自于混合的C57BL/6和129Sl/SvJ(B6.129)基因背景)不发展结肠炎的体征，发现GPX1/2DK0小鼠发展具有临床活动性评分大约为9的严重的结肠炎(图
12)。一旦结肠炎体征立即明显，施用nAChR α 7激动剂和nAChR α 7拮抗剂于GPX1/2DK0小鼠。在使用nAChRa 7激动剂处理的GPX1/2DK0小鼠中，疾病(结肠炎)的发展显著降低，表明nAChRa 7激动剂PNU对治疗由GPX1/2DK0介导的结肠炎高度有效(图12)。然而使用nAChR a 7拮抗剂或盐水处理的GPX1/2DK0小鼠未显示在结肠炎的评分上的显著性变化。这些数据表明nAChRa 7激动剂对结肠炎的化学和基因模型的治疗都高度有效。实施例10 PNU对小鼠的主要器官和行为没有可观察到的副作用.
在临床前研究使用的剂量下，PNU药物对小鼠展示无副作用。所有主要器官，包括心脏，肾脏，肝脏，小肠和大肠，脾脏，外观均看起来正常。强制游泳实验:老鼠被强迫在圆柱形容器内游泳 6 分钟，如 Porsolt R.D.，Bertin A.，Jalfre M.，“Behavioral despairin mice:a primary screening test for antidepressants，，，Arch Int PharmacodynTher 229:327-336(1977)所描述的，以评价药物是否改变小鼠的行为(活动作为读数)。ZomkowskiA.D., Santos A.R., Rodrigues A.L，“Evidence for the involvement of theopioid system in the agmatine antidepressant-like effect in the forced swimmingtest，”Neurosci Lett 381:279-283(2005)。如图14所示，没有观察到显著性的小鼠行为变化，无论经过或未经过药物处理。仅DSS诱导结肠炎的小鼠表现显著性的不动。使用激动剂PNU的处理预防结肠炎，并且因此完全逆转DSS小鼠的不动。这个结果显示，nAChRa 7激动剂对研究的小鼠的行为不具有副作用。这些nAChR a 7特异性药物的其他研究，包括毒性和药物动力学，正在研究进行中。综上所述，本公开的化合物对⑶和UC提供了单个治疗靶，nAChRa 7:nAChRa 7激动剂(例如PNU和GTS-21)是对UC高度有效的治疗性药物，而nAChRa 7拮抗剂(例如MLA)对CD具有显著性的治疗潜力。参考文献在本说明书中提到的所有出版物、专利申请、专利、和其他参考文献是对本公开主题所属的领域的技术人员的 水平的指示。所有出版物、专利申请、专利、和其他参考文献均以引用并入本文，与每一个单独的出版物、专利申请、专利、和其他参考文献被具体地和单独地指出以引用而并入一样。要理解，尽管本文提到大量专利申请、专利、和其他参考文献，但这种引用不构成对这些文件中的任何一个形成本领域常见的普通知识的一部分的承认。Xavier RJ, Podolsky DK.Unravelling the pathogenesis of inflammatorybowel disease.Nature 2007;448:427-434.
Loftus EV, Jr.Clinical epidemiology of inflammatory bowel disease:Incidence，prevalence, and environmental influences.Gastroenterology 2004 ； 126:1504-1517.
Shanahan F.Review article:colitis_associated cancer—time for newstrategies 1.Aliment Pharmacol Ther 2003 ; 18 Suppl 2:6-9.
Campbell BJ, Yu LG, Rhodes JM.Altered glycosylation in inflammatorybowel disease:a possible role in cancer development.Glycoconj J 2001 ；18:851-858.
Birrenbach T，Bocker U.1nflammatory bowel disease and smoking:a reviewof epidemiology,pathophysiology,and therapeutic implications.1nflamm Bowel Dis2004 ；10:848-859.
Rubin DT，Hanauer SB.Smoking and inflammatory bowel disease.Eur JGastroenterol Hepatol 2000 ； 12:855-862.
Thomas GA，Rhodes J，Ingram JR.Mechanisms of disease:nicotine—a reviewof its actions in the context of gastrointestinal disease.Nat Clin PractGastroenterol Hepatol 2005 ；2:536-544.
Ingram JR，Rhodes JiEvans BKiThomas GA.Preliminary observations of oralnicotine therapy for inflammatory bowel disease:an open—label phase 1-1I studyof tolerance.1nflamm Bowel Dis 2005 ；11:1092-1096.
Gaimarri AiMoretti M,Riganti L,Zanardi A,Clementi FiGotti C.Regulationof neuronal nicotinic receptor traffic and expression.Brain Res Rev 2007 ；55:134-143.
Gallowitsch-Puerta M，Tracey KJ.1mmunologic role of the cholinergicantiinflammatory pathway and the nicotinic acetylcholine alpha 7 receptor.AnnNY Acad Sci 2005 ；1062:209-219.
Tracey KJ.The inflammatory reflex.Nature 2002 ；420:853-859.
Wang H，Yu M，Ochani M，Amelia CA,Tanovic M,Susarla S，Li JH, Wang H，YangHiUlloa LiAl-Abed Y,Czura CJ,Tracey KJ.Nicotinic acetylcholine receptor alpha7subunit is an essential regulator of inflammation.Nature 2003 ；421:384-388.
de Jonge WJ, van der Zanden EP, The F0, Bijlsma MF, van Westerloo DJ,Bennink RJ, Berthoud HR， Uematsu S， Akira S， van den Wijngaard RM, BoeckxstaensGE.Stimulation of the vagus nerve attenuates macrophage activation byactivating the Jak2_STAT3 signaling pathway.Nat Immunol 2005 ；6:844-851.
Floto RA，Smith KG.The vagus nerve, macrophages，and nicotine.Lancet2003 ；361:1069-1070.
Ghia JE, Blennerhassett P，Kumar-Ondiveeran H，Verdu EF, Collins SM.Thevagus nerve:a tonic inhibitory influence associated with inflammatory boweldisease in a murine model.Gastroenterology 2006 ；131:1122-1130.
Mazurov A，Hauser T，Miller CH.Selective alpha7 nicotinic acetylcholinereceptor ligands.Curr Med Chem 2006 ；13:1567-1584.
Alex, P，Zacho, N.，Nguyen, T.，Gonzales, L，Chen, T.E.，Conklin，L S.，Centola，M，and Li, X.Distinct cytokine patterns identified from multiplex profiles ofexperimental colitis.1nflammatory Bowel Disease.2009 ; 15 (3)，341-352Alex P,Szodoray P,Knowlton N,Dozmorov IM,Turner M，Frank MB,Arthur RE，Willis L，Flinn D，Hynd RF，Carson C，Kumar A, El-Gabalawy HS，Centola M.Multiplexserum cytokine monitoring as a prognostic tool in rheumatoid arthritis.Clin ExpRheumatol 2007 ；25:584-592.
Alex PM，Frank B，Cadwell C，Dozmorov I，Miner P，Brant S，Centola M，Li X.CXCL8，CCL3，CCL4，IL-1O AND IL-17 are primary mediators of the earlydifferential immune response in active patients with inflammatory boweldisease.15th United European Gastroenterology Week" UEGW 2007" Paris，France，October 27-31，2 007 2007.
Nakayama T，Hieshima K，Nagakubo D，Sato E，Nakayama M，Kawa K，Yoshie0.Selective induction of Th2_attracting chemokines CCLI7 and CCL22 in humanB cells by latent membrane protein I of Epstein-Barr virus.J Virol 2004 ；78:1665-1674.
Burdin N， Peronne C， Banchereau J， Rousset F.Epstein-Barr virustransformation induces B lymphocytes to produce human interleukin 10.J Exp Med1993 ；177:295-304.
Vockerodt M， Pinkert D， Smola-Hess S， Michels A， Ransohoff RM, Tesch H，Kube D.The Epstein-Barr virus oncoprotein latent membrane protein I inducesexpression of the chemokine IP—10:importance of mRNA half-life regulation.1ntJ Cancer 2005 ；114:598-605.
Kuhn RiLohler J,Rennick D,Rajewsky KiMuller W.1nterleukin-lO-deficientmice develop chronic enterocolitis 2.Cell 1993 ；75:263-274.
Ribbons KA, Thompson JH, Liu X，Pennline K，Clark DA, MillerMJ.Antiinflammatory properties of interleukin-10 administration inhapten-1nduced colitis.Eur J Pharmacol 1997 ；323:245-254.
Lee DH, Esworthy RS, Chu C，Pfeifer GP, Chu F F.Mutation accumulation inthe intestine and colon of mice deficient in two intracellular glutathioneperoxidases.Cancer Res.2006 Oct 15 ；66 (20):9845-51.
Porsolt RD，Bertin A，Jalfire M.Behavioral despair in mice:a primaryscreening test for antidepressants.Arch Int Pharmacodyn Ther 1977 ；229:327-336.
Zomkowski AD，Santos AR，Rodrigues AL.Evidence for the involvement of theopioid system in the agmatine antidepressant-like effect in the forced swimmingtest.Neurosci Lett 2005 ；381:279-283.
尽管出于清楚理解的目的通过阐述和实例的方法以一些细节描述了前述的主题，本领域技术人员要理解某些改变和修改可以在所附的权利要求的范围内被实践。
权利要求
1.一种用于给有相应治疗需要的受治疗者治疗炎性肠病(IBD)的方法，所述方法包括以有效调节所述受治疗者的至少一种细胞中的nAChRa 7活性的量对所述受治疗者施用烟碱型乙酰胆碱受体a 7 (nAChR α 7)拮抗剂，借此所述至少一种细胞中的nAChR α 7活性的调节治疗所述受治疗者的IBD。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述IBD包括克罗恩病(⑶)。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述nAChRa7拮抗剂选自由以下组成的组:α -环蛇毒素、甲基牛扁亭(MLA)、nAChRa 7特异性抗体、nAChR a 7特异性抑制性RNA、和其药学上可接受的盐、或组合。
4.一种用于给有相应治疗需要的受治疗者治疗炎性肠病(IBD)的方法，所述方法包括以有效调节所述受治疗者的至少一种细胞中的nAChRa 7活性的量对所述受治疗者施用nAChR a 7激动剂,借此所述至少一种细胞中的nAChR a 7活性的调节治疗所述受治疗者的IBD。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述IBD包括溃疡性结肠炎(UC)。
6.根据权利要求4所述的方法，其中所述nAChRa7激动剂选自由以下组成的组:PNU282987, MEM3454, P H-399733，AR-R1779, SSR180711A, ABT-418，甲碘可卡因，3-2，4-二甲氧基苯亚甲基新烟碱(GTS-21或DMXB-A)，3-(4-羟基苯亚甲基)假木贼因，3-(4-甲氧基苯亚甲基)假木贼因，3-(4-氨基苯亚甲基)假木贼因，3-(4-羟基-2-甲氧基苯亚甲基)假木贼因，3-(4-甲氧基-2-羟基苯亚甲基)假木贼因，反式-3-亚肉桂基假木贼因，反式-3-(2-甲氧基-亚肉桂基)假木贼因，和反式-3-(4-甲氧基亚肉桂基)假木贼因，N-[(3R)-1-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-羟基苯氧基)苯甲酰胺，N_[(3R)_1_氮杂双环[2.2.2]辛-3-基]-4-(4_乙酰氨基苯氧基)苯甲酰胺，N-[(3R)_1-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基]-4-(苯基硫烷基)苯甲酰胺，和N-[(3R)-1-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基]-4-(3-氯苯磺酰基)苯甲酰胺，(1-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基)氨基甲酸1- (2-氟苯基)-乙酯，nAChR a 7特异性抗体，nAChR a 7特异性抑制性RNA，和药学上可接受的盐，或其组合。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述治疗包括预防IBD在所述受治疗者中的发展或预防IBD在所述受治疗者中的进展。
8.一种调节至少一种免疫细胞类型中的nAChR a 7活性的方法，所述方法包括使所述至少一种免疫细胞类型与以有效调节所述至少一种免疫细胞类型中的nAChRa 7活性的量的nAChR a 7拮抗剂或nAChR a 7激动剂接触。
9.一种减少在具有慢性胃肠道炎症的受治疗者中发展结直肠癌的风险的方法，所述方法包括以有效调节一种或多种胃肠道免疫细胞中的nAChR a 7活性的量对受治疗者施用nAChR a 7拮抗剂或nAChR a 7激动剂，借此调节nAChR a 7活性改变在所述一种或多种胃肠道免疫细胞中的炎症反应，因此减少发展结直肠癌的风险。
10.一种鉴定在表达nAChR a 7的至少一种细胞中调节nAChR a 7活性的化合物或剂的方法，所述方法包括: (i)使所述表达nAChR a 7的至少一种细胞与候选化合物或剂接触； ( )确定与所述候选化合物或剂接触的所述表达nAChRa 7的至少一种细胞中的nAChR a 7 活性；(iii)确定没有与所述候选化合物或剂接触的表达nAChRa7的至少一种对照细胞中的nAChRa7活性；和 (iv)对比与所述候选化合物或剂接触的所述至少一种细胞中的nAChRa7活性和所述至少一种对照细胞中的nAChRa 7活性； 其中在与所述候选化合物或剂接触的所述至少一种细胞中的nAChRa 7活性与所述至少一种对照细胞中的nAChR a 7活性的差异鉴定在至少一种细胞中调节nAChR a 7活性的候选化合物或剂。
11.一种预测对受害于由nAChRa 7的基因或蛋白表达的异常水平导致的IBD的受治疗者施用nAChRa 7表达调节剂的治疗效果的方法，其中所述nAChRa 7表达调节剂是nAChR a 7拮抗剂或nAChR a 7激动剂，所述方法包括: (a)测量在施用nAChRa7调节剂之前所述受治疗者的组织或细胞中nAChRa 7的基因或蛋白表达水平； (b)以有效改变所述受治疗者的组织或细胞中nAChRa7基因或蛋白表达水平的量对所述受治疗者施用nAChRa 7调节剂； (C)测量来自于施用所述nAChR a 7调节剂之后的受治疗者的组织或细胞中的nAChRa 7的基因或蛋白表达水平；和 (d)确定施用所述nAChRa 7调节剂之后的组织或细胞中nAChRa 7的基因或蛋白表达水平相比较于施用所述nAChRa 7调节剂之前的组织或细胞中基因或蛋白表达水平的改变； 其中在所述组织或者细胞中的nAChRa 7基因或蛋白表达水平的改变预测所述nAChRa 7表达调节剂对于受害于IBD的受治疗者的治疗效果。`
12.根据权利要求11所述的方法，其中nAChRa 7在受害于IBD的受治疗者中被过度表达至异常水平，并且其中基因或蛋白表达水平的降低预测对施用所述nAChRa 7调节剂的正反应。
13.根据权利要求11所述的方法，其中nAChRa7在受害于IBD的受治疗者中被下调至异常表达水平，并且其中基因或蛋白表达水平的增加预测对施用所述nAChRa 7调节剂的正反应。
14.根据权利要求11所述的方法，其中基因表达水平的改变是使用一种或多种方法确定的，所述方法选自由以下组成的组:RNA印迹法，RT-PCR,实时RT-PCR，原位杂交，和微阵列。
15.根据权利要求11所述的方法，其中蛋白表达水平的改变是使用一种或者多种方法确定的，所述方法选自以下组成的组:蛋白质印迹法，ELISA，质谱，免疫组织化学，和蛋白质阵列。
16.一种药物组合物，包括有效调节nAChR a 7的功能以治疗或预防有相应治疗需要的受治疗者的炎性肠病(IBD)的量的烟碱型乙酰胆碱受体a 7 (nAChR a 7)的特异性激动剂或特异性拮抗剂。
17.根据权利要求16所述的组合物，还包括药学上可接受的载体。
全文摘要
公开了nAChRα7的激动剂和拮抗剂以及它们作为用以治疗和管理炎性肠病(IBD)例如克罗恩病(Crohn’s disease，CD)和溃疡性结肠炎(UC)的治疗剂的用途。公开了nAChRα7的激动剂和拮抗剂以及它们作为用以治疗和管理炎性肠病(IBD)例如克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)的治疗剂的用途。
文档编号A61P1/04GK103200954SQ201180039320
公开日2013年7月10日 申请日期2011年6月24日 优先权日2010年6月25日
发明者旭航·李, 菲利普·亚历克斯, 迈克尔·B·森托拉 申请人:约翰霍普金斯大学, 俄克拉荷马州医学研究基金会