抗体制剂的制作方法

专利名称：抗体制剂的制作方法
抗体制剂相关申请本申请要求2010年7月2日提交的美国临时申请61/361，209的优先权。上述申请的公开内容通过引用全文纳入本文。序列表本申请包含通过EFS-Web以ASCII格式同时提交的序列表，并通过引用全文纳入本文。2011年6月22日创建的所述ASCII拷贝命名为102728W01.txt，大小为3，275字节。
背景技术：
抗体制剂中不需要物质的不稳定性和/或存在可以引起问题，包含简单的不便性如需要以特定方式存储或处理所述制剂，以及安全性和功效问题如由增加的毒性或免疫原性引起的那些。一些抗体观察到的一个特性是所述抗体分子可逆性自体缔合的趋势，也称为可逆自体缔合(RSA)。在给定制剂中抗体的RSA可以受抗体浓度、温度和/或pH的影响。所述制剂中抗体的RSA趋势能对抗体制剂的物理属性有显著影响，潜在地影响长期稳定性、可制造性、使用者顺应性和潜在的产物安全性和功效。例如，当维持在或低于约2° C-8° C的存储温度时，一些抗体制剂中抗体RSA趋势明显。尽管室温延长孵育(如长于I小时)可以完全或基本解决这种RSA趋势，对这种延长孵育的需求可能会负面影响制剂的有效性和持续使用。需要有助于鉴定合适制剂条件以使稳定性最大化和RSA趋势最小化的方法。例如，当存储在广泛条件(如温度、抗体浓度和pH)下时，需要使治疗抗体稳定而RSA最小的方法和制剂
发明内容
`本公开提供了降低制剂中抗体或抗体片段的可逆自体缔合的制剂方法。同样，本公开提供了能用于鉴定制备抗体或抗体片段的改善制剂的方法。例如这种制剂能在临床或实验室设置中治疗或诊断性应用。本公开还提供了特定制剂，所述特定制剂包含特异结合H)GFR-a和抑制表达PDGFR-a的细胞生长的抗体或抗体片段。示例性制剂有使所述制剂特别适于药学应用的优势RSA和稳定特性。在某些实施方式中，所述制剂是液体制剂，包含特异结合TOGFR-a和抑制表达I3DGFR-a的细胞生长的抗体或抗体片段。在一个实施方式中，所述液体制剂不适合冻干。在另一个实施方式中，所述制剂适合冻干。在某些实施方式中，所述制剂包含缓冲液。在其他实施方式中，所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在其他实施方式中，所述制剂包含乙酸钠缓冲液。在另一些实施方式中，替代或除了乙酸钠缓冲液外，所述制剂包含乙酸盐缓冲液。在某些实施方式中，所述制剂中所用缓冲液的这些变化可应用于本文所述公开的任何方面和实施方式。在另一方面，本公开提供了某种制剂，所述制剂包含:a)水性运载体；b)lmg/ml-100mg/ml特异结合I3DGFR- α和抑制表达TOGFR- α的细胞生长的抗体或抗体片段;c) 4%-20%(重量/体积)蔗糖；d) 0.01%-0.1%(重量/体积)聚山梨酯80 (PS80);和e)乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的PH是pH4.0-pH6.0。在一些方面，本发明提供了某种制剂，所述制剂由下列组成:a)水性运载体；b) lmg/ml-100mg/ml特异结合I3DGFR- α和抑制表达TOGFR- α的细胞生长的抗体或抗体片段；c) 4%-20%(重量/体积)蔗糖；d) 0.01%-0.1%(重量/体积)聚山梨酯80 (PS80);和e)乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0。在任一上述某些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含全长IgG单克隆抗体。在一些实施方式中，所述抗体或抗体片段的存在浓度是20mg/ml-50mg/ml。在某些实施方式中，所述抗体或抗体片段的存在浓度是20mg/ml。在其他实施方式中，所述抗体或抗体片段的存在浓度是50mg/ml。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含含氨基酸序列SEQ ID NO:1的重链多肽。在一些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含含氨基酸序列SEQ ID NO: 2的轻链多肽。在某些实施方式中，所述抗体或抗体片段与重链多肽含SEQID NO:1氨基酸序列且轻链多肽含SEQ ID NO: 2氨基酸序列的抗体结合相同的表位。在任一 上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含:有氨基酸序列SEQ ID NO: 3的VH CDRl;有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2;有氨基酸序列SEQ ID NO: 5的VH CDR3 ;有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl;有氨基酸序列SEQ IDNO:7的VL CDR2;和有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段与包含下列结构域的抗体结合相同的表位:有氨基酸序列SEQ ID NO: 3的VH CDRl;有氨基酸序列SEQID NO:4的VH CDR2;有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3 ;有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl;有氨基酸序列SEQ ID NO: 7的VL CDR2;和有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VLCDR3。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂包含6%(w/v)蔗糖或10%(w/V)蔗糖。在某些实施方式中，所述制剂包含0.05%(w/v)PS80。在一些实施方式中，所述制剂包含50mM乙酸钠缓冲液。在其他实施方式中，所述制剂的pH是5.5。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，据分析超速离心(AUC)测定，所述制剂中的所述抗体或抗体片段在2-8° C和23-27° C有基本相似的可逆自体缔合(RSA)特性。在某些实施方式中，高效大小排阻色谱(HPSEC)和动态光散射(DLS)不能检出所述制剂中所述抗体或抗体片段的RSA。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂中大于95%的所述抗体或抗体片段是单体形式，并且当在10mg/ml、2-8° C时HPSEC不能检出所述抗体或抗体片段的RSA。在一些实施方式中，据动态光散射(DLS)测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在5° C的流体力学半径与25° C的没有显著区别。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂适合静脉内给予。在某些实施方式中，所述水性运载体是水。在一些实施方式中，所述制剂是无热原的。在其他实施方式中，所述制剂还包含防腐剂以延长保存期限。在一些实施方式中，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述制剂在2-8° C稳定至少2年。在一些实施方式中，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述制剂的纯度在至少两年内每年下降小于0.5%。
在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂基本没有组氨酸、任何其它表面活性剂、任何其它糖或多元醇和/或任何其它盐。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂适合冻干。在其他实施方式中，所述制剂不适合冻干。在一些方面，本公开提供了基本由以下组成的制剂:a)无菌水；b)20mg/ml特异结合TOGFR- α和抑制表达TOGFR- α的细胞生长的抗体或抗体片段；c) 10% (重量/体积)蔗糖；d)0.05%(重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)50mM乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH 是 pH5.5。在另一方面，本发明提供了基本由以下组成的制剂:a)无菌水；b)50mg/ml特异结合TOGFR- α和抑制表达TOGFR- α的细胞生长的抗体或抗体片段；c) 10% (重量/体积)蔗糖；d)0.05%(重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)50mM乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH 是 pH5.5。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:1的重链多肽。在一些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含含有氨基酸序列SEQ ID N0:2的轻链多肽。在某些实施方式中，所述抗体或抗体片段与重链多肽含SEQ ID NO:1氨基酸序列且轻链多肽含SEQ ID NO: 2氨基酸序列的抗体结合相同的表位。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段包含:有氨基酸序列SEQ ID NO: 3的VH CDRl;有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2;有氨基酸序列SEQ ID NO: 5的VH CDR3 ;有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl;有氨基酸序列SEQ IDNO:7的VL CDR2;和有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。

在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段与包含下列结构域的抗体结合相同的表位:有氨基酸序列SEQ ID NO: 3的VH CDRl;有氨基酸序列SEQID N0:4的VH CDR2;有氨基酸序列SEQ ID N0:5的VH CDR3 ;有氨基酸序列SEQ ID N0:6的VL CDRl;有氨基酸序列的SEQ ID N0:7VL CDR2;和有氨基酸序列SEQ ID NO: 8的VL CDR3。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，据AUC测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在2-8° C的不可逆自体缔合(非RSA)特性和23-27° C的基本相似。在一些实施方式中，当在10mg/ml、2-8° C时HPSEC不能检出所述制剂中所述抗体或抗体片段的RSA。在其他实施方式中，所述制剂中大于95%的所述抗体或抗体片段在2-8° C是单体形式。在某些实施方式中，据动态光散射(DLS)测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在5° C的流体力学半径和25° C的没有显著区别。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂适合静脉内给予。在一些实施方式中，所述水是无菌水。在某些实施方式中，所述制剂是无热原的。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，据根据ICHQlA指南的长期稳定性研究测定，所述制剂在约2-8° C稳定至少2年。所述ICHQlA指南是工业标准(FederalRegister(联邦公报)，68卷，第225号，2003年11月21日星期五;第65717-18页)。在某些实施方式中，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述制剂的纯度在至少两年内每年下降小于0.5%。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述制剂不适合冻干。在一些实施方式中，所述制剂适合冻干。
在另一方面，本公开提供了一种制剂，所述制剂包含:a)水性运载体；b)lmg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段；c) 4%-20% (重量/体积)蔗糖；d) 0.01%-0.1% (重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中制剂中所述抗体或抗体片段在约2-8° C测定的非RSA趋势与约23-27° C测定的基本相同。在其他方面，本公开提供了一种制剂，所述制剂包含:a)水性运载体；b)lmg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段；c) 4%-20% (重量/体积)蔗糖；d) 0.01%-0.1% (重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中在2-8° C时所述制剂中大于95%的所述抗体或抗体片段是非自体缔合、单体形式。在某些方面，本公开提供了一种制剂，所述制剂由下列组成:a)水性运载体;b) lmg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段;c) 4%-20% (重量/体积)鹿糖;d) 0.01%-0.1% (重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中所述制剂中所述抗体或抗体片段在约2-8° C测定的非RSA趋势与约23-27° C测定的基本相同。在一些方面，本发明提供了一种制剂，所述制剂由下列组成:a)水性运载体;b) lmg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段;c) 4%-20% (重量/体积)鹿糖;d) 0.01%-0.1% (重量/体积)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸钠缓冲液，其中所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中在2-8° C时所述制剂中大于95%的所述抗体或抗体片段是非自体缔合、单体形式。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，本公开提供了乙酸钠缓冲液被不同的乙酸盐缓冲液代替或取代的制剂。例如，在某些实施方式中，本公开提供了包含不同乙酸盐缓冲液替代乙酸钠的制剂。当使用不同的乙酸盐缓冲液时，所述缓冲液可以与乙酸钠缓冲液所用类似的方式使用(如在或跨相同浓度范围)。在其他实施方式中，所述制剂包含多于一种乙酸盐缓冲液。在其他方面，本公开提供了消`除和降低制剂中抗体的可逆自体缔合(RSA)的方法，所述方法包含:提供包含抗体或抗体片段的起始制剂，其中，所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA可用HPSEC测量，i)在约2-8° C和/或ii)在大于4mg/ml浓度，和所述起始制剂中抗体或抗体片段包含高分子量形式；向所述起始制剂中加入蔗糖以提供有约4%-约20%(重量/体积)蔗糖的改变制剂，其中当在约2-8° C以给定抗体浓度比较时，所改变制剂中抗体或抗体片段的RSA相对于所述起始制剂抗体或抗体片段的RSA消除或降低。在某些实施方式中，所述方法还包含:测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径，并将其与所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径进行比较，其中当在约2-8° C以给定抗体浓度比较时，所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径相对于所述起始制剂的流体力学半径消除或降低。在一个实施方式中，所述改变的制剂的流体力学半径用DLS测定。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述方法还包含:使用HPSEC测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的RSA趋势，并将其与所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA趋势进行比较，其中当在约2-8° C以给定抗体浓度比较时，所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的RSA趋势相对于所述起始制剂的RSA趋势消除或降低。在某些实施方式中，所述方法还包含在约2-8° C和约23-27° C测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的RSA趋势，和确证所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段在2-8° C测定的非RSA趋势和23-27° C测定的基本相似。在一个实施方式中，通过AUC分析在约2_8° C和约23-27° C的RSA趋势。在一些实施方式中，HPSEC不能检出所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的RSA。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段在所述起始制剂和改变制剂中的存在浓度是约lmg/ml -约100mg/ml。在一些实施方式中，所述抗体或抗体片段在所述起始制剂和改变制剂中的存在浓度是约20mg/ml或约50mg/ml。在其他实施方式中，所述抗体或抗体片段在所改变制剂中的存在浓度是约20mg/ml或约50mg/ml。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，向所述起始制剂中加入蔗糖包含加入蔗糖以使蔗糖终浓度达到所改变制剂中约10%(w/v)。在其他方面，本公开提供了消除或降低制剂中抗体可逆自体缔合(RSA)的方法，所述方法包含:a)提供包含抗体或抗体片段的起始制剂，其中以浓度10mg/ml、在约2-8° C时用HPSEC可检出所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA;b)使用一种或多种试验测定所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的生物物理属性；c)将所述起始制剂的蔗糖含量调节至约4%-约20%(w/v)的终浓度以生成改变的制剂；和d)使用一种或多种试验测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的生物物理属性；其中当在约2-8° C以给定抗体浓度比较时，所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的RSA相对于所述起始制剂的RSA消除。在一些实施方式中，步骤(C)进行多于一次。在某些实施方式中，步骤(C)和(d)进行多于一次。在其他实施方式中，步骤(b)和(d)包含评价相同的生物物理属性。在示例性实施方式中，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述生物物理属性是指示RSA趋势的特征色谱峰。在一些实施方式中，所述特征色谱峰是所述峰有峰肩。在一些实施方式中，所述生物物理属性在2个不同温度评价。在任一上述方面和实施方式的某些实施方式中，据动态光散射测定,所述生物物理属性是所述起始制剂和/或所述改变的制剂中抗体或抗体片段的流体力学半径。在任一上述方面和实施方式中某些实施方式中，所述生物物理属性是流体力学半径，并且所述方法包含测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径，并将其与所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径进行比较，其中当在约2-8° C以给定抗体浓度比较时，所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径相对于所述起始制剂的流体力学半径降低。在示例性实施方式中，所述改变的制剂的流体力学半径用DLS测定。 在上述方面或实施方式中任一项的某些实施方式中，所述抗体或抗体片段以约lmg/ml -约100mg/ml浓度存在于所述起始制剂和所改变制剂。在某些实施方式中,所述抗体或抗体片段以约20mg/ml或约50mg/ml浓度存在于所述起始制剂和改变的制剂。在一些实施方式中，所述抗体或抗体片段以约20mg/ml或约50mg/ml浓度存在于所改变的制剂。在上述方面和实施方式中任一项的某些实施方式中，调整蔗糖含量包含加入蔗糖以达到所改变制剂中蔗糖终浓度约10%(w/v)。在其他方面，本公开提供了根据任一上述方面或实施方式的方法生成的含有抗体或抗体片段的制剂。
在其他方面，本公开提供了治疗需要治疗的患者肿瘤病症的方法，所述方法包含给予所述患者有效量的任一上述方面或实施方式的制剂。在某些实施方式中，所述制剂作为治疗方案的一部分与一种或多种其他药剂或治疗方式联合施用。在示例性实施方式中，所述肿瘤病症是癌症。在另一方面，本公开提供了生成有降低RSA的抗体或抗体片段的制剂的方法，所述方法包含:生成抗体或抗体片段；和将所述抗体或抗体片段配制为包含以下组分的制剂:水性运载体；lmg/ml-100mg/ml所述抗体或抗体片段；4%_20%(重量/体积)蔗糖；0.01%-0.1%(重量/体积)表面活性剂；和乙酸盐缓冲液，其中所述制剂的pH是PH4.0-pH6.0;其中所述制剂中使用的蔗糖量通过以下选择:提供包含抗体或抗体片段的起始制剂，其中在约2-8° C用HPSEC可检出所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA，并且所述起始制剂中的抗体或抗体片段由高分子量形式组成；加入蔗糖到所述起始制剂中以提供有4%-20%(重量/体积)蔗糖的改变制剂，其中在约2-8° C以给定抗体浓度比较时，所述改变的制剂中抗体或抗体片段的RSA相对于所述起始制剂下降。在其他方面，本公开提供了生成有降低RSA的抗体或抗体片段的制剂的方法，所述方法包含:生成抗体或抗体片段；和将所述抗体或抗体片段配制为包含以下组分的制剂:水性运载体；lmg/ml-100mg/ml所述抗体或抗体片段；4%_20%(重量/体积)蔗糖；0.01%-0.1%(重量/体积)表面活性剂；和乙酸盐缓冲液，其中所述制剂的pH是PH4.0-pH6.0;其中所述制剂中使用的蔗糖量通过以下选择:a)提供包含抗体或抗体片段的起始制剂，其中以10mg/ml、在约2-8° C下时用HPSEC可检出所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA;b)使用一种或多种试验测定所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的生物物理属性；c)调整所述起始制剂的蔗糖含量实现约4%-约40%(w/v)终浓度以生成改变的制剂；和d)使用一种或多种试验测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的生物物理属性，其中当在约2-8° C以给定抗体浓度下比较时，所改变制剂中所述抗体或抗体片段的RSA相对于所述起始制剂的RSA下降。在任一上述某些实施方式中，本公开提供了制剂中有缓冲液的制剂和方法。在某些实施方式中，所述缓冲液是乙酸盐缓冲液。在某些实施方式中，所述乙酸盐缓冲液是乙酸钠缓冲液。在其他实施方式中，所述乙酸盐缓冲液不是乙酸钠缓冲液。在其他实施方式中，乙酸钠缓冲液用不同的乙酸盐缓冲液代替或取代。例如，在某些实施方式中，本公开提供了包含不同乙酸盐缓冲液替代乙酸钠的制剂。当使用不同的乙酸盐缓冲液时，所述缓冲液可以与乙酸钠缓冲液所用类似的方式使用(如在或跨相同浓度范围)。在其他实施方式中，所述制剂包含多于一种乙酸盐缓冲液。本公开考虑了任一上述方面和实施方式的所有组合以及详细描述和实施例中所示任一实施方式的组合。另外，当涉及〃任一上述方面或实施方式〃时，也应该理解包含〃任一上述或下列方面或实施方式〃。附表和图的简要说明

图1。MabA显示了不含蔗糖的乙酸盐/盐制剂中的RSA趋势。此起始、包含乙酸盐/盐制剂中所述抗体的RSA趋势由HPSEC和沉降速率分析超速离心(AUC)测定。图1A，下图(2-8°C)，表明在存储温度条件下出现指示RSA的峰的前沿峰肩。在2-8° C下单体峰中的竖直线显示自体缔合。图1B显示了这种不含蔗糖制剂中的MabA于23-27° C沉淀超过离散范围，在2-8° C观察到显著变宽和更高的沉降系数，指示RSA。图1显示了起始不含蔗糖制剂中的MabA在2-8° C有用HPSEC和AUC可测量的RSA趋势。所述RSA主要作为二聚化和更高级寡聚化发生。另外，图1显示了此起始制剂中所述抗体的RSA趋势是温度依赖性的(如由上述峰肩证明的RSA趋势在室温相对于约2-8 ° C存储温度分解成单体)。图2。含有蔗糖制剂中MabA的RSA预防，据HPSEC和AUC测定。在含有蔗糖制剂中，据HPSEC (图2A)在2-8 ° C以20mg/ml和50mg/ml抗体浓度测定，没有检出RSA。另外，如AUC所显示，抗体沉淀中没有观察到温度依赖性(叠加2-8° C和23-27° C的AUC沉淀概况；见图2B)。因此，与不含蔗糖的制剂相比，MabA的RSA在以含蔗糖的制剂提供时被防止。例如，在约2-8° C通过HPSEC不再检出和测量到RSA。图3。MabA上α -氨基萘三磺酸(ANS)和疏水性表面之间的相互作用随着蔗糖含量增加而减少。0%和12%蔗糖含量的比较显示了含有蔗糖制剂中ANS结合的显著下降，提示蔗糖含量降低抗体的表面疏水性，造成RSA降低。图4。含蔗糖和不含蔗糖制剂中多个温度下MabA流体力学半径的测量。图4Α显示了 5° C、25° C和37° C下含乙酸盐/盐制剂中MabA的流体力学半径。没有蔗糖时，所述抗体流体力学半径是温度依赖性，指示了低温下RSA趋势。然而，出现蔗糖(图4B)时，没有观察到温度依赖性，指示RSA趋势的消除。图5。含蔗糖制剂中MabA的增加热稳定性。使用差示扫描量热法(DSC)，在含蔗糖和不含蔗糖的制剂中评价MabA的热稳定性。所述抗体显示了含蔗糖制剂中显著更大的热稳定性。这显示了含蔗糖制剂诱导有利构象变化，产生相对于所述起始制剂降低的RSA和增加的热稳定性。图6。第二维里系数的测量。加入蔗糖使所述第二维里系数从吸引向排斥净交互作用移动。这个结果指示了蔗糖对分子间相互作用的显著下降/防止和自体缔合倾向起作用。`
具体实施例方式⑴综述抗体的可逆自体缔合可以在某些制剂条件下发生。然而，通常，仅作为蛋白聚集更大问题的一部分，制剂中发生抗体可逆自体缔合。例如，可逆自体缔合可以在显著非可逆二聚化、三聚化和其他更高级寡聚化发生的情况和/或条件下观察到。显著非可逆聚集的出现通常使制剂不适合治疗应用。此外或替代地，仅在基本低于制剂存储或使用温度的极低温度下发生可检测的可逆自体缔合。在这个情况下，尽管可逆自体缔合在极低温度的条件下可检测，存储温度和室温下可检测自体缔合的消失意味者RSA可能基本不影响制剂的诊断、研究或治疗效用。在上面任一条件下，可以没有调节所述制剂以降低RSA的特定需求。然而，在一些情况下，在存储温度(约2-8° C，如5° C)发生制剂中可检测的可逆自体缔合。替代地或此夕卜，甚至在相对低抗体浓度(如约4-8mg/ml)下仍发生制剂中可检测的抗体可逆自体缔合。这是显著的，因为期望可逆自体缔合随着抗体浓度的降低而降低，并且在低于通常存储或使用条件的剂量下，出现可检出RSA提示了 RSA对标准治疗或使用条件下所述制剂中的抗体是重要事件。本公开提供了这些情况下防止或降低RSA的方法和与RSA有关的挑战。
本公开部分是基于以下发现:如本文所述蔗糖降低或防止制剂中抗TOGFR-CI抗体的RSA。因此，在某些方面，本公开提供了减少制剂中抗体或抗体片段的RSA趋势的方法。本文所述制剂方法的可观察优势是制备制剂的能力，当以给定浓度如至少约10mg/ml评价和与存储温度及室温基本相同时，HPSEC不能检出制剂中抗体的RSA趋势。在某些实施方式中，所述方法产生制剂的制备，其中在约2-8° C的存储温度下，HPSEC不能检测制剂中抗体的RSA趋势。注意到RSA趋势可以在任意一些浓度和温度下评价。然而，在过低抗体条件下评价RSA趋势可能错误低估RSA的出现。因此，在得出制剂中抗体RSA趋势消除或RSA趋势显著提高的结论前，在靶标制剂浓度或至少约10mg/ml浓度和2-8° C下进行HPSEC和/或AUC评估。在这种浓度和温度范围下不能由HPSEC和/或AUC检出的RSA与就制剂中抗体而言RSA消除的结论一致。本公开方法和组合物的显著优势之一是特别在相关浓度如至少10mg/ml评价时HPSEC不能检出RSA和在存储温度(2-8° C)与室温之间没有显著区别的制剂，和/或在相关浓度如至少10mg/ml时HPSEC于2_8° C不能检测RSA趋势的制剂能使用而不需要室温延长孵育。换言之，如果不能检出RSA，不需要室温孵育60-90分钟或更长的延长期。因此，在某些实施方式中，本公开提供了防止或降低制剂中抗体RSA的方法。本文提供这些方法的细节。在某些实施方式中，所述方法涉及防止或降低制剂中抗I3DGFR-α抗体的RSA。另外，本公开提供了包含抗roGFR-α抗体或抗体片段的制剂。本文提供了特定制剂的细节。在某些实施方式中，所述制剂提高了优选的非RSA属性，例如I)给定浓度下在2-8° C对比室温没有显著区别的RSA和/或2)在相关浓度如至少10mg/ml不能由HPSEC于2-8° C检测的RSA和/或3)至少4mg/ml的抗体浓度下不能检测的RSA和/或随着浓度没有显著变化的RSA。不考虑RSA特性，应该理解所述制剂中抗体保留其功能属性如特异结合TOGFR-α的能力，和抑制表达TOGFR-α的细胞生长。另外，本公开提供了降低或消除起始制剂中抗体的RSA趋势以实现一种或多种上述RSA特性。同样地，所述抗体制剂在`存储修复后不需要延长培育期就可以给予对象，因此简化了健康护理专业人员向对象给予制剂的过程。另外，本文所述制剂能包含浓度范围约lmg/ml -约100mg/ml的抗体(包含其抗体片段)，而不造成由于延长存储期间蛋白聚集和/或片段化对抗体生物活性的不良作用。这种稳定性不仅保证了抗体的功效，而且降低了对象中可能发生不良作用的风险。因此，在某些实施方式中，本公开提供了防止或降低抗体特别是抗I3DGFR-α抗体RSA趋势的包含蔗糖的抗体制剂。另外，本文提供了防止或降低抗体制剂中抗体RSA的方法。在某些实施方式中，所述制剂是液体制剂。在某些实施方式中，所述制剂不适合冻干。在某些实施方式中，所述制剂适合冻干。在某些实施方式中，这种制剂中的抗体具有利的RSA特性。在某些实施方式中，这种有利的RSA特性相对于起始制剂中抗体的RSA特性作评价。本公开制剂提供了抗体(包含其抗体片段)的稳定即用型制品。在特定实施方式中，本公开制剂提供了包含抗H)GFR-a抗体的制品。不希望受理论的限制，本公开部分基于下面的观察:起始制剂中抗roGFR-a抗体有影响所述制剂能使用方法的RSA趋势(参见例如本文实施例1)。这种起始制剂中的单体抗roGFR-α分子有短暂和可逆的自体缔合趋势，并且这种RSA是温度的函数。特定地，所述起始制剂中该抗体的RSA在约2° C -约8° C的存储条件下显著,并且甚至在10mg/ml下可由HPSEC测量,如单体峰前沿峰肩所指示。在这个起始制剂中，甚至当所示抗体显著稀释时HPSEC仍然可测量指示RSA的峰肩(如直到所述抗体稀释到小于或等于4mg/ml时，所示峰肩可以检出)。然而，RSA趋势随时间降低并且室温平衡60 - 90分钟后不能检出。类似地，所述抗体应用于此起始制剂前需要室温或更高温度的延长培育。需要延长培育是通常不方便的原因并且可潜在引入不顺应性的风险。在某些实施方式中，这种短暂RSA趋势是浓度依赖性的，并且随着更低抗体浓度而下降。例如，上述HPSEC峰肩在2-8° C和蛋白浓度10mg/ml下可检出。2-8° C下稀释抗体浓度到小于或等于4mg/ml后，不能观察到所述HPSEC峰肩。4° C时AUC的尺寸分布分析也显示了低抗体浓度下产物峰加宽变小。类似的，为了避免这种制剂中的RSA，一些抗体需要在极低浓度(如小于4mg/ml)下。对很多治疗应用而言，在这种低浓度下配制抗体不实用。本发明部分基于下面惊人的发现:蔗糖防止或降低起始制剂中观察到的抗PDGFR- α抗体的RSA，并且本公开也适用于显示本文所述RSA的其他抗体。在某些实施方式中，本描述提供了防止或降低抗体RSA的方法(相对于起始制剂的RSA)，其中起始制剂中抗体的RSA有一种或多种下列特性:i)在2-8° C于给定抗体浓度如10mg/ml或至少IOmg/ml可测量/检出RSA，并且所述RSA在室温平衡后降低或消除，ii)在2_8° C大于4mg/ml抗体浓度下可测量/检出RSA，并且所述RSA在稀释到4mg/ml或更小浓度后降低或消除，和/或iii)从可逆自体缔合的高分子量形式(如二聚体、三聚体、四聚体、五聚体或更高级寡聚体)生成RSA。防止或降低RSA的方法特别适于防止或降低抗体中的RSA，其中起始制剂中的RSA有1、2或全部3项上述特性。类似地，所述抗体制剂在存储修复后不需要延长培育期就可以给予对象，从而简化了健康护理专业人员向对象给予制剂的过程。另外，本公开制剂能包含浓度范围约Img/ml -约100mg/ml的抗体(包含其抗体片段)，而不造成由于延长存储期间RSA、蛋白聚集和/或片段化对抗体生物活性的不良`作用。尽管抗体稳定性是与RSA趋势不同的属性，制剂稳定性对安全性、功效和商业应用重要。这种稳定性不仅保证了抗体的功效，而且降低了对象中可能发生不良作用的风险。因此，本公开提供了防止或降低抗体特别是抗roGFR-α抗体的RSA趋势的含蔗糖抗体制剂。另外，本文提供了防止或降低抗体制剂中抗体RSA的制剂方法。(ii)定义继续进一步详细描述本发明之前，应理解本发明不限于特定组合物或工艺步骤，所述组合物或工艺步骤可变化。必须注意，除非上下文另外明确说明，否则在本说明书和所附权利要求中使用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代物。除非另有定义，本文使用的所有科技术语与本发明所属领域普通技术人员所理解的通常含义相同。例如，Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology(《生物医药和分子生物学简明词典》)，Juo，Pe1-Show，第2版，2002，CRC出版社(CRCPress) ; The Dictionary of Cell and Molecular Biology (《细胞和分子生物学词典》)，第 3 版，1999，学术出版社(Academic Press);和 Oxford Dictionary Of BiochemistryAnd Molecular Biology (《牛津生物化学和分子生物学辞典》)，修订，2000，牛津大学出版社(Oxford University Press),向技术人员提供了本发明使用的很多术语的常用词典。本文中氨基酸可指由IUPAC-1UB生物化学命名委员会推荐的俗称三字母符号或单字母符号。同样，核苷酸可指其普遍接受的单字母代码。除非另有说明，抗体可变结构域、互补决定区(CDR)和框架区(FR)的氨基酸编号遵循 Kabat 等 Sequences of Proteins of Immunological Interest(《免疫学感兴趣蛋白的序列》)，第5版,公共卫生服务部(Public Health Service),马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院(1991)所示的Kabat定义。使用这个编号系统，所述实际线形氨基酸序列可以包含对应于可变结构域FR或CDR缩短、或插入的更少或其他氨基酸。例如，重链可变结构域可以包含H2的残基52后的单氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)和重链FR残基82后的插入残基(如根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。可以通过用〃标准"Kabat编号序列比对抗体序列同源性区域就给定抗体测定残基的Kabat编号。构架残基的最大比对常需要在编号系统中插入“间隔”残基，用于Fv区。另外，由于种间或等位基因差异，任何给定Kabat位点上的某些单独残基特性在抗体链间可能不同。本文所用术语“一种或多种抗体”也称为免疫球蛋白，包括单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、由至少两种不同表位结合片段(如双特异性抗体)形成的多特异性抗体、人抗体、人源化抗体、骆骑(camelised)抗体、嵌合抗体、单链Fv(scFv)、Fab片段、F(ab’)2片段、显示所需生物学活性(如抗原结合部分)的抗体片段、二硫键连接的Fv(dsFv)和抗独特型(抗-1d)抗体(包括例如，本公开抗体的抗-1d抗体)、细胞内抗体和任一上述物质的表位结合片段。具体说，抗体包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫学活性片段，即含有 至少一个抗原结合位点的分子。免疫球蛋白分子能是任何同种型(如 IgG、IgE、IgM、IgD、IgA 和 IgY)、亚同种型(如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)或同种异型(如 Gm,如 Glm(f、z、a 或 x)、G2m(n)、G3m(g、b 或 c)、Am、Em 和 Km(l、2 或 3))。抗体可衍生自任何哺乳动物，包括但不限于人、猴、猪、马、兔、犬、猫、小鼠等，或其他哺乳动物如鸟(如鸡)。在给出值或范围时，本文所用术语“约”指在给定数值或范围的20%以内、优选10%以内和更优选5%以内的数值或范围。术语〃H)GFR- α 〃指血小板衍生生长因子酪氨酸激酶受体-α。TOGFR- α也称作CD 140a 和 PDGFR-α。“MabA"指包含表I所示氨基酸序列的特定、人IgG2抗TOGFR- α抗体。特定地，所述抗体包含表I所示VH和VL (其可变区包含表I所示6个CDR)。这个抗体也可以涉及其示于表I的6个⑶R或作为包含VH和VL结构域的抗体和包含表I所示6个⑶R的抗体。这种特定人抗体是特异结合I3DGFR-α和抑制表达TOGFR-α的细胞生长的TOGFR-α抗体示例。当涉及靶标结合药剂如抗体时，术语〃中和〃指所述药剂消除或显著降低靶标抗原活性的能力。因此，〃中和〃抗TOGFR-α抗体能消除或显著降低roGFR-α的活性。例如中和H)GFR-a抗体可以通过阻断配体和roGFR-a结合起作用。如Kabat 等，1991 (Kabat, E.A.等.(1991) Sequences of Proteins ofImmunological Interest (《免疫学感兴趣蛋白的序列》)，第5版,美国卫生和人类服务部公共卫生署的NIH，华盛顿)和随后版本所定义，术语“CDR区”或“CDR”用于指示免疫球蛋白重链和轻链的超变区。抗体通常含有3个重链⑶R和3个轻链⑶R。本文利用术语⑶R表示(视情形而定)这些区域中的一个或几个或甚至全部，这些区域含有负责通过抗体与其识别抗原或表位的亲和性来结合的大多数氨基酸残基。如本文所讨论，考虑了抗体或免疫球蛋白分子的氨基酸序列的小变化由所述抗体或免疫球蛋白分子所涵盖，前提是氨基酸序列的变化维持与本文所述抗体或免疫球蛋白分子至少75%，至少80%、90%、95%或至少99%序列相同性。变体应该保持参照抗体的所需生物属性。例如，在roGFR-α抗体情况下，变体应该保持(i)特异结合TOGFR-α的能力和/或(ii)抑制表达roGFR-a的细胞生长的能力。在某些实施方式中，变体还定性为:作为参照抗体结合相同表位和/或与所述参照抗体就结合抗原竞争。在某些实施方式中，变体包含相对于参照抗体的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个取代(包含删除或插入)。特别地，考虑了保守性氨基酸取代。保守性取代是在有相关侧链的氨基酸家族内发生的取代。遗传编码的氨基酸通常分为几个家族:(I)酸性=天冬氨酸、谷氨酸；(2)碱性=赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性=丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；和(4)不带电极性=甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、色氨酸、苏氨酸、酪氨酸。更优选家族为:丝氨酸和苏氨酸是脂族羟基家族；天冬酰胺和谷氨酰胺是含酰胺家族；丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸是脂族家族；以及苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸是芳族家族。例如，能合理预期分别用异亮氨酸或缬氨酸取代亮氨酸，用谷氨酸取代天冬氨酸，用丝氨酸取代苏氨酸，或用结构上相关氨基酸类似地取代某氨基酸对结合功能或所得分子的属性不会产生大影响。氨基酸改变是否产生功能肽能易于通过测定所述多肽衍生物的特异活性来测定。本文详细描述试验。抗体或免疫球蛋白分子的片段或类似物能易于通过本领域普通技术制备。优选片段或类似物的氨基和羧基末端出现在功能结构域的边界附近。通过比较核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共或专有的序列数据库能鉴定结构和功能结构域。优选计算机比较方法用于鉴定在已知结构和/或功能的其他蛋白上出现的序列基序或预测蛋白构型结构域。已知鉴定折叠成已知三维结构的蛋白序列的方法。Bowie等，Science253:164(1991)。因此，上述实施例显示了本领域技术人员能识别可用于定义与本文所述抗体一致的结构和功能结构域的序列基序和结构构型。当过量抗体使配体结合受体量减少至少50%、60%或80%或大于`约85% (如体外竞争性结合试验所测量)时，抗体通常抑制配体和受体的结合。本文使用的术语"单克隆抗体"指特异结合相同表位的基本均匀抗体群中的抗体。在此易指出本文使用“和/或”时应视作具体公开了两种特征或组分的每一种，有或没有另一种。例如，“A和/或B”应视作具体公开了(i)A、(ii)B及(iii)A和B中每一种，就如同各自在本文中单独列出一样。本文使用的术语"特异结合"指特异结合到抗原的抗体(包括抗体片段)。优选特异结合抗原的抗体(包括抗体片段)不与其他无关抗原发生明显的交叉反应。然而，应理解特异结合来自给定物种特定蛋白的抗体也可以特异结合来自一种或多种其他物种蛋白的直向同源物。由于特异结合抗原，这种交叉物种结合不改变抗体特性。在某些实施方式中，利用实验技术如放射免疫试验(RIA)和酶联免疫吸附实验(ELISA)测定，抗体与某抗原结合的亲和性大幅高于任何交叉反应抗原例如亲和性高100-1000倍时，所述抗体特异性结合于该抗原。参见例如，Paul编，1989,基础免疫学(《Fundamental Immunology))),第2版,纽约拉文出版社(Raven Press,New York),第332-336页有关抗体特异性的讨论。本文所用的术语“联合”指使用一种以上治疗(如一种以上药剂；一种或多种药剂以及一种或多种其他治疗/治疗方式)。使用术语“联合”不限制向对象给予治疗(如药剂和/或其他治疗方式)的顺序。在给予对象第二治疗(如第二种药剂和/或其他治疗方式)之前(如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、I小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、I周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周前)、同时或之后(如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、I小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、I周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周后)给予第一治疗(如第一种药剂和/或其他治疗方式)。例如〃其他治疗方式(modality)"包括但不限于手术、放射治疗、透析、干细胞移植、辅助呼吸(ventilatory support)、饮食、物理治疗等。本文所用的术语“赋形剂”指在制剂中用作稀释剂、载剂、防腐剂、粘合剂或稳定剂的惰性物质，所述的惰性物质赋予制剂有益物理特性，如增加蛋白质稳定性、提高蛋白质溶解度和降低粘度。赋形剂的例子包括但不限于:蛋白质(如血清白蛋白)、氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、甘氨酸和组氨酸)、表面活性剂(如SDS、聚山梨酯和非离子型表面活性剂)、糖(如葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和海藻糖)、多元醇(如甘露糖醇和山梨醇)、脂肪酸和磷脂(如烧基磺酸盐(alkyl sulfonate)和辛酸酯(caprylate))。其它有关赋形剂的信息参见Remington’ s Pharmaceutical Sciences (《雷明顿药物科学》)(JosephP.Remington,第18版(增刊)，宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司(Mack PublishingC0.，Easton, PA))，其通过引用全文纳入本文。本文所用的术语“多元醇”指与正常糖相比含有许多一OH基团的糖。〃可逆自体缔合趋势〃、〃可逆自体缔合特性〃、〃RSA〃或〃可逆自体缔合〃可互换使用，并且涉及蛋白或抗体分子与另一分子或蛋白或抗体分子组短暂自体缔合(即分子间相互作用)的特性。RSA通常是浓度依赖性并且随着蛋白浓度而增加。本文所述RSA也能是温度依赖性，并且可以在低温观察到，而温度升高时利于分解。〃可测量的RSA"或〃可测量的RSA趋势〃互换使用，指能使用例如HPSEC或AUC检出RSA。通过HPSEC可测量的RSA还能通过其他正交方法测量。〃防止〃或〃消除〃指用本文所述方法(如HPSEC)检测时，不能检出或不能测量RSA。另外，当与没有RSA的制剂(如没有显示RSA的对照样品)比较，RSA基本相同时，也可以应用该术语。〃高分子量形式〃或〃更高级形式〃指单体以外的(如二聚体、三聚体、四聚体、五聚体等)的给定制剂中处于短暂或永久状态(如可逆或非可逆更高级形式)的任一蛋白种
类。 〃非RSA〃指没有RSA，或者用本文所述方法(如HPSEC)检测时，不能检出或不能测量RSA。〃非自体缔合单体〃指制剂中作为单体(Y形抗体分子)，而不是例如作为二聚体(两个Y形抗体分子)、三聚体(三个Y形分子)、片段等出现的抗体或功能片段。〃稳定的〃和〃稳定性〃指在一段时间内维持起始水平的制剂纯度。换言之，如果在时间O的给定抗体种类方面，制剂是99%纯度，稳定性是所述制剂基本保留此纯度水平的良好程度和时间长度(如没有形成其他种类，如纯物质的片段化部分或聚集物)。在约2-8° C存储给定时间段时，如果纯度水平没有大幅下降，制剂是稳定的。优选稳定制剂是在存储条件超过至少2年时间段，稳定性没有大幅下降的制剂。类似地，在约2-8° C存储给定时间段时，通过如HPSEC测定的制剂纯度水平来测量稳定性。〃基本(substantially)没有下降"指制剂纯度水平在给定时间段内改变每年小于1%、每年小于0.75%、每年小于0.5%或每年小于0.4%。类似地，稳定性能在其他温度评价。(iii)抗体本公开提供了降低制剂中抗体和抗体片段的RSA趋势的方法。此外，本公开提供的具体制剂包含特异结合roGFR-α和抑制表达roGFR-a的细胞生长的抗TOGFR-a抗体和抗体片段。例如，可在治疗和诊断上应用这种制剂。在某些实施方式中，本公开制剂降低了 RSA趋势。在讨论降低RSA的特定制剂和/或更常用方法前，提供了抗体的简单描述。除非另有说明，抗体或抗体片段的一般讨论应用于任何抗体或抗体片段，例如可以通过增加制剂中蔗糖来降低抗体或抗体片段的RSA。可通过本领域已知的任何合成抗体方法，具体是通过化学合成或通过重组表达技术生产特异性结合抗原如TOGFR-a的抗体(包括抗体片段)。抗体结 构基本天然抗体的结构单位已知包含四聚体。各四聚体由两对相同的多肽链构成，各对有一条“轻链”(约25kDa)和一条“重链”(约50-70kDa)。各链的氨基末端部分包含约100-110或更多氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。各链的羧基末端部分定义主要负责效应物功能的恒定区。人轻链分类为K和λ轻链。重链分类为μ、δ、Y、α、或ε，分别定义抗体同种型IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。通常参见Fundamental Immunology (《基础免疫学》)第7章(Paul, W.编，第2版，纽约拉文出版社(Raven Press, New York) (1989))(通过引用全文纳入本文以用于所有目的)。每个轻/重链对的可变区形成抗体结合位点。全长抗体情况下，单体IgG抗体分子的基本单位经常描述为Y。因此，完整天然抗体有两个结合位点。两个结合位点不相同的抗体示例包含双功能或双特异性抗体。天然抗体链都显示了由三个高变区连接的相对保守框架区(FR)的相同通用结构，也称为互补决定区或CDR。来自各对的两条链的CDR通过框架区比对，能结合特定表位。从N末端到C末端，轻和重链都包含所述结构域FRl、⑶Rl、FR2、⑶R2、FR3、⑶R3和FR4。每个结构域氨基酸的比对与 Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(《免疫学感兴趣蛋白的序列》)(马里兰州贝塞斯达的国立卫生研究院(National Institutesof Health) (1987和 1991))或Chothia和 Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987);Chothia等，Nature342:878-883 (1989)的定义一致。在某些情况下，使用抗体片段有优势。例如，不希望受理论限制，抗体片段的使用可以引起实体瘤可及性改善和/或可允许快速清除。已开发了产生抗体片段的各种技术。传统上，这些片段通过蛋白酶水解消化完整抗体来获得(参见例如，Morimoto 等，J Biochem Biophys.Method.24:107-117 (1992)和Brennan等，Science, 229:81 (1985))。然而,现在这些片段可以通过重组宿主细胞直接产生。Fab、Fv和scFv抗体片段能在细胞如大肠杆菌(E.coli)内表达或从其分泌，因此能容易生成大量的这些片段。抗体片段能从例如抗体噬菌体文库分离。或者，Fab’-SH片段可由大肠杆菌直接回收，并经化学偶联形成F(ab’ )2片段(Carter等，Bio/Technology,10:163-167 (1992))。按照另一种方法，F (ab’) 2片段可由重组宿主细胞培养物直接分离。体内半衰期增加的Fab和F (ab’)2描述于美国专利号5，869，046。在其它实施方式中，所选抗体是单链Fv片段(scFv)。见W093/16185;美国专利号5，571，894和美国专利号5，587,458。抗体片段还可以是如美国专利号5，641，870所述的“线形抗体”。这种线形抗体片段可以是单特异性或双特异性。尽管VH或VL结构域可单独用于结合抗原，VH结构域与VL结构域配对以提供抗体抗原-结合位点。VH结构域可与VL结构域配对，从而形成同时包含VH和VL结构域的抗体抗原-结合位点。人抗体和抗体人源化在某些实施方式中，所述要求权利的方法和制剂中使用的抗体和抗体片段是人或人源化的。在其他实施方式中，抗体或抗体片段是鼠的。人抗体避免了与具鼠或大鼠可变和/或恒定区的抗体有关的一些问题。这种鼠或大鼠衍生蛋白的出现能造成所述抗体的快速清除或能引起患者产生针对抗体的免疫反应。为了避免使用鼠或大鼠衍生抗体，全人抗体能通过将功能性人抗体基因座引入到啮齿动物、其他哺乳动物或动物来产生，从而所述啮齿动物、其他哺乳动物或动物生成全人抗体。生成全人抗体的一种方法是通过使用X en() M () us e W小鼠系，所述小鼠系已经工程改造成包含多至但是少于IOOOkb大小生殖系配置的人重链基因座和K轻链基因座片段。见 Mendez 等，Nature Genetics 15:146-156 (1997)以及 Green 和 Jakobovits J.Exp.Med.188:483-495 (1998)。所述XenoMouse 品系可得自安进公司(Amgen, Inc.)(美国加利福尼亚州弗里蒙特)。然后这种小鼠能生成人免疫`球蛋白分子和抗体，并且在生成鼠免疫球蛋白分子和抗体上有缺陷。用于实现相同目标的技术公开于1996年12月3日提交的美国专利申请序列号08/759，620，和1998年6月11日发表的国际专利申请号W098/24893，和2000年12月21日发表的W000/76310，其公开内容通过引用纳入本文。也参见Mendez等，NatureGeneticsl5:146-156(1997)，其公开内容通过引用纳入本文。所述XenoMouse 小鼠系的生成还讨论和描绘在1990年I月12日提交的美国专利申请序列号07/466，008，1990年11月8日提交的07/610，515，1992年7月24日提交的07/919，297，1992 年 7 月 30 日提交的 07/922，649，1993 年 3 月 15 日提交的 08/031，801，1993年8月27日提交的08/112,848,1994年4月28日提交的08/234，145，1995年I月20日提交的08/376，279，1995年4月27日提交的08/430，938，1995年6月5日提交的08/464，584，1995 年 6 月 5 日提交的 08/464，582，1995 年 6 月 5 日提交的 08/463，191，1995年6月5日提交的08/462，837，1995年6月5日提交的08/486，853，1995年6月5日提交的 08/486，857，1995 年 6 月 5 日提交的 08/486，859，1995 年 6 月 5 日提交的 08/462，513，1996 年 10 月 2 日提交的 08/724,752,1996 年 12 月 3 日提交的 08/759，620，2001 年 11月30日提交的美国公开2003/0093820和美国专利号6，162,963,6, 150, 584,6, 114,598、6，075，181 和 5，939，598 以及日本专利号 3 068 180 B2、3 068 506 B2 和 3 068 507 B2。也参见1996年6月12日授予发表的欧洲专利号EP O 463 151 BI，1994年2月3日发表的国际专利申请号W094/02602，1996年10月31日发表的国际专利申请号W096/34096，1998年6月11日发表的W098/24893，2000年12月21日发表的W000/76310。上述专利、申请和参考文献的公开内容通过引用整体纳入本文。在替代方法中，包含杰法姆国际公司(GenPharm International, Inc.)在内的其他方法使用〃微基因座(minilocus) 〃方案。在所述微基因座方案中，外源Ig基因座通过包含来自Ig基因座的片段(个体基因)来模拟。因此一种或多种VH基因，一种或多种DH基因，一种或多种JH基因，μ恒定区和通常第二恒定区(优选Y恒定区)形成构建体以插入到动物中。这个方案描述于Surani等的美国专利号5，545，807，和各为Lonberg 和 Kay 的美国专利号 5，545，806、5，625，825、5，625，126、5，633，425、5，661，016、5，770，429、5，789，650、5，814，318、5，877，397、5，874，299 和 6,255,458, Krimpenfort 和Berns 的美国专利号 591，669 和 6，023.010，Berns 等的美国专利号 5，612，205,5, 721，367和5，789，215，和Choi和Dunn的美国专利号5，643，763，和杰珐姆国际公司(GenPharmInternational) 1990年8月29日提交的美国专利申请序列号07/574，748，1990年8月31日提交的07/575，962，1991年12月17日提交的07/810，279，1992年3月18日提交的07/853，408，1992 年 6 月 23 日提交的 07/904，068，1992 年 12 月 16 日提交的 07/990，860，1993年4月26日提交的08/053，131，1993年7月22日提交的08/096，762，1993年11月18日提交的08/155，301，1993年12月3日提交的08/161，739，1993年12月10日提交的08/165，699，1994年3月9日提交的08/209，741，其公开内容通过引用纳入本文。也参见欧洲专利号O 546 073 BI，国际专利申请号92/03918、W092/22645、W092/22647、W092/22670、W093/12227、W094/00569、W094/25585、W096/14436、W097/13852 和 W098/24884 以及美国专利号5，981，175，其公开内容通过引用全文纳入本文。还参见Taylor等，1992，Chen等，1993, Tuaillon 等，1993, Cho 等，1993, Lonberg 等，(1994), Taylor 等，(1994)，和 Tuaillon等，(1995)，Fishwild等，(1996),其公开内容通过引用全文纳入本文。Kirin也显示了从小鼠生成人抗体,其中通过微细胞(microcell)融合引入大片段染色体或整个染色体。参见欧洲专利申请号773 288和843 961，其公开内容通过引用纳入本文。此外，生成了 Kirin Tc小鼠与Medarex微基因座(Humab)小鼠杂交结果的KMTM小鼠。这些小鼠有Kirin小鼠的人IgH转染色体(transchromosome)和Genpharm小鼠的K 链转基因(Ishida 等，Cloning Stem Cells, (2002)4:91-102)。人抗体也能由体外方法获得。合适的示例包括但不限于曬菌体展示(CAT、Morphosys> Dyax> Biosite/Medarex、Xoma> Symphogen> Alexion(以前的 Proliferon)、Affimed)核糖体展示(CAT)、酵母展示等。注意到上述技术仅仅是生成人抗体的方法示例。另外，鼠抗体能使用例如标准杂交瘤技术生成。不考虑特定抗体如何初始制成，一旦鉴定了所述抗体的氨基酸序列，该抗体能易于重组生成。例如，鼠、人源化、人等抗体和抗体片段能在细胞内表达和从所述培养细胞中纯化。能用于重组表达的抗体和抗体片段的示例性细胞包括但不限于CHO细胞、COS细胞、酵母细胞和细菌细胞。这在下面更详细描述。表1提供了在要求权利的组合物和方法情况下使用的示例性I3DGFRa抗体的序列。然而，在其他实施方式中，本公开制剂和/或方法使用其他I3DGFRa抗体，例如结合的表位与有表I所不任一序列的抗体相同的抗体，或者与有表I所不任一序列的抗体竞争结合抗原的抗体。易在体外测定抗体之间的竞争，例如采用ELISA和/或用特定的报道分子对一种结合成员作标记(可在一种或多种其它未标记的抗体存在下检出)，从而能鉴定结合相同表位或重叠表位的抗体。本领域普通技术人员不难知晓这些方法，本文更详细描述了这些方法。因此，本公开其他方面提供了包含人抗体抗原结合位点的抗原结合位点，所述人抗体抗原结合位点与抗体分子竞争，例如特别是包含VH和/或VL结构域的抗体分子，母体抗体或任何结合I3DGFR- a的本文所公开抗体的⑶R如HCDR3或⑶R组。在某些实施方式中，抗体或抗体片段可以用另一部分作标签、标记或融合。例如抗体或抗体片段可以用荧光、金属或放射性部分标记以帮助例如诊断或成像情况下的检出。通过其他示例，抗体或抗体片段可以PEG化以提高体内药代动力学性质。通过其他示例，抗体或抗体片段可以添加全部或部分HAS以提高血清半衰期。通过其他示例，抗体或抗体片段可以包含myc或HA标签以辅助纯化和/或检出。上述仅仅是示例。抗体的制备通常，抗体通过本领域已知方法生成，例如杂交瘤技术(小鼠或人)、噬菌体展示等。一旦鉴定了所需抗体(例如有所需功能特性的抗体)，能使用杂交瘤和/或通过在培养细胞中重组表达编码抗体的核苷酸序列来完成持续制备。应该理解本公开情况下制成的抗体或抗体片段如抗TOGFR- a抗体能在杂交瘤细胞系以外的细胞系中表达。编码特定抗体的序列能用于转化合适的哺乳动物细宿主胞或非哺乳动物宿主细胞。转化可以是将多核苷酸引入宿主细胞的任何已知方法，包含例如把多核苷酸封装入病毒(或病毒载体)和用所述病毒(或载体)转导宿主细胞或通过本领域已知的转染技术，如美国专利号4，399，216,4, 912，040,4, 740，461和4，959，455 (所述专利通过引用纳入本文)所示例的。所使用的`转化方法依赖于要转化的宿主。引入异源多核苷酸进入哺乳动物细胞的方法为本领域熟知，并且包含右旋糖苷介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺(polybrene)介导的转染、原生质体融合、电穿孔、多核苷酸封装入脂质体,和直接微注射DNA到细胞核。可用作表达宿主的哺乳动物细胞系为本领域已知，并且包含很多获自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection) (ATCC)的永生化细胞系，包括但不限于中华仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(如H印G2)、人上皮肾293细胞和很多其他细胞系。一旦生成抗体或抗体片段，其能如本文所述配制和/或其能用于本文所述方法。例如，抗roGFR-α抗体用于检出患者样品中的TOGFR-α并且因此用作疾病状态例如本文所述肿瘤病症的诊断。在某些实施方式中，以帮助最小化RSA趋势的方式制备所述抗体，并且这种抗体用于诊断方法。在某些实施方式中，当通过HPSEC在约2-8° C和给定相关浓度如约10mg/ml评价时，用于诊断方法的制剂没有可检测的RSA趋势。通过其他示例，基于其抑制肿瘤生长的能力，抗roGFR-a抗体在治疗由于PDGFR- a表达造成的症状和病症中有治疗效果。一旦生成抗体或抗体片段，其能如本文所述配制和/或其能用于本文所述方法。在特定实施方式中，本文所述抗体和方法涉及肿瘤病症的治疗,如由于roGFR-α诱导肿瘤生长造成的肿瘤病症。其他实施方式涉及使用本文所述抗体和方法以治疗肿瘤疾病，如癌症，包含肺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌、多形性成胶质细胞瘤、黑素瘤和胃肠道间质瘤(GIST)、肾细胞癌、肝细胞癌等。在某些实施方式中，以帮助最小化RSA趋势的方式制备所述抗体。例如这种制剂可以用于治疗或诊断方法。在某些实施方式中，当用HPSEC在约2-8° C和大于4mg/ml浓度(如至少10mg/ml、至少20mg/ml、或至少50mg/ml或至少100mg/ml)评价时，用于治疗方法的制剂没有可测量的RSA趋势。PDGFR-α 抗体在某些实施方式中，抗roGFR-α抗体特异性结合TOGFR-a并且抑制表达PDGFR- a的细胞的生长。在某些实施方式中，所述抗体是例如结合roGFR-a并且防止配体与roGFR-a结合的中和抗体。在某些实施方式中，所述抗体是全长抗体，例如全长IgG抗体。在某些实施方式中，所述抗体是IgG2或IgG4抗体。在其他实施方式中，所述抗体是IgGl抗体。在其他实施方式中，所述抗体是特异结合I3DGFR-a和抑制表达TOGFR-a的细胞生长的抗体片段。在某些实施方式中，任何这些抗体和抗体片段是人抗体。示例性抗体特异结合roGFR-a并且抑制表达TOGFR-a的细胞生长。这种抗体能根据所述功能和/或序列鉴定。这种抗体还能基于一种或多种其他功能特性鉴定，例如KD(如抗原亲和性)。通过其他示例，这种抗体能根据与来自非人物种的roGFR-a交叉反应来鉴定。因此，在某些实施方式中，示例性抗体或抗体片段特异结合人TOGFR-a并且还特异结合来自一种或多种其他物种如小鼠、大鼠或猕猴的TOGFR- a。在某些实施方式中，特异结合TOGFR-a并且抑制表达TOGFR-α的细胞生长的抗体或抗体片段是高亲和性抗体，例如KD为约10_6 -约10_12M或更好(如更低KD指示更高亲和性抗体)的抗体。在其他实施方式中，这种抗体的KD小于约500、400、300、200或100皮摩(pM)并且抑制表达I3DGFR-a的细胞生长。在某些实施方式中，这种抗体抑制肿瘤生长。在一些实施方式中，所述抗体结合PDGFR-a的KD小于约75、60、50、40、30、25、20、10或5pM并且抑制表达PDGFR-a的细胞生长。在某些实施方式中，这种抗体抑制肿瘤生长。测量亲和性能通过固相或溶液相技术如针对细胞使用基于FACS亲和性测量技术。亲和性也能通过使用表面等离子体共振试验通过BIAC0RE -2000或BIAC0RE -3000(新泽西州皮斯卡特维的BIAcore公司)测量。例如，使用25° C下在 10反应单位(RU)有固定抗原CM5芯片的表面等离子体共振试验。简单说，羧甲基化葡聚糖生物传感器芯片(CM5，BIAcore公司)用N-乙基-N' _(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)根据供应商说明书激活。在以5ul/分钟流速注射前，抗原用IlOmM乙酸钠，ρΗ4.8稀释到5ug/ml ( 0.2uM)以实现约10反应单位(RU)的偶联蛋白。抗原注射后，注射IM乙醇胺以阻隔未反应组。对动态测量而言，把两倍系列稀释的Fab (0.78nM-500nM)以约25ul/分钟流速于25。C注射到有0.05%吐温20的PBS (PBST)中。不考虑特定实验参数，表面等离子体共振试验能用于测量KD、Ka、以及kgg和kWiS。结合速率(k结合)和解离速率(k解离)使用简单一对一(one-to-one)朗格缪尔结合模型(BIAC0RE 评价软件3.2版)通过同时拟合所述结合和解离传感图(sensorgram)计算。美国专利申请11/833，473 (本文也称作〃’ 473应用〃)提供了特异结合I3DGFR-α并且抑制表达roGFR-α的细胞生长的示例性抗体和抗体片段，所述申请通过引用全文纳入本文。简单说，所述’473申请提供了多种抗体，如该申请所述的特异结合roGFR-α的特异性人抗体。在某些实施方式中，本公开考虑了特异结合I3DGFR-a并且抑制表达H)GFR-a的细胞生长的任何这种抗TOGFR- a抗体或抗体片段能如此申请所述配制和/或能用于此申请所述的方法和试剂盒。本公开的实施方式包含表I提供序列信息的特异抗roGFR-a抗体或抗体片段。表I提供了特定人TOGFR-a抗体的重和轻链可变区的序列信息以及各个CDR (可变区序列亚组)的序列信息。简单说，描述于美国申请序列号11/833,473的抗TOGFR-a抗体通过使用所述申请描述的XenoMouse 技术制备，所述申请通过引用全文纳入本文。简单说，XenoMouse 小鼠系用感兴趣抗原(如I3DGFR-a)免疫，从高免疫小鼠中回收淋巴细胞(如B细胞)，和所回收的淋巴细胞融合骨髓型细胞系以制备永生杂交瘤细胞系。这些杂交瘤细胞系经筛选和选择以鉴定生成感兴趣抗原特异抗体的杂交瘤细胞系。用于实施例所述制剂的特定抗体是最初用这种方法生成的人、IgG2抗体，并且描述于申请序列号11/833，473。表I提供了实施例所述制剂使用的抗体的重和轻链可变区的序列信息以及各个CDR(可变区序列亚组)的序列信息。关于特异结合TOGFR-a的其他人抗体的其他信息能见于美国序列号11/833，473，所述专利通过引用全文纳入本文。表1.抗I3DGFR-a抗体的序列
权利要求
1.一种制剂，所述制剂包含: a)水性运载体； b)lmg/ml-100mg/ml特异结合H)GFR-a并且抑制表达TOGFR-a的细胞生长的抗体或抗体片段； c)4%-20% (重量/体积)鹿糖； d)0.01%-0.1%(重量/体积)聚山梨酯80 (PS80);和 e)乙酸钠缓冲液， 其中，所述制剂的PH为ρΗ4.0 - ρΗ6.0。
2.一种制剂，所述制剂由下列组成: a)水性运载体； b)lmg/ml-100mg/ml特异结合H)GFR-a并且抑制表达TOGFR-a的细胞生长的抗体或抗体片段； c)4%-20% (重量/体积)鹿糖； d)0.01%-0.1% (重量/体积)聚山梨酯80 (PS80);和 e)乙酸钠缓冲液， 其中，所述制剂的PH是ρΗ4.0 - ρΗ6.0。`
3.如权利要求1或2所述的制剂，其特征在于，(b)包含全长IgG单克隆抗体。
4.如权利要求1-3中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段的存在浓度是 20mg/ml-50mg/ml。
5.如权利要求1-4中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段的存在浓度是 20mg/ml。
6.如权利要求1-4中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段的存在浓度是 50mg/ml。
7.如权利要求1-6中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:1的重链多肽。
8.如权利要求1-7中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段包括含有氨基酸序列SEQ ID NO:2的轻链多肽。
9.如权利要求1-8中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段与重链多肽含SEQ ID NO:1氨基酸序列且轻链多肽含SEQ ID NO: 2氨基酸序列的抗体结合相同的表位。
10.如权利要求1-9中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段包含: 有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2 ;和 有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
11.如权利要求ι- ο中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段与包含下列结构域的抗体结合相同的表位:有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2 ;和 有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
12.如权利要求1-11中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂包含6%(w/v)鹿糖。
13.如权利要求1-11中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂包含10%(w/v)鹿糖。
14.如权利要求1-13中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂包含0.05%(w/v)PS80。
15.如权利要求1-14中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂包含50mM乙酸钠缓冲液。
16.如权利要求1-15中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂的pH是5.5。
17.如权利要求1-16中任一项所述的制剂，其特征在于，据分析超速离心(AUC)所测定，所述制剂中的所述抗体或抗体片段在2-8° C和23-27° C有基本相似的可逆自体缔合(RSA)特性。
18.如权利要求1-17中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂中所述抗体或抗体片段的RSA不能由高 效大小排阻色谱(HPSEC)和动态光散射(DLS)检出。
19.如权利要求1-18中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂中大于95%的所述抗体或抗体片段是单体形式，并且在10mg/ml时,2-8° C下,HPSEC不能检出所述抗体或抗体片段的RSA。
20.如权利要求1-19中任一项所述的制剂，其特征在于，据动态光散射(DLS)测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在5° C的流体力学半径与25° C的没有显著区别。
21.如权利要求1-20中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂适合静脉内给予。
22.如权利要求1-21中任一项所述的制剂，其特征在于，所述水性运载体是水。
23.如权利要求1-22中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂是无热原的。
24.如权利要求1-23中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂还包含防腐剂以延长保存期限。
25.如权利要求1-24中任一项所述的制剂，其特征在于，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述制剂在2-8° C稳定至少2年。
26.如权利要求25所述的制剂，其特征在于，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述制剂的纯度在至少两年内每年下降小于0.5%。
27.如权利要求1-26中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂基本没有组氨酸。
28.如权利要求1-27中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂基本没有任何其他表面活性剂。
29.如权利要求1-28中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂基本没有任何其他糖或多元醇。
30.如权利要求1-29中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂基本没有任何其他盐。
31.如权利要求1-30中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂适合冻干。
32.—种制剂，所述制剂基本由下列组成: a)无菌水； b)20mg/ml特异结合TOGFR-α并且抑制表达H)GFR-a的细胞生长的抗体或抗体片段； c)10% (重量/体积)蔗糖； d)0.05%(重量/体积)聚山梨酯80 (PS80);和 e)50mM乙酸钠缓冲液， 其中，所述制剂的pH是pH5.5。
33.一种制剂，所述制剂基本由下列组成: a)无菌水； b)50mg/ml特异结合TOGFR-α并且抑制表达H)GFR-a的细胞生长的抗体或抗体片段； c)10% (重量/体积)蔗糖； d)0.05%(重量/体积)聚山梨酯80 (PS80);和 e)50mM乙酸钠缓冲液， 其中，所述制剂的pH是pH5.5。
34.如权利要求32或33所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:1的重链多肽。
35.如权利要求32-34中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:2的轻链多肽。
36.如权利要求32-35中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段与重链多肽含SEQ ID NO:1氨基酸序列且轻链多肽含SEQ ID NO: 2氨基酸序列的抗体结合相同的表位。
37.如权利要求32-36中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段包含 有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2 ;和 有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
38.如权利要求32-37中任一项所述的制剂，其特征在于，所述抗体或抗体片段与包含下列结构域的抗体结合相同的表位: 有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2 ;和 有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
39.如权利要求32-38中任一项所述的制剂，其特征在于，据AUC测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在2-8° C的不可逆自体缔合(非RSA)特性与23-27° C的基本相似。
40.如权利要求32-39中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂中所述抗体或抗体片段的RSA在10mg/ml、2-8° C时不能由HPSEC检出。
41.如权利要求32-40中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂中大于95%的所述抗体或抗体片段在2-8° C下是单体形式。
42.如权利要求32-41中任一项所述的制剂，其特征在于，据动态光散射(DLS)所测定，所述制剂中所述抗体或抗体片段在5° C的流体力学半径与25° C的没有显著区别。
43.如权利要求32-42中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂适合静脉内给药。
44.如权利要求32-43中任一项所述的制剂，其特征在于，所述水是无菌水。
45.如权利要求32-44中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂是无热原的。
46.如权利要求32-45中任一项所述的制剂，其特征在于，据ICHQlA指南的长期稳定性研究测定，所述制剂在约2-8° C稳定至少2年。
47.如权利要求46所述的制剂，其特征在于，据高效大小排阻色谱(HPSEC)测定，所述制剂的纯度在至少两年内每年下降小于0.5%。
48.如权利要求32-47中任一项所述的制剂，其特征在于，所述制剂不适合冻干。
49.一种制剂，所述制剂包含: a)水性运载体； b)lmg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段； c)4%-20% (重量/体积)鹿糖； d)0.01%-0.1% (重量/体积)聚山梨酯80 (PS80);和 e)乙酸钠缓冲液， 其中，所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0，并且，在约2_8° C测定的所述制剂中所述抗体或抗体片段的非RSA趋势与在约23-27° C测定的基本相同。
50.一种制剂，所述制剂包含: a)水性运载体； b)lmg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段； c)4%-20% (重量/体积)鹿糖； d)0.01%-0.1%(重量/体积)聚山梨酯80 (PS80);和 e)乙酸钠缓冲液， 其中，所述制剂的PH是pH4.0-pH6.0,并且，所述制剂中大于95%的所述抗体或抗体片段在2-8° C是非自体缔合的单体形式。
51.一种制剂，所述制剂由下列组成: a)水性运载体；b)lmg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段； c)4%-20% (重量/体积)鹿糖； d)0.01%-0.1%(重量/体积)聚山梨酯80 (PS80);和 e)乙酸钠缓冲液， 其中，所述制剂的PH是pH4.0-pH6.0，并且，所述制剂中所述抗体或抗体片段在约2-8° C测定的非RSA趋势与在约23-27° C测定的基本相同。
52.一种制剂，所述制剂由下列组成: a)水性运载体； b)lmg/ml-100mg/ml抗体或抗体片段； c)4%-20% (重量/体积)鹿糖； d)0.01%-0.1%(重量/体积)聚山梨酯80 (PS80);和 e)乙酸钠缓冲液， 其中，所述制剂的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中所述制剂中大于95%的所述抗体或抗体片段在2-8° C是非自体缔合的单体形式。
53.一种消除或降低制剂中抗体的可逆自体缔合(RSA)的方法，所述方法包含: 提供包含抗体或抗体片段的起始制剂，所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA可由HPSEC在i)约2-8° C和/或ii)大于4mg/ml浓度下测出，并且所述起始制剂中抗体或抗体片段包含高分子量形式； 加入蔗糖到所述起始制剂中以提供有约4%-约20%(重量/体积)蔗糖的改变制剂， 其中，当在约2-8° C、在给定浓度比较时，所述改变制剂中抗体或抗体片段的RSA相对于所述起始制剂抗体或抗 体片段的RSA消除或降低。
54.如权利要求53所述的方法，其特征在于，所述方法还包含: 测定所述改变制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径，并将其与所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径进行比较，其中在约2-8° C以给定抗体浓度比较时，所述改变制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径相对于所述起始制剂的流体力学半径消除或降低。
55.如权利要求54所述的方法，其特征在于，所述改变制剂的流体力学半径由DLS测定。
56.如权利要求53-55中任一项所述的方法,其特征在于,所述方法还包含: 使用HPSEC测定所述改变制剂中所述抗体或抗体片段的RSA趋势并将其与所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA趋势进行比较，在约2-8° C以给定抗体浓度比较时，所述改变制剂中所述抗体或抗体片段的RSA趋势相对于所述起始制剂消除或降低。
57.如权利要求53-56中任一项所述的方法,其特征在于,所述方法还包含: 在约2-8° C和约23-27° C测定所述改变的制剂中所述抗体或抗体片段的RSA趋势，并确证所述改变制剂中所述抗体或抗体片段在2-8° C测定的非RSA趋势和23-27° C测定的基本相似。
58.如权利要求57所述的方法，其特征在于，通过AUC分析在约2-8°C和约23-27° C的RSA趋势。
59.如权利要求53-58中任一项所述的方法，其特征在于，所述改变制剂中所述抗体或抗体片段的RSA不能由HPSEC检出。
60.如权利要求53-59中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗体或抗体片段在所述起始制剂和改变制剂中的存在浓度是约lmg/ml -约100mg/ml。
61.如权利要求60所述的方法，其特征在于，所述抗体或抗体片段在所述起始制剂和改变制剂中的存在浓度是约20mg/ml。
62.如权利要求60所述的方法，其特征在于，所述抗体或抗体片段在所述起始制剂和改变制剂中的存在浓度是约50mg/ml。
63.如权利要求60所述的方法，其特征在于，所述抗体或抗体片段在所述改变制剂中的存在浓度是约20mg/ml。
64.如权利要求60所述的方法，其特征在于，所述抗体或抗体片段在所述改变制剂中的存在浓度是约50mg/ml。
65.如权利要求53-64中任一项所述的方法，其特征在于，所述将蔗糖加入所述起始制剂包含加入蔗糖以使改变制剂中蔗糖的终浓度为约10%(w/v)。
66.一种消除或降低制剂中抗体的可逆自体缔合(RSA)的方法，所述方法包含 a)提供包含抗体或抗体片段的起始制剂，其中，在10mg/ml的浓度、约2_8°C用HPSEC可检出所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA ； b)使用一种或多种试验测定所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的生物物理属性； c)将所述起始制剂的蔗糖含量调节至终浓度约4%-约20%(w/v)以生成改变的制剂；和 d)使用一种或多种试验测定所述改变制剂中所述抗体或抗体片段的生物物理属性； 其中，在约2-8° C、在给定浓度比较时，所述改变制剂中抗体或抗体片段的RSA相对于所述起始制剂抗体或抗体片段的RSA消除。
67.如权利要求66所述的方法，其特征在于，步骤(c)进行多于一次。
68.如权利要求67所述的方法，其特征在于，步骤(c)和(d)进行多于一次。
69.如权利要求66-68中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(b)和(d)包含评价相同的生物物理属性。
70.如权利要求69所述的方法，其特征在于，所述生物物理属性是高效大小排阻色谱(HPSEC)测定中指示RSA趋势的特征色谱峰。
71.如权利要求70所述的方法，其特征在于，所述特征色谱峰是所述峰有峰肩。
72.如权利要求66-71中任一项所述的方法，其特征在于，在两个不同温度测评所述生物物理属性。
73.如权利要求66-72中任一项所述的方法，其特征在于，所述生物物理属性是动态光散射测定的所述起始制剂和/或所述改变制剂中抗体或抗体片段的流体力学半径。
74.如权利要求66-73中任一项所述的方法，其特征在于，所述生物物理属性是流体力学半径，并且所述方法包含测定所述改变制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径并将其与所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径进行比较，其中在约2-8° C、给定抗体浓度比较时，所述改变制剂中所述抗体或抗体片段的流体力学半径相对于所述起始制剂的流体力学半径降低。
75.如权利要求74所述的方法，其特征在于，所述改变制剂的流体力学半径由DLS测定。
76.如权利要求66-75中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗体或抗体片段在所述起始制剂和改变制剂中的存在浓度是约lmg/ml -约100mg/ml。
77.如权利要求76所述的方法， 其特征在于，所述抗体或抗体片段在所述起始制剂和改变制剂中的存在浓度是约20mg/ml。
78.如权利要求77所述的方法，其特征在于，所述抗体或抗体片段在所述起始制剂和改变制剂中的存在浓度是约50mg/ml。
79.如权利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗体或抗体片段在所述改变制剂中的存在浓度是约20mg/ml。
80.如权利要求79所述的方法，其特征在于，所述抗体或抗体片段在所述改变制剂中的存在浓度是约50mg/ml。
81.如权利要求66-80中任一项所述的方法，其特征在于，所述调整蔗糖含量包含加入蔗糖以使经改变制剂中蔗糖的终浓度为约10%(w/v)。
82.—种包含如权利要求53-81中任一项所述方法生成的抗体或抗体片段的制剂。
83.一种治疗需要治疗的患者中肿瘤病症的方法，所述方法包含给予所述患者有效量的如权利要求1-52中任一项所述制剂。
84.如权利要求83所述的方法，其特征在于，所述制剂作为治疗方案的一部分与一种或多种其他药剂或治疗方式联合施用。
85.如权利要求83或84所述的方法，其特征在于，所述肿瘤病症是癌症。
86.—种生产包含R SA降低的抗体或抗体片段的制剂的方法，所述方法包含: 生成抗体或抗体片段；和 将所述抗体或抗体片段配制为包含下列组分的制剂: 水性运载体； lmg/ml-100mg/ml所述抗体或抗体片段；4%-20% (重量/体积)鹿糖；0.01%-0.1%(重量/体积)表面活性剂；和 乙酸盐缓冲液， 其中，所述制剂的PH是ρΗ4.0 - ρΗ6.0 ； 其中如下选择用于所述制剂的蔗糖量: 提供包含抗体或抗体片段的起始制剂，其中，在约2-8° C用HPSEC可检出所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA，并且所述起始制剂中所述抗体或抗体片段由高分子量形式组成； 将蔗糖加入所述起始制剂中以提供有4%-20%(重量/体积)蔗糖的改变制剂， 其中，在约2-8° C、给定抗体浓度比较时，所述改变制剂中抗体或抗体片段的RSA相对于所述起始制剂下降。
87.—种生产包含RSA降低的抗体或抗体片段的制剂的方法，所述方法包含: 生成抗体或抗体片段；和 将所述抗体或抗体片段配制成包含下列组分的制剂 水性运载体； lmg/ml-100mg/ml所述抗体或抗体片段； 4%-20% (重量/体积)鹿糖；0.01%-0.1%(重量/体积)表面活性剂；和 乙酸盐缓冲液， 其中，所述制剂的PH是ρΗ4.0 - ρΗ6.0 ；其中如下选择用于所述制剂的蔗糖量: a)提供包含抗体或抗体片段的起始制剂，其中，在10mg/ml的浓度、约2_8°C用HPSEC可检出所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的RSA ； b)使用一种或多种试验测定所述起始制剂中所述抗体或抗体片段的生物物理属性； c)将所述起始制剂的蔗糖含量调节至终浓度约4%-约40%(w/v)生成改变的制剂；和 d)使用一种或多种试验测定所述改变制剂中所述抗体或抗体片段的生物物理属性， 其中，在约2-8° C、在给定浓度比较时，所述改变制剂中抗体或抗体片段的RSA相对于所述起始制剂抗体或抗体片段的RSA下降。
88.如权利要求86或87所述的方法，所述方法包含 生成抗体或抗体片段；和 将所述抗体或抗体片段配制成包含下列组分的制剂 水性运载体； .lmg/ml-100mg/ml所述抗体或抗体片段； .4%-20% (重量/体积)鹿糖； .0.01%-0.1%(重量/体积)表面活性剂；和 乙酸钠缓冲液， 其中，所述制剂的PH是ρΗ4.0 - ρΗ6.0。
全文摘要
本发明涉及包含蔗糖的制剂，和制备所述制剂的方法，其中所述蔗糖含量促进降低或消除所述制剂中抗体的可逆自体缔合(RSA)。本发明也涉及包含抗PDGFR-α抗体或抗体片段的制剂。这种抗体能用于各种治疗方法。本申请还涉及消除或降低制剂中抗体RSA趋势的方法。
文档编号A61K47/08GK103108658SQ201180042125
公开日2013年5月15日 申请日期2011年7月1日 优先权日2010年7月2日
发明者M·N·季米特洛娃, N·莫迪 申请人:米迪缪尼有限公司