抗il-17的抗体的制作方法

专利名称：抗il-17的抗体的制作方法
抗IL-17的抗体相关申请的交叉引用本专利申请要求2010年8月5日提交的美国临时专利申请号61/370，978的优先权，其通过引用并入本文。通过引用并入的以电子形式提交的材料与本文一并提交的计算机可读核苷酸/氨基酸序列表通过整体引用并入本文，所述序列表为2011年8月I日创建的名为“708661_ST25.TXT”的ASCII (TXT)文件，其大小为119，414字节。
背景技术：
白介素-17 (IL-17)是一种由活化的T-细胞分泌的促炎性细胞因子。细胞因子 IL-17 家族包括 IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E (也称为 IL-25)和 IL-17F，以及该家族的原型成员被称为IL-17A (参见，例如，Moseley等，Cytokine Growth FactorRev.,14(2):155-74(2003) )0 IL-17家族的所有成员均具有类似的蛋白结构，其具有对其三维形状发挥关键作用的四个高度保守的半胱氨酸残基，但其与任何其他已知的细胞因子均不具有序列相似性。然而，在猴疱疹病毒的开放阅读框13中发现了 IL-17A的病毒同系物(参见，例如Yao等，Immunity, 3:811 (1995))，其与人IL-17A具有72%的氨基酸残基同一性。已报道了 IL-17家族成员的多种功能，其主要涉及免疫应答的调控。例如，IL-17参与上调粘附分子和诱导多种类型的细胞产生多种炎性细胞因子和趋化因子，所述多种细胞类型包括滑膜细胞、软骨细胞、成纤维细胞、内皮细胞、上皮细胞、角化细胞、和巨噬细胞。而且，IL-17通过诱导趋化因子的释放来诱导中性粒细胞募集至炎症部位，刺激前列腺素和金属蛋白酶产生、以及抑制蛋白多糖合成。IL-17在造血祖细胞的成熟过程中发挥了重要作用，并且IL-17在不同器官和组织中具有信号传导的作用，所述器官和组织包括肺、关节软骨、骨、脑、造血细胞、肾、皮肤和肠(参见，例如Kolls and Linden, Immunity, 21:467-476 (2004)，和 Fossiez 等,Int.Rev.Tmmunol., 16:541 (1998) )。IL-17 还能够诱导金属蛋白酶(MMP)的产生并且使金属蛋白酶组织抑制剂( ΜΡ)下调(参见，例如Jovanovic等，J.Rheumatol.，28:712-718(2001))，以及阻断IL-1和IL-17在体内对炎症和骨破坏具有协同作用(参见，例如 Chabaud 等,Arthritis Rheum., 44:1293-1303 (2001))。IL-17 (即，IL-17A)不适宜的产生或产生增加与多种疾病相关，如气道炎症、哮喘、类风湿性关节炎(RA)、骨关节炎、骨质疏松、骨质侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎性肠病(IBD)、慢性阻塞性肺病(C0PD)、艾 迪生氏病、丙种球蛋缺乏症、过敏性哮喘、斑秃、乳糜泻、查加斯病、原发性肺纤维化、克隆氏病、溃疡性结肠炎、同种异体移植排斥(例如，肾)、牛皮癣关节炎、葡萄膜炎、白塞氏病、某些类型的癌症、血管新生、动脉粥样硬化、多发性硬化症(MS)、系统性红斑狼疮、败血症、脓毒性或内毒素性休克、对过敏原暴露的应答、幽门螺杆菌相关性胃炎、支气管哮喘、强制性脊柱炎、狼疮肾炎、牛皮癣、缺血、系统性硬化症、中风以及其他炎性疾病(参见，例如Witowski等，Cell Mol.Life Sc1.,61:567-579(2004) ；Antonysamy 等，J.1mmunol.，162:577-584(1999)，vanKooten 等，J.Am.Soc.Nephrol.，9:1526-1534(1998) ；Molet 等，J.Allergy Clin.Tmmunol., 108:430-438(2001) ；Teunissen 等,J.1nvest.Dermatol., 111:645-649(1998)；和 Kurasawa 等,Arthritis Rheum., 43:2455-2463(2000))。从上述内容可以看出，IL-17可能是某些炎性或自身免疫性疾病的治疗靶点。出于这个目的，已有研究提出采用与IL-17结合的抗体治疗IL-17介导的疾病和病症(参见，例如国际专利申请公开号W 02006/013107和W02007/117749 ;以及美国专利申请公开号2008/0269467A1和2009/0280131A1 )。此外，通过IL-17特异性抗体或与IL-17结合的可溶性受体阻断IL-17的生物活性，能够在多种动物关节炎模型中减轻炎症和骨侵蚀(参见，例如 Lubberts 等，Arthritis&Rheumatism, 50:650-659 (2004))。但是，由于其在体内的药代动力学性质、稳定性和疗效不理想，导致目前IL-17抗体的治疗应用受到局限。因此，需要一种IL-17结合剂(例如，抗体)，其与IL-17具有较高的结合亲和性，在体内显示出增加的稳定性、改善的药代动力学性质、和有效中和IL-17的活性。本发明即提供了这样一种IL-17结合剂。发明概述本发明提供了一种分离的IL-17结合剂，其包括下述中的一种或两种:(a)免疫球蛋白重链多肽，其包括SEQ ID NO: 1，但其中SEQ ID NO:1的残基32、53和59中的一个或多个被不同残基取代，以及任选地SEQ ID NO:1的残基30、31、35、40、50、52、53、59、62、66、69、75、79、88和97中的一个或多个被不同残基取代，或其包含至少五个氨基酸的片段，以及(b)免疫球蛋白轻链多肽，其包括SEQ ID N0:23，但其中SEQ ID NO:23的残基9、10、11、
13、17、20、21和22中的一个或多个被不同残基取代，或者与SEQ ID NO: 23具有至少85%同一性的氨基酸序列。本发明还提供了一种包含免疫球蛋白重链多肽的分离的IL-17结合剂，所述免疫球蛋白重链多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO: 1，但其中SEQ ID NO:1的残基50被S、A、或I残基取代，以及任选地SEQ ID N0:1的残基31、32、35、40、52、62、66、88、和97中的一个或多个被不同残基取代，或者与SEQ ID NO:1具有至少85%同一性的氨基酸序列。本发明进一步提供了一种包含免疫球蛋白重链多肽的分离的IL-17结合剂，所述免疫球蛋白重链多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO: 1，但其中SEQ ID NO:1的残基104、109、和115中的一个或多个被不同残基取代，以及任选地SEQ ID N0:1的残基100、101、102、106、107、108、和111中的一个或多个被不同残基取代，或者与SEQ ID NO:1具有至少85%同一性的氨基酸序列。本发明提供了一种包含免疫球蛋白重链多肽的分离的IL-17结合剂，所述免疫球蛋白重链多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID N0:78、或SEQ IDNO: 79，或者与所述序列具有至少85%同一性的氨基酸序列。附图简述

图1显示了皮下给予每只小鼠1、3、和IOyg剂量的hIL-17后，KC (CXCLl)随时间变化的曲线。图2显示了给予小鼠hIL-17两小时后，抗IL17抗体(与SEQ ID N0:24与SEQ IDNO:4配对)对血清KC水平的剂量依赖性的抑制。
图3显示了实施例2中描述的HC和LC结合的BIAC0RE A100解离曲线。图4显示了实施例3中描述的人类风湿性关节炎(RA)滑膜成纤维细胞中IL-6释放试验的结果。图5显示了 ELISA的检测结果，ELISA用于检测实施例4中描述的抗IL17a抗体对受体-配体结合的抑制。发明详述本发明提供了一种分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白重链多肽和/或分离的免疫球蛋白轻链多肽，或其片段(例如，免疫原性片段)。“IL-17结合剂”指与细胞因子IL-17特异性结合的分子，尤其是蛋白质分子。优选地，IL-17结合剂是抗体或其片段(例如，免疫原性片段)。如本文所使用的，术语“免疫球蛋白”或“抗体”指在脊椎动物血液或其他体液中发现的蛋白，其被免疫系统用于识别和中和外源性物质，如细菌和病毒。完整的免疫球蛋白通常由四个多肽组成:两个相·同的重链(H)多肽和两个相同的轻链(L)多肽。各重链均含有一个N端可变(Vh)区和三个C端恒定(CH1XH2和CH3)区，并且各轻链均含有一个N端可变(')区和一个C端恒定(CJ区。根据其恒定结构域的氨基酸序列，可以将抗体的轻链分成两种不同类型，即K或λ。在典型的免疫球蛋白中，各轻链与重链通过二硫键连接，并且两条重链之间通过二硫键相互连接。轻链可变区与重链可变区对齐，轻链恒定区与重链第一恒定区对齐。重链其余的恒定区相互对齐。各对轻链和重链的可变区形成抗体的抗原结合位点。V1^P'区具有相同的基本结构，各区域均包含四个框架区，其序列相对保守。框架区通过三个互补决定区(⑶R)相连。三个⑶R，已知为⑶R1XDR2、和⑶R3，形成抗体的“高变区”，其负责与抗原结合。四个框架区(FW或FR)大部分采用β_片层构象，⑶R形成环状连接，在某些情况下包括β_片层构象。轻链和重链的恒定区并不直接涉及抗体与抗原的结合，但是表现出不同的效应器功能，如通过效应器分子和细胞之间的相互作用来参与抗体依赖性细胞毒作用。本发明的IL-17结合剂能够优选地与白介素-17(IL-17或IL-17A)结合。IL-17A是称为IL-17家族的一组细胞因子的重要成员。最初将IL-17A鉴定为啮齿类动物T-细胞杂交瘤的转录产物，在啮齿类动物中被称为CTLA8 (Rouvier等，J.1mmunol.，150(12):5445-5456 (1993) )。IL-17A与被称为IL-17R的I型细胞表面受体结合，IL-17R至少具有三个变体 IL17RA、IL17RB、和 IL17RC (Starnes 等，J.1mmunol.，169(2):642-646(2002))。除了IL-17A 以外，IL-17 家族还包括细胞因子 IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E (也称为 IL-25)、和IL-17F。IL-17家族的所有成员均具有相似的蛋白结构，其具有对其三维结构十分关键的四个高度保守的半胱氨酸残基，但其与任何其他已知的细胞因子均不具有序列相似性。如上文所讨论的，IL-17蛋白家族成员表现出多种免疫调节功能，这主要是由于其能够诱导免疫信号分子。特别地，IL-17表现出能够诱导和介导促炎性应答，其通常与过敏应答相关。IL-17 诱导细胞因子，如 IL-6、G-CSF, GM-CSF, IL-1 β、TGF- β、TNF- α、趋化因子(例如，IL-8、GRO-α、和MCP-1)和前列腺素(例如，PGE2)从多种细胞类型(例如，成纤维细胞、内皮细胞、上皮细胞、角化细胞、和巨噬细胞)产生。细胞因子的释放可引起多种功能，如气道重塑，其是IL-17应答的特征。趋化因子的表达增加吸引包括中性粒细胞在内的其他细胞，但不包括嗜酸性粒细胞。IL-17的功能对⑶4+Τ-细胞亚类也是必须的，⑶4+Τ-细胞亚类被称为T辅助17 (Thl7)细胞的。如此，IL-17蛋白家族与多种免疫和自身免疫相关疾病的病理学相关，包括但不限于，类风湿性关节炎、哮喘、狼疮、同种异体移植排斥、和抗-肿瘤免疫(参见，例如 Aggarwal 等，J.Leukoc.Biol., 71 (I): 1-8(2002))。本发明的IL-17结合剂能够与本文所述的IL-17蛋白家族的任意成员，例如IL-17A和/或IL-17F，结合。在一个优选实施方式中，IL-17结合剂与IL-17A蛋白结合。在另一个实施方式中，IL-17结合剂能够与IL-17A人和/或非人直系同源物结合或交叉反应。本发明的分离的IL-17结合剂包括免疫球蛋白重链多肽，或其中的包含至少五个氨基酸的片段，和/或免疫球蛋白轻链多肽，或其中的包含至少五个氨基酸的片段。在一个实施方式中，分离的IL-17结合剂包括免疫球蛋白重链多肽或免疫球蛋白轻链多肽。在另一个实施方式中，分离的IL-17结合剂包括免疫球蛋白重链多肽和免疫球蛋白轻链多肽。能够与IL-17蛋白家族中的一个或多个成员结合的若干免疫球蛋白重链和轻链的氨基酸序列均为本领域所公知的(参见，国际专利申请公开号W02006/013107和W02007/117749 ；以及美国专利申请公开号2008/0269467A1和2009/0280131A1 )。与IL-17结合的免疫球蛋白重链多肽的一个例子包括SEQ ID NO:1，或与SEQ IDNO:1具有至少85%同一性的氨基酸序列(例如，与其具有至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的同一性)。在本发明中，免疫球蛋白重链多肽包括SEQ ID N0:1，但其中SEQ ID NO:1的一个或多个残基被不同氨基酸残基取代。在这一方面，SEQ ID NO:1中残基32、53、和59中的一个或多个被不同残基取代，并且任选地SEQ ID NO:1中残基30、
31、35、40、50、52、53、59、62、66、69、75、79、88、和 97 中的一个或多个被不同残基取代。SEQID NO:1 中的各氨基酸残基 30、31、35、40、50、52、53、59、62、66、69、75、79、88、和 97 均可以被任意适宜的氨基酸残基取代，其在各位置可以相同或不同。氨基酸的“替换”或“取代”指在给定位置的一个氨基酸或残基被在相同位置的另一个氨基酸或多肽序列内的残基取代。氨基酸可被大致分成“芳香族”或“脂肪族”。芳香族的氨基酸包含芳环。“芳香族”氨基酸的例子包括组氨酸(H或His)、苯丙氨酸(F或Phe)、酪氨酸(Y或Tyr)、和色氨酸(W或Trp)。非芳香族氨基酸可被大致分为“脂肪族”。“脂肪族”氨基酸的例子包括甘氨酸(G或Gly)、丙氨酸(A或Ala)、缬氨酸(V或Val)、亮氨酸(L或Leu)、异亮氨酸(I或He)、甲硫氨酸(M或Met)、丝氨酸(S或Ser)、苏氨酸(T或Thr)、半胱氨酸(C或Cys)、脯氨酸(P或pro)、谷氨酸(E或Glu)、天冬氨酸(A或Asp)、天冬酰胺(N或Asn)、谷氨酰胺(Q或Gin)、赖氨酸(K或Lys)、和精氨酸(R或Arg)。可以将脂肪族氨基酸再分成四个亚组。“大脂肪族非极性亚组”由缬氨酸、亮氨酸、和异亮氨酸组成。“脂肪族微极性亚组”由甲硫氨酸、丝氨酸、苏氨酸、和半胱氨酸组成。“脂肪族极性/带电荷亚组”由谷氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、和精氨酸组成。“小残基亚组”由甘氨酸和丙氨酸组成。可以将带电荷/极性氨基酸组再细分成三个亚组:“正电荷亚组”由赖氨酸和精氨酸组成，“负电荷亚组”由谷氨酸和天冬氨酸组成，以及“极性亚组”由天冬酰胺和谷氨酰胺组成。可以将芳香族氨基酸再分成两亚组:“氮环亚组”由组氨酸和色氨酸组成以及“苯基亚组”由苯丙氨酸和 酪氨酸组成。短语“保守性氨基酸取代”或“保守性突变”指一个氨基酸被与其具有相同性质的另一个氨基酸取代。确定各氨基酸之间共同性质的有效方法为分析同源有机体相应蛋白间氨基酸变化的归一化频率(Schulz, G.E.and R.H.Schirmer, Principles of ProteinStructure, Springer-Verlag, New York (1979))。根据这样的分析,可以将氨基酸的组定义为组内的氨基酸可以优选地互换，因而其对总体蛋白结构的影响彼此最为类似(Schulz，G.E.and R.H.Schirmer,同上)。保守性氨基酸取代的例子包括上述亚组内部的氨基酸取代，例如赖氨酸可换为精氨酸，反之亦然，这样可以保持其带有正电荷；谷氨酸可换为天冬氨酸，反之亦然，这样可以保持其带有负电荷；丝氨酸可换为苏氨酸，这样能够保持其具有游离的-OH ;以及谷氨酰胺可换为天冬酰胺，这样能够保持其具有游离的-nh2。“半保守性突变”包括用属于上文所列同一组但不属于同一亚组的氨基酸进行的氨基酸取代。例如，将天冬氨酸换成天冬酰胺，或将天冬酰胺换成赖氨酸的突变均涉及属于同一组但是不同亚组的氨基 酸。“非保守性突变”涉及不同组之间的氨基酸取代，例如将赖氨酸替换成色氨酸，或将苯丙氨酸替换成丝氨酸等。在一个实施方式中，分离的IL-17结合剂包括免疫球蛋白重链多肽，其包含SEQ IDNO: USSEQ ID NO:1的残基32被H (组氨酸)、S (丝氨酸)、或F (苯丙氨酸)残基取代、SEQID NO:1的残基53被E (谷氨酸)或H (组氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基59被H (组氨酸)残基取代、或前述取代的任意组合。除了上文中讨论的氨基酸取代以外，免疫球蛋白重链多肽任选地可以包含其他氨基酸取代。在一个实施方式中，免疫球蛋白重链多肽包括SEQ ID NO: USSEQ ID NO:1的残基30、31、35、40、50、52、53、59、62、66、69、75、79、88、和97中的一个或多个被不同残基取代。在另一个实施方式中，免疫球蛋白的重链多肽包括SEQ ID N0:USSEQ ID N0:1的残基30被N (天冬酰胺)残基取代、SEQ ID N0:1的残基31被N (天冬酰胺)或D (天冬氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基35被T (苏氨酸)、N (天冬酰胺)、或D (天冬氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基40被T (苏氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基50被A (丙氨酸)、S(丝氨酸)、1 (异亮氨酸)、或G (甘氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基52被N (天冬酰胺)或R (精氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基53被E (谷氨酸)或H (组氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基59被H (组氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基62被G (甘氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基66被V (缬氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基69被I (异亮氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基75被D (天冬氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基79被V (缬氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基88被V (缬氨酸)残基取代、SEQ ID NO:1的残基97被V (缬氨酸)、T (苏氨酸)、L (亮氨酸)、或F (苯丙氨酸)、或前述取代的任意组
八
口 ο示例性的免疫球蛋白重链多肽可以包含下述氨基酸序列中的任意一个:SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3-5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO: 10-20、SEQ ID NO:35-72、SEQ ID NO:76 和 SEQ ID NO:77。本发明还提供了一种分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白重链多肽，所述免疫球蛋白重链多肽含有氨基酸序列SEQ ID NO:1JSSEQ ID NO:1的残基50被不同残基取代，和任选地SEQ ID NO:1中的残基31、32、35、40、52、62、66、88、和97中的一个或多个被不同残基取代。就此而言，SEQ ID N0:1的50、31、32、35、40、52、62、66、88、和97位的氨基酸残基可以被本文所描述的任意适宜的氨基酸残基取代。在一个实施方式中，SEQ ID NO:1的残基50被S、A、或I残基取代。在其他实施方式中，SEQ ID NO:1的残基31被N或D残基取代，SEQ ID NO:1的残基35被N、T、或D残基取代，SEQ ID NO:1的残基40被T残基取代，SEQ ID NO:1的残基52被N或R残基取代，SEQ ID NO:1的残基62被G残基取代，SEQID NO:1的残基66被V残基取代、SEQ ID NO:1的残基88被V残基取代，SEQ ID NO:1的残基97被V、T、L、或F残基取代，或前述取代的任意组合。例如，免疫球蛋白重链多肽可以包括 SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:74、或 SEQ IDNO:75中的任意一个。本发明进一步提供了一种分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白重链多肽，所述免疫球蛋白重链多肽含有氨基酸序列SEQ ID N0:USSEQ ID NO:1的残基104、109、和115中的一个或多个被不同残基取代，和任选地SEQ ID N0:1中的残基100、101、102、106、107、108、和111中的一个或多个被不同残基取代。就此而言，SEQ ID NO:1的100、101、102、104、106、107、108、109、111、和115位的氨基酸残基可以被本文所描述的任意适宜氨基酸残基取代。在一个实施方式中，SEQ ID NO:1的残基104被V残基取代、SEQ ID NO:1的残基109被V残基取代、SEQ ID NO:1的残基115被N或E残基取代、或前述取代的任意组合。在其他实施方式中，SEQ ID NO:1的残基100被H残基取代、SEQ ID NO:1的残基101被H或F残基取代、SEQ ID NO:1的残基102被E残基取代、SEQ ID NO:1的残基106被N残基取代、SEQ ID NO:1的残基107被S残基取代、SEQ ID NO:1的残基108被H或F残基取代、SEQ ID NO:1的残基111被S残基取代、或前述取代的任意组合。例如，免疫球蛋白重链多肽可以包括 SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、或 SEQ ID NO: 73。在另一个实施方式中，IL-17结合剂可以包括免疫球蛋白重链多肽，所述免疫球蛋白重链多肽含有氨基酸序列SEQ ID NO:1JSSEQ ID NO:1中被插入一个或多个氨基酸残基。可以将任意数量的氨基酸残基插入SEQ ID NO:1。优选地，将至少一个氨基酸残基(例如，2个或更多、3个或更多、5个或更多、或者8个或更多的氨基酸残基)，但是少于20个氨基酸残基(例如，18个或更少、15个或更少、12个或更少、或者10个或更少的氨基酸残基)插入SEQ ID NO:1。优选地，将约3至约20个氨基酸残基(例如，约3-5个氨基酸残基、约5-10个氨基酸残基、约10-15个氨基酸残基、或约15-20个氨基酸残基、或者任意两个前述值定义的范围)插入SEQ ID NO:1。在一个优选实施方式中，将不超过8个氨基酸残基插入SEQ ID NO:1。例如，免疫球蛋白重链多肽可以包括SEQ ID NO:78或SEQ ID NO:79。对IL-17具有特异性的免疫球蛋白轻链多肽的一个例子包括SEQ ID NO: 23，或与其具有至少85%同一性的氨基酸序列(例如，与其具有至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的同一性)。在本发明中，分离的IL-17结合剂包括免疫球蛋白轻链多肽，所述免疫球蛋白轻链多肽含有SEQ ID N0:23 JSSEQ ID NO:23残基中的一个或多个被不同的氨基酸残基取代。在这一方面，SEQ ID N0:23的残基9、10、11、13、17、20、21、和22中的一个或多个被不同残基取代。SEQ ID N0:23的氨基酸残基9、10、11、13、17、20、21、和22可以被本文所描述的任意适宜氨基酸残基取代。在一个实施方式中，免疫球蛋白轻链多肽包括SEQ ID N0:23，但SEQ ID N0:23的残基9被Y (酪氨酸)残基取代、SEQ ID N0:23的残基10被R (精氨酸)残基取代、SEQ IDNO: 23的残基11被T (苏氨酸)残基取代、SEQ ID NO: 23的残基13被L (亮氨酸)或I (异亮氨酸)残基取代、SEQ ID NO: 23的残基17被G (甘氨酸)残基取代、SEQ ID NO: 23的残基20被K (赖氨酸)残基取代、SEQ ID NO: 23的残基21被V (缬氨酸)残基取代、SEQ IDNO:23的残基22被D (天冬氨酸)残基取代、或前述取代的任意组合。例如，免疫球蛋白轻链多肽可以包括氨基酸序列 SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO:80、或 SEQ ID NO:81。本发明不限于分离的IL-17结合剂，其包含被本文所述的特定氨基酸残基取代的免疫球蛋白重链多肽或轻链多肽。事实上，SEQ ID NO:1或SEQ ID NO: 23的任意氨基酸残基均可以被不同氨基酸残基，以任意组合取代，或可以将任意数量的氨基酸残基插入SEQ IDNO:1或SEQ ID NO: 23，只要氨基酸取代或插入的结果是使得IL-17结合剂的生物活性增强或改善即可。IL-17结合剂的“生物活性”指，例如与特定IL-17表位的结合亲和性、在体内对IL-17活性的中和作用(例如，IC5(I)、在体内的稳定性(包括但不限于热稳定性和蛋白水解稳定性)、药代动力学性质、IL-17结合剂的免疫原性、和交叉反应性(例如，与非人同源或直系同源的IL-17之间，或与其他蛋白或组织之间)。本领域公知的抗原结合剂的其他生物学性质或特性包括，例如亲和力、选择性、溶解性、折叠、免疫毒性、表达、制剂、和催化活性。可以采用标准技术对上述性质或特性进行观察、测量、和/或评价，所述标准技术包括但不限于，ELISA、竞争性ELISA、BIAC0RE或KINEXA表面等离子共振分析、体外或体内中和试验、受体结合试验、细胞因子或生长因子产生和/或分泌检测、以及信号转导和免疫组化检测。如本文所使用的，术语对IL-17结合剂活性的“抑制”或“中和”指基本上拮抗、抑制、阻止、限制、延缓、破坏、消除、终止、或逆转，例如IL-17生物活性，或与IL-17相关的疾病或病症的进程或严重程度的能力。本发明的分离的IL-17结合剂优选抑制或中和IL-17的活性达至少约20%、约30%、约40%、约50%、约60%、约70%、约80%、约90%、约95%、约100%，或上述值中任意两个所定义的范围。如本文所描述的，本发明的分离的IL-17结合剂可以是完整抗体，或抗体的片段。术语“抗体的片段”、“抗体片段”、或“抗体的功能性片段”在本文中可以互换使用，其是指抗体中保留与抗原特异性结合能力的一个或多个片段(参见，通常，Holliger等，Nat.Biotech.，23(9):1126-1129(2005))。分离的IL-17结合剂可以含有任意IL-17结合抗体片段。抗体片段优选包含例如一个或多个CDR、可变区(或其部分片段)、恒定区(或其部分片段)、或其组合。抗体片段的例子包括，但不限于，(i)Fab片段，其是包含'、VH、Q、和CH1结构域的单价片段；(ii)F(ab’)2片段，其是由两个Fab片段在铰链区通过二硫键连接组成的二价片段；以及(iii) Fv片段，其包含抗体单臂的\和Vh结构域。在本发明的一个实施方式中，分离的IL-17结合剂是抗体或抗体片段，其包含(a)免疫球蛋白重链多肽，所述免疫球蛋白重链多肽含有SEQ ID N0:2-22，或SEQ ID NO:31-79中的任意一个氨基酸序列，或其片段，以及(b)免疫球蛋白轻链多肽，其含有SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:27,SEQ ID NO:28,SEQ ID N0:80、或SEQ ID N0:81的氨基酸序列，或其片段。在分离的IL-17结合剂包含免疫球蛋白重链或轻链多肽的实施方式中，所述片段可 以是任意尺寸，只要片段能结合至IL-17，并能优选地抑制IL-17的活性。在这一方面，免疫球蛋白重链多肽的片段优选包含约5至18个氨基酸(例如，约5、6、
7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、或前述值中任意两个所定义的范围)。类似地，免疫球蛋白轻链多肽的片段拟包含约5至18个氨基酸(例如，约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、或前述值中任意两个所定义的范围)。当IL-17结合剂是抗体或抗体片段时，抗体或抗体片段包含任意合适类型的恒定区(F。)。优选地，抗体或其片段包含基于野生型IgGl、IgG2、或IgG4抗体,或其变体的恒定区。IL-17结合剂还可以是单链抗体片段。单链抗体片段的例子包括，但不限于，(i)单链Fv (scFv)，其是由Fv片段的两个结构域(S卩，'和Vh)组成的单价分子，由其由能够使两个结构域合成一条多肽链的合成连接子连接(参见，例如 Bird 等，Science,242:423-426 (1988) ；Huston 等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 85:5879-5883(1988);以及 Osbourn 等，Nat.Biotechnol.，16:778(1998))和(ii)双抗体，其为多肽链的二聚体，其中各多肽链均包含通过肽连接子连接至'的Vh，肽连接子非常短从而允许Vh与\之间能够在同一多肽链配对，籍此使不同Vh-'多肽链的互补结构域之间配对，以产生具有两个功能性抗原结合位点的二聚体分子。抗体片段是本领域公知的，更加详细的描述参见例如美国专利申请公开号2009/0093024A1。
分离的IL-17结合剂还可以是细胞内抗体或其片段。细胞内抗体是一种在细胞内表达和发挥功能的抗体。细胞内抗体一般缺少二硫键，其能够通过其特异性结合活性来调节靶基因的表达或活性。细胞内抗体包括单结构域片段，例如分离的Vh和\结构域以及ScFvs0细胞内抗体可以包括连接至细胞内抗体N端或C端的亚细胞转运信号，以使其在存在靶蛋白的亚细胞组件中高浓度的表达。通过与靶基因的相互作用，细胞内抗体通过，例如加速靶蛋白降解和在非生理性亚细胞组件中隔离靶蛋白的机制，来调节靶蛋白的功能和/或实现表型/功能敲除。细胞内抗体介导的基因失活的其他机制可以依赖于细胞内抗体导向的表位，如结合至靶蛋白的催化位点，或导向至参与蛋白-蛋白、蛋白-DNA、或蛋白-RNA相互作用的表位。分离的IL-17结合剂可以是，或可以来自人抗体、非人抗体、或嵌合抗体。“嵌合”指包含人和非人区域的抗体或其片段。非人抗体包括分离自任意非人动物，例如啮齿类动物(如，小鼠或大鼠)的抗体。IL-17结合剂的免疫球蛋白重链多肽可以来自人抗体、非人抗体、或嵌合抗体，其不依赖于IL-17结合剂的免疫球蛋白轻链多肽是否来自人抗体、非人抗体、或嵌合抗体。换言之，例如，免疫球蛋白重链多肽可以来自人抗体，免疫球蛋白轻链多肽可以来自非人抗体。或反之，免疫球蛋白重链多肽可以来自非人抗体，免疫球蛋白轻链多肽可以来自人抗体。或者，免疫球蛋白重链多肽可以来自啮齿类动物抗体或其片段，免疫球蛋白轻链多肽可以来自人抗体或其片段。这一方案可能是有用的，例如用于将抗体人源化。在另一个实施方式中，免疫球蛋白重链多肽和免疫球蛋白轻链多肽均来自人抗体或非人抗体。或者，免疫球蛋白重链多肽和免疫球蛋白轻链多肽均是嵌合抗体。可以通过任意方法获得人抗体、非人抗体、或嵌合抗体，包括通过体外来源(例如，产生重组抗体的杂交瘤或细胞系)和体内来源(例如，啮齿类动物)。产生抗体的方法是本领域所公知的，其描述参见例如K6hler and Milstein, Eur.J.1mmunol.，5:511-519 (1976) ；Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A LaboratoryManual, CSH Press (1988)；和 C.A.Janeway 等(eds.), Immunobiology, 5th Ed., GarlandPublishing, New York, NY(2001))。在某些实施方式中，可以使用转基因动物(例如，小鼠)生产人抗体或嵌合抗体，其一个或多个内源性的免疫球蛋白基因被一个或多个人免疫球蛋白基因所取代。内源性抗体基因被人抗体基因有效取代的转基因小鼠的例子，包括但不限于，HUMAB-MOUSE 、Kirin TC MOUSE 、以及KM-M0USE (参见，例如 Lonberg, Nat.Biotechnol., 23 (9): 1117-25 (2005),和 Lonberg, Handb.Exp.Pharmacol., 181:69-97(2008))。在本发明的另一个实施方式中，分离的IL-17结合剂可以部分是“替代支架(alternative scaffold) ”或其片段。“替代支架”指非抗体多肽或多肽结构域，其对目标抗原表现出与抗体类似的亲和性和特异性。示例性的替代支架包括如来自纤连蛋白(例如，Adnectins)、脂质运载蛋白(例如,Anticalin)、Kunitz结构域、硫氧还蛋白(例如，肽适体)、蛋白A(例如，AFFIB0DY 分子)、锚蛋白重复(例如，DARPins)、γ-β-晶状体蛋白或泛素(例如，AFFLIN 分子)、CTLD3 (例如，四连接素)以及多价复合物(例如，ATRMER 分子或SMP 分子)的β-夹层结构域。替代支架的描述参见,例如Binz等，Nat.Biotechnol.，23:1257-1268(2005) ; Skerra, Curr.0pin.Biotech.，18:295-304(2007);和美国专利申请公开号2009/0181855A1。在一个实施方式中，替代支架可以是AVMER 分子。AVMER 分子是一类人类来源的与抗体和抗体片段无关的治疗蛋白，其由若干模块和可重复利用的结构域组成，所述结构域被称为A-结构域(也称为·A类模块、互补类型重复、或LDL-受体A类结构域)。通过体外外显子改组(exon shuffling)和曬菌体展示可从人细胞外受体结构域中开发得到 AVIMER 分子(SiIverman 等,Nat.Biotechnol., 23:1493-94(2005)，和 Silverman等，Nat.Biotechnol.，24:220(2006) )。AVMER 分子可以包含多个独立的结合结构域，其相对于单一表位的结合蛋白可以表现出改善的亲和性(低于纳摩的某些情况下)和特异性(参见，例如美国专利申请公开号 2005/0221384A1 ；2005/0164301Α1 ；2005/0053973Α1 ；2005/0089932A1 ；2005/0048512Α1 ;和 2004/0175756A1 )。已知的 217 个人 A-结构域均包含约35个氨基酸(约4kDa)。主要在钙结合和二硫键形成的介导下，天然A-结构域迅速和有效地折叠形成均一、稳定的结构。仅有12个氨基酸的保守支架基序是该共有结构所必需的。AVMER 分子包含多个A-结构域，通过长度平均为五个氨基酸的连接子将其彼此间隔开。最终结果是单蛋白链含有的多个结构域均分别具有独立的功能。AVMER 分子的各结构域分别独立地与抗原结合，并且各结构域的作用是可累加的。本发明的分离的IL-17结合剂可以插入其他分子(例如，多肽)，以产生与目标抗原结合的新分子。在这一点上，本发明包括一种生产与IL-17结合的多肽的方法，该方法包括将IL-17结合剂插入至不同多肽。可以采用本领域公知的常规分子生物学技术生产此类新抗原-结合分子。例如，将IL-17结合剂，或编码IL-17结合剂的核酸序列插入不同分子(例如，多肽或多核苷酸)以产生与IL-17结合的重组分子。在一个实施方式中，采用蛋白化学或重组DNA技术，可以将本文所描述的免疫球蛋白重链多肽和/或免疫球蛋白轻链多肽的⑶R (例如，⑶R1、⑶R2、或⑶R3)或可变区移植入(即，嫁接到)另一个分子，如抗体或非抗体多肽。在这一点上，本发明提供了一种分离的IL-17结合剂，其包含本文所述的免疫球蛋白重链和/或轻链的至少一个CDR。分离的IL-17结合剂可以包括如本文所描述的免疫球蛋白重链和/或轻链多肽可变区的一个、两个、或三个CDR。在这一点上，本文所述的免疫球蛋白重链多肽的CDRl位于SEQ ID NO:2-22和SEQ ID NO:31-79内的氨基酸残基25至35之间(包含在内)。本文所述的免疫球蛋白重链多肽的⑶R2位于SEQ ID N0:2-22和SEQ IDNO: 31-79内的氨基酸残基50-67之间(包含在内)。本文所述的免疫球蛋白重链多肽的⑶R3位于SEQ ID N0:2-22和SEQ ID NO:31-79内的氨基酸残基99至102之间(包含在内)。本文所述的各免疫球蛋白轻链多肽CDR的位置列于表I。表I
权利要求
1.一种分离的IL-17结合剂，其包括下述中的一种或两种: (a)免疫球蛋白重链多肽，其包括SEQID N0:1，但其中SEQ ID NO:1的残基32、53和59中的一个或多个被不同残基取代，以及任选地SEQ ID N0:1的残基30、31、35、40、50、52、53、59、62、66、69、75、79、88和97中的一个或多个被不同残基取代，或者与SEQ ID NO:1具有至少85%同一性的氨基酸序列，以及 (b)免疫球蛋白轻链多肽，其包括SEQID NO:23，但其中SEQ ID NO:23的残基9、10、11、13、17、20、21、和22中的一个或多个被不同残基取代，或者与SEQ ID NO:23具有至少85%同一'丨生的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的分离的IL-17结合剂，其包括所述免疫球蛋白重链多肽或所述免疫球蛋白轻链多肽。
3.根据权利要求1所述的分离的IL-17结合剂，其包括所述免疫球蛋白重链多肽和所述免疫球蛋白轻链多肽。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白重链多肽，其中: (a)SEQ ID NO:1的残基32被H、S、或F残基取代， (b)SEQID ΝΟ:1的残基53被E或H残基取代， (C)SEQ ID NO:1的残基59被H残基取代，或者 (d) (a)、(b)和(C)的任意组合。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的分离的IL-17结合剂，其中免疫球蛋白重链多肽包括 SEQ ID NO:2。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的分离的IL-17结合剂，其中SEQID NO:1的残基30、31、35、40、50、52、53、59、62、66、69、75、79、88 和 97 中的一个或多个被不同残基取代。
7.根据权利要求6所述的分离的IL-17结合剂，其中: (a)SEQ ID NO:1的残基30被N残基取代， (b)SEQ ID NO:1的残基31被N或D残基取代， (c)SEQID NO:1的残基35被T、N或D残基取代， (d)SEQ ID NO:1的残基40被T残基取代， (e)SEQ ID NO:1的残基50被A、S、I或G残基取代， (f)SEQ ID NO:1的残基52被N或R残基取代， (g)SEQID ΝΟ:1的残基53被E或H残基取代， (h)SEQID NO:1的残基59被H残基取代， (i)SEQID NO:1的残基62被G残基取代， (j) SEQ ID NO:1的残基66被V残基取代， (k)SEQ ID NO:1的残基69被I残基取代， (I)SEQ ID NO:1的残基75被D残基取代， (m) SEQ ID NO:1的残基79被V残基取代， (n) SEQ ID NO:1的残基88被V残基取代， (O)SEQ ID NO:1的残基97被V、T、L或F残基取代，或者 (P) (a)至(O)的任意组合。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的分离的IL-17结合剂，其中所述免疫球蛋白重链多肽包括SEQ ID NO:3-5,SEQ ID NO: 7,SEQ ID NO:8,SEQ ID NO: 10-20,SEQ ID NO:35-72,SEQ ID NO:76、或 SEQ ID NO:77 中的任意一个。
9.根据权利要求1-8任意一项所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白轻链多肽，其中: (a)SEQ ID NO:23的残基9被Y残基取代， (b)SEQID NO: 23的残基10被R残基取代， (C)SEQ ID NO:23的残基11被T残基取代， (d)SEQ ID NO:23的残基13被L或I残基取代， (e)SEQ ID NO: 23的残基17被G残基取代， (f)SEQ ID NO: 23的残基20被K残基取代， (g)SEQID NO: 23的残基21被V残基取代， (h)SEQID NO: 23的残基22被D残基取代，或者 (i)(a)至(i)的任意组合。
10.根据权利要求9所述的分离的IL-17结合剂，其中所述免疫球蛋白轻链多肽包括SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:80或 SEQ ID NO:81。
11.根据权利要求1-8任意一项所述的分离的IL-17结合剂，其中所述免疫球蛋白轻链多肽包括与SEQ ID NO:23具有至少90%同一性的氨基酸序列。
12.根据权利要求11所述的分离的IL-17结合剂，其中所述免疫球蛋白轻链多肽包括与SEQ ID NO:23具有至少95%同一性的氨基酸序列。
13.根据权利要求1-12任意一项所述的分离的IL-17结合剂，其是抗体、抗体偶联物或其抗原结合片段。
14.根据权利要求13所述的分离的IL-17结合剂，其是选自F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv、scFv、dsFv、dAb和单链结合多肽的抗体片段。
15.根据权利要求13或权利要求14所述的分离的IL-17结合剂，其为人抗体、非人抗体、或嵌合抗体。
16.根据权利要求1-15任意一项所述的分离的IL17-结合剂，其包括免疫球蛋白重链可变区的至少一个互补决定区(⑶R)，所述免疫球蛋白重链可变区包括SEQ ID NO:2-5,SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10-20、SEQ ID NO:35-72、SEQ ID NO:76 或 SEQ IDNO:77中的任意一个。
17.根据权利要求16所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白重链可变区的一个CDR,所述免疫球蛋白重链可变区包括SEQ ID NO:2-5, SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO: 10-20、SEQ ID NO: 35-72、SEQ ID NO:76 或 SEQ ID NO:77 中的任意一个。
18.根据权利要求16所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白重链可变区的两个CDR,所述免疫球蛋白重链可变区包括SEQ ID NO:2-5, SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO: 10-20、SEQ ID NO: 35-72、SEQ ID NO:76 或 SEQ ID NO:77 中的任意一个。
19.根据权利要求16所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白重链可变区的三个CDR,所述免疫球蛋白重链可变区包括SEQ ID NO:2-5, SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO: 10-20、SEQ ID NO: 35-72、SEQ ID NO:76 或 SEQ ID NO:77 中的任意一个。
20.根据权利要求1-19任意一项所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白轻链可变区的至少一个CDR，所述免疫球蛋白轻链可变区包括SEQ ID NO:24-28, SEQ ID NO:80或SEQ ID NO:81中的任意一个。
21.根据权利要求20所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白轻链可变区的一个CDR,所述免疫球蛋白轻链可变区包括SEQ ID NO: 24-28、SEQ ID NO: 80或SEQ ID NO: 81中的任意一个。
22.根据权利要求20所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白轻链可变区的两个CDR,所述免疫球蛋白轻链可变区包括SEQ ID NO: 24-28、SEQ ID NO: 80或SEQ ID NO: 81中的任意一个。
23.根据权利要求20所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白轻链可变区的三个CDR,所述免疫球蛋白轻链可变区包括SEQ ID NO: 24-28、SEQ ID NO: 80或SEQ ID NO: 81中的任意一个。
24.一种包含免疫球蛋白重链多肽的分离的IL-17结合剂，所述免疫球蛋白重链多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO: 1，但其中SEQ ID NO:1的残基50被S、A或I残基取代，以及任选地SEQ ID ΝΟ:1的残基31、32、35、40、52、62、66、88和97中的一个或多个被不同残基取代，或者与SEQ ID NO:1具有至少85%同一性的氨基酸序列。
25.根据权利要求24所述的分离的IL-17结合剂，其中SEQID NO:1的残基31、32、35、40、52、62、66、88和97中的一个或多个被不同残基取代。
26.根据权利要求25所述的分 离的IL-17结合剂，其中: (a)SEQ ID NO:1的残基31被N或D残基取代， (b)SEQ ID NO:1的残基35被N、T或D残基取代， (c)SEQ ID NO:1的残基40被T残基取代， (d)SEQ ID NO:1的残基52被N或R残基取代， (e)SEQ ID NO:1的残基62被G残基取代， (f)SEQ ID NO:1的残基66被V残基取代， (g)SEQID NO:1的残基88被V残基取代， (h)SEQ ID NO:1的残基97被V、T、L或F残基取代，或者 (i)(a)至(h)的任意组合。
27.根据权利要求25或权利要求26所述的分离的IL-17结合剂，其中所述免疫球蛋白重链多肽包含 SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:74、或SEQ ID NO:75。
28.根据权利要求24-27任意一项所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白重链可变区的至少一个互补决定区(⑶R)，所述免疫球蛋白重链可变区包括SEQ ID NO:6、SEQID NO:9, SEQ ID NO:31, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:74、或 SEQ ID NO:75 中的任意一个。
29.一种包含免疫球蛋白重链多肽的分离的IL-17结合剂，所述免疫球蛋白重链多肽包括氨基酸序列SEQ ID NO: 1，但其中SEQ ID NO:1的残基104、109和115中的一个或多个被不同残基取代，以及任选地SEQ ID ΝΟ:1的残基100、101、102、106、107、108和111中的一个或多个被不同残基取代，或者与SEQ ID NO:1具有至少85%同一性的氨基酸序列。
30.根据权利要求29所述的分离的IL-17结合剂，其中: (a)SEQ ID NO:1的残基104被V残基取代， (b)SEQ ID NO:1的残基109被V残基取代， (C)SEQ ID NO:1的残基115被N或E残基取代，或者 (d) (a)、(b)、和(C)的任意组合。
31.根据权利要求29或权利要求30所述的分离的IL-17结合剂，其中SEQID ΝΟ:1的残基100、101、102、106、107、108和111中的一个或多个被不同残基取代。
32.根据权利要求31所述的分离的IL-17结合剂，其中:(a)SEQ ID NO:1的残基100被H残基取代， (b)SEQ ID NO:1的残基101被H或F残基取代， (c)SEQ ID NO:1的残基102被E残基取代， (d)SEQ ID NO:1的残基106被N残基取代， (e)SEQ ID NO:1的残基107被S残基取代， (f)SEQ ID NO:1的残基108被H或F残基取代， (g)SEQID NO:1的残基111被S残基取代，或者 (h)(a)至(g)的任意组合。
33.根据权利要求29-32中任意一项所述的分离的IL-17结合剂，其中所述免疫球蛋白重链多肽包括 SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22 或 SEQ ID NO:73。
34.根据权利要求29-33任意一项所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白重链可变区的至少一个互补决定区(⑶R)，所述免疫球蛋白重链可变区包括SEQ ID NO: 21, SEQID NO:22 或 SEQ ID NO:73 中的任意一个。
35.根据权利要求1、24或29任意一项所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白重链多肽，所述免疫球蛋白重链多肽包含与SEQ ID NO:1具有至少90%同一性的氨基酸序列。
36.根据权利要求35所述的分离的IL-17结合剂，其包括免疫球蛋白重链多肽，所述免疫球蛋白重链多肽包含与SEQ ID NO:1具有至少95%同一性的氨基酸序列。
37.一种包含免疫球蛋白重链多肽的分离的IL-17结合剂，所述免疫球蛋白重链多肽包括氨基酸序列 SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:78 或 SEQ ID NO:79，或者与所述氨基酸序列具有至少85%同一性的氨基酸序列。
38.根据权利要求24-37任意一项所述的分离的IL17-结合剂，其进一步包括免疫球蛋白轻链多肽，所述免疫球蛋白轻链多肽包含SEQ ID NO:23肽，但其中SEQ ID NO:23的残基9、10、11、13、17、20、21和22中的一个或多个被不同残基取代，或者与SEQ ID NO:23具有至少85%同一'丨生的氨基酸序列。
39.一种载体，其包含核酸序列，所述核酸序列编码权利要求1-38任意一项所述的分离的IL-17结合剂。
40.一种分离的细胞，其包含如权利要求39所述的载体。
41.一种组合物，其包含如权利要求1-38任意一项所述的分离的IL-17结合剂或如权利要求39所述的载体以及药学上可接受的载体。
42.一种在哺乳动物中治疗IL-17介导的疾病的方法，所述方法包括向患有IL-17介导的疾病的哺乳动物给予如权利要求41所述的组合物，籍此在哺乳动物中治疗IL-17介导的疾病。
43.一种在哺乳动物中预防IL-17介导的疾病的方法，该方法包括向易患IL-17介导的疾病的哺乳动物给予如权利要求41所述的组合物，籍此在哺乳动物中预防IL-17介导的疾病。
44.一种在哺乳动物中诊断IL-17介导的疾病的方法，该方法包括向疑似患有IL-17介导的疾病的哺乳动物给予如权利要求41所述的组合物，籍此通过检测IL-17结合剂与IL-17的结合，来指示哺乳动物患有IL-17介导的疾病。
45.根据权利要求42-44任意一项所述的方法,其中所述IL-17介导的疾病选自气道炎症、哮喘、类风湿性关节炎(RA)、骨关节炎、骨质疏松、骨质侵蚀、腹膜内脓肿和粘连、炎性肠病(IBD)、慢性阻塞性肺病(COPD)、艾迪生氏病、丙种球蛋白缺乏症、过敏性哮喘、斑秃、乳糜泻、查加斯病、特发性肺纤维化、克隆氏病、溃疡性结肠炎、同种异体移植排斥(例如，肾)、牛皮癣关节炎、葡萄膜炎、白塞氏病、某些类型的癌症、血管新生、动脉粥样硬化、多发性硬化症(MS )、系统性红斑狼疮、败血症、脓毒性或内毒素性休克、对过敏原暴露的应答、幽门螺杆菌相关性胃炎、支 气管哮喘、强直性脊柱炎、狼疮肾炎、牛皮癣、缺血、系统性硬化症和中风。
46.根据权利要求42-45任意一项所述的方法，其中IL-17结合剂在哺乳动物中的半衰期为5至28天。
47.根据权利要求42-46任意一项所述的方法，其中与IL-17结合的IL-17结合剂的KD小于或等于I纳摩尔。
48.根据权利要求47所述的方法，其中与IL-17结合的IL-17结合剂的KD小于或等于200皮摩尔。
全文摘要
本发明涉及一种分离的IL-17结合剂，其包括包含SEQ ID NO:1的免疫球蛋白重链多肽，以及任选地包含SEQ ID NO:23的免疫球蛋白轻链多肽，但SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:23的一个或多个特定残基被不同残基取代。本发明还包括使用IL-17结合剂治疗IL-17介导的疾病的载体、组合物和方法。
文档编号A61K39/395GK103154026SQ201180048098
公开日2013年6月12日 申请日期2011年8月2日 优先权日2010年8月5日
发明者R·霍里克, D·金, P·鲍尔斯, J·道尔顿, B·吴, T·罗伯茨, X·张, L·阿尔托贝尔三世 申请人:安奈普泰斯生物有限公司