专利名称：子宫内膜异位症的预防和/或改善剂以及含有其的饮食品组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及子宫内膜异位症的预防和/或改善剂。特别是涉及含有特定乳酸菌而成的子宫内膜异位症的预防和/或改善剂、以及含有该乳酸菌而成的饮食品组合物。
背景技术：
子宫内膜异位症是在月经时剥落的子宫内膜或与其类似的组织逆流过输卵管、在子宫外的腹腔内进行增殖的疾病，推测处于生殖期的女性中的6 10%患有该病，是极重要的妇科疾病之一。其发病机制虽有很多不清楚的地方，但通过众多报告已经清楚腹腔内的免疫监测系统的异常为其原因。通常，巨噬细胞、NK细胞等免疫活性细胞对流入腹腔内的子宫内膜组织进行排除。但是认为，当由于某种原因，这些免疫活性细胞的功能降低时，子宫内膜组织在腹腔内存活并生长。特别是有报告指出NK活性的降低与其严重程度显著相关(非专利文献I)。这种发现启示了所谓的由于腹腔中的NK细胞对异位性子宫内膜细胞的除去功能的降低与子宫内膜异位症的发病及发展有关的NK细胞说。另一方面，子宫内膜异位症多伴有疼痛，明显损害QOL (Quality of Life ;生活质量)。一般来说，在月经期为了缓和疼痛而使用非留体抗炎药(NSAIDs)。但是已知，NSAIDs由于所谓的抑制环氧化酶而抑制由花生四烯酸产生具有粘膜保护功能的前列腺素的药理学性质，因此诱发腐蚀性病变或溃疡等肠胃障碍。进而，在使用达那唑或促性腺激素释放激素激动剂等的子宫内膜异位症治疗法中，还观察到激素性的副作用。因此，在各个领域中对促进NK细胞活化的物质进行了探索。在此之前作为具有某种程度效果而已知的例子，有多糖(香菇多糖、甲壳素、壳聚糖、灰树花D馏分、nigero-低聚糖等)、菌体等。但是，关于子宫内 膜异位症的研究均不充分。另一方面，IL-12是具有活化Thl细胞或NK细胞等作用的细胞因子，有报告指出其具有异位性子宫内膜细胞的生长抑制效果(非专利文献2)。现有技术文献非专利文献非专利文献1: Oosterlynck DJ, Meuleman C，Waer M, Vandeputte M, and KoninckxPR，The natural killer activity of peritoneal fluid lymphocytes is decreased inwomen with endometriosis.Fertil.Steril., 58, 290-295 (1992).
非专利文献2: Somigliana Ej Vigano P，Rossi Gj Carinelli Sj VignaliM，and Panina-Bordignon P.Endometrial ability to implant in ectopic sitescan be prevented by interleukin-12in a murine model of endometriosis.Hum.Reprod.，14，2944-2950 (1999)
发明内容
发明欲解决的课题
但是，对于上述用于促进NK细胞活化的化合物、进而可诱导用于活化NK细胞的IL-12产生的化合物等，并未充分地研究它们与子宫内膜异位症的发病的相关性。因此，本发明的目的在于提供基于增强NK活性的子宫内膜异位症的预防和/或改善剂。另外，本发明的目的还在于提供含有该乳酸菌的子宫内膜异位症的预防和/或改善用饮食品组合物。进而，本发明的目的还在于提供预防和/或改善子宫内膜异位症的方法。特别是，本发明的目的还在于提供可经口摄取且无副作用、可获得高安全性和疼痛效果的子宫内膜异位症的预防和/或改善剂等。用于解决课题的手段本发明人等之前也研究了益生菌乳酸菌对IL-12的诱导性。特别是，对于具有促进IL-12产生、增强NK细胞的细胞毒性的作用的乳酸菌对子宫内膜异位症显示改善效果的可能性进行了各种研究。鉴于上述以往问题点，本发明人等进行了深入研究。结果发现，某种乳酸菌、特别是乳杆菌(Lactobacillus)属乳酸菌具有优异的子宫内膜异位症病变部位的生长抑制效果，从而完成了本发明。此外，当使子宫内膜异位症患者、特别是抱怨降低QOL的主要原因的骨盆痛的患者摄取乳杆菌属乳酸菌时，可见该乳酸菌对于子宫内膜异位症、特别是月经痉挛及痛经的改善效果。如此，本发明人等发现了乳酸菌对子宫内膜异位症患者的QOL提高有效，从而完成了本发明。S卩，本发明的一个方式为含有乳酸菌而成的子宫内膜异位症的预防和/或改善剂。该子宫内膜异位症的预防和/或改善剂所含的乳酸菌并无任何限定，优选为乳杆菌属(Lactobacillus),更·优选为格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri),特别地最优选为格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809 株。另外，本发明的另一个方式为含有有效量的乳酸菌而成的子宫内膜异位症的预防和/或改善用饮食品组合物。在该子宫内膜异位症的预防和/或改善用饮食品组合物中，乳酸菌并无任何限定，优选为乳杆菌属，更优选为格氏乳杆菌，特别地最优选为格氏乳杆菌0LL2809株。其中，所述饮食品组合物优选为发酵乳饮食品，另外优选酸奶、酸奶饮料等酸奶饮食品，但并非限定于这些。另外，本发明的再一个方式为子宫内膜异位症的预防和/或改善方法，其特征在于，给予期望量的含有有效量乳酸菌的组合物。该子宫内膜异位症的预防和/或改善方法中，乳酸菌优选为乳杆菌属，更优选为格氏乳杆菌，特别地最优选为格氏乳杆菌0LL2809株。另外，所述子宫内膜异位症的预防和/或改善方法中，所述给予量优选为至少2mg/kg/日，但并非限定于此。或者，本发明涉及以下的(I) (19)。(I) 一种用于对子宫内膜异位症进行预防和改善这两者或任一者的药剂，其是含有乳酸菌而成的。(2)上述(I)所述的药剂，其中，所述乳酸菌为乳杆菌属(Lactobacillus)。
(3)上述(I)所述的药剂，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)。(4)上述(I)所述的药剂，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri) 0LL2809 株。(5)—种用于对子宫内膜异位症进行预防和改善这两者或任一者的饮食品组合物，其是含有有效量的乳酸菌而成的。(6)上述(5)所述的饮食品组合物，其中，所述乳酸菌为乳杆菌属(Lactobaci IIus)。(7)上述(5)所述的饮食品组合物，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)。(8)上述(5)所述的饮食品组合物，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809 株。
(9)上述(8)所述的饮食品组合物，其特征在于，饮食品组合物为发酵乳饮食品。(10)上述(9)所述的饮食品组合物，其特征在于，发酵乳饮食品为酸奶。(11) 一种用于对子宫内膜异位症进行预防及改善这两者或任一者的方法，其特征在于，给予期望量的含有有效量乳酸菌的组合物。(12)上述(11)所述的方法，其中，所述乳酸菌为乳杆菌属(Lactobacillus)。(13)上述(11)所述的方法，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)。(14)上述(11)所述的方法，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri) 0LL2809 株。(15)上述(11) (14)中任一项所述的方法，其中，所述给予量为至少2mg/kg/日。(16) —种用于对子宫内膜异位症进行预防及改善这两者或任一者的乳酸菌。(17)上述(16)所述的乳酸菌,其中,所述乳酸菌为乳杆菌属(Lactobacillus)。(18)上述(16)所述的乳酸菌，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)。(19)上述(16)所述的乳酸菌，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri) 0LL2809 株。或者，本发明涉及以下的(101) (112)。(101) —种子宫内膜异位症预防及治疗剂，其含有乳酸菌而成。(102)上述(101)所述的子宫内膜异位症预防及治疗剂，其中，所述乳酸菌为乳杆菌属(Lactobacillus)。(103)上述(101)所述的子宫内膜异位症预防及治疗剂，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809 株。(104)—种子宫内膜异位症预防及治疗用饮食品组合物，其是含有有效量的乳酸菌而成的。(105)上述(104)所述的子宫内膜异位症预防治疗组合物，其中，所述乳酸菌为乳杆菌属(Lactobacillus)。(106)上述(105)所述的子宫内膜异位症预防及治疗用饮食品组合物，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809株。(107)上述(106)所述的子宫内膜异位症预防及治疗用饮食品组合物，其中，饮食品组合物为发酵乳饮食品。(108)上述(107)所述的子宫内膜异位症预防及治疗用饮食品组合物，其中，发酵乳饮食品为酸奶、酸奶饮料等酸奶饮食品。(109) —种子宫内膜异位症预防及治疗方法，其特征在于，给予期望量的含有有效量乳酸菌的组合物。(110)上述(109)所述的子宫内膜异位症预防及治疗方法，其中，所述乳酸菌为乳杆菌属(Lactobacillus)。(111)上述(109 )所述的子宫内膜异位症预防及治疗方法，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809。(112)上述(109) (111)中任一项所述的子宫内膜异位症预防及治疗方法，其中，所述给予量为至少2mg/kg/日。发明效果通过本发明，提供了含有某种乳酸菌、特别是乳杆菌属乳酸菌而成的子宫内膜异位症的预防和/或改善剂。本发明的乳杆菌属乳酸菌以增强NK活性为特征，通过提高自身的免疫力，对子宫内膜异位 症、特别是对月经痉挛及痛经显示了之前所没有的强大改善效果。因此，可以将乳杆菌属乳酸菌用于这些疾病的预防和/或改善。本发明的子宫内膜异位症的预防和/或改善剂对于子宫内膜异位症患者的QOL提高是有效的。另外，本发明的子宫内膜异位症的预防和/或改善剂可通过经口摄取而简便地摄取。另外，使用激素药等进行预防或改善时有时会伴有副作用，而本发明没有这种担心。此外安全性高，为可作为食品看待的程度。如此，本发明的预防和/或改善剂的患者摄取障碍低，不会对生活造成负担地使子宫内膜异位症的预防和/或改善变得可能。另外，由于具备这种特性，因此可以容易地将其制成饮食品组合物，可以进一步促进简便摄取。另外，本发明的子宫内膜异位症的预防和/或改善剂由于具有对其他未见类似的、该疾病所特有的疼痛的减轻效果，因此特别是对提高子宫内膜异位症患者的QOL是有效的。
图1为比较对子宫内膜异位症模型小鼠给予0LL2809等之后的子宫内膜异位症病变部位的重量(图1 (A))及大小(图1 (B))的图表。a-c:不同符号之间具有显著性差异(Ρ〈0.05)。图2为表示存在于腹腔洗涤液中的腹腔细胞内的IL-2 (图2 (A))及Ncrl基因(图2 (B))的亢进的图表。a、b:不同符号之间具有显著性差异(Ρ〈0.05)。图3为利用视觉模拟评分法评价的月经期疼痛的时间进程的图表。*、**:分别为Ρ〈0.05,0.01。图4为利用视觉模拟评分法评价的月经期疼痛在摄取前后的变化量的图表。**:Ρ〈0.01。图5为表不月经期的痛经评分的时间进程的图表。*:Ρ〈0.05。
图6为表示月经时的痛经评分在摄取前后的变化量的图表。(*):P<0.1。
具体实施例方式以下详细地说明本发明，但本发明并非限定于以下所述的各个方式。本发明提供含有乳酸菌的子宫内膜异位症的预防和/或改善剂(以下称作“本发明的预防/改善剂”)。本发明的预防/改善剂还可如下表述。.含有乳酸菌的子宫内膜异位症的预防和/或改善用医药组合物.含有乳酸菌的子宫内膜异位症的病变部位的生长抑制剂.含有乳酸菌的子宫内膜异位症的病变部位的生长抑制用医药组合物本说明书中，“预防和/或改善”还可表述为“预防及改善这两者或任一者”。因此，本发明的“预防和/或改善”包含:.预防及改善.预防.改善另外，本说 明书中，“改善”也可表述为“治疗”。本发明的预防/改善剂含有乳酸菌作为其活性成分。乳酸菌只要具有高的IL-12产生诱导能力，则种类并无关系。乳酸菌到目前为止被分类为乳球菌(Lactococcus )属、乳杆菌(Lactobacillus)属、明串珠菌(Leuconostoc)属、小球菌(Pediococcus)属、链球菌(Streptococcus)属、Wissella 属、四联球菌(Tetragenococcus)属、酒球菌(Oenococcus)属、肠球菌(Enterococcus)属、漫游球菌(Vagococcus)属、肉杆菌(Carnobacterium)属等超过30个属。本发明的预防/改善剂中可以使用这些乳酸菌。优选可举出乳杆菌(LactobaciIIus)属乳酸菌、更优选可举出格氏乳杆菌(LactobaciIIus gasseri )、特别优选可举出格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809株(保藏编号:NITE BP-72)，但并非限定于这些。另外，还可组合使用种类不同的2种以上的乳酸菌。本发明人等将格氏乳杆菌0LL2809株保藏在独立行政法人制品评价技术基础机构专利微生物保藏中心。以下记载确定保藏的内容。( I)保藏机构名称:独立行政法人制品评价技术基础机构专利微生物保藏中心(独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託力 > 夕一)(2)联系方式:〒292-0818千葉県木更津市分f ^鎌足2 — 5 — 8电话号码0438-20-5580(3)保藏编号:NITE BP-72(4)用于识别的表示:格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809(5)原保藏日:平成17年(2005年)2月I日(6)基于布达佩斯条约向保藏机构的移送日:2006年I月18日格氏乳杆菌0LL2809株(保藏编号:NITE BP-72)为革兰式阳性杆菌，乳酸菌MRS琼月旨、Difcoo上的菌落形态为圆形、淡黄色、扁平状。作为生理学特征，具有同型乳酸发酵形式、45°C下的生长性、对葡萄糖、甘露糖、果糖、半乳糖、蔗糖、纤维二糖、乳糖、海藻糖具有发酵性。作为用于培养格氏乳杆菌0LL2809(保藏编号:NITE BP-72)的培养基，使用在乳酸菌的培养中通常使用的培养基。即，只要是除了主碳源之外还适当地含有氮源、无机物、其他营养素的培养基，则可以使用任何培养基。作为碳源，可根据所用菌的同化性使用乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、淀粉水解物、糖蜜等。作为氮源，可以使用酪蛋白的水解物、乳清蛋白水解物、大豆蛋白水解物等有机含氮物。另外，作为增殖促进剂，使用肉膏、鱼肉膏、酵母膏等。培养优选在厌氧条件下进行，但也可以是利用通常使用的液体静置培养等的微需氧条件下。厌氧培养可以适用在二氧化碳气层下进行培养的方法等公知手法，但也可以是其他的方法。培养温度通常优选为30 40°C，但只要是菌能够生长的温度则可以是其他的温度条件。培养中的培养基的PH优选维持在6.0 7.0，但只要是细菌能够生长的温度，则也可以是其他的PH条件。另外，还可以在分批培养条件下进行培养。培养时间通常优选为10 24小时，但只要是细菌能够生长的时间，则可以是其他的培养时间。关于本发明中可使用的其他格氏乳杆菌，对于其为革兰式阳性杆菌、及其他生理学特征，也显示与格氏乳杆菌0LL2809同样的特征。这种格氏乳杆菌只要是本领域技术人员则可以基于生理学特征从人类粪便等中分离。培养也可以通过与上文所述的有关格氏乳杆菌0LL2809的培养的同样的方法进行。本发明的预防/改善剂可直接含有乳酸菌，或者还可以对乳酸菌实施了一些处理而得到的乳酸菌处理物的形式含有。例如，可以使用乳酸菌悬浮液、乳酸菌培养物(菌体、培养上清液(含培养基成分))、乳酸菌发酵物(乳酸菌饮料、酸乳、酸奶等)、浓缩物、加工成糊状的糊化物、喷雾干燥物、冷冻干燥物(选自喷雾干燥物、冷冻干燥物、真空干燥物、滚筒干燥物中的至少I个)、真空干燥物、滚筒干燥物、分散于介质中的液态物、用稀释剂稀释得到的稀释物、利用磨机等将干燥物粉碎而得到的粉碎物等作为处理物。另外，乳酸菌可以适当使用活菌、湿菌、干菌等。也可以是实施了灭菌、即加热灭菌处理、放射线灭菌处理或粉碎处理等而得到的死菌。这些处理工序可单独使用、也可并用多个。本发明的预防/改善剂可单独用于人和动物的子宫内膜异位症的预防或改善。或者，还可以在与医药品或食品中 可通常使用的其他成分混合后，经口给予。另外，还可以与子宫内膜异位症的预防或改善效果已知的其他化合物或微生物等并用。子宫内膜异位症的预防或治疗效果例如如实施例所示，也可通过利用视觉模拟评分法(VAS)或痛经评分的主观评价来进行确认。本发明的预防/改善剂的给予量可考虑给予途径、包括人在内的给予对象动物的年龄、体重、症状等各种因素进行适当设定。本发明并非限定于此，优选作为有效成分至少给予2mg/kg/日。但是，当长时间以预防和/或改善为目的进行摄取时，可以是少于上述范围的少量。或者，本发明的预防/改善剂的有效成分在作为食品的安全性方面并无问题，因此也可以以多于上述范围的量进行使用。另外，本发明的预防/改善剂可以通过经口给予或非经口给予(肌肉内、皮下、静脉内、栓剂、经皮、经胃管等)均可进行给予。作为本发明的预防/改善剂的给予方式，可根据预防目的或改善目的、给予路径等来选择剂型，例如可举出片剂、包衣片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液体剂、悬浮剂、乳齐 、糖浆剂、注射剂、栓剂、浸剂、煎剂、酊剂等。这些各种制剂可根据常规方法针对主药、根据需要使用填充剂、膨胀剂、赋形剂、粘合剂、保湿剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、着色剂、矫味除臭剂、增溶剂、悬浮剂、包衣剂等医药制剂技术领域中可通常使用的已知辅助剂进行制剂化。另外，在该医药制剂中还可含有着色剂、防腐剂、香料、风味剂、甜味剂等或其他医药品。本发明中，乳酸菌还可以以医药品或饮食品的任意形态使用。例如，通过作为医药品进行直接给予、或者作为特定保健用食品等特別用途食品或营养功能食品进行直接摄取，期待进行子宫内膜异位症的预防和/或改善。即，本发明提供含有有效量的构成本发明预防/改善剂的乳酸菌而成的子宫内膜异位症的预防和/或改善用饮食品组合物。作为饮食品组合物的形态，可以举出调制奶粉或发酵乳饮食品等。作为发酵乳饮食品，可举出酸奶、奶酪等，但并非限定于这些。本发明的饮食品组合物以酸奶等各种发酵乳、饮料等为代表，还可适用于保健功能食品或病人用食品。保健功能食品制度是考虑到国内外的趋势、符合一直以来的特定保健用食品制度，不仅以通常的食品、还以制成片剂、胶囊等形状的食品为对象设定而成，因此包括特定保健用食品(个别许可型，product-based approval type)和营养功能食品(监管标准型,regulatory standard type)这2种类型。通过直接摄取含有构成本发明预防/改善剂的乳酸菌的特定保健用食品等特別用途食品或营养功能食品，可以对子宫内膜异位症进行预防和/或改善。本发明的饮食品组合物具体地可在各种饮食品(牛奶、软饮料、发酵乳、酸奶、奶酪、面包、饼干、脆饼、比萨饼(pizza crust)、调制奶粉、流质食物、病人用食品、婴幼儿用奶粉等食品、哺乳妇女用奶粉等食品、营养食品等)中添加构成本发明预防/改善剂的乳酸菌，然后将其摄取。可 以直接使用本有效成分，或者与其他食品或食品成分混合等根据通常的饮食品组合物的常规方法进行使用。另外，对于其性状，还可以是通常使用的饮食品状态、例如固态(粉末、颗粒状等)、糊状、液态或悬浮状的任意状态。对于其他成分并无特别限定，在含有构成本发明预防/改善剂的乳酸菌的饮食品组合物中可使用水、蛋白、糖质、脂质、维生素类、矿物类、有机酸、有机碱、果汁、香料类等作为主成分。作为蛋白，例如可举出全脂奶粉、脱脂奶粉、部分脱脂奶粉、酪蛋白、乳清粉、乳清蛋白、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物、α-酪蛋白、β-酪蛋白、K-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、乳铁蛋白、大豆蛋白、鸡蛋蛋白、肉蛋白等动植物性蛋白、它们的水解物；黄油、乳清矿物质(whey mineral)、奶油、乳清、非蛋白态氮、唾液酸、磷脂、乳糖等各种乳来源成分等。作为糖质，可举出糖类、加工淀粉(除了糊精外，可溶性淀粉、英国淀粉(Britishstarch )、氧化淀粉、淀粉酯、淀粉醚等)、食物纤维等。作为脂质，例如可举出猪油、鱼油等、它们的分离油、氢化油、酯交换油等动物性油脂；棕榈油、红花油、玉米油、菜籽油、椰子油、它们的分离油、氢化油、酯交换油等植物性油脂等。作为维生素类，例如可举出维生素A、胡萝卜素类、维生素B族、维生素C、维生素D族、维生素E、维生素K族、维生素P、维生素Q、烟酸、尼克酸、泛酸、生物素、肌糖、胆碱、叶酸等，作为矿物质类，例如可举出钙、钾、镁、钠、铜、铁、锰、锌、硒、乳清矿物质等。作为有机酸，例如可举出苹果酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸等。这些成分可以组合使用2种以上，可以使用合成品和/或大量含有上述物质的食品。构成本发明预防/改善剂或饮食品组合物的乳酸菌的量可以根据其目的、用途(药剂、饮食品组合物)任意地决定。本发明虽不限定于此，但作为其含量，相对于总量通常优选为0.001 100% (w/w)、特别优选为0.01 100% (w/w)。在饮食品组合物或药剂的制造中使用乳酸菌时，制造方法可以通过本领域技术人员公知的方法进行。只要是本领域技术人员，则可适当组合将乳酸菌或其处理物与其他成分混合的工序、成形工序、灭菌工序、发酵工序、烧制工序、干燥工序、冷却工序、造粒工序、包装工序等，制作所需的食品或药剂。另外，在各种乳制品的制造中使用乳酸菌时，可以通过本领域技术人员公知的方法制造所需的乳制品。示出当为酸奶的情况之一例时，可以经过使用乳酸菌调制发酵剂的工序、将该发酵剂添加到经过前处理的牛奶中进行培养的工序、冷却工序、调味工序、填充工序等来制造酸奶。当为奶酪时，例如，可以经过在进行了灭菌等前处理的牛奶中添加本发明的乳酸菌作为发酵剂使其乳酸发酵的工序、添加凝乳酶生成干酪凝块的工序、凝块剪切工序、乳清排出工序、加盐工序、熟化工序等进行制造。或者，在所述各种乳制品的制造中，还可代替特定的乳酸菌(例如格氏乳杆菌)使用其他的乳酸菌作为发酵剂，然后在制造工序中添加该特定的乳酸菌(例如格氏乳杆菌)或其处理物。另外，本发明涉及子宫内膜异位症的预防和/或改善方法，其包含将乳酸菌经口给予至动物的工序。作为给予乳酸菌的对象，可举出哺乳动物。作为哺乳动物，可举出人及除人以外的哺乳动物，优选可举出人或猴子，更优选可举出人。另外，本发明涉及用于在子宫内膜异位症的预防和/或改善中使用的乳酸菌。或者，本发明涉及乳酸菌在子宫内膜异位症的预防和/或改善剂的制造中的用途。另外，本发明还涉及用于子宫内膜异位症的预防和/或改善的乳酸菌的用途。另外，本发明还涉及子宫内膜异位症的预防和/或改善剂的制造方法，其包含将乳酸菌和药学上可容许的载体配合的工序。作为乳酸菌，优选可举出乳杆菌属的乳酸菌、更优选格氏乳杆菌、特别优选格氏乳杆菌0LL2809株，但并非限定于这些。或者，本发明提供含有乳酸菌的子宫内膜异位症病变部位的生长抑制剂。另外，本发明还提供抑制子宫内膜异位症病变 部位的生长的方法，其包含将乳酸菌给予至动物的工序。此外，本发明还涉及用于抑制子宫内膜异位症病变部位的生长的乳酸菌。或者，本发明涉及乳酸菌在制造子宫内膜异位症病变部位的生长抑制剂中的用途。或者，本发明涉及乳酸菌在用于抑制子宫内膜异位症病变部位的生长中的用途。或者，本发明涉及子宫内膜异位症病变部位的生长抑制剂的制造方法，其包含将乳酸菌和药学上可容许的载体配合的工序。本发明的生长抑制剂可以配合适于经口给予的载体。本发明的生长抑制剂为了抑制子宫内膜异位症病变部位的生长，可以兼作食品进行给予。子宫内膜异位症主要在腹膜、卵巢或子宫、子宫直肠窝、肠或直肠等脏器的表面、卵巢的内部、子宫的肌肉层等的细胞中发生。利用本发明的生长抑制剂是否抑制了病变部位的生长，例如可通过本领域技术人员公知的方法通过测量这些病变部位的面积或体积、重量进行判定。另外，本说明书中引用的全部现有技术文献通过参照纳入本说明书中。实施例以下举出实施例说明本发明，但本发明并非限定于此。另外，本说明书中％符号在没有明确说明的情况下，表示重量％。[实施例1]通过以下方法制作子宫内膜异位症模型小鼠，对本发明的预防/改善剂的预防及改善效果进行研究。[实验动物]使用在5周龄时实施了卵巢摘除手术的6周龄雌性BALB/c小鼠(日本SLC株式会社)。小鼠给予CRF-1饲料(Oriental Yeast株式会社)，在室温21±2°C、湿度55±15%下、在按照每12小时明暗循环进行管理的房间中，在分组的鼠笼中进行饲养。饲料和水自由摄取。子宫内膜异位症模型小鼠的制作使用对Somigliana et al.(非专利文献2)的方法进行了改变的方法。具体地说，将下述供体小鼠的I对子宫角切为小片，悬浮在0.6ml的磷酸缓冲生理盐水(PBS ;pH为7.2)中，利用18G的注射针向腹腔内注入子宫内膜悬浮液，使得每只受体小鼠为0.3ml (第O天)。受体小鼠使用在5周龄时(移植日的7日前)接受了卵巢摘除手术的小鼠，在7日前、第0、7、14日，共计4次将溶解于蓖麻油的雌性激素(和光纯药工业株式会社；100 μ g/kg)肌肉 给予至大腿部。供体小鼠与受体小鼠同样，在移植日的7日前进行卵巢摘除和雌性激素给予。卵巢摘除和雌性激素的给予是为了将所有小鼠的性周期调至发情期而实施的。将小鼠IL-12重组体(和光纯药工业株式会社)悬浮在PBS中，向腹腔内给予
0.15 μ g/0.4ml，从移植日的2日前至2日后共计连续进行5天。其他组在相同条件下仅给予溶剂。格氏乳杆菌0LL2809在乳酸菌MRS肉汤(Difco)中活化培养(37°C、18小时)2次。在相同培养基中接种1%经活化的菌体，在37°C下培养18小时。在集菌后，利用生理盐水洗涤2次、用灭菌蒸馏水洗涤I次。在75°C下加热60分钟进行灭菌、冷冻干燥。将冷冻干燥菌体以2mg/0.5ml的浓度悬浮于水中，以2mg/0.5ml/body的给予量使用胃管从移植日至解剖前日(第20日)的期间经胃管给予。其他组在相同条件下仅给予溶剂。在子宫内膜移植后的第21天，通过颈椎脱臼使小鼠安乐死，将腹腔洗涤液回收后，打开腹部。使用游标卡尺测定子宫内膜病变部位的大小(长径、短径)后，将其摘出，测定重量。当病变部位形成嚢胞时，在吸引嚢胞液后实施。另外，在腹腔开腹前将Iml的含1%FCS的PBS注入到腹腔内，回收0.5ml的腹腔洗涤液，用于测定腹水中的细胞因子浓度。细胞因子的测定使用Bio-plex细胞因子分析试剂盒(Bio-rad, Hercules, CA)。对于腹腔细胞，将0.5ml的腹腔洗涤液回收后，进而向腹腔内注入4ml的含1%FCS的PBS，将其3ml的洗涤液回收。通过离心分离将细胞因子测定用所采用的0.5ml腹腔洗涤液中的细胞回收，一并作为腹腔细胞。来自腹腔细胞的总RNA使用Trizol试剂(Invitrogen, Calsbad, CA)。以抽提的 I U g 的总全 RNA 为模板，使用 PrimeScript RT reagent Kit (TaKaRa Bio 株式会社)进行向 cDNA 的逆转录。实时 PCR 使用 FastStart Universal SYBR Green Master 试剂(Roche, Indianapolis, IN),利用 ABI Prism7300 (Applied Biosystems>Foster City、CA)进行测定。IL-2基因的寡核苷酸引物参考Overbergb et al.(Overbergb L, GiuliettiA,Valckx D,Decallonne B,Bouillon R, and Matbieu C.The use of real-time reversetranscriptase PCR for the quantification of cytokine gene expression.J.Biomol.Tech.，14，33-43 (2003))。NCRl 基因使用 TaqMan 探针(Applied Biosystems)进行测定。各基因的表达量利用甘油醛-3-磷酸脱氢酶的表达量进行校正(normalize)。结果用平均值土标准差进行表示。统计分析的参数数据通过单因素方差分析进行多重检验，当可见显著性差异时，在Fishser的PLSD检验中分析组间的显著性差异。非参数数据通过Steel-Dwass的方法进行多重比较。P〈0.05判断为显著。格氏乳杆菌0LL2809的给予对子宫内膜异位症病变部位的影响在通常(无处置)组中未见子宫内膜异位症病变部位，但在对照组每I个个体中检测到2 7个病变部位，其重量和面积均与通常组相比显示有显著性的高值(图1)。通过格氏乳杆菌0LL2809的给予，与对照组相比，其重量和面积均显示有显著性的低值，即可见病变部位的生长抑制效果。另外，其程度与作为阳性对照设定的IL-12给予组为同等程度。因此可以证明，通过给予本发明的预防/改善剂，对子宫内膜异位症具有预防及改善效果。腹腔细胞的基因表达分析腹腔洗涤液中经测定的大多数细胞因子浓度为检测限以下，根据腹腔细胞的细胞种比例，也无法确认格氏乳杆菌0LL2809的有显著性的给予效果。因此，测定了腹腔细胞的基因表达量。结果，IL-2与通常组相比，在对照组中可见有显著性的低值(图2 (A))。与此相对，在0LL2809组和IL-12给予组中，其表达量回复、显示与通常组为同等程度的值(图2 (B))。已清楚IL-2基因主要是Thl细胞所产生的细胞因子，其促进B细胞或T细胞、NK细胞等的分化、增殖，且在大鼠中可抑制子宫内膜异位症(Velasco I, Quereda F, BermejoR, Campos A, and Acien P.1ntraperitoneal recombinant interleukin_2activatesleukocytes in rat entomentriosis.J.Reprod.Tmmunol., 74, 124-132 (2006)等X IL-2基因表达量通过格氏乳杆菌0LL2809的给予而增加，从而验证了本发明的预防/改善剂的有效性。此外，对于NK 细胞活化标记物之一的 NCRl (Natural cytotoxicity triggeringreceptor I,自然细胞毒作用触发性受体1)，可见基因表达量的显著性增加。NCRl在人中还作为Ly94或NKp46而已知，已清楚在经活化的NK细胞表面上表达。在测定基因表达量时，从各个体采集相同数量的腹腔细胞、使用由同浓度的总RNA制备的cDNA。此外，在利用FACS的腹腔细胞的种群分析中，未见NK细胞数有组间差异。因此，作为NK活性本身，虽未见格氏乳杆菌0LL2809给予所引起的显著性提高，但在基因水平的分析中，启示各个细胞的活性提闻。因此可知，含有格氏乳杆菌0LL2809的本发明预防/改善剂具有子宫内膜病变的生长抑制效果。[实施例2]在以下的实施例2中，研究了本发明的预防/改善剂对子宫内膜异位症病患者的月经痉挛及痛经的改善效果。以诊断为子宫内膜异位症、满足以下选择标准且不符合排除标准的患者作为受试者。子宫内膜异位症的诊断标准根据《6th Obstetrics and Gynecology, 2003 (publishedby People，s Me dical Publishing House)》。即，当可见下述(I) (5)中的I个症状且可见(6)或(7)中任一种体征时，判断为患病。症状:
(I)缓慢发展的持续性痛经、(2)非月经时的下腹部或骨盆痛、(3)性交引起的不舒服感或疼痛、(4)间歇性腹泻、便秘、肛门的里急后重、(5)不孕。体征:(6)直肠子宫陷凹(rectouterine pouch)结节、子宫后壁下部的子宫骶韧带的结节、(7)附着在子宫附件周围的囊性肿块。选择标准:(I)年龄在18 45岁的患者、(2)每月有月经、周期为28±3日的患者。排除标准:
(I)过去3个月内接受了激素疗法的患者、(2)有严重肝脏疾病、肾脏疾病、心肌梗塞或血液疾病的既往史的患者、(3)患有恶性肿瘤的患者或疑似患有恶性肿瘤的患者、(4) CA-125 为 100IU/ml 以上的患者、(5)在腹膜的切开部发生了子宫内膜病变的患者、(6)在乳制品摄入后发生腹 与症状的患者、(7)接受过敏性疾病治疗的患者、(8)摄取认为对试验结果有影响的药物(便秘改善药或胃肠药等)的患者、(9)每周摄取4日以上认为对试验结果有影响的食品(含有乳酸菌的发酵乳或饮料等)的患者。中止 退出标准:(I)自愿拒绝试验继续的受试者、(2)在过程中未跟踪经过的受试者、(3)未遵守规则的受试者、(4)发生严重并发症或副作用的受试者、(5)试验片剂的摄取量为指定量的80%以下或120%以上的受试者。根据以上标准，将诊断为患有子宫内膜异位症的66人作为受试者。其中，62人完成了试验，最终安慰剂组的分析对象为33人、活性剂组的分析对象为29人。由与试验无直接相关的控制者将满足上述选择、排除标准的受试者随机地分为安慰剂组和活性剂组。各受试者依次为活性剂组每日摄取2片含有本发明格氏乳杆菌0LL2809的预防/改善剂的活性片、安慰剂组摄取12周(3个性周期)安慰剂片。各受试者在开始试验前、在开始摄取的1、2、3个月后每月I次通过问诊等进行监测，同时进行下述评价项目的记录。对以下的评价项目设定各评分，进行评价。第一评价项目:在月经期间中，利用视觉模拟评分法(VAS)和痛经评分评价主观疼痛的程度。
第二评价项目:月经时以外的VAS和骨盆痛的总得分。将各得分示于表I。[表I]痛经总得分(痛经的程度得分和镇痛药的使用得分之和)
权利要求
1.一种用于对子宫内膜异位症进行预防及改善这两者或任一者的药剂，其是含有乳酸菌而成的。
2.根据权利要求1所述的药剂，其中，所述乳酸菌为乳杆菌属(Lactobacillus)。
3.根据权利要求1所述的药剂，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)。
4.根据权利要求1所述的药剂，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri) 0LL2809 株。
5.一种用于对子宫内膜异位症进行预防及改善这两者或任一者的饮食品组合物，其是含有有效量的乳酸菌而成的。
6.根据权利要求4所述的饮食品组合物，其中，所述乳酸菌为乳杆菌属(Lactobaci IIus)。
7.根据权利要求4所述的饮食品组合物，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)。
8.根据权利要求4所述的饮食品组合物，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri) 0LL2809 株。
9.根据权利要求8所述的饮食品组合物，其特征在于，饮食品组合物为发酵乳饮食品。
10.根据权利要求9所述的饮食品组合物，其特征在于，发酵乳饮食品为酸奶。
11.一种用于对子宫内膜异位症进行预防及改善这两者或任一者的方法，其特征在于，给予期望量的含有有效量的乳酸菌的组合物。
12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述乳酸菌为乳杆菌属(Lactobacillus)。
13.根据权利要求11所述的方法，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)。
14.根据权利要求11所述的方法，其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri) 0LL2809 株。
15.根据权利要求11 14中任一项所述的方法，其中，所述给予量为至少2mg/kg/日。
16.一种用于对子宫内膜异位症进行预防及改善这两者或任一者的乳酸菌。
17.根据权利要求16所述的乳酸菌,其中,所述乳酸菌为乳杆菌属(Lactobacillus)。
18.根据权利要求16所述的乳酸菌,其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri)。
19.根据权利要求16所述的乳酸菌,其中，所述乳酸菌为格氏乳杆菌(Lactobacillusgasseri) 0LL2809 株。
全文摘要
本发明提供一种含有属于乳酸菌的乳杆菌属(Lactobacillus)、特别是格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)OLL2809株的子宫内膜异位症的预防和/或改善剂。另外，本发明还提供含有该乳酸菌的子宫内膜异位症的预防和/或改善用饮食品组合物以及以给予该乳酸菌为特征的子宫内膜异位症的预防和/或改善方法。
文档编号A61P15/08GK103249421SQ20118005718
公开日2013年8月14日 申请日期2011年11月29日 优先权日2010年11月29日
发明者伊藤裕之, 指原纪宏, 池上秀二, 纪再思, 内田胜幸 申请人:株式会社明治