专利名称：阿魏胶囊在制备治疗高脂血症脂肪肝药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及在制备治疗高脂血症脂肪肝药物中的应用技术领域，是ー种阿魏胶囊在制备治疗高脂血症脂肪肝药物中的应用。
背景技术：
高脂血症是现代医学病名，传统中医文献无此记载而且目前也未形成统ー病名，部分中医学者根据病因病机特点有命名为 “血浊”者。现代医学以血脂四项作为诊疗标准。对于高脂血症现代医学所提供的药物多基于单靶点的作用机制，其缺陷在于调脂作用单一、停药反弹和易引发其它疾病及肝功能损害等。目前中医对于高脂血症多从痰浊、血瘀进行辨证施治，在治疗上基本采取活血化瘀、利湿泄浊的方法，虽然这种方法明显减少了毒副作用，但治疗周期较长，疗效平庸，所以从中医理论入手寻找ー种峻猛、安全和快速的治疗方案意义重大。
发明内容
本发明提供了一种阿魏胶囊在制备治疗高脂血症脂肪肝药物中的应用，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决高脂血症治疗周期长和疗效平庸的问题。本发明的技术方案是通过以下措施来实现的阿魏胶囊在制备治疗高脂血症脂肪肝药物中的应用。下面是对上述发明技术方案的进ー步优化或/和改进
上述阿魏胶囊按下述步骤得到第一歩备药材，阿魏Sg，拳參750g，厚朴750g，紫草750g，山慈菇750g，白茅根1500g ;第二步得到阿魏和白茅根的混合细粉，将上述所述量的阿魏与38g白茅根药材混合串油粉碎成阿魏和白茅根的混合细粉，备用；第三步得到醇提物，取上述所述量的厚朴、紫草加其6倍量80%质量百分比浓度的こ醇水溶液回流提取2次，毎次I. 5小吋，合并提取液，滤过，得到醇提滤液备用；第四步得到阿魏胶囊，将上述其余药材即山慈菇、白茅根和拳參药材加其10倍量水煎煮提取2次，每次I. 5小时，合并水提滤液，将水提滤液浓缩至相对密度I. 10 I. 20 (600C )后，加入80%质量百分比浓度的こ醇使含醇量达到总质量的70%，静置24小时，滤过得到的滤液与上述醇提液合并后回收こ醇至无醇味，减压干燥，粉碎成细粉，加入上述白茅根和阿魏的混合细粉，混匀，制成颗粒，干燥，加入药典规定量的硬脂酸镁，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得阿魏胶囊。上述阿魏胶囊用药量为每天3次，每次5粒，每粒O. 43g。本发明通过把SD大鼠随机分成5组，除正常对照组外、高脂血症模型对照组、阿魏胶囊高剂量组、阿魏胶囊中剂量组和阿魏胶囊低剂量组以高脂饲料喂养，采用阿魏胶囊作为药物分别以不同剂量给阿魏胶囊高剂量组、阿魏胶囊中剂量组和阿魏胶囊低剂量组中的SD大鼠灌胃7周，观察分析SD大鼠的各项指标，通过数据和图片显示灌胃后的阿魏胶囊高剂量组、阿魏胶囊中剂量组和阿魏胶囊低剂量组中的SD大鼠较高脂血症模型对照组中的SD大鼠有较大的改善，从而进一步证实了阿魏胶囊具有调节血脂、増加抗氧化能力、预防脂肪肝和改善肝功的作用。
附图I为正常对照组放大100倍的SD大鼠肝脏HE染色光学显微镜图。附图2为高脂血症模型对照组放大100倍的SD大鼠肝脏HE染色光学显微镜图。附图3为本发明中阿魏胶囊高剂量组放大100倍的SD大鼠肝脏HE染色光学显微镜图。
附图4为本发明中阿魏胶囊中剂量组放大100倍的SD大鼠肝脏HE染色光学显微镜图。附图5为发明中阿魏胶囊低剂量组放大100倍的SD大鼠肝脏HE染色光学显微镜图。
具体实施例方式本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。实施例1，阿魏胶囊在制备治疗高脂血症脂肪肝药物中的应用。实施例2，实施例I中的阿魏胶囊是按下述步骤得到第一步备药材，阿魏Sg，拳參750g，厚朴750g，紫草750g，山慈菇750g，白茅根1500g ;第二步得到阿魏和白茅根的混合细粉，将上述所述量的阿魏与38g白茅根药材混合串油粉碎成阿魏和白茅根的混合细粉，备用；第三步得到醇提物，取上述所述量的厚朴、紫草加其6倍量80%质量百分比浓度的こ醇水溶液回流提取2次，毎次I. 5小时，合并提取液，滤过，得到醇提滤液备用；第四步得到阿魏胶囊，将上述其余药材即山慈菇、白茅根和拳參药材加其10倍量水煎煮提取2次，每次I. 5小时，合井水提滤液，将水提滤液浓缩至相对密度I. 10 I. 20 (600C )后，加入80%质量百分比浓度的こ醇使含醇量达到总质量的70%，静置24小时，滤过得到的滤液与上述醇提液合并后回收こ醇至无醇味，减压干燥，粉碎成细粉，加入上述白茅根和阿魏的混合细粉，混匀，制成颗粒，干燥，加入药典规定量的硬脂酸镁，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得阿魏胶囊。实施例3，实施例I和实施例2的阿魏胶囊用药量为每天3次，每次5粒，每粒O. 43g0下面为本发明中阿魏胶囊在制备治疗高脂血症脂肪肝药物中的应用的具体药理试验
I.阿魏胶囊对大鼠体重的影响31只大鼠(雌性16只，雄15只)适应饲养3天后，雌雄分别按体重从小到大排序，(雌性大鼠取出体重排在第8位的未进行随机，直接放入阿魏胶囊高剂量组)。用SPSS软件完成随机分组，将雌雄大鼠随机分别各分5组，根据临床用药量的体重计算法确定给药剂量。以阿魏胶囊临床拟用量计算大鼠等效剂量。人体临床用药量为每天3次，毎次5粒，每粒O. 43g。大鼠阿魏胶囊等效剂量为O. 43X3X5X5. 98/60=0. 64g/kg/d (5. 98为等效剂量比值，60为成人平均体重)。等效剂量设为中剂量，1/2倍中剂量为低剂量，2倍中剂量为高剂量。确定阿魏胶囊给药量分别为每天 O. 32g、0. 64g、l. 28g 内容物 /kg，见表 I。
除正常组外，其余组大鼠均给予高脂饲料，同时高、中、低给药组分别灌胃相应剂量的药物，所有大鼠每周称重一次，并重新计算各组给药量，正常对照组和模型对照组毎日灌胃相应体积的O. 5%CMC-Na水溶液，连续7周。如实记录每天的实验室气温，大鼠饮水量/天、进食量/天，每周对各组大鼠拍照一次，保留照片。阿魏胶囊对大鼠进食量的值结果见表2。从表2中可以看出，试验前，雌、雄各组大鼠体重比较均衡，随着时间增加，各组大鼠体重均有所上升。雌性大鼠各组之间体重相比，正常组大鼠体重增长最为明显，高剂量组大鼠体重增长最慢，其余各组差异则不明显；雄性大鼠各组之间相比，前3周体重增长速度相近，4周后，正常组大鼠体重增长最快，其次是中剂量组，其余各组差异不明显。总体比较，所有大鼠体重均有不同程度的増加，雄性组大鼠体重增长速度较雌性组快。2.阿魏胶囊对大鼠血脂四项指标的影响将所有大 鼠称重，并记录体重。腹腔注射10%水合氯醛O. 3ml/100g进行麻酔，待完全麻醉后，由腹部倒T字形纵向剪开，充分暴露肝脏，观察肝脏颜色，形态，大小，有无斑点、病变等现象，并拍照。剥离腹部小肠、脂肪等组织，充分暴露腹主动脉，采血，装入5ml采血管中，编号，室温静置约30分钟后，3000rpm离心15min，分离上层血清，置于EP管中，_20°C冰箱保存，备用。将血清室温融化，取O. 5ml血清于I. 5mlEP管中，分别放入迈瑞BS320全自动生化仪中，申请样本位，设定检测项为TC、TG、HDL-C、LDL-C等。点击运行后进行含量測定，记录数据，统计分析。阿魏胶囊对大鼠干预7周后，检测大鼠血脂四项指标，结果见表3。从表3可知雌性大鼠中与正常组大鼠相比，模型组大鼠的TC、TG、LDL-C, HDL-C差异有统计学意义O°〈0. 01，/X0. 05)，模型组大鼠的TC、TG、LDL-C升高，HDL-C降低，说明高脂血症模型成立；与模型组相比，各给药组大鼠TC、LDL-C差异有统计学意义O°〈0. 01)，阿魏胶囊给药组的TC、LDL-C降低，高剂量组大鼠的TG含量下降。雄性大鼠中与正常组大鼠相比，模型组大鼠的TC和LDL-C差异有统计学意义(7X0. 01)，模型组各值均有所增加，TG和HDL-C的差异则无统计学意义O°>0. 05);与模型组大鼠相比，高剂量组TG差异有统计学意义(/X0. 05)，高剂量组含量略有降低，各给药组LDL-C的差异有统计学意义O°〈0. 01)，给药组的LDL-C水平较模型组低，阿魏胶囊对大鼠血清中LDL-C的含量影响较明显。3.血清ALT、AST、GLU的影响将血清室温融化，取O. 5ml血清于1.5mlEP管中，分别放入迈瑞BS320全自动生化仪中，申请样本位，设定检测项为ALT、AST、GLU等。点击运行后进行含量測定，记录数据，统计分析。对大鼠血清ALT、AST、GLU的值，结果见表4。从表4可以看出雌性大鼠中与正常组相比，模型组大鼠的AST、ALT差异具有统计学意义O°〈0. 01)，而GLU差异则无统计学意义；与模型对照组相比，各给药组的AST、ALT差异均有统计学意义O°〈0. OI ,/X0. 05)，各给药组数值降低。雄性大鼠中与正常对照组相比，雄性模型组大鼠的ALT差异有统计学意义O°<0. 05)，ALT含量增加；与模型组相比，雄性高剂量组大鼠ALT和低剂量组GLU的差异有统计学意义O°〈0. 05)，总体比较，阿魏胶囊能降低大鼠AST、ALT水平，但对大鼠GLU变化水平影响较小。4.阿魏胶囊对大鼠血清抗氧化指标的影响MDA含量測定血清前处理取100 μ I血清,加入200 μ I生理盐水，备用。标准管配置加入I Onmo I/ml标准品100 μ I,再加入试剂ー 100μ 1，混匀。标准空白管溶液的配置加入无水こ醇100ml，再加入试剂ー100 μ I,混匀。测定管溶液的配置加入100 μ I已稀释的上清液,再加入试剂ー 100 μ I,混匀。以上各管分别加入试剂ニ 1ml，试剂三1ml，用漩涡混匀器混匀，试管ロ用保鲜膜扎紫，用针头刺一小孔，95°C水浴80min，取出后流水冷却，然后用3750rpm，4°C离心lOmin，取上清，波长532 nm，Icm光径，蒸馏水调零，测定吸光度值。MDA含量(nmol/ml)=(测定管吸光度-标准空白管吸光度)/ (标准管吸光度-标准空白管吸光度)XlOnmol/mlX样品测试前稀释倍数。注意吸取上清比色时最好用移液枪吸取上清加入比色皿中，尽量避免倾倒，以免沉淀进入比色皿中，影响吸光度。NO含量测定血清前处理取血清原液100 μ I加试剂ー 200 μ 1，混匀，加试剂ニ 100 μ 1，漩涡充分混匀后静置10min，3750rpm，4°C离心15min，取上清160μ1操作。空白孔配置加入O. 16ml双蒸水，再加入O. 08ml显色剂。标准孔的配置加入20 μ mol/L亚硝酸钠标准液0. 16ml,再加入0. 08ml显色剂。测定孔的配置カロ入0. 16ml上清液，再加入0. 08ml显色剂。混匀，静置15min，酶标仪比色，蒸馏水调零，在波长550nm处测定OD值，根据下列公式计算血清中NO 的含量NO (μ mol/L)=(測定孔OD值-空白孔OD值)パ标准OD值-空白孔OD值)X20umol/LX稀释倍数。注意若离心后上层有浑浊，务必再次离心，以保证上层液澄清，否则影响测试結果。SOD活性測定经预试验和给定的參考值，确定本试验血清取样量为5 μ I。样本前处理血清外观浑浊较明显，故取血清5 μ 1，加入5μ I生理盐水，再加入2. 5μ I无水こ醇混匀稀释，备用。测定管溶液的配置加入试剂ー 1ml，加入样本处理后的溶液5μ 1，再分别加入试剂ニ、三、四各0. 1ml，用漩涡混悬器充分混匀，置37°C恒温水浴40min，加入显色剂2ml，混匀，室温放置lOmin。对照管溶液的配置分别加入试剂ー 1ml，试剂ニ、三、四各0. 1ml，用漩涡混悬器充分混匀，置37°C恒温水浴40min,加入显色剂2ml,样本5μ I,混勻，室温放置lOmin。于波长550nm处Icm光径比色杯，蒸馏水调零，比色。SOD活力(U/ml) =(对照管吸光度-測定管吸光度)/对照管吸光度/50%X反应体系的稀释倍数X样品测试前的稀释倍数。计算血清超氧化物歧化酶的活性。阿魏胶囊对大鼠血清抗氧化指标的值结果见表5。从表5中可以看出，分别与正常对照组各指标相比，模型组大鼠的MDA、NO含量和SOD活性差异具有统计学意义(/X0. 01)，MDA、N0含量均升高，SOD活性降低；与模型组相比，高剂量给药组大鼠的NO含量差异具有统计学意义O°〈0. 05)，其含量降低，各给药组的MDA含量均有所降低，高、中剂量组的差异具有统计学意义O°〈0. 01)，高、中剂量组的SOD活性増加。各给药组之间相比，随剂量降低，MDA、N0的含量依次増加，SOD的活性依次降低。5.阿魏胶囊对大鼠肝脏重量、肝脏系数等的影响取心脏打开胸腔，将心脏连主动脉弓完整剪下，用生理盐水反复冲洗，滤纸吸干残留液体，称重。取脑脏从枕骨大孔开始用咬骨钳一点一点地去除颅骨，将颅顶的骨片去除干净。小心用剪刀将其剪开，然后用剪刀将颈部脊髄剪断，将脑组织整个掀起，同时剪断相应的脑神经。主要是三叉神经和视神经，轻轻将全脑完整的取出，称重。阿魏胶囊对大鼠肝脏重量、肝脏系数等指标的值结果见表6。从表6中可以得知雌性大鼠与正常对照组相比，模型组大鼠的肝脏重量、肝脏系数和肝脑比，差异均有统计学意义O°〈0. 01，Ρ<Λ· 05)，模型组各数值均增加；与模型组大鼠相比，各给药组大鼠肝脏系数，差异均有统计学意义(ΖΧ0. 05)，各给药组均降低，高剂量组大鼠的肝脑比差异具有统计学意义0°〈0.05)，高剂量组有所下降。雄性大鼠与正常对照组大鼠相比，模型组大鼠的肝脏系数和肝脑比差异均有统计学意义Ο°〈0. 01，/Χ0. 05)，模型组均有所増加；与模型组大鼠相比，各给药组大鼠的肝脏系数有所降低，各给药组之间，肝脏系数和肝脑比的差异则无统计学意义。6.肝脏HE染色光学显微镜检查肝脏切片的制作由新疆医科大学病理切片室员江利老师完成，阅片由买买提·艾カ老师完成，基本步骤为脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片、染色、封片。肝脏HE染色显微检查结果见图I至图5。正常对照组肝小叶结构清楚，肝细胞形态和排列正常，无脂肪变，细胞质均匀，肝细胞围绕小叶中央静脉呈放射状。模型对照组肝细胞体积普遍变大变圆，胞浆内有大小不等，多少不等的脂滴，空泡变严重，细胞核被挤压至ー边，汇管见炎细 胞浸润，部分区域肝细胞坏死，属于重度脂肪变。高剂量组肝小叶近中央区肝细胞脂变，但数量较少，亦见部分肝细胞胞浆呈现疏松化，肝细胞围绕小叶中央静脉呈放射状。中剂量组肝细胞脂变较明显，部分肝细胞胞浆疏松化，炎细胞浸润灶。低剂量组肝小叶中央区肝细胞有大小不等，多少不等的空泡变，病变以中央静脉向周围递減，并见胞浆疏松化及炎细胞浸润。综上所述，阿魏胶囊对SD大鼠饮水量、进食量及体重的影响实验结果表明随试验时间的延长，正常对照组SD大鼠的饮水量增长较其他组高，其余各组比较均衡，差异较小，各组不同时间作比较，波动性较一致，总体规律性不明显，我们推测可能与測量时间间隔不统一或者进食量的差异等因素有夫。正常对照组SD大鼠的进食量与其他组相比，前三周差异不明显，总体与饮水量基本一致，雌性阿魏胶囊低剂量组前2周饲料消耗量较大，据观察发现鼠盒底部有较多碎小饲料颗粒，后在鼠盒中放入一小木块，避免SD大鼠因磨牙造成饲料浪费和数据不准确，自此，情况有所好转。所有SD大鼠体重均呈现增长趋势，正常对照组增长最快，高脂血症模型对照组增长最慢，阿魏胶囊高剂量组、阿魏胶囊中剂量组和阿魏胶囊低剂量组相对于正常对照组，进食高脂饲料的SD大鼠体重增长减缓，说明高脂饲料对SD大鼠的体重增长有抑制作用，而相对于模型组，灌胃给予阿魏胶囊的大鼠的体重平均值增大，雄性比雌性增长明显，与高脂血症模型对照组相比，阿魏胶囊高剂量组、阿魏胶囊中剂量组和阿魏胶囊低剂量组SD大鼠体重有所増加，说明阿魏胶囊能改善高脂血症模型对照组SD大鼠的体能状态。阿魏胶囊对SD大鼠抗氧化指标的影响实验表明阿魏胶囊能改善高脂血症模型对照组SD大鼠脂质过氧化状态，提高SD大鼠抗氧化能力，且对MDA、NO含量和SOD活性影响的程度与给药剂量有夫。阿魏胶囊对SD大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C血脂四项指标的影响实验结果表明阿魏胶囊可降低雌性高脂血症SD大鼠TC、LDL-C水平，且阿魏胶囊高剂量组可降低雌性大鼠TG水平。阿魏胶囊高剂量组对雄性高脂血症大鼠TG水平有降低趋势，且阿魏胶囊降低雄性高脂血症大鼠LDL-C的水平显著。在阿魏胶囊影响高脂血症大鼠肝脏外观、重量、组织切片和肝脏相关的转氨酶实验中，阿魏胶囊高剂量组对大鼠的肝脏形态、病理检查、肝重、AST和ALT等较模型组有一定的改善作用。阿魏胶囊中剂量组对大鼠肝脏有向正常大鼠方向改善的趋势。阿魏胶囊低剂量组对大鼠肝脏较模型组有改善趋势。肝脏HE染色光学显微镜检查实验结果表明与正常对照组相比，高脂血症模型组的肝细胞脂肪变严重，而阿魏胶囊高剂量组、阿魏胶囊中剂量组和阿魏胶囊低剂量组对肝细胞脂肪变性有明显改善作用。通过整体的对SD大鼠肝脏外观、重量、组织切片和肝脏相关的转氨酶研究，发现肝脏重量、肝脏系数未随着剂量降低而呈规律性升高，而AST和ALT则具有这ー特征。经阿魏胶囊药物干预后，对肝脏的外观、重量和细胞结构有一定的改善作用，能够降低由高脂饲料引起SD大鼠AST和ALT的异常升高，都说明 阿魏胶囊具有保护肝细胞结构和功能、不同程度的减轻肝细胞脂肪变性、降低肝脏损害等作用。
权利要求
1.阿魏胶囊在制备治疗高脂血症脂肪肝药物中的应用。
2.根据权利要求I所述的阿魏胶囊在制备治疗高脂血症脂肪肝药物中的应用，其特征在于该阿魏胶囊按下述步骤得到第一歩备药材，阿魏Sg，拳參750g，厚朴750g，紫草750g，山慈菇750g，白茅根1500g ;第二步得到阿魏和白茅根的混合细粉，将上述所述量的阿魏与38g白茅根药材混合串油粉碎成阿魏和白茅根的混合细粉，备用；第三步得到醇提物，取上述所述量的厚朴、紫草加其6倍量80%质量百分比浓度的こ醇水溶液回流提取2次，毎次I. 5小时，合并提取液，滤过，得到醇提滤液备用；第四步得到阿魏胶囊，将上述其余药材即山慈菇、白茅根和拳參药材加其10倍量水煎煮提取2次，每次I. 5小时，合并水提滤液，将水提滤液浓缩至相对密度I. 10 I. 20 (600C )后，加入80%质量百分比浓度的こ醇使含醇量达到总质量的70%，静置24小时，滤过得到的滤液与上述醇提液合并后回收こ醇至无醇味，减压干燥，粉碎成细粉，加入上述白茅根和阿魏的混合细粉，混匀，制成颗粒，干燥，加入药典规定量的硬脂酸镁，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得阿魏胶囊。
3.根据权利要求I或2所述的阿魏胶囊在制备治疗高脂血症脂肪肝药物中的应用，其特征在于阿魏胶囊用药量为每天3次，毎次5粒，每粒O. 43g。
全文摘要
本发明涉及在制备治疗高脂血症脂肪肝药物中的应用技术领域，是一种阿魏胶囊在制备治疗高脂血症脂肪肝药物中的应用。本发明通过把SD大鼠随机分成5组，除正常对照组外、高脂血症模型对照组、阿魏胶囊高剂量组、阿魏胶囊中剂量组和阿魏胶囊低剂量组以高脂饲料喂养，采用阿魏胶囊作为药物分别以不同剂量给阿魏胶囊高剂量组、阿魏胶囊中剂量组和阿魏胶囊低剂量组中的SD大鼠灌胃7周，观察分析SD大鼠的各项指标，通过数据和图片显示灌胃后的阿魏胶囊高剂量组、阿魏胶囊中剂量组和阿魏胶囊低剂量组中的SD大鼠较高脂血症模型对照组中的SD大鼠有较大的改善，从而进一步证实了阿魏胶囊具有调节血脂、增加抗氧化能力、预防脂肪肝和改善肝功的作用。
文档编号A61K36/23GK102688397SQ20121017330
公开日2012年9月26日 申请日期2012年5月30日 优先权日2012年5月30日
发明者周倩, 孟军, 张洪平, 薛洁, 赵翡翠, 韩荣 申请人:新疆医科大学