冬凌草茎水提物的纳米结构及应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及冬凌草茎用蒸馏水80oC提取制备水提物、涉及该水提物浓缩得到的固体在水溶液中的纳米结构、进一步涉及纳米结构对抗血栓活性的影响。
【专利说明】冬凌草茎水提物的纳米结构及应用
[0001] _
发明领域
[0002]本发明涉及冬凌草茎用蒸馏水80 °C提取制备水提物、涉及该水提物浓缩得到的固体在水溶液中的纳米结构、进一步涉及纳米结构对抗血栓活性的影响。本发明属于生物医药领域。
[0003]
【背景技术】
[0004]冬凌草(DLC),是唇形科香茶菜属植物碎米極Rabdosia rubescens (Hems1.)Hara的全草。冬凌草为多年生草本植物，广泛分布于我国黄河长江流域，主产于河南济源太行山、王屋山区一带。因具有清热解毒、清咽利喉和消肿止痛功能，民间常年将冬凌草叶当作茶叶煮水饮用。在过去的30多年里，冬凌草的化学成分及药理作用研究主要集中在叶的脂溶性部分，代表性成分为冬凌草甲素和冬凌草乙素。通过长期研究积累，发明人披露了冬凌草茎水提物的6种酚酸和4种二萜。它们是丹参素，丹酚酸 B, 5-(2-carboxyvinyl)-2, 3 -dihydro-7-hydroxy-2-(3, 4- dihy- droxyphenyl)benzofuran-3-carboxylic acid l-carboxy-2- (3, 4-dihydroxyphenyl)- ethyl ester 及异构体，丹酌=酸 B 脱二氢物及异构体，amethystonoic acid, oridonin, rabdoternin D和ponicidin。这些酚酸和二萜在冬凌草茎水提物中的相对含量接近73%。不过，到目前为止还没有任何与冬凌草茎水提物纳米结构的报道。
[0005]通过长期研究积累，发明人认识到这些酚酸和二萜在水溶液中可以通过J1-Ji相互作用，氢键相互作用和疏水 性相互作用发生共组装，形成纳米结构。恰恰是这些酚酸和二萜在水溶液中共组装形成的纳米结构，使得冬凌草茎水提物显示重要的生物活性。根据这些认识，发明人提出了本发明。
【发明内容】
[0006]本发明的第一个内容是提供冬凌草茎水提物。
[0007]本发明所要解的第二个内容是测定冬凌草茎水提物的纳米结构。
[0008]本发明的第三个内容是阐明冬凌草茎水提物的纳米结构与抗血栓活性的关系。
[0009]
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1在浓度为24.00 mg/ml的超纯水溶液中冬凌草茎的水提物以直径为38.9-227.8 nm的纳米球存在.图2在浓度为6.00 mg/ml的超纯水溶液中冬凌草茎的水提物以直径为4.5-63.6 nm的纳米球存在.图3在浓度为1.0O mg/ml的超纯水溶液中冬凌草茎的水提物以直径为32.9-180.8nm的纳米球存在.图4在浓度为0.17 mg/ml的超纯水溶液中冬凌草茎的水提物以直径为45.7-234.3nm的纳米球存在.【具体实施方式】
[0011]为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0012]实施例1冬凌草茎水提物的制备
44 g干冬凌草茎自来水洗净、凉干、切成大约I cm长的茎段、加500 ml双蒸水于60 -100 °C，优选80 °C搅拌提取10 - 60分钟，优选30分钟。过滤得到的清液于40 °C减压浓缩，得到3 g冬凌草茎水提物，为淡黄色固体，研成粉末，供后面的研究使用。
[0013]实施例2冬凌草茎水提物的纳米结构
为了描述冬 凌草茎水提物的纳米结构，本发明将冬凌草茎水提物的淡黄色固体配成浓度为40 mg/ml, 6 mg/ml, I mg/ml和0.17 mg/ml的超纯水溶液，然后将溶液滴在铜网上，35 ° C挥发24 h至干溶后按标准操作(20 eV能量窗口，6000 - 400，000倍)在透射电镜(JSM- 6360 LV, JEOL, Tokyo, Japan)下观察纳米形态。测定的透射电镜照片显示在图1 - 4中。
[0014]图1说明在浓度为40 mg/ml的超纯水溶液中，冬凌草茎的水提物以直径为38.9-227.8 nm的纳米球存在。
[0015]图2说明在浓度为6 mg/ml的超纯水溶液中，冬凌草茎的水提物以直径为
4.5-63.6 nm的纳米球存在。
[0016]图3说明在浓度为1.00 mg/ml的超纯水溶液中，冬凌草茎的水提物以直径为32.9-180.8 nm的纳米球存在。
[0017]图4说明在浓度为0.17 mg/ml的超纯水溶液中，冬凌草茎的水提物以直径为
45.7-234.3 nm的纳米球存在。
[0018]图2-4说明当浓度从6.00 mg/ml降至1.00 mg/ml再降至0.17 mg/ml时，冬凌草茎的水提物形成的纳米球的直径逐步增大。这种现象揭示，我们可以通过控制冬凌草茎的水提物的浓度来控制冬凌草茎的水提物形成的纳米球的直径。图1-2说明当浓度从40mg/ml降至6.00 mg/ml时,冬凌草莖的水提物形成的纳米球的直径减小。这种现象同样揭示，我们可以通过控制冬凌草茎的水提物的浓度来控制冬凌草茎的水提物形成的纳米球的直径。
[0019]实施例3冬凌草茎水提物的抗血栓活性评价
用前将冬凌草茎水提物配成三种浓度的生理盐水溶液，用于体内的剂量为0.8 mg/kg,
5.0 mg/kg, 30.0 mg/kg 和 120.0 mg/kg。阳性药 Asprin 配成 10 g/L 生理盐水溶液，即55.5 mM (毫摩尔，是浓度单位)的溶液，用于体内的剂量为30 mg/kg。空白对照为生理盐水，抗凝剂为肝素钠0.42 mg/ml生理盐水溶液。将体重大约为250 g SD雄性大鼠随机分组，η = 10，大鼠灌胃的体积为3 ml/kg,灌胃30分钟后用乌拉坦(20 g/100 ml, 7ml/kg)麻醉，分离右颈动脉和左颈静脉，将一根含有6 cm事先已精密称重的丝线的聚乙烯管充满肝素钠生理盐水溶液，一端插入左颈静脉，一端插入右颈动脉。血流从右侧动脉经聚乙烯管流入左侧静脉，15分钟后取出丝线并记录血栓湿重，结果如表1所示。表1的数据说明，当剂量从30.0 mg/kg降至5.0 mg/kg再降至0.8 mg/kg时,冬凌草莖水提物抑制大鼠血栓形成的活性逐步降低。而当剂量从30.0 mg/kg升降至120.0 mg/kg时,冬凌草莖水提物抑制大鼠血栓形成的活性也降低。冬凌草茎的水提物在剂量为120.0 mg/kg时抑制大鼠血栓形成的活性与剂量为0.8 mg/kg时抑制大鼠血栓形成的活性相当。
[0020]表1 口服冬凌草茎水提物对SD雄性大鼠血栓形成的影响
If 品 ΨΙΜ.?, it-S 重(nieai1: mg)
主理坌水 0.6 ml: R 大 E36 J0 = 2.51
3 司匹忭 30.0 nit；ts24.S7 =2,62
120.0?ngto32,55 r2.2~ ?
50.026.54 = 2.50 *
冬次萆茎水提钧'^,
5.0rat/kg30.24 =: 2.30 "
0.S mg/kg33.51 χ 2.22 ?
η = 10; a)与生理盐水组，5.0 mg/kg冬凌 草茎水提物组，0.8 mg/kg冬凌草茎水提物组及120.0 mg/kg冬凌草莖水提物组比p〈0.01; b)与生理盐水组比p〈0.01,与0.8 mg/kg冬凌草茎水提物组及120.0 mg/kg冬凌草茎水提物组比p〈0.05; c)与生理盐水组比p〈0.05，与120.0 mg/kg冬凌草茎水提物组比P > 0.05.实施例4冬凌草茎水提物的纳米结构与抗血栓活性的关系
实施例2揭示，当浓度从6.00 mg/ml降至1.00 mg/ml再降至0.17 mg/ml时,冬凌草莖的水提物形成的纳米球的直径逐步增大。当浓度从40 mg/ml降至6.00 mg/ml时,冬凌草茎的水提物形成的纳米球的直径反而减小。浓度为40.00 mg/ml时冬凌草茎的水提物形成的纳米球的直径与浓度为0.17 mg/ml时形成的纳米球的直径非常接近。按照每只大鼠的血量为 20 ml 估算,给药剂量为 120.0 mg/kg, 30.0 mg/kg, 5.0 mg/kg 和 0.8 mg/kg 时的血药浓度分别为40.00 mg/ml, 6.00 mg/ml, 1.00 mg/ml和0.17 mg/ml。这种估算说明，冬凌草茎的水提物形成的纳米球的直径在70 nm以下时，抗血栓活性最好。冬凌草茎的水提物形成的纳米球的直径在大于200 nm时，抗血栓活性变差。因为冬凌草茎的水提物形成的纳米球的直径紧密依赖于浓度，所以我们可以通过浓度-粒径-活性三者的关系来谋取理想的疗效。这就是冬凌草茎水提物的纳米结构的应用价值。
[0021]
【权利要求】
1.冬凌草茎水提物的制备工艺，该工艺包括将干冬凌草茎用自来水洗净之后切碎，按1:24的比例加水于60 - 100 °C，优选80 °C搅拌提取10 - 60分钟，优选30分钟，过滤得到的清液于40 °C减压浓缩，得到冬凌草茎水提物干粉，为淡黄色固体。
2.冬凌草茎水提物在水溶液中的纳米结构。
3.冬凌草茎水 提物在水溶液中的纳米结构对抗血栓活性的影响。
【文档编号】A61P7/02GK103536651SQ201210236258
【公开日】2014年1月29日 申请日期:2012年7月10日 优先权日:2012年7月10日
【发明者】彭师奇, 赵明, 姚兴河, 彭莉 申请人:彭莉