专利名称：昆仑雪菊提取物及其新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及昆仑雪菊总黄酮的新用途，属于中药领域。
背景技术：
高原世居人群及移居人群在独特的自然环境中面临低压性缺氧的问题，在缺氧适应过程中，从人的器官、组织到细胞水平，都发生了特殊的病理生理变化，部分人群因适应不全而发生慢性高山病，常出现肺循环异常、肾功能不全、血压异常及红细胞容量和血红蛋白容量异常相关的临床症状，严重影响着高原人的身心健康。目前高原缺氧的治疗方法有补氧及药物治疗，采用的方法如采用便携式供氧装置给氧或采用红景天等药物进行治疗。
《昆仑雪菊水溶性黄酮的制备及初步鉴定》(郑大成，2010年10月《亚太传统医药》研究了水溶性的总黄酮)，其提取方法为取雪菊花药材粉末10g，用I :10比例的水提取3次(每次60°C，50min)，减压浓缩至小体积，用石油醚脱脂，再用正丁醇萃取，减压回收正丁醇，得提取物I (样品B)。将正丁醇萃取后的水层经减压浓缩至干，得水提物I。本发明研究发现，昆仑雪菊的乙醇提取的总黄酮具有明显的抗缺氧的作用。
发明内容
本发明目的之一在于提供昆仑雪菊在制备治疗高原缺氧症药物中的应用。本发明的目的还在于提供昆仑雪菊总黄酮在制备高原缺氧症药物中的应用。本发明目的在于提供一种治疗高原缺氧症的昆仑雪菊提取物。本发明目的还在于提供该昆仑雪菊提取物的制备方法。本发明目的还在于提供该昆仑雪菊提取物在制备治疗高原缺氧症药物中的应用。本发明是通过以下技术方案实现的昆仑雪菊KunlunChrysanthemum,学名为两色金鸡菊(Coreopsis tinctoria),又名“雪菊”，维吾尔语“古丽恰尔”，为菊科多年生草本植物菊金鸡菊Golden chrysanthemum同属近缘植物昆仑雪菊的头状花序。一种治疗高原缺氧症的昆仑雪菊提取物，所述昆仑雪菊提取物中总黄酮含量以芦丁计为 20-90%。优选地，所述昆仑雪菊提取物中总黄酮含量为30-90%;优选地，所述昆仑雪菊提取物中总黄酮含量为35-90%;优选地，所述昆仑雪菊提取物中总黄酮含量为40-90%;优选地，所述昆仑雪菊提取物中总黄酮含量为45-90%;优选地，所述昆仑雪菊提取物中总黄酮含量为50-90%;优选地，所述昆仑雪菊提取物中总黄酮含量为55-90%;优选地，所述昆仑雪菊提取物中总黄酮含量为60-90%;优选地，所述昆仑雪菊提取物中总黄酮含量为70-90%;
进一步优选地，所述昆仑雪菊提取物中总黄酮含量为75-90%。本发明所述昆仑雪菊提取物，可以是昆仑雪菊主要由乙醇提取得到的乙醇提取物；优选地，所述昆仑雪菊由20-95%乙醇提取；优选地，所述昆仑雪菊由25-95%乙醇提取；优选地，所述昆仑雪菊由30-95%乙醇提取；优选地，所述昆仑雪菊由35-95%乙醇提取；优选地，所述昆仑雪菊由40-95%乙醇提取；优选地，所述昆仑雪菊由50-95%乙醇提取；优选地，所述昆仑雪菊由60-95%乙醇提取；优选地，所述昆仑雪菊由70-90%乙醇提取；优选地，乙醇提取温度为40_100°C ；优选地，乙醇提取1-4次，每次1-3小时。本发明所述昆仑雪菊提取物，还可以是昆仑雪菊采用水提醇沉法制备得到的提取物，其醇沉浓度为20-90%;优选地，醇沉浓度为35-85% ；优选地，醇沉浓度为40-85% ；优选地，醇沉浓度为55-85% ；优选地，醇沉浓度为65-85% ；优选地，醇沉浓度为75-85% ；优选地，水提取步骤中，溶剂用量为8-12倍量；提取次数为2-4次，每次O. 5-1. 5小时。本发明所述昆仑雪菊提取物还可以是上述昆仑雪菊乙醇提取物或水提醇沉物进一步经大孔吸附树脂纯化得到的产物；其中乙醇洗脱浓度为50-95% ；优选的，大孔吸附树脂为中等极性或弱极性；更优选的，大孔吸附树脂为弱极性；弱极性大孔吸附树脂可以选择DlOl大孔吸附树脂。所述昆仑雪菊提取物，优选由以下方法制备而成步骤I :昆仑雪菊用20-95%乙醇提取，滤过得滤液；步骤2 :滤液浓缩，加水稀释，静置，滤过，得滤液；步骤3 :滤液通过大孔吸附树脂吸附，先后用水和/或低浓度乙醇洗脱到无色，最后用50-95%乙醇洗脱，收集50-95%乙醇洗脱液。优选地，步骤I中的乙醇用量为药材用量的4-12倍重量；优选地，步骤I中的乙醇为70-90 %乙醇；优选地，步骤I中40_100°C乙醇提取1-3次，每次1_3小时；优选地，上述步骤2中的加水稀释为加水稀释至原体积的1-3倍，放置12-36小时，滤过；优选地，上述步骤3中的大孔吸附树脂柱为中等极性或弱极性；优选地，上述步骤3 :滤液通过1-3倍重量大孔吸附树脂吸附；
优选地，上述步骤3中的低浓度乙醇为用5-30%乙醇；优选地，上述步骤3中的低浓度乙醇为用5-20%乙醇；优选地，上述步骤3，收集50-95%乙醇洗脱液后干燥，得昆仑雪菊提取物。本发明昆仑雪菊提取物可以按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，例如胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂、粉针剂等制剂。为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如填充齐 、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味 剂包括甜味剂及各种香精；防腐剂包括尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括PEG6000，PEG4000，虫蜡等。本发明提供上述昆仑雪菊提取物在制备抗缺氧症药物中的应用。本发明提供上述昆仑雪菊总黄酮在制备抗缺氧症药物中的应用。本发明提供上述昆仑雪菊提取物在制备高原缺氧症药物中的应用。本发明提供上述昆仑雪菊总黄酮在制备高原缺氧症药物中的应用。本发明一种治疗高原缺氧症的昆仑雪菊提取物的制备方法，其制备方法为昆仑雪菊由乙醇提取；优选地，所述昆仑雪菊由20-95%乙醇提取；优选地,所述昆仑雪菊由60-95%乙醇提取；优选地，所述昆仑雪菊由70-90%乙醇提取；优选地，乙醇提取温度为40_100°C ；优选地，乙醇提取1-4次，每次1-3小时。昆仑雪菊还可以采用水提醇沉法制备，其醇沉浓度为60-90% ； 优选地，醇沉浓度为75-85% ；优选地，水提取步骤中，溶剂用量为8-12倍量；提取次数为2-4次，每次O. 5-1. 5小时。进一步优选地，昆仑雪菊经乙醇提取或水提醇沉后还可以进一步经大孔吸附树脂纯化，其乙醇洗脱浓度为50-95% ；优选的，大孔吸附树脂为中等极性或弱极性；更优选的，大孔吸附树脂为弱极性；弱极性大孔吸附树脂可以选择DlOl大孔吸附树脂。所述昆仑雪菊提取物，优选由以下方法制备而成步骤I :昆仑雪菊乙醇提取，滤过得滤液；步骤2 :滤液浓缩，加水稀释，静置，滤过，得滤液；步骤3 :滤液通过大孔吸附树脂吸附，先后用水和/或低浓度乙醇洗脱到无色，最后用50-95%乙醇洗脱，收集50-95%乙醇洗脱液。
优选地，步骤I中的乙醇用量为药材用量的4-12倍重量； 优选地，步骤I中的乙醇为20-80 %乙醇；优选地，步骤I中40_100°C乙醇提取1-3次，每次1_3小时；优选地，上述步骤2中的加水稀释为加水稀释至原体积的1-3倍，放置12-36小时，滤过；优选地，上述步骤3中的大孔吸附树脂柱为中等极性或弱极性；优选地，上述步骤3 :滤液通过1-3倍重量大孔吸附树脂吸附；优选地，上述步骤3中的低浓度乙醇为用5-30%乙醇；优选地，上述步骤3中的低浓度乙醇为用5-20%乙醇； 优选地，上述步骤3，收集50-95%乙醇洗脱液后干燥，得昆仑雪菊提取物。本发明所述水提醇沉法系指在中药水提浓缩液中，加入乙醇使达到规定的含醇量(即醇沉浓度)，某些成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀，滤过，取乙醇溶液，回收溶剂，使水提液得以精制的方法。本发明由昆仑雪菊制成，昆仑雪菊性味苦、辛、微寒，菊味浓郁，汤色绛红而清透，性苦、辛、味寒、归肺、肝经，《本草汇言》称其可“破血疏肝，解疔散毒”，本发明昆仑雪菊总黄酮提取物制备而成的中药制剂抗缺氧疗效显著，能能明显延长小鼠在密闭缺氧条件下的存活时间，明显延长小鼠亚硝酸钠中毒致缺氧的存活时间，安全边际高，具有广阔的应用前景；且本发明制剂所采用的制备方法能够充分地提取出药材中的有效成份，具有操作简单，有效成份富集率高，生产成本低、能适应工业化生产要求等优点。实验例I :常压密闭缺氧实验I实验目的通过常压密闭缺氧实验模型，观察本发明的抗缺氧作用。2实验材料A :本发明制剂(实施例I制备)，为棕褐色粉末状物，每克干膏相当于生药16. 66g ；B :本发明制剂(实施例2制备)，为棕褐色粉末状物，每克干膏相当于生药16. 32g ；C :本发明制剂(实施例3制备)，为棕褐色粉末状物，每克干膏相当于生药16. 98g ；D :本发明制剂(实施例4制备)为棕褐色膏状状物，每克干膏相当于生药9g ；E :本发明制剂(实施例5制备)为棕褐色粉末状物，每克干膏相当于生药3g ；F :对照药红景天提取物为棕褐色粉末状物，实验前用蒸馏水配制成O. 14g/ml的悬池液，相当于6g原生药材· kg4 · (Γ1 ；G :对照药0. 5%普萘洛尔针剂，用蒸馏水稀释成I. 2mg/ml ；H:生理盐水3实验动物将80只小鼠随机分为8组，分别为本发明制剂5组、红景天组、普萘洛尔组及生理盐水组。4实验步骤除普萘洛尔组以腹腔注射(给药剂量0. 02g / kg)，其余组以灌胃给药(药物浓度O. 12g生药量/ml，给药体积O. 2ml/10g)。连续给药8d，每日I次。末次给药Ih后，将小鼠放入装有IOg碱石灰的250mL广口瓶内，旋紧瓶塞，并涂以凡士林密封，立即记录各组小鼠存活时间。5实验结果根据实验观察，小鼠从缺氧到死亡过程中有紫绀和抽搐症状，以小鼠挣扎抽搐后突然瘫软并呼吸停止为死亡判定标准。用统计软件SPSS17. O处理数据，结果均采用均数土标准差表示(X土s)，组间差异比较采用单因素方差分析(One way ANOVA)，方差齐者组间比较用LSD检验，方差不齐者用Tamhan^ s T2检验，以P〈0. 05为差异有统计学意义。表I雪菊总黄酮对常压密闭缺氧的影响(η=10，Γ± )
权利要求
1.昆仑雪菊提取物，其特征在于，该提取物的是通过用质量浓度为20-95%乙醇提取昆仑雪菊制备得到。
2.如权利要求I所述的提取物，其特征在于乙醇的质量浓度为60-95%。
3.如权利要求I所述的提取物，其特征在于昆仑雪菊由乙醇提取后还包括大孔吸附树脂纯化的步骤；所述大孔吸附树脂为中等极性或弱极性。
4.如权利要求3所述的提取物，其特征在于该提取物的制备方法包括如下步骤 步骤I :昆仑雪菊用20-95%乙醇提取，滤过得滤液； 步骤2 :滤液浓缩，加水稀释，静置，滤过，得滤液； 步骤3 :滤液通过大孔吸附树脂吸附，先后用水和/或低浓度乙醇洗脱到无色，最后用50-95%乙醇洗脱，收集50-95%乙醇洗脱液。
5.昆仑雪菊提取物在制备抗缺氧药物中的应用，所述昆仑雪菊提取物中总黄酮含量以芦丁计为20-90% ;优选总黄酮含量以芦丁计为30-90% ;优选总黄酮含量以芦丁计为35-90% ;优选总黄酮含量以芦丁计为40-90% ;优选总黄酮含量以芦丁计为45-90% ;优选总黄酮含量以芦丁计为50-90% ;优选总黄酮含量以芦丁计为55-90% ;优选总黄酮含量以芦丁计为60-90% ;优选总黄酮含量以芦丁计为70-90% ;优选总黄酮含量以芦丁计为75-90%。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述缺氧为高原缺氧。
7.如权利要求5或6所述的应用，其特征在于昆仑雪菊提取物选自由如下方法A、B任意一种制备得到的提取物 方法A包括昆仑雪菊主要由乙醇提取制备得到的乙醇提取物； 方法B为昆仑雪菊采用水提醇沉法制备得到的提取物。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于昆仑雪菊乙醇提取物或水提醇沉物进一步经大孔吸附树脂纯化得到的精制产物。
9.昆仑雪菊总黄酮在制备预防或治疗高原缺氧药物中的应用。
10.如权利要求1-4任一所述的提取物在制备预防或治疗高原缺氧药物中的应用。
全文摘要
本发明公开昆仑雪菊提取物及其新用途，该提取物的是通过用质量浓度为20-95％乙醇提取昆仑雪菊制备得到。本发明还提供了昆仑雪菊提取物在制备抗缺氧药物中的应用，以及在制备预防或治疗高原缺氧药物中的应用。本发明抗缺氧疗效显著，能明显延长小鼠在密闭缺氧条件下的存活时间，明显延长小鼠亚硝酸钠中毒致缺氧的存活时间，安全性高，具有广阔的应用前景。
文档编号A61K36/28GK102836195SQ20121036564
公开日2012年12月26日 申请日期2012年9月27日 优先权日2012年1月20日
发明者伍文彬, 刘涛 申请人:伍文彬