鸡传染性支气管炎弱毒株s1基因及其弱毒株和应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种鸡传染性支气管炎弱毒株S1基因及含有该弱毒株S1基因的弱毒株。该弱毒株S1基因编码的多肽能够刺激机体产生中和抗体，含有该弱毒株S1基因的传染性支气管炎YB160株，可用于制备鸡传染性支气管炎疫苗组合物或亚单位疫苗，能够有效防制IB流行毒株攻击，对腺胃型传染性支气管炎具有较好保护力。本发明还涉及一种由本发明的鸡传染性支气管炎弱毒株制得的鸡传染性支气管炎诊断药剂。本发明另外还涉及一种与本发明的鸡传染性支气管炎弱毒株S1基因同源的鸡传染性支气管炎强毒株S1基因及含有该强毒株S1基因的鸡传染性支气管炎强毒株，该强毒株可用于抗传染性支气管炎疫苗或亚单位疫苗或疫苗组合物的效力检验。
【专利说明】鸡传染性支气管炎弱毒株Si基因及其弱毒株和应用
【技术领域】
[0001]本发明属于禽类生物制药【技术领域】，涉及一种鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因、含有该弱毒株Si基因的鸡传染性支气管炎弱毒株及该弱毒株在制备疫苗方面的应用。
【背景技术】
[0002]鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis, IB)是鸡的一种急性，高度接触传染性的病毒性疾病。我国从1953年开始有呼吸道病变型IB的发病报道，1982年在广东首次发现肾病变型IB，近年来全国各地均有IB的流行，其中多以肾病变型为主。自1995年以来我国江苏、山东、山西、安徽等省发生了一种以生长阻滞、极度消瘦、拉稀为主要症状，以腺胃肿大为主要病理特征的腺胃病变型IB。该病发病率为30%~50%，病死率达30%以上。患病鸡体重出现负增长，饲料报酬显著下降，给养禽业造成重大损失。
[0003]王玉东等于1997年对腺胃型传染性支气管炎做了如下报道:1996年9月以来在青岛及附近地区养鸡场25~70日龄育成鸡连续发生了一种以流泪、眼肿、伴有呼吸道症状，极度消瘦、拉稀、死亡为特征的传染病，主要剖检症状为:腺胃肿大如球状，腺胃壁增厚，腺胃粘膜出血溃疡，胰腺肿大出血。发病率可达100%，死亡率为3%~95%不等。不同品种鸡都有发病。研究表明，病原为冠状病毒，我们将该病暂定名为鸡腺胃型传染性支气管炎。
[0004]免疫接种是防治鸡传染性支气管炎病毒的最有效手段。目前，市场上已经有一些弱毒疫苗在临床上应用，也有一些新的毒株被分离。由于IBV血清型众多，且流行毒株与疫苗株相比在基因水平上存在较大变异，致使已有疫苗株不能够有效防制IB流行毒株攻击，IB的防制效果并不理想。例如，中国专利CN 101514334A公开了一种鸡传染性支气管炎病毒弱毒疫苗株及其应用；中国专利CN 102220287A公开了一种鸡传染性支气管炎冷适应致弱疫苗株及其应用；中国专利CN101100656A公开了一种鸡肾型传染性支气管炎HN99株病毒株。以上专利均涉及到一些新的鸡传染性支气管炎弱毒疫苗株，可用于制备活疫苗，但这些毒株均未表明可以对腺胃型鸡传染性支气管炎病毒有良好的保护作用。
[0005]因此，目前存在的问题是需要研究开发一种可以能够有效防制IB流行毒株攻击，对腺胃型传支具有较好保护力的疫苗。
【发明内容】
[0006]本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因，该弱毒株SI基因编码的多肽能够刺激机体产生中和抗体。
[0007]本发明还进一步提供了一种含有该SI基因的弱毒株，该弱毒株可用于制备抗鸡传染性支气管炎疫苗组合物，能够有效防止腺胃型传支病毒的攻击，对腺胃型传染性支气管炎具有较好保护力。
[0008]本发明还提供了一种鸡传染性支气管炎弱毒株制得的亚单位疫苗。
[0009]特别地，本发明提供了一种由本发明的鸡传染性支气管炎弱毒株制得的鸡传染性支气管炎诊断药剂。
[0010]本发明还进一步提供了一种与本发明的鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因同源的鸡传染性支气管炎强毒株SI基因及含有该强毒株SI基因的鸡传染性支气管炎强毒株,该强毒株可用于抗传染性支气管炎疫苗或亚单位疫苗或疫苗组合物的效力检验。
[0011]为此，本发明提供了一种鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID N0.1所示。
[0012]本发明中鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因是病毒在演化过程中最容易发生变异的基因，其编码的多肽能够刺激机体产生中和抗体，且其高变区主要位于SI基因内。通过对本发明中鸡传染性支气管炎弱毒株Si基因序列进行分析，发现了鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因的序列总长度为1562bp。
[0013]在本发明的一个具体的实施例中，对鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因进行分离纯化。先从鸡传染性支气管炎弱毒株病毒液中提取核酸，并以此为模板，经反转录后，用特异性引物进行PCR扩增，之后用PCR产物纯化试剂盒回收目的片段，即获得纯化的鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因。
[0014]从GenBank中下载IBV H52、Hl20和W93疫苗株SI基因序列，用DNAStar软件与本发明中鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因序列进行多重比对，比对方法为:打开DNAStar软件，选用MegAlign功能,在“File”中载入需比对序列，选择“Align”中“By ClustalVmethod”进行比对,选择“view”下的“Sequence Distances”即可看到比对序列的核苷酸遗传距离(见图1)。通过比对发现本发明中鸡传染性支气管炎弱毒株Si基因与常见的鸡传染性支气管炎病毒疫苗 株H52株、H120株和W93株SI基因的同源性分别为71.4%,71.6%和 71.3%。
[0015]本发明还提供了一种含有本发明所述弱毒株SI基因的鸡传染性支气管炎弱毒株。该弱毒株可用于制备抗鸡传染性支气管炎疫苗组合物，能够有效防止腺胃型传支病毒的攻击，对腺胃型传染性支气管炎具有较好保护力。
[0016]本发明中所用术语“病毒疫苗株”是指用于制备疫苗的病毒株。
[0017]本发明中所用术语“SI蛋白”是指SI基因的表达产物。
[0018]所谓“基因的表达”是指细胞在生命过程中，把储存在DNA序列中的遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子。
[0019]本发明中，所用术语“腺胃型传染性支气管炎病毒，简称腺胃型传支”(Avianinfectious bronchitis, IB)是指本发明中所述传染性支气管炎病毒为腺胃型传染性支气管炎弱毒株，其具有如下特征:
[0020](I)发病鸡腺胃肿大如球状，腺胃壁增厚，腺胃粘膜乳头出血溃疡；
[0021](2)病毒分离物对NDV LaSota株病毒的繁殖产生干扰；
[0022](3)病毒分离物对I %鸡红细胞不产生凝集；
[0023](4)特异性血清中和试验结果标明，病鸡的病毒分离物与YB160阳性血清呈阳性反应，而与NDV LaSota株、IBDV B87株、AIV H9N2株、EDS76的阳性血清均呈阴性反应。
[0024]在本发明中，“鸡传染性支气管炎弱毒株”应该从广义上加以理解，其包括含有SEQID N0.1核苷酸序列的弱毒株SI基因或含有与SEQ ID N0.1的核苷酸序列的弱毒株SI基因的同源性在80%以上的核苷酸序列的SI基因的鸡传染性支气管炎弱毒株，优选含有与SEQ ID N0.1的核苷酸序列的弱毒株SI基因的同源性在90%以上的核苷酸序列的SI基因的鸡传染性支气管炎弱毒株，更为优选的是，含有与SEQ ID N0.1的核苷酸序列的弱毒株SI基因的同源性在95%~99%以上的核苷酸序列的SI基因的鸡传染性支气管炎弱毒株。
[0025]在本发明中所用术语“同源性”是指两个氨基酸序列或两个核苷酸序列的相似程度。氨基酸序列或核苷酸序列的同源性可以通过本领域公知的任何适当的方法计算得到，例如，可以将目标氨基酸(或核苷酸)序列与参比氨基酸(或核苷酸)序列进行序列比对，必要时可以引入空缺，使得两条比对的序列间相同的氨基酸(或核苷酸)数目达到最优化，并在此基础上计算两条氨基酸(或核苷酸)序列之间相同氨基酸(或核苷酸)的百分比。氨基酸(或核苷酸)序列的比对和同源性的计算可以通过本领域公知的软件实现，例如，但不限于，BLAST软件(在美国国立生物技术信息中心(NCBI)的网址上可获得:http://blast, ncb1.nlm.nih.gov/Blast.cgi,或者见，例如，Altschul S.F.et al, J.Mol.Biol.,215:403-410(1990) !Stephen F.et al, Nucleic Acids Res.，25:3389-3402 (1997))，Clustalff2软件(在欧洲生物信息研究所网址上可获得)。
[0026]在一个【具体实施方式】中，一种根据本发明所述的弱毒株,其中,所述弱毒株为鸡传染性支气管炎病毒YB160株(Avian infectious virus strain YB160)，其保藏编号为:CCTCC NO:V201235，保藏日期:2012年08月29日，保藏于中国典型培养物保藏中心(简称:CCTCC ;地址:湖北省武汉市武昌区珞珈山路16号武汉大学)。
[0027]本发明还提供了一种含有本发明所述的鸡传染性支气管炎弱毒株的抗鸡传染性支气管炎疫苗组合物。
[0028]在一个优选实施例中，所述疫苗组合物包括传染性支气管炎病毒YB160株。
[0029]根据本发明，所述疫苗组合物还进一步含有冻干保护剂。所述冻干保护剂包括但不限于含有明胶和蔗糖 。
[0030]在本发明的一个具体实施例中，所述疫苗组合物由传染性支气管炎病毒YB160株和冻干保护剂组成:取传染性支气管炎病毒YB160株的生产用毒种，用灭菌生理盐水稀释10万倍,接种于9~10日龄SPF(specific pathogen free,无特定病原体)鸡胚尿囊腔内，每胚接种0.1ml，接种后密封针孔，置于37°C条件下孵育。弃去24h死胚，鸡胚观察至72h，将30~72h的鸡胚气室向上，置于4°C条件下冷却4~24h。收获鸡胚尿囊液，将6~8个鸡胚尿囊液混合为一组，置于灭菌瓶中，在2~8°C条件下保存，同时做无菌检验，测得病毒含量应为107_°EID5(i/0.1ml。经无菌检验和病毒含量测定合格的鸡胚尿囊液混合后再与蔗糖明胶保护剂按1: l(v/v)配苗,冻干保护剂以8% (w/v)明胶、40% (w/v)鹿糖保护剂,经115°C高压灭菌40min，放4°C保存，72h内用完。在添加过程中应不断摇动病毒液，充分混匀后，即为疫苗组合物原液。将疫苗组合物原液进行无菌定量分装，迅速冷冻真空干燥，加盖密封。本发明所制备的鸡传染性支气管炎疫苗组合物每羽份中IBV为104_%ID5(i。
[0031 ] 在本发明的一个优选实施例中，所述疫苗组合物还包括其他弱毒疫苗株。其中，所述其他弱毒疫苗株包括但不限于鸡新城疫病毒弱株和/或法氏囊弱毒株等诸如此类。优选所述其他弱毒疫苗株为鸡新城疫弱毒株。
[0032]本发明还提供了一种根据本发明所述的鸡传染性支气管炎弱毒株在预防和治疗鸡腺胃型支气管炎的应用。所述应用应该理解为在制备用于预防和治疗鸡腺胃型支气管炎的疫苗及其组合物中的应用。[0033]本发明提供了一种鸡传染性支气管炎亚单位疫苗，其特征在于:所述亚单位疫苗实质上含有序列表中SEQ ID N0.3的氨基酸序列。
[0034]在本发明的一个具体实施例中，所述亚单位疫苗的制备方法，包括下述步骤:
[0035](I)利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法克隆YB160株SI蛋白的编码基因；
[0036](2)构建包含SI基因的重组转移质粒PFASTYB160S1 ；
[0037](3)构建重组杆状病毒rAcYB160Sl ；
[0038](4)重组杆状病毒rAcYB160Sl感染昆虫细胞及昆虫细胞的培养；
[0039](5)重组杆状病毒的鸡传染性支气管炎病毒重组SI基因表达鸡传染性支气管炎病毒重组SI蛋白，收获和纯化鸡传染性支气管炎重组SI蛋白；
[0040](6)利用鸡传染性支气管炎病毒重组SI蛋白，辅以佐剂，经乳化，制备鸡传染性支气管炎病毒亚单位疫苗。
[0041]本发明另外还提供了一种与本发明所述弱毒株的SI基因同源的鸡传染性支气管炎强毒株SI基因，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID N0.2所示。
[0042]本发明还提供一种含有本发明所述强毒株SI基因的鸡传染性支气管炎强毒株，其特征在于:所述强毒株为鸡传染性支气管炎病毒YBX株(Avian infectious virusstrain YBX)，其保藏编号为:CCTCCN0:V201236，保藏日期:2012年08月29日，保藏于中国典型培养物保藏中心(简称:CCTCC ;地址:湖北省武汉市武昌区珞珈山路16号武汉大学)。
[0043]本发明还进一步提供了一种根据本发明所述强毒株在抗传染性支气管炎疫苗或亚单位疫苗或疫苗组合物的效力检验中的应用。其采用传染性支气管炎病毒YBX株作为强毒株进行攻毒试验。
[0044]在本发明中，上述强毒株除用于抗传染性支气管炎疫苗或亚单位疫苗或疫苗组合物的效力检验外，其还是本发明中鸡传染性支气管炎弱毒株及鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因的重要来源。本发明中鸡传染性支气管炎弱毒株是由本发明所述强毒株SI基因的鸡传染性支气管炎强毒株经传代致弱获得的。而鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因则是从本发明的鸡传染性支气管炎弱毒株经分离纯化获得的。
[0045]本发明还特别提供了一种由鸡传染性支气管炎弱毒株制得的鸡传染性支气管炎诊断药剂，其可用于鸡传染性支气管炎疫苗效力检验中抗体水平的测定。
[0046]根据本发明的鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因是病毒在演化过程中最容易发生变异的基因，其编码的多肽能够刺激机体产生中和抗体，且其高变区主要位于SI基因内。由含有该弱毒株SI基因的鸡传染性支气管炎弱毒株所制得的鸡传染性支气管炎疫苗组合物或亚单位疫苗均能够有效防治IB流行病毒的攻击，尤其对腺胃型传染性支气管炎具有较好保护力。
[0047]根据本发明的鸡传染性支气管炎弱毒株制得的鸡传染性支气管炎诊断药剂可用于鸡传染性支气管炎疫苗效力检验中抗体水平的测定。本发明的传染性支气管炎强毒株可用于抗传染性支气管炎疫苗或亚单位疫苗或疫苗组合物的效力检验。
【专利附图】
【附图说明】
[0048]图1为实施例1中本发明鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因与IBV常见疫苗株H120、H52和W93株SI基因的核苷酸序列比对结果。
[0049]图2为实施例2中本发明传染性支气管炎病毒YB160株第F115、F125、F145、F160、F170代病毒液SI基因的核苷酸序列比对结果。
[0050]图3为实施例5中IBV SI基因的PCR扩增产物鉴定结果。
[0051]图3中的附图标记的含义如下:1IBV SI基因扩增产物；2DNAMarker2000。
[0052]菌种保藏
[0053]鸡传染性支气管炎病毒YB 160 株(Avian infectious virus strain YB160)，由普莱柯生物工程股份有限公司分离、鉴定，已在中国典型培养物保藏中心(简称=CCTCC ;地址:湖北省武汉市武昌区珞珈山路16号武汉大学)进行保藏，保藏日期:2012年08月29日，保藏编号:CCTCC NO:V201235o
[0054]鸡传染性支气管炎病毒YBX株(Avian infectious virus strainYBX),由普莱柯生物工程股份有限公司分离、鉴定，已在中国典型培养物保藏中心(简称=CCTCC ;地址:湖北省武汉市武昌区珞珈山路16号武汉大学)进行保藏，保藏日期:2012年08月29日，保藏编号:CCTCC NO:V201236o
【具体实施方式】
[0055]为使本发明更加容易理解，下面将结合实施例来详细说明本发明，这些实施例仅起说明性作用，并不局限于本发明的应用范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。
[0056]实施例
[0057]实施例1:本发明鸡传染性支气管炎病毒弱毒疫苗株(IBV)的制备
[0058]IBV强毒株为鸡传染性支气管炎病毒YBX株
[0059]传染性支气管炎病毒株传代致弱，使用9~10日龄SPF(specific pathogenfree，无特定病原体)鸡胚对株进行连续传代致弱，每代次通过尿囊腔接种3枚鸡胚，连续传至170代，进行致弱评价试验。将F30、F65、F90、Fl 15、F125、F145、F160和F170代毒株分别接种I日龄SPF鸡，每只鸡滴鼻、口服、肌肉注射1ml，其中F145、F160和F170代毒接种的雏鸡，未发现发病和死亡，说明该毒株在F145、F160和F170代毒已经完全致弱，对鸡只具有较好的安全性。同时用本发明弱毒株免疫15日龄雏鸡，于免疫后15天，用同源强毒进行攻击，发现免疫组鸡只状态良好，无发病症状。而对照组发病明显，其在攻毒后约30%(6-7/20)鸡死亡。以上实验经过2次重复，得到一致的结果，说明致弱毒株具有良好的免疫保护性，选取F160代毒作为疫苗研制的候选毒株。
[0060]实施例2:本发明弱毒疫苗株鸡传染性支气管炎病毒YB160株的培育及其基因稳定性
[0061]1.材料与方法
[0062]1.1病毒株YBX传代致弱
[0063]使用9~10日龄SPF鸡胚对YBX株进行连续传代致弱。每个代次毒通过尿囊腔接种3枚鸡胚，每胚接种0.1ml，置37°C孵育72h (弃去24h内死胚)，每日观察鸡胚两次，如果鸡胚在24~72h死亡，则置4°C保存。72h后将所有接胚取出置4°C，4~24h，观察记录鸡胚病变情况，无菌收集鸡胚尿囊液进行下一代传代。选择72h未死，但病变典型，尿囊液清亮的鸡胚进行传代。
[0064]1.2病毒滴度测定
[0065]取F30、F65、F90、Fl 15、F125、F145、F160和F170代次毒的鸡胚尿囊液，分别依次作10倍系列稀释；选择4个稀释倍数(IO4~IO7或IO5~IO8)的病毒悬液分别接种5枚9~10日龄SPF鸡胚，每枚鸡胚接种0.1ml，将鸡胚置37°C温箱中孵育I周，每天照胚，记录I周内鸡胚的感染数和生存数，按Reed-Muench法计算EID5(I。
[0066]1.3无菌检验和支原体检验
[0067]将YB 株 F30、F65、F90、Fl 15、F125、F145、F160 和 F170 代次毒按现行《中华人民共和国兽药典》附录进行无菌检验和支原体检验。
[0068]1.4外源病毒检验
[0069]将YB160 株 F30、F65、F90、F115、F125、F145、F160 和 F170 代次毒进行外源病毒检测。
[0070]1.5 YB 160株的致弱评价
[0071]180只I日龄SPF鸡随机分为9组(每组20只)，分别将9组鸡饲养于9个负压隔离器中，雏鸡自由采食饮水。在15日龄时，I~8组雏鸡分别用鸡胚代次毒F30 (106.5EID50)、F65 (IO7-2EID50)、 F90 (IO7-5EID50)、F115 (IO7-8EID50)、F125 (108.0EID50)、F145 (108.2EID50)、F160 (IO8-3EID50)和F170 (IO8 2EID5tl)进行接种，每只滴鼻0.1ml ;第9组雏鸡作为对照组，每只滴鼻0.1ml正常尿囊液。自接种之日起，每日观察、记录鸡群的发病情况、死亡情况，对死亡鸡进行剖检，观察IBV靶器官、组织的病理变化并于接种后14日，使用同源强毒YBX进行攻击，每只点眼滴鼻0.1ml ;攻毒后，每日观察、记录鸡群发病情况、死亡情况，对死亡鸡进行剖检，观察靶器官、组织的病理变化。
[0072]1.6 YB160株的免疫效力评价
[0073]1.6.1 15日龄的SPF鸡免疫效力试验
[0074]40只I日龄SPF鸡随机分为2组(每组20只)，分别饲养于负压隔离器中，雏鸡自由采食饮水。15日龄时，其中一组雏鸡使用YB160株进行接种，每只滴鼻0.1ml ;另一组雏鸡则作为对照组，每只滴鼻0.1ml正常尿囊液。自接种之日起，每日观察、记录接种鸡群的发病情况、死亡情况，并于免疫后15天，对每组采集血清进行特异性抗体检测,具体方法参照传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒说明书进行；同时将2组雏鸡用同源强毒YBX进行滴鼻攻击，每只0.1ml ;攻毒后，每日观察、记录鸡群的发病情况、死亡情况。
[0075]1.6.2 3日龄SPF鸡免疫效力试验
[0076]方法同1.6.1, SPF鸡为3日龄。
[0077]1.7 YB 160株基因稳定性试验
[0078]将F115、F125、F145、F160、F170株SI基因测序，比较其基因稳定性。
[0079]2 结果
[0080]2.1 YB 160株的传代致弱
[0081]我们利用IBV-YBX强毒株在SPF鸡胚上连续传代170代，培育出了一株毒力明显减弱，并且具有良好免疫原性的IBV弱毒株。试验证实IBV-YB160 F160代毒力明显下降，以IO5 5EID5tl接种I日龄SPF鸡5/5无不良反应。IBV-YB160 F160代毒连续通过I日龄SPF鸡体5代，未见毒力返强。以IO3EID5tl免疫I日龄SPF鸡，攻毒后10/10保护，对照10/10发病。
[0082]2.2病毒滴度测定结果
[0083]YB 160株可高度适应鸡胚，F30代的EID5tl为106 5/0.1ml，传代后病毒滴度逐渐升高，F65 ~F125 代≥107 0EID50A).1ml，F145 ~F160 代趋于稳定，滴度约为 108 2EID50/0.1ml。
[0084]表1 YB160株鸡胚传代毒滴度测定结果
[0085]
【权利要求】
1.一种鸡传染性支气管炎弱毒株SI基因,其核苷酸序列如序列表中SEQ ID N0.1所/Jn ο
2.—种含有权利要求1所述弱毒株SI基因的鸡传染性支气管炎弱毒株。
3.一种根据权利要求2所述的弱毒株，其特征在于:所述弱毒株为鸡传染性支气管炎病毒 YB160 株(Avian infectious virus strain YB160)，其保藏编号为:CCTCC NO:V201235，保藏于中国典型培养物保藏中心。
4.一种含有权利要求2或3所述的鸡传染性支气管炎弱毒株的抗鸡传染性支气管炎疫苗组合物。
5.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于:所述疫苗组合物还进一步含有冻干保护剂。
6.根据权利要求4或5所述的疫苗组合物，其特征在于:所述疫苗组合物还包括其他弱毒疫苗株。
7.根据权利要求6所述的疫苗组合物，其特征在于:所述其他弱毒疫苗株为鸡新城疫署層
8.一种鸡传 染性支气管炎亚单位疫苗，其特征在于:所述亚单位疫苗实质上含有序列表中SEQ ID N0.3的氨基酸序列。
9.一种根据权利要求2或3所述的鸡传染性支气管炎弱毒株在预防和治疗鸡腺胃型支气管炎的应用。
10.一种与权利要求1所述弱毒株的SI基因同源的鸡传染性支气管炎强毒株SI基因，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID N0.2所示。
11.一种含有权利要求10所述强毒株SI基因的鸡传染性支气管炎强毒株，其特征在于:所述强毒株为鸡传染性支气管炎病毒YBX株(Avian infectious virus strain YBX),其保藏编号为=CCTCC NO:V201236，保藏于中国典型培养物保藏中心。
12.一种根据权利要求11所述强毒株在抗传染性支气管炎疫苗或亚单位疫苗或疫苗组合物的效力检验中的应用。
【文档编号】A61K49/00GK103849632SQ201210519405
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年12月6日 优先权日:2012年12月6日
【发明者】张许科, 孙进忠, 白朝勇 申请人:普莱柯生物工程股份有限公司