专利名称：乌头属药材或其加工品中总生物碱提取物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种乌头属药材或其加工品中总生物碱提取物的制备方法，特别是对由各种方法得到的乌头属药材或其加工品总生物碱提取物粗品制备其纯化提取物产品的方法。
背景技术：
乌头属植物有着丰富的药用品种，据记载，我国约有36种乌头属植物可供药用，常用药材主要有乌头(川乌)、北乌头(草乌)、黄花乌头、短柄乌头、甘青乌头等，以及炮制加工品，如制草乌、制川乌、黑附片、白附片、淡附片、黄附片、炮天雄等。地方和民间习用的药用品种有铁棒锤、黄草乌、爪叶乌头和聚叶花葶乌头及其加工炮制品等。乌头属植物多具有祛风除湿、温经止痛之功效，可用于风寒湿痹、关节疼痛、心腹冷痛等，广泛用于临床治疗
中，《全国医药产品大全》收载有含川乌、附子、草乌、短柄乌头、高乌头、黄花乌头的中成药超过350种。乌头属药用植物中主要药效成分是生物碱，包括双酯型生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱等)、单酯型生物碱(苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱等)和醇胺型生物碱(乌头原碱、新乌头原碱、次乌头原碱)等。目前对该类生物碱成分已有报道和/使用的分离纯化方法，均为将其水煎液或其水溶液经大孔吸附树脂柱吸附后，先用水洗脱除杂，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，得到经分离纯化后的附子或川乌的总生物碱成分。如赵镭等报道，将附子提取物通过DlOl大孔吸附树脂纯化，水、体积分数为10%、80%的乙醇溶液梯度洗脱，收集体积分数为10%的乙醇洗脱部分浓缩干燥，即得附子总生物碱(附子总生物碱的提取纯化工艺，沈阳药科大学学报，2007，24(7) :433)。万里翔等报道，将附子提取物上DlOl大孔吸附树脂柱，以蒸馏水除杂，再用95%乙醇洗脱，浓缩蒸干洗脱液，即得附子总生物碱(乌头总碱的纯化工艺及中乌头碱的纯化研究，安徽农业科学，2008，36(12):5044)。吴平报道了一种附子生物碱的提取分离纯化方法，将生附子用酸水提取，提取液经大孔树脂柱吸附，先用水洗去杂质，再用60%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，经进一步处理得到附子生物碱提取物(成都中医药大学硕士学位论文，2007年)。申请人:经研究发现，对乌头属药材或其加工品的水煎液，或其乙醇等其它溶剂提取物的水溶液，采用大孔吸附树脂柱分离纯化时，经水洗脱除杂后，再用3(T95(v)%的含水乙醇洗脱(解吸附)，均不能充分洗脱回收相应的生物碱成分，导致生物碱的损失严重，损失率可达30飞0%，浪费了药材资源，也影响了乌头属药材或其加工品药效作用的充分发挥。
发明内容
鉴于此，本发明提供了一种乌头属药材或其加工品总生物碱提取物的制备方法，特别是对由各种方法得到的乌头属药材或其加工品总生物碱提取物粗品制备其纯化提取物产品的方法。本发明乌头属药材或其加工品中总生物碱提取物的制备方法，是将含有乌头属药材或其加工品提取物的水溶液调节PH值7 10，优选的是调节pH值8 10后，用大孔吸附树脂柱吸附，然后先用水洗涤除杂质后，再至少用PH ( 5和乙醇体积含量为50、0%的酸性乙醇-水溶液洗脱，收集洗脱液，除去溶剂，即得到乌头属药材及其加工品总生物碱提取物。其中，所说的大孔吸附树脂，可以按照目前常规的方式操作，如选择常用的HPD100、HPD300、DlOU AB-8等各种型号的大孔树脂，其中优选HPD100或DlOl等型号的大孔吸附树脂。上述所说的含有乌头属药材或其加工品提取物的水溶液，包括乌头属药材或其加工品的水提取溶液，或者是其它各种来源的含有乌头属药材或其加工品提取物成分的水溶液，特别是由不同的有机溶剂对乌头属药材或其加工品提取并除去溶剂后的提取物配制的水溶液。其中，在采用乌头属药材或其加工品的水提取液时，该水提取液除可以为常规的水提取液外，更优选的是pH< 5的酸水提取液，并优选采用为以盐酸或硫酸酸化的水溶液。
对作为制备原料的所说含有乌头属药材或其加工品提取物水溶液的pH调节，可以采用药物中允许使用的各种碱性成分，例如通常可以采用包括氢氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠等最为常用的碱金属氢氧化物或是其碳酸盐、碳酸氢盐等。实验显示，将乌头属药材或其加工品提取物的水溶液调节至PH值7 10后，再用所说的大孔吸附树脂吸附处理，将更有利于醇胺型生物碱成分的吸附分离，明显提高大孔树脂的吸附容量，提高分离效率，降低成本。所说含有乌头属药材或其加工品提取物的水溶液用大孔吸附树脂柱吸附后用水洗涤除杂时，可以分别采用常规方式只用中性水洗涤的方式，更优选的方式是采用依次用中性水、pH 8^10的碱性水和中型水洗涤；或者采用依次用pH 8^10的碱性水洗涤和中性水洗涤。实验表明，大孔吸附树脂吸附后先用PH 8 10的碱水洗涤，能更好的除去杂质，再用水洗至近中性(pH 7 8)。然后再进行所说的用酸性乙醇-水溶液洗脱，从而能更好地富集纯化总生物碱成分。上述方法中，为提高处理效率，所说的供大孔吸附树脂柱吸附的水溶液，优选的是其中乌头属药材或其加工品的提取物含量不超过相当于2克生药/毫升。上述制备方法中作为洗脱液的所说酸性乙醇溶液，除优选以工业生产中最为常用和易得的盐酸进行酸化的乙醇-水溶液外，也可以使用药物中允许使用的其它酸性成分进行酸化。洗脱时的另一种优选方式是，可以采用先用酸性乙醇-水溶液洗脱，最后再用中性乙醇-水溶液洗脱，即先采用酸性(特别是酸性较强的)乙醇-水溶液洗脱，使大孔吸附树脂柱呈酸性后，最后再改用中性乙醇洗脱。对所收集的洗脱液，除可直接除去乙醇等溶剂，得到所说的提取物(或含有乌头属药材或其加工品总生物碱相应酸盐)外，还可以采用的其它方式包括，将所说收集的洗脱液先用医药中允许使用的碱性成分(如同样可优选上述的氢氧化钠、碳酸钠或碳酸氢钠等)调节至pH值5 7后，再进行除去溶剂的操作。另一种方法是，可以将所说收集的洗脱液用碱型阴离子交换树脂，如选择目前已有广泛报道和/使用的717、D201、D202、711、D301、D311、D318等型号的碱型阴离子交换树脂处理后，再进行除去溶剂的操作。实验结果表明，本发明上述制备方法与目前传统方法比较，特别是采用碱性水溶液洗脱除杂时，既能充分除去杂质，又不会明显损失或破坏所需要的生物碱成分，而且用酸性乙醇-水溶液对吸附树脂进行洗脱，能使相应的生物碱成分被充分洗脱，回收率高，有效避免了传统方法的生物碱损失严重问题，大大节省了药材资源，提高了药材的利用率，使乌头属药材或其加工品的药效作用得以更充分的利用和发挥。以下通过实施例的具体实施方式
再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本发明的范围内。
具体实施例方式实施例I
取生附子10kg，加水10倍，浸泡4小时，煎煮2小时，滤过，水煎液备用；药渣再加水8倍，煎煮I小时，滤过，合并水煎液，用氢氧化钠溶液调节PH值扩10，按常规方法上HPD100 型大孔吸附树脂柱，先用水洗脱除杂后，再用PH 2 3的70(v)% (以下同)盐酸乙醇-水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，用氢氧化钠溶液调节PH值至6 7，减压回收乙醇，浓缩、干燥，SP得生附子总生物碱提取物。实施例2
取炒附片10kg，加水12倍，浸泡2小时，煎煮3小时，滤过，水煎液备用；药渣再加水10倍，煎煮2小时，滤过，合并水煎液，用碳酸钠溶液调节pH值9 10，上HPD100型大孔吸附树脂柱，分别用水、PH值扩10的氢氧化钠溶液和水洗脱除杂，再用pH 2^3的70%盐酸乙醇-水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，上717碱型阴离子交换树脂柱，收集乙醇流出液，减压回收乙醇，浓缩、干燥，即得炒附片总生物碱提取物。实施例3
取铁棒锤(制)IOkg,加水10倍，煎煮2次，每次2小时，滤过，合并水煎液，用氢氧化钠溶液调节PH值8 9，上DlOl型大孔吸附树脂柱，分别用pH值扩10的碳酸钠溶液和水洗脱除杂，再用PH 3^4的90%盐酸乙醇-水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩、干燥，即得制铁棒锤总生物碱提取物。实施例4
取黑附片10kg，加pH值2 3的盐酸溶液12倍，煎煮2次，每次3小时，滤过，合并水煎液，用碳酸钠溶液调节PH值疒8，上DlOl型大孔吸附树脂柱，分别用pH值8、的氢氧化钠溶液和水洗脱除杂后，再用PH 2^3的60%盐酸乙醇-水溶液洗脱，至流出液呈酸性时，改用中性60%乙醇-水洗脱，收集酸乙醇和乙醇洗脱液，加氢氧化钠溶液调节pH值至5 7，减压回收乙醇，浓缩、干燥，即得黑附片总生物碱提取物。实施例5
取白附片10kg，加70 (V) %乙醇10倍，回流提取2次，每次2小时，滤过，合并乙醇提取液，减压回收除尽乙醇，得到白附片的提取物，加水溶解，配制成含量相当于I克/毫升生药的水溶液，用碳酸氢钠溶液调节PH值7 8，滤过，上HPD300型大孔吸附树脂柱，分别用水、PH值8、的碳酸钠溶液和水洗脱除杂，再用pH 4^5的80%盐酸乙醇-水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩、干燥，即得白附片总生物碱提取物。实施例6取淡附片10kg，加pH值4飞的盐酸溶液12倍，煎煮2次，每次2小时，滤过，合并水煎液，用碳酸钠溶液调节PH值8 9，上HPD300型大孔吸附树脂柱，分别用pH值扩10的氢氧化钠溶液和水洗脱除杂后，再用PH 3^4的60%盐酸乙醇-水溶液洗脱，至流出液呈酸性时，改用中性60%乙醇-水洗脱，收集酸乙醇和乙醇洗脱液，加氢氧化钠溶液调节pH值至近中性，减压回收乙醇，浓缩、干燥，即得淡附片总生物碱提取物。实施例7
取蒸附片10kg，加pH值广2的硫酸溶液8倍，煎煮3次，每次I. 5小时，滤过，合并滤液，用氢氧化钠溶液调节PH值9 10，上AB-8型大孔吸附树脂柱，分别用水、pH值扩10的氢氧化钠溶液和水洗脱除杂后，再用PH 2^3的70%盐酸乙醇-水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，上717碱型阴离子交换树脂柱，收集乙醇流出液，减压回收乙醇，浓缩、干燥，即得蒸附片总生物碱提取物。
实施例8
取制川乌10kg，加pH值3 4的盐酸溶液12倍，煎煮2次，每次2小时，滤过，合并水煎液，用氢氧化钠溶液调节pH值扩10，滤过，上HPD100型大孔吸附树脂柱，先用水洗脱除杂，再用PH 3 4的50%盐酸乙醇-水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，加氢氧化钠溶液调节pH值至5飞，减压回收乙醇，浓缩、干燥，即得制川乌总生物碱提取物。实施例9
取生川乌10kg，加水10倍，煎煮2次，每次5小时，滤过，合并水煎液，用碳酸钠溶液调节pH值8 9，上HPD300型大孔吸附树脂柱，分别用pH值扩10的氢氧化钠溶液和水洗脱除杂后，再用pH r2的70%盐酸乙醇-水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，上D201碱型阴离子交换树脂柱，收集乙醇流出液，减压回收乙醇，浓缩、干燥，即得生川乌总生物碱提取物。实施例10
取制草乌10kg，加80 (v)%乙醇8倍，回流提取3次，每次2小时，滤过，合并乙醇提取液，减压回收除尽乙醇，得到制草乌的提取物，加水溶解，用氢氧化钠溶液配制成pH 8 9、配制成含量不超过相当于2克/毫升生药的水溶液，滤过，上AB-8型大孔吸附树脂柱，分别用PH值扩10的氢氧化钠溶液和水洗脱除杂后，再用pH 0. 5的60%盐酸乙醇-水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，上D301碱型阴离子交换树脂柱，收集乙醇流出液，减压回收乙醇，浓缩、干燥，即得制草乌总生物碱提取物。以下通过有效成分的含量和药效作用为评价指标，进一步说明本发明附子或川乌总生物碱提取物的制备方法所具有的有益效果。I、有效成分的含量测定
取生附子4kg，加水10倍，浸泡4小时，煎煮2小时，滤过，水煎液备用；药渣再加水8倍，煎煮I小时，滤过，合并水煎液，用氢氧化钠溶液调节PH值扩10，滤过，分成4等份，按常规方法分别上4根完全相同的柱床体积为I. 5L的HPD100型大孔吸附树脂柱(A、B、C、D)A柱采用常规方式，先用3倍柱床体积的水洗脱除杂，再用70%乙醇-水溶液洗脱，收集3倍柱床体积的乙醇洗脱液，备用(A液)；
B柱采用上述实施例I的方式，先用3倍柱床体积的水洗脱除杂，再用pH 2^3的70%盐酸乙醇-水溶液洗脱，收集3倍柱床体积的乙醇洗脱液，用氢氧化钠溶液调节pH值至6 7，备用(B液)；C柱采用上述实施例2的方式，分别用3倍柱床体积的水、pH值扩10的氢氧化钠溶液和水洗脱除杂，再用pH 2^3的70%盐酸乙醇溶液洗脱，收集3倍柱床体积的乙醇洗脱液，上717碱型阴离子交换树脂柱，收集乙醇流出液，备用(C液)。D柱采用上述实施例3的方式，分别用3倍柱床体积的pH值扩10的氢氧化钠溶液和水洗脱除杂，再用pH 2^3的70%盐酸乙醇溶液洗脱，收集3倍柱床体积的乙醇洗脱液，用氢氧化钠溶液调节PH值至6 7，备用(D液)。
另取黑附片4kg，加pH值2 3的盐酸溶液12倍，煎煮2次，每次3小时，滤过，合并滤液，用碳酸钠溶液调节PH值7 8 ，滤过，分成4等份，按常规方法分别上4根完全相同的柱床体积为I. 5L的DlOl型大孔吸附树脂柱(E、F、G、H)
E柱同A柱方式，先用3倍柱床体积的水洗脱除杂，再用70%乙醇-水溶液洗脱，收集3倍柱床体积的乙醇洗脱液,备用(E液)；
F柱同B柱方式，先用3倍柱床体积的水洗脱除杂，再用pH 2^3的70%盐酸乙醇-水溶液洗脱，收集3倍柱床体积的乙醇洗脱液，用氢氧化钠溶液调节pH值至6 7，备用(F液)；G柱同C柱方式，分别用3倍柱床体积的水、pH值扩10的氢氧化钠溶液和水洗脱除杂，再用pH 2^3的70%盐酸乙醇溶液洗脱，收集3倍柱床体积的乙醇洗脱液，上717碱型阴离子交换树脂柱，收集乙醇流出液，备用(G液)。H柱同D柱方式，分别用3倍柱床体积的pH值扩10的氢氧化钠溶液和水洗脱除杂，再用pH 2^3的70%盐酸乙醇溶液洗脱，收集3倍柱床体积的乙醇洗脱液，用氢氧化钠溶液调节PH值至6 7，备用(H液)。再取制草乌4kg，加pH 2^3含80 (v) %乙醇的盐酸溶液8倍量，回流提取3次，每次2小时，滤过，合并乙醇提取液，减压回收除尽乙醇，得到制草乌的提取物，加4 L水溶解，用氢氧化钠溶液调节PH 8^9,滤过，分成4等份，按常规方法分别上4根完全相同的柱床体积为I. 5L的AB-8型大孔吸附树脂柱(L、M、N、0)
L柱同A柱方式，先用3倍柱床体积的水洗脱除杂，再用70%乙醇-水溶液洗脱，收集3倍柱床体积的乙醇洗脱液,备用(L液)；
M柱同B柱方式，先用3倍柱床体积的水洗脱除杂，再用pH 2^3的70%盐酸乙醇-水溶液洗脱，收集3倍柱床体积的乙醇洗脱液，用氢氧化钠溶液调节pH值至6 7，备用(M液)；N柱同C柱方式，分别用3倍柱床体积的水、pH值扩10的氢氧化钠溶液和水洗脱除杂，再用pH 2^3的70%盐酸乙醇溶液洗脱，收集3倍柱床体积的乙醇洗脱液，上717碱型阴离子交换树脂柱，收集乙醇流出液，备用(N液)。0柱同D柱方式，分别用3倍柱床体积的pH值扩10的氢氧化钠溶液和水洗脱除杂，再用pH 2^3的70%盐酸乙醇溶液洗脱，收集3倍柱床体积的乙醇洗脱液，用氢氧化钠溶液调节PH值至6 7，备用(0液)。按中国药典2010年版一部177页附子项下的HPLC色谱方法，分别测定上述A液 0液中生物碱成分的含量(以生药计)，结果见表I。表I A 0洗脱液中生物碱成分的含量测定结果(mg g'以生药计)
生物碱I苯甲酰乌头原碱I苯甲酰次乌头原碱 I苯甲酰新乌头原碱 I乌头碱I次乌头碱I新乌头碱
A 液 0.113_0. 341_0. 837_—_—_—_
B 液丨0. 158|o. 425|l. 562|— |—|—
权利要求
1.乌头属药材或其加工品中总生物碱提取物的制备方法，其特征是将含有乌头属药材或其加工品提取物的水溶液调节PH值7 10，优选为pH值8 10后，用大孔吸附树脂柱吸附，然后先用水洗涤除杂质后，再至少用pH < 5和乙醇体积含量为5(T90%的酸性乙醇-水溶液洗脱，收集洗脱液，除去溶剂，即得到乌头属药材及其加工品总生物碱提取物。
2.如权利要求I所述的制备方法，其特征是所说的含有乌头属药材或其加工品提取物的水溶液，为乌头属药材或其加工品的水提取液，或是乌头属药材或其加工品提取物的水溶液。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征是所说的乌头属药材或其加工品的水提取液为pH < 5的水提取液,优选为用盐酸或硫酸酸化的水溶液。
4.如权利要求I所述的制备方法，其特征是所说含有乌头属药材或其加工品提取物的水溶液用大孔吸附树脂柱吸附后，用水洗涤除杂时，采用依次用中性水、PH 8^10的碱性水和中性水洗涤；或者采用依次用PH 8^10的碱性水洗涤和中性水洗涤。
5.如权利要求I所述的制备方法，其特征是所说供大孔吸附树脂柱吸附的水溶液中乌头属药材或其加工品的提取物含量不超过相当于2克生药/毫升。
6.如权利要求I所述的制备方法，其特征是所说的酸性乙醇-水溶液为用盐酸酸化的乙醇-水溶液。
7.如权利要求I所述的制备方法，其特征是所说的用酸性乙醇-水溶液洗脱时，采用先用酸性乙醇_水溶液洗脱,最后用中性乙醇_水溶液洗脱。
8.如权利要求I所述的制备方法，其特征是所说收集的洗脱液先调节至pH值5 7后，再除去溶剂。
9.如权利要求I所述的制备方法，其特征是对收集的洗脱液先用碱型阴离子交换树脂处理后，再进行除去溶剂的操作。
10.如权利要求I所述的制备方法，其特征是所说的大孔吸附树脂为HPD100或DlOl型大孔吸附树脂。
全文摘要
乌头属药材或其加工品中总生物碱提取物的制备方法。将含有乌头属药材或其加工品提取物的水溶液调节pH值7～10后，用大孔吸附树脂柱吸附，然后先用水洗涤除杂质后，再至少用pH≤5和乙醇体积含量为50～90%的酸性乙醇-水溶液洗脱，收集洗脱液，除去溶剂，即得到乌头属药材及其加工品总生物碱提取物。该方法既能达到除杂完全，又不损失和破坏所需的生物碱成分，而且对相应生物碱成分洗脱充分，回收率高，有效解决了传统方法生物碱损失严重的问题，大大节省了药材资源，提高了药材的利用率，使乌头属药材或其加工品的药效作用得以更充分的利用和发挥。
文档编号A61P29/00GK102973679SQ20121055943
公开日2013年3月20日 申请日期2012年12月21日 优先权日2012年12月21日
发明者陈燕, 唐小龙, 黄志芳, 刘玉红, 刘云华, 易进海 申请人:四川省中医药科学院