鱼麻醉剂和方法

鱼麻醉剂和方法
【专利摘要】本发明涉及一种使水生生物镇静、麻醉或安乐死的方法，其包括使所述生物与芳樟醇、组合物、含有其的水体接触的步骤，以及涉及一种运输水生生物的方法。
【专利说明】鱼麻醉剂和方法
[0001]相关申请
[0002]本申请要求美国临时申请61/527163号的权益，所述申请的内容通过引用并入本文。
【技术领域】
[0003]本申请涉及用于使水生生物镇静、麻醉和/或安乐死的改良方法和用于这类方法的组合物。
【背景技术】
[0004]捕杀鱼或其它水生生物的实践通常涉及经历一定压力的生物。生物通常将捕杀与捕食联系在一起，因此挣扎以逃脱固定。这种挣扎会对生物组织的宰杀后品质具有重要影响，这取决于其持续时间和生物宰杀前的身体状况(Lowe, Τ.E.;Ryder, J.Μ.;Carragher, J.F.; WelIs, R.Μ.G.1993: Flesh quality in snapper, Pagrus auratus, affectedby capture stress.Journal of Food Science58:770-773;和 Jerrett, A.R.;Stevens,J.;Holland, A.J.1995:Tensile properties of rested and exhaustedchinook salmon(Oncorhynchus tshaivytscha)white muscle.1n press.Journal of FoodScience(USA))。
[0005]在水产业中，所养殖的生物在生命周期期间通常被单独处理。对于容易激动的鱼类如大鳞大麻哈鱼(Oncorhynchus tshawytscha),必须非常小心以确保处理期间动物不被擦伤、脱鳞或以任何方式损毁或受伤。天然的、未受损伤的外观常常是决定鱼的最终销售价格的关键因素。
[0006]为了实现捕杀期间的最佳产品品质，必须使生物保持在平静的状态。已经研究的一种方法是在捕杀期间使用麻醉剂。麻醉剂如MS-222、2-苯氧乙醇、苯佐卡因和镇静剂依托咪酯和美托咪酯(Kreiberg, H.1992:Metomidate Sedation Minimises Handling Stressin Chinook Salmon.Bulletin of the Aquacultural Association of Canada92~3:52-54)已经用于使处理期间的损伤最小化，但是它们对人类的潜在残余毒性(或人的滥用)阻止了它们在捕杀期间的使用。因此，这些材料中的一些的使用必须在捕杀之前至少21天时中止。
[0007]还已经研究了无毒的非化学麻醉法。常用的无毒替代方案，例如冷麻醉法(Mittal, A.K.和 Whitear, Μ.1978: A note on cold anaesthesia of poikilotherms.Journal of Fish Biology:519-520)或碳酸麻醉法(Post, G.1979: Carbonic AcidAnaesthesia for Aqua 程中也导致相当大的创伤。因此，如果要将宰杀后的肉质保持为尽可能接近宰杀前的话，则它们不适合用于捕杀。
[0008]因此，显然地，需要对于具有尤其适用于捕杀水生生物的低毒性或无毒性的便利可用的食品级麻醉剂。用于捕杀的理想化学麻醉法会是具有成本效益，具有低刺激或无刺激性品质，并适合于对旨在用于人类消费的动物使用。

【发明内容】

[0009]因此，根据本发明的一个实施方案，提供一种使水生生物镇定、麻醉或安乐死的方法，其包括使所述生物与式^的化合物，即芳樟醇接触的步骤。
[0010]根据本发明的一个实施方案，还提供一种在基本上保持水生生物宰杀前肉质的同时捕杀水生生物的方法，其包括使所述生物与式、H0/^ 的化合物，即芳樟醇接触的步骤。
[0011]根据本发明的一个实施方案，还提供一种运输处于活的或僵硬前状态的水生生物

HO^
的方法，其包括如下步骤:使待运输的生物与式的化
合物，即芳樟醇接触，以在所述生物内引起镇静、麻醉或僵硬前的状态；并在处于所述镇静、麻醉或僵硬前状态的同时运输所述生物。
[0012]在上述方法中的每一种中，化合物可以是(S)-(+)-芳樟醇，即
HOΛ

(CAS 注册号 126-90-9)，(R)-(-)-芳樟醇、即

(CAS 注册号 126-91-0)，或(S)-芳樟醇和(R)-芳樟醇两者的混合物，包括外消旋混合物(CAS注册号78-70-6)。
[0013]活性化合物((S)-芳樟醇和/或(R)-芳樟醇)可以以基本上不含其它萜烯醇的形式，即以其中所存在的所有萜烯醇中的至少90重量％是芳樟醇的形式存在。活性化合物可以与一种或更多种另外的食品级水生用镇静剂、麻醉剂和/或安乐死用剂如丁香油酚和异-丁香油酚以掺和形式存在；或者，芳樟醇可以以活性成分的至少90重量％、活性成分的至少92重量％、活性成分的至少94重量％、活性成分的至少95重量％、活性成分的至少96重量％、活性成分的至少97重量％、活性成分的至少98重量％、活性成分的至少99重量％、或者活性成分的基本100重量％提供。
[0014]化合物或掺和物会通常处于溶液中。活性化合物还可以与表面活性剂一起存在。活性化合物还可以作为如下文所述的组合物的一部分来提供。
[0015]在一些实施方案中，水生生物存在于水中，并且芳樟醇的浓度为至少5ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少6ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少7ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少8ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少9ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少lOppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少15ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少20ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少25ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少30ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少35ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少40ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少45ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少50ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少60ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少75ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少lOOppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为不多于500ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为不多于400ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为不多于300ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为不多于200ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为不多于150ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为不多于 IOOppm0
[0016]在一些实施方案中，使水生生物与芳樟醇接触至少I分钟的时间段。在一些实施方案中，接触进行至少2分钟、至少3分钟、至少5分钟、至少10分钟、至少15分钟、至少20分钟。在一些实施方案中，接触进行至少30分钟、至少40分钟、至少50分钟、至少60分钟、至少120分钟、或者至少180分钟。在一些实施方案中，接触进行不多于180分钟的时间段。在一些实施方案中，接触进行不多于120分钟、不多于60分钟、不多于50分钟、不多于40分钟、不多于35分钟、不多于30分钟、不多于25分钟、不多于20分钟、不多于15分钟、不多于10分钟、不多于5分钟。
[0017]根据本发明的一个实施方案，还提供一种适合用作水生用镇静剂、麻醉剂或安乐死用剂的活性化合物，其以掺和形式包含有效量的式、
的化合物，即芳樟醇和有效量的溶剂或表面活性剂。溶剂可以为极性质子溶剂或极性非质子溶剂。极性质子溶剂的实例为水、醇(例如乙醇、异丙醇)、多元醇(例如丙三醇、山梨醇、丙二醇)、羧酸(例如乙酸)。极性非质子溶剂的实例为羰基化合物(例如酮，如丙酮；醛，如戊醛；酯，如乙酸乙酯)、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺和乙腈。还预期前述溶剂的混合物、共混物和改性物，如本领域技术人员`会理解的。
[0018]组合物可以包含一种或更多种另外的食品级水生用镇静剂、麻醉剂和/或安乐死用剂，例如丁香油酚和异-丁香油酚。
[0019]任选地，组合物进一步包含表面活性剂。含有芳樟醇的组合物也可以含有消泡成分，即用于增加水的表面张力的一种或更多种化合物，如脂肪酸、醇和多元醇、硅酮以及其混合物、共混物、改性物，如本领域技术人员会理解的。组合物还可以包含防腐剂，即用于通过化学或物理手段来防止、抑制或破坏微生物，如细菌、酵母或霉菌的活力、生长或繁殖的化合物。用作防腐剂的合适化合物的实例为甲醛或甲醛供体，如1，3- 二羟甲基-5，5- 二甲基乙内酰脲、咪唑烷基脲；对羟基苯甲酸酯；醇和多元醇，如乙醇、苯甲醇、戊二醇；和羧酸，如苯甲酸或山梨酸。另外的实例为增加渗透压的化合物，如糖、丙三醇和氯化钠。还可以采用防腐剂的混合物、共混物和改性物，如本领域技术人员会理解的。可以在本领域技术人员所使用的标准参考书，例如《国际化妆品成分词典和手册》，第4卷，第12版，2008，Personal Care Products Council中发现可能的溶剂、消泡剂、防腐剂和表面活性剂的各种范围的其它参考。
[0020]组合物中芳樟醇的浓度可以从非常低，例如0.05重量％或0.5重量％变化至相当高，例如93重量％。通常，组合物的其余成分会是水和一种或更多种表面活性剂，尽管可以以不包含水(例如，参见下面的实施例28)的方式来配制芳樟醇。在一些实施方案中，组合物含有50重量％的芳樟醇、10重量％至45重量％的表面活性剂和40重量％至5重量％的溶剂。在一些实施方案中，组合物含有5重量％的芳樟醇、5重量％至50重量％的表面活性剂和90重量％至45重量％的溶剂。会理解，在用于麻醉鱼时，需要相对少量的芳樟醇-通常在容纳鱼的水中为约50ppm至IOOppm的数量级，并且，如在实施例中显示的，在相同情况下甚至更低，取决于所涉及的种类和麻醉的条件；因而，在一些实施方案中，组合物会被包装成具有比必须使用的浓度高的芳樟醇浓度，使得最终用户会在对鱼施用之前稀释组合物。在其它实施方案中，组合物可以被包装为使得其在使用之前几乎不需要或者不需要稀释。芳樟醇可以与一种或更多种食品级水生用镇静剂、麻醉剂和/或安乐死用剂、如丁香油酚和异-丁香油酚以掺和形式存在；或者，芳樟醇可以以组合物中活性成分的至少90重量％、活性成分的至少92重量％、活性成分的至少94重量％、活性成分的至少95重量％、活性成分的至少96重量％、活性成分的至少97重量％、活性成分的至少98重量％、活性成分的至少99重量％、或者活性成分的基本100重量％提供。
[0021]因而，例如，在一个实施方案中，可以制备并使用含有93重量％的芳樟醇、5重量％的乙氧基化蓖麻油(Alkamulsl4R, CAS注册号61791-12-16)和2重量％的Amersil AF80(含有二醇的消泡剂，并且可得自 Ametech srl, Via Matteoti62, 20092Cinisello Balsamo,意大利)的制剂来麻醉鱼,例如通过将其添加至容纳待麻醉的鱼的水至约0.006重量％的量，即约5.5ppm的水中芳樟醇浓度。类似的，可以制备和使用含有16.6重量％的芳樟醇、78.3重量％的丙二醇、5重量％的乙醇和0.1%的Amersil AF80的制剂来麻醉鱼，例如，通过将其添加至容纳待麻醉的鱼的水至约0.056重量％的量，即约55.6ppm的水中芳樟醇浓度。
[0022]在一些实施方案中，芳樟醇为(S)-芳樟醇。在一些实施方案中，芳樟醇为(R)-芳樟醇。在一些实施方案中，芳樟醇为(S)-芳樟醇和(R)-芳樟醇的混合物。
[0023]在一些实施方案中，表面活性剂为乙氧基化蓖麻油。
[0024]在一些实施方案中，组合物可以包含溶剂。在一些实施方案中，溶剂为聚乙二醇，其为 PEG400。
[0025]根据本发明的一个实施方案，提供了一种使水生生物镇静、麻醉或安乐死的方法，其包括使所述生物与足够浓度的芳樟醇接触足够的时间以实现所述镇静、麻醉或安乐死的步骤。在一些实施方案中，芳樟醇作为如上所述组合物的一部分提供。
[0026]如本领域技术人员会理解的，对于具有给定尺寸的给定类型水生生物，在水中的芳樟醇浓度和生物暴露于芳樟醇以实现镇静或麻醉所需的时间量之间存在反比(尽管不一定是线性的)关系，并且类似的，在芳樟醇浓度和生物可被暴露于芳樟醇以免出现死亡的时间量之间也存在反比(尽管不一定是线性的)关系。因而，例如，在一种情形中，在75ppm的芳樟醇中停留50分钟，或者在IOOppm的芳樟醇中停留40分钟的鱼无法存活，而当在IOOppm的芳樟醇中停留5分钟时,相同的鱼被有效麻醉。另一方面,通过暴露于25ppm的芳樟醇甚至较长的时间段也不会影响相同的鱼。
[0027]根据本发明的一个实施方案，提供了一种方法，所述方法包括捕杀经芳樟醇镇静、芳樟醇麻醉或芳樟醇安乐死的水生生物。在一些实施方案中，该方法包括使待捕杀的生物与一定浓度的芳樟醇接触一段时间，所述浓度和时间足以在所述生物中引起镇静、麻醉或安乐死状态；并在所述镇静、麻醉或安乐死状态下捕杀所述生物。在一些实施方案中，芳樟醇作为如上所述述组合物的一部分提供。
[0028]根据本发明的一个实施方案，提供一种运输处于活的或者僵硬前状态的水生生物的方法，所述方法包括以下步骤:使待运输的生物与一定浓度的芳樟醇接触一段时间，所述浓度和时间足以在所述生物内引起镇静、麻醉或者僵硬前状态；并在所述镇静、麻醉或僵硬前状态下运输所述生物。在一些实施方案中，芳樟醇作为如上所述述组合物的一部分提供。
[0029]根据本发明的一个实施方案，还提供了一种装有水、水生生物和芳樟醇的容器。在一些实施方案中，芳樟醇以足以使水生生物镇静或者麻醉的浓度存在。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少5ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少6ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少7ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少8ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少9ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少lOppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少15ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少20ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少25ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少30ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少35ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少40ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少45ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少50ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少60ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少75ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为至少lOOppm。在一些实施方案中，容器装有不多于500ppm浓度的芳樟醇。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为不多于400ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为不多于300ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为不多于200ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为不多于150ppm。在一些实施方案中，芳樟醇的浓度为不多于lOOppm。在一些实施方案中，容器还装有表面活性剂。在一些实施方案中，容器还装有溶剂。在一些实施方案中，水的pH为至少5.5。在一些实施方案中，pH为至少6.0。在一些实施方案中，pH为至少6.5。在一些实施方案中，pH为至少7.0。在一些实施方案中，pH为至少7.5。在一些实施方案中，pH为至少8.0。在一些实施方案中，pH不大于8.5。在一些实施方案中，pH不大于8.0。在一些实施方案中，pH不大于7.5。在一些实施方案中，pH不大于7.0。在一些实施方案中，pH不大于6.5。在一些实施方案中，pH不大于6.0。在一些实施方案中，容器中水的温度在40° F至75° F(~4° C至~24° C)的范围内；在一些实施方案中，该范围为65° F至75° F。在一些实施方案中，容器中水的温度在72° F至85° F的范围内；在一些实施方案中，该范围为75° F至 85° F。
[0030]虽然上文概括地限定了本发明，但是本领域技术人员当然会理解本发明不限于此，而是还包括实施方案，所述实施方案的以下说明提供了实施例。
【具体实施方式】
[0031]本发明的方法可以应用于的水生生物是所谓的原生水生生物，所述原生水生生物是生活在水中并且呼吸溶解氧的冷血动物，例如软骨鱼纲(Chondrichthyes)的成员、硬骨鱼总纲(Osteichthyes)的成员。在一些实施方案中，本文所描述的方法可以对从经济角度看为有价值的、高档的可销售生物的生物使用。这类生物的实例包括属于软骨鱼纲或硬骨鱼总纲的那些，例如鲑鱼、鳟鱼、嘉鱼、香鱼、鲤鱼、鲫鱼、金鱼、斜齿鳊、银鱼、鳗鱼、海鳗、沙丁鱼、飞鱼、海鲈、海鲷、鹦鹉鲈鱼、鲷鱼、鲭鱼、竹荚鱼、金枪鱼、鲣鱼、黄狮鱼、岩鱼、鲽鱼、鳎鱼、比目鱼、河豚、马面鱼、鲟鱼、鲶鱼等。
[0032]为了根据本发明的实施方案进行使用，芳樟醇可以便利地从商业源获得；目前芳樟醇的最常见源为由通常提取自松树的α-蒎烯或α-萜品醇合成的芳樟醇，尽管芳樟醇可以通过常规提取技术从多种天然源中获得，并且如果有必要获得适当高浓度的芳樟醇(例如90%至100%的芳樟醇)，对其进一步进行纯化和/或浓缩。优选地，来自这类天然源的提取物在这类纯化/浓缩步骤之前含有至少5重量％的芳樟醇。以下是这类源的部分列表:软枝黄蜂花油(Allamanda cathartica linn, flower oil)、苦艾蒿油(Artemisia santolina schrenk oil)、罗勒净油(Basil absolute sweet)、甜罗勒油(Basil oil sweet)、海桐罗勒油(Basil oil var.glabratum)、茴香月桂叶油(Bay leaf
oilanise)、丁香月桂叶油(Bay leaf oil clove)、香梓樣薄荷油(Bergamot mint oil)、香梓樣油(Bergamot oil)、蔷薇木叶油(Bois de rose leaf oil)、蔷薇木油(Bois de roseoil)、卡南迦油(Cananga oil)、小豆蔻籽油(Cardamom seed oil)、胡萝卜杆油(Carrotseed oil)、胡萝卜草油(Carrot weed oil)、香苦木皮油(Cascarilla bark oil)、白兰(michelia alba dc.)、黄兰花浸嘗(Champaca concrete)、香紫苏油(Clary sage oil)、芫荽杆油(Coriander seed oil)、炮弹树花油(Couroupita guianensis aubl.flower oil)、巴豆叶油(Croton cajucara benth.leaf oil)、野生摘亚苏木果油(Dialium guineensewild, fruit oil)、 天竺葵叶油(Geranium leaf oil)、天竺葵油(Geranium oil)、五叶山小橘杆油(Glycosmis pentaphylla (cor.) seed oil)、芳棒叶油(Ho leaf oil)、芳樟木油(Ho wood oil)、茉莉花净浸膏(Jasmin absolute concrete)、茉莉花油(Jasminoil)、双辧茉莉花净油(Jasmin sambac absolute)、月桂皮油(Laurel bark oil)、月桂莖油(Laurel stem oil)、月桂木油(Laurel wood oil)、醒目薰衣草净油(Lavandinabsolute grosso)、杂薰衣草油(Lavandin oil)、薰衣草花油(lavender flower oil)、薰衣草油(lavender oil)、薰衣草莖油(lavender stem oil)、玉蕊花油(lecythis usitatamiers.var.paraensis (ducke)r.kunth.flower oil)、橘子油(Mandarin oil)、甘牛至油(Marjoram oil)、桃金娘油(Myrtle oil)、水仙净油(Narcissus absolute)、禮花油(NeroIi bigarde oil)、禮花油(Neroli oil)、无胳烯禮油(Orange oil terpeneless)、橘花净油(Orangef lower absolute)、佛手柑禮叶油(Petitgrain bergamot oil)、苦禮叶油(Petitgrain bigarade oil)、橘叶油(Petitgrain mandarin oil)、禮叶油(Petitgrainoil)、甜橙叶油(Petitgrain sweet oil)、迷迭香油(Rosemary oil)、鼠尾草油(Sageoil)、月桂茵芋油(Skimmia laureola oil)、蛇根油(Snake root oil)、百里香净油(Thymeabsolute)、百里香油(Thyme oil)、依兰油(Ylang ylang oil)、柚子皮油(Yuzu peeloil)。还可以合成芳樟醇，尽管应理解，在所谓的“有机”应用中，优选的是使用从天然源获得的芳樟醇。如果来自植物源的提取物具有足够高的芳樟醇浓度，例如至少80%，则其可以在不进行进一步纯化和/或浓缩的情况下使用。[0033]根据本发明的实施方案，芳樟醇可以以纯净的形式或以混合物使用。这种混合物可以是芳樟醇在水中的悬浮液或乳液，或者可以是其中将芳樟醇溶解或悬浮在适当的溶剂或溶剂混合物中的混合物。这类溶剂的实例包括醇，例如乙醇。芳樟醇可以是合成的，或者其可以从天然源中分离。在一些情形中，芳樟醇可以作为植物提取物的一部分提供，前提是在提取物内的芳樟醇浓度足够高。这种提取物的一个实例是芳樟油(Ho Wood Oil)，一种通过樟树(Cinnamomum camphora)木材的蒸汽蒸懼获得的油,其含有80重量％或更高的芳樟醇。
[0034]在一些实施方案中，芳樟醇可以以包含表面活性剂的组合物的形式使用。该表面活性剂可以是具有合适性能的市售表面活性剂，例如乙氧基化蓖麻油。这类表面活性剂的实例为(I)阴离子表面活性剂，例如(a)脂肪酸的金属盐或胺盐，例如硬脂酸钠，(b)硫酸盐和醚硫酸盐，例如烷基或芳基链的硫酸盐和醚硫酸盐，所述烷基链或芳基链可以被乙氧基化，与硫酸反应并且用金属或胺阳离子中和，例如月桂基硫酸钠，(C)磺酸盐，例如与磺酸反应并且用金属或胺阳离子中和的烷基链或芳基链，例如十二烷基苯磺酸钠；(2)非离子表面活性剂，例如(a)乙氧基化的醇和烷基酚，例如连接至烷基链或芳基链的醇，天然源或合成源的，其已经历一定程度的乙氧基化，例如乙氧基化(20E0)氢化蓖麻油或者壬基酚9E0乙氧基化物；(b)脂肪酸酯，(C)脂肪酸酰胺，(d)烷基多糖和(e)硅酮乙氧基化物；(3)阳离子表面活性剂，如连接有或未连接有芳基的线性烷基胺和烷基铵；和(4)两性或两性离子表面活性剂，如甜菜碱；以及其混合物、共混物和改性物，如本领域技术人员会理解的。可以在本领域技术人员所使用的标准参考书，例如《国际化妆品成分词典和手册》，第4卷，第12版,2008, Personal Care Products Council中发现可能的表面活性剂的各种范围的其它参考。在一些实施方案中，组合物可以含有溶剂，例如丙二醇。 [0035]此外，芳樟醇可以与一种或更多种替代的食品级水生用镇静剂、麻醉剂和/或安乐死用剂组合。例如，可以配制包含与一种或更多种丁香油酚、异-丁香油酚、水杨酸乙酯和水杨酸甲酯组合的芳樟醇的组合物。
[0036]根据本发明的实施方案所采用的芳樟醇的浓度可以根据待实施的处理类型，即生物是否要进行镇静、麻醉或安乐死而变化。会理解，在期望快速实现深度麻醉或安乐死效果的情况下，通常会使用较高的浓度(50mg芳樟醇/I升水，或者甚至更大的芳樟醇浓度)。待使用的浓度也会取决于待实施的暴露于芳樟醇的时间(反之亦然)；这两种参数都会进一步取决于待处理的鱼的类型(例如冷水或温水，淡水或咸水)、水温和pH。在给定温度和pH条件下对于给定种类的提取物芳樟醇浓度和暴露时间可以通过经验来确定，而不用过度实验。
[0037]还应理解，渐近的镇静至麻醉至安乐死的效果可以通过改变生物与芳樟醇接触的时间来产生。实际上，能够以小于IOppm(例如在装有待镇静的鱼的水中8ppm或5ppm的芳樟醇)使用芳樟醇，其中通过增加对活性溶液暴露的时间来引起渐近的镇静、麻醉和安乐死效果。
[0038]当不要求快速引起各种渐进效果时，可以采用活性化合物的约5至Sppm的上述浓度。然而，会理解，并不排除使用甚至更低或更高浓度的活性化合物(IOOppm或更高)。
[0039]当芳樟醇与一种或更多种其它试剂，如丁香油酚、异-丁香油酚、水杨酸乙酯和水杨酸甲酯组合时，活性剂的浓度当然也会根据待引起的效果而变化。在一些实施方案中，芳樟醇是水中的主要鱼麻醉剂；在一些实施方案中，不使用其它麻醉剂，使得水基本上不含其它鱼麻醉剂。在一些实施方案中，丁香油酚、异-丁香油酚、水杨酸乙酯和水杨酸甲酯或其它鱼麻醉剂中每一个的浓度都为芳樟醇的浓度的至少三分之一、四分之一、五分之一、六分之一、七分之一、八分之一、九分之一或十分之一。
[0040]将参考以下实施例举例说明本发明的实施方案。
[0041]实施例1
[0042]将体长为Ilcm并且看起来健康的一岁锦鲤放置在装有25°C水的4升缸中，并且其中通过通气使水循环。将含有I重量％的合成芳樟醇的液体混合物(I重量％的芳樟醇、5重量％的14R、2重量％的AF80和92重量％的水)添加至缸，并手动地使其与水混合，以使得芳樟醇在水中的浓度为50ppm。这被视为实验的起始时间；之后，定时进行观察以确定鱼在水中的行为。这持续到对外部刺激没有反应，并且观察到完全失去平衡，此时将鱼转移至装有淡水的恢复缸。将鱼放置在空气泵附近，并且记录直到鱼再次游泳和对外部刺激正常反应的时间。
[0043]结果:在暴露于芳樟醇2.5分钟之后，鱼处于轻度紧张状态(当喘气时鱼经常剧动并且经常浮出水面)。在5.5分钟时，鱼表现出部分失去平衡并且躺在缸的底部。在6.5分钟时，鱼表现出完全失去平衡。在8分钟时，鱼仰躺漂浮。在9分钟时，鱼对外部刺激未表现出反应。在9.5分钟时，鱼被移到具有清洁水的恢复缸中。之后，其缓慢恢复，并且在45分钟之后在缸内四处游动且看起来已经重新开始正常活动。
[0044]该实验的结果表明， 在装有锦鲤的水中被稀释至50ppm芳樟醇浓度的I重量％芳樟醇制剂对锦鲤具有麻醉效果。
[0045]实施例2
[0046]使用体长为12cm的一岁锦鲤并且添加芳樟醇制剂至75ppm而不是50ppm的水中芳樟醇浓度来重复实施例1的实验。在暴露于芳樟醇2分钟之后，鱼看起来处于轻度紧张状态。在5.5分钟时，其表现出部分失去平衡并且躺在缸的底部。在7分钟时，其表现出完全失去平衡，并且在9分钟时，其对外部刺激未表现出反应。在20分钟时，将鱼移到具有清洁水的恢复缸中。之后，其缓慢恢复，并且在40分钟之后在缸内四处游动且看起来已经重新开始正常活动。
[0047]实施例3
[0048]使用体长为12.5cm的一岁锦鲤并且添加芳樟醇制剂至IOOppm而不是50ppm的水中芳樟醇浓度来重复实施例1的实验。在暴露于芳樟醇2.5分钟之后，其表现出部分失去平衡，并且在4分钟时，其表现出完全失去平衡。在5.5分钟时，其对外部刺激未表现出反应。在6分钟时，将鱼移到具有清洁水的恢复缸中。之后，其缓慢恢复，并且在30分钟之后在缸内四处游动且看起来已经重新开始正常活动。
[0049]实施例4
[0050]使用体长为8.5cm的一岁金鱼来重复实施例1的实验。在暴露于芳樟醇2分钟之后，鱼看起来处于轻度紧张状态，在5分钟时，其表现出部分失去平衡，并且在6.5分钟时，其表现出完全失去平衡。在9分钟时，其对外部刺激未表现出反应。在9.5分钟时，将鱼移到具有清洁水的恢复缸中。之后，其缓慢恢复，并且在35分钟之后在缸内四处游动且看起来已经重新开始正常活动。[0051]实施例5
[0052]使用体长为8.5cm的一岁金鱼并且添加芳樟醇制剂至75ppm而不是50ppm的水中芳樟醇浓度来重复实施例1的实验。在暴露于芳樟醇2分钟之后，鱼看起来处于轻度紧张状态。在2.5分钟时，其表现出部分失去平衡。在5分钟时，其表现出完全失去平衡，并且在9分钟时，其对外部刺激未表现出反应。在20分钟时，将鱼移到具有清洁水的恢复缸中。之后，其缓慢恢复，并且在35分钟之后在缸内四处游动且看起来已经重新开始正常活动。
[0053]实施例6
[0054]使用体长为8cm的估计为一岁的金鱼并且添加芳樟醇制剂至IOOppm而不是50ppm的水中芳樟醇浓度来重复实施例1的实验。在暴露于芳樟醇1.5分钟之后，鱼表现出部分失去平衡，并且在2分钟时，其表现出完全失去平衡。在3.5分钟时，其对外部刺激未表现出反应。在4分钟时，将鱼移到具有清洁水的恢复缸中。之后，其缓慢恢复，并且在35分钟之后在缸内四处游动且看起来已经重新开始正常活动。
[0055]实施例7
[0056]该实验使用三条金鱼(Carassius auratus auratus,平均体长12.5cm)和五条拉氏小曬土丽鲷(Mikrogeophagus ramirezi,体长3.5cm至4cm)重复实施例1的实验。所有的鱼看起来都健康。金鱼缸保留4升水,并且保持拉氏小嗤土Hll觸的缸保持一升水。
[0057]对所有的鱼再观察3天，没有出现死亡。
[0058]实施 例8
[0059]将平均重量150g、保持在6升缸中的16条健康鲤鱼(Cyprinus carpio)各自暴露于75ppm的芳樟醇(使用实施例1中所描述的相同制剂，将45g所述制剂混合到每个处理缸中)不同的时间量。将鱼成对地同时引入到芳樟醇中，然后在不同时间点移出至恢复缸中:在引入之后3、8、12、15、20、30、40和50分钟，并且在连续两天的过程中观察每条鱼的恢复。在暴露5分钟之后实现了完全麻醉。结果示于下表中。
[0060]
【权利要求】
1.一种使水生生物镇静、麻醉或安乐死的方法，其包括使所述生物与式
2.根据权利要求1所述的方法，其中在所述水生生物在水中时发生所述接触。
3.根据权利要求2所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少5ppm。
4.根据权利要求3所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少6ppm。
5.根据权利要求4所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少7ppm。
6.根据权利要求5所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少8ppm。
7.根据权利要求6所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少9ppm。
8.根据权利要求7所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少lOppm。
9.根据权利要求8所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少15ppm。
10.根据权利要求9所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少20ppm。
11.根据权利要求10所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少25ppm。
12.根据权利要求11所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少30ppm。
13.根据权利要求12所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少35ppm。
14.根据权利要求13所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少40ppm。
15.根据权利要求14所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少45ppm。
16.根据权利要求15所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少50ppm。
17.根据权利要求16所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度为至少75ppm。
18.根据权利要求3至17中任一项所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度不大于 500ppmo
19.根据权利要求18所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度不大于400ppm。
20.根据权利要求19所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度不大于300ppm。
21.根据权利要求20所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度不大于200ppm。
22.根据权利要求21所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度不大于150ppm。
23.根据权利要求22所述的方法，其中在所述水中的芳樟醇的浓度不大于lOOppm。
24.根据权利要求2至23中任一项所述的方法，其中所述水处于4°C至24°C范围内的温度。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述水处于4°C至22°C范围内的温度。
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述水处于10°C至22°C范围内的温度。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述水处于15°C至21°C范围内的温度。
28.根据权利要求2至23中任一项所述的方法，其中所述水处于24°C至30°C范围内的温度。
29.根据权利要求28所述的方法，其中所述水处于24°C至29°C范围内的温度。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述水处于25°C至28°C范围内的温度。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述水处于25°C至27°C范围内的温度。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其中所述水的pH为至少5.5。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述水的pH为至少6.0。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述水的pH为至少6.5。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述水的pH为至少7.0。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述水的pH为至少7.5。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述水的pH为至少8.0。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的方法，其中所述水的pH不大于8.5。
39.根据权利要求1至36中任一项所述的方法，其中所述水的pH不大于8.0。
40.根据权利要求1至35中任一项所述的方法，其中所述水的pH不大于7.5。
41.根据权利要求1至34中任一项所述的方法，其中所述水的pH不大于7.0。
42.根据权利要求1至33中任一项所述的方法，其中所述水的pH不大于6.5。
43.根据权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述水的pH不大于6.0。
44.根据权利要求2至42中任一项所述的方法，其中所述接触进行至少I分钟的时间段。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述接触进行至少2分钟的时间段。
46.根据权利要求45所述的方法，其中所述接触进行至少3分钟的时间段。
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述接触进行至少5分钟的时间段。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述接触进行至少10分钟的时间段。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述接触进行至少15分钟的时间段。
50.根据权利要求49所述的方法，其中所述接触进行至少20分钟的时间段。
51.根据权利要求50所述的方法，其中所述接触进行至少30分钟的时间段。
52.根据权利要求51所述的方法，其中所述接触进行至少40分钟的时间段。
53.根据权利要求52所述的方法，其中所述接触进行至少50分钟的时间段。
54.根据权利要求53所述的方法，其中所述接触进行至少60分钟的时间段。
55.根据权利要求54所述的方法，其中所述接触进行至少120分钟的时间段。
56.根据权利要求55所述的方法，其中所述接触进行至少180分钟的时间段。
57.根据权利要求44至55中任一项所述的方法，其中所述接触进行不多于180分钟的时间段。
58.根据权利要求44至54中任一项所述的方法，其中所述接触进行不多于120分钟的时间段。
59.根据权利要求44至53中任一项所述的方法，其中所述接触进行不多于60分钟的时间段。
60.根据权利要求44至52中任一项所述的方法，其中所述接触进行不多于50分钟的时间段。
61.根据权利要求44至51中任一项所述的方法，其中所述接触进行不多于40分钟的时间段。
62.根据权利要求44至51中任一项所述的方法，其中所述接触进行不多于35分钟的时间段。
63.根据权利要求44至50中任一项所述的方法，其中所述接触进行不多于30分钟的时间段。
64.根据权利要求44至50中任一项所述的方法，其中所述接触进行不多于25分钟的时间段。
65.根据权利要求44至49中任一项所述的方法，其中所述接触进行不多于20分钟的时间段。
66.根据权利要求44至48中任一项所述的方法，其中所述接触进行不多于15分钟的时间段。
67.根据权利要求44至47中任一项所述的方法，其中所述接触进行不多于10分钟的时间段。
68.根据权利要求44或45所述的方法，其中所述接触进行不多于5分钟的时间段。
69.根据权利要求1至68中任一项所述的方法，其中所述水生生物为软骨鱼纲或硬骨鱼总纲的成员。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述鱼纲的成员选自:鲑鱼、鳟鱼、嘉鱼、香鱼、鲤鱼、鲫鱼、金鱼、斜齿鳊、银鱼、鳗鱼、海鳗、沙丁鱼、飞鱼、海鲈、海鲷、鹦鹉鲈鱼、鲷鱼、鲭鱼、竹荚鱼、金枪鱼、鲣鱼、黄狮鱼、岩鱼、鲽鱼、鳎鱼、比目鱼、河豚、马面鱼、鲟鱼、It鱼和锦鲤。
71.根据权利要求69或70所述的方法，其中所述软骨鱼纲或硬骨鱼总纲的所述成员为冷水鱼。
72.根据权利要求69或70所述的方法，其中所述软骨鱼纲或硬骨鱼总纲的所述成员为温水鱼。
73.一种用于逆转通过根据权`利要求1至72中任一项所述的方法引起的镇静或麻醉状态的方法，其包括将所述水生生物放置在基本上不含鱼镇静物质或鱼麻醉物质的水中。
74.一种用于保持通过根据权利要求1至72中任一项所述的方法引起的镇静或麻醉的方法，其包括将所述水生生物放置在含有比用于引起所述镇静或麻醉的芳樟醇浓度低的浓度的芳樟醇的水中。
75.—种在基本上保持水生生物的宰杀前肉质的同时捕杀所述水生生物的方法，其包括通过根据权利要求1至72中任一项所述的方法使水生生物镇静或麻醉，之后捕杀所述水生生物。
76.根据权利要求75所述的方法，其中在使所述水生生物麻醉或镇静时捕杀所述水生生物。
77.根据权利要求75所述的方法，其中在所述镇静或麻醉之后但是在所述捕杀之前，将所述水生生物放置在含有比用于引起所述镇静或麻醉的芳樟醇浓度低的浓度的芳樟醇的水中。
78.根据权利要求77所述的方法，其中含有比用于引起所述镇静或麻醉的芳樟醇浓度低的浓度的芳樟醇的所述水基本上不含鱼镇静物质或鱼麻醉物质。
79.—种运输处于活的或僵硬前状态的水生生物的方法，其包括运输在水中的所述水生生物，所述水含有足以保持所述水生生物在镇静或麻醉状态的浓度的芳樟醇。
80.根据权利要求1至79中任一项所述的方法，其中所述芳樟醇是(S)-(+)_芳樟醇。
81.根据权利要求1至79中任一项所述的方法，其中所述芳樟醇是(R)-(-)-芳樟醇。
82.根据权利要求1至79中任一项所述的方法，其中所述芳樟醇是(S)-芳樟醇和(R)-芳樟醇两者的混合物。
83.根据权利要求1至82中任一项所述的方法，其中所述芳樟醇构成至少90重量％、至少92重量％、至少94重量％、至少95重量％、至少96重量%、至少97重量%、至少98重量％、至少99重量％或基本上100%的用于使所述鱼镇静、麻醉或安乐死的活性成分。
84.—种组合物，其以掺和形式包含的化合物
85.根据权利要求84所述的组合物，其中在所述组合物中所述芳樟醇的浓度为0.00005重量%至93重量％。
86.—种含有至少一种水生生物和浓度为至少5ppm的芳樟醇的水体。
87.根据权利要求86所述的水体,其中所述芳樟醇的浓度为至少6ppm。
88.根据权利要求87所述的水体，其中所述芳樟醇的浓度为至少7ppm。
89.根据权利要求88所述的水体，其中所述芳樟醇的浓度为至少8ppm。
90.根据权利要求89所述的水体，其中所述芳樟醇的浓度为至少9ppm。
91.根据权利要求86所 述的水体，其中所述芳樟醇的浓度为至少lOppm。
92.根据权利要求91所述的水体，其中所述芳樟醇的浓度为至少20ppm。
93.根据权利要求92所述的水体，其中所述芳樟醇的浓度为至少30ppm。
94.根据权利要求93所述的水体，其中所述芳樟醇的浓度为至少40ppm。
95.根据权利要求94所述的水体,其中所述芳樟醇的浓度为至少50ppm。
96.根据权利要求95所述的水体,其中所述芳樟醇的浓度为至少75ppm。
97.根据权利要求86至96中任一项所述的水体，其中在所述水中的芳樟醇的浓度不大于 500ppmo
98.根据权利要求97所述的水体，其中所述芳樟醇的浓度不大于400ppm。
99.根据权利要求98所述的水体，其中所述芳樟醇的浓度不大于300ppm。
100.根据权利要求99所述的水体，其中所述芳樟醇的浓度不大于200ppm。
101.根据权利要求100所述的水体,其中所述芳樟醇的浓度不大于150ppm。
102.根据权利要求101所述的水体，其中所述芳樟醇的浓度不大于lOOppm。
103.根据权利要求86至102中任一项所述的水体，其中所述水处于4°C至24°C范围内的温度。
104.根据权利要求103所述的水体，其中所述水处于4°C至22°C范围内的温度。
105.根据权利要求104所述的水体，其中所述水处于10°C至22°C范围内的温度。
106.根据权利要求105所述的水体，其中所述水处于15°C至21°C范围内的温度。
107.根据权利要求86至102中任一项所述的水体，其中所述水处于24°C至30°C范围内的温度。
108.根据权利要求107所述的水体，其中所述水处于24°C至29°C范围内的温度。
109.根据权利要求108所述的水体，其中所述水处于25°C至28°C范围内的温度。
110.根据权利要求109所述的水体，其中所述水处于25°C至27°C范围内的温度。
111.根据权利要求75至110中任一项所述的水体，其中所述水的pH为至少5.5。
112.根据权利要求111所述的水体，其中所述水的pH为至少6.0。
113.根据权利要求112所述的水体，其中所述水的pH为至少6.5。
114.根据权利要求113所述的水体，其中所述水的pH为至少7.0。
115.根据权利要求114所述的水体，其中所述水的pH为至少7.5。
116.根据权利要求115所述的水体，其中所述水的pH为至少8.0。
117.根据权利要求75至116中任一项所述的水体，其中所述水的所述pH不大于8.5。
118.根据权利要求75至115中任一项所述的水体，其中所述水的所述pH不大于8.0。
119.根据权利要求75至114中任一项所述的水体，其中所述水的所述pH不大于7.5。
120.根据权利要求75至113中任一项所述的水体，其中所述水的所述pH不大于7.0。
121.根据权利要求75至112中任一项所述的水体，其中所述水的所述pH不大于6.5。
122.根据权利要求75至111中任一项所述的水体，其中所述水的所述pH不大于6.0。
123.根据权利要求86至102中任一项所述的水体，其中所述水体被封闭在人造外壳中。
124.根据权利要求123所述的水体，其中所述人造外壳是密封的。
125.根据权利要求86至124中任一项所述的水体，其中所述水生生物是软骨鱼纲或硬骨鱼总纲的成员。
126.根据权利要求125所述的水体，其中所述软骨鱼纲或硬骨鱼总纲的所述成员选自鲑鱼、鳟鱼、嘉鱼、香鱼、鲤鱼、鲫鱼、金鱼、斜齿鳊、银鱼、鳗鱼、海鳗、沙丁鱼、飞鱼、海鲈、海鲷、鹦鹉鲈鱼、鲷鱼、鲭鱼、竹荚鱼、金枪鱼、鲣鱼、黄狮鱼、岩鱼、鲽鱼、鳎鱼、比目鱼、河豚、马面鱼、鲟鱼、It鱼和锦鲤。
127.根据权利要求86至126中任一项所述的水体，其中所述芳樟醇是(S)-(+)_芳樟醇。
128.根据权利要求86至126中任一项所述的水体，其中所述芳樟醇是(R)-(_)_芳樟醇。
129.根据权利要求86至126中任一项所述的水体，其中所述芳樟醇是(S)-芳樟醇和(R)-芳樟醇两者的混合物。
130.根据权利要求75至129中任一项所述的水体，其中所述芳樟醇构成至少90重量％、至少92重量％、至少94重量％、至少95重量％、至少96重量％、至少97重量％、至少98重量％、至少99重量％或基本上100%的用于使所述鱼镇静、麻醉或安乐死的活性成分。
【文档编号】A61K36/53GK103764131SQ201280041456
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2012年8月22日 优先权日:2011年8月25日
【发明者】达尼·内菲尔德 申请人:阿卡莫技术有限公司