疫苗疗法
【专利摘要】本发明提供了用于在患有唐氏综合症(DS)的青年至中年对象中治疗、减轻和预防淀粉样蛋白相关病理学的工具。特别的是，本发明提供了源自淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质的抗原肽片段，用于在患有唐氏综合症的青年至中年对象中预防性治疗淀粉样蛋白相关病理学的用途。
【专利说明】疫苗疗法
[0001]本发明提供了用于在患有唐氏综合症(DS)的青年至中年对象中治疗淀粉样蛋白相关病理学的工具。特别的是，本发明提供了源自淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质(amyloid-like protein)的抗原肽片段,用于在患有唐氏综合症(DS)的青年至中年对象中治疗阿兹海默病(AD)样痴呆。
[0002]遗传病唐氏综合症(DS)是最常见的染色体三体，发病率为每700-1000名新生儿中I名。估计提示25%或更多在35岁以上的唐氏综合症个体表现出阿兹海默样痴呆的标志和症状(Stanton L.R和Coetzee R.H，2004)。百分比随年龄而增加。在DS中，全部的或至少一部分的21号染色体存在3份(Antonarakis等人,2004 ；Moncaster等人,2010)。因此，三拷贝的淀粉样蛋白前体蛋白质(APP)基因导致生成过量的淀粉样蛋白_β (Αβ)，这是普遍已知对阿兹海默病(AD)负责的主要异常蛋白质之一(Ballard等人，2011)。因此，提示Αβ可能在大部分DS人群的AD样痴呆中发挥作用(Lee等人，2005 ;Liu等人，2005 ;Gilman 等人,2005)。
[0003]在患唐氏综合症的人中，AD样记忆缺陷可以涉及若干种病理学蛋白质，如Αβ、T、DyrklA、ApoE等。在胚胎阶段Αβ就已开始增加，在出生时进一步发展，并随年龄增长而持续累积(Stoltzner等人，2000)。此外，在老龄(MO岁)人群中，A β 42的脑脊液(CSF)水平低于年轻的DS人群，而τ水平则高于年轻的DS人群(Tap1la等人，2001)。一旦Αβ沉积为斑块，则在12岁时Apo E可以在许多斑块中检测到，并随年龄稳步增长(Lemere等人，1996)。在生活史的第4个十年中，可以在DS的脑内检测到神经元纤维缠结(NFT)。这些NFT被认为是τ积累的结果。已显示，过表达被 称为DyrklA(双特异性酪氨酸磷酸化的和调控的激酶1Α)的激酶可能导致过磷酸化(Lemere等人，1996 ；Liu等人,2008)。因此，患有DS的人群可以到40岁时出现淀粉样蛋白相关病理学，且大部分到60岁时具有与阿兹海默病类似的临床症状，如认知衰退和记忆损伤(Stanton2004)。
[0004]患有DS的个体接受的医学护理主要是针对其多种健康问题(如心脏缺陷、感染和甲状腺机能减退)，而几乎不考虑针对神经病理学性状，即，心理残疾和记忆缺陷的特定治疗。目前，仅在进行少数临床试验，其目标都是增强心理能力或降低神经损坏。用于治疗DS的药物也用于AD，都是作用于胆碱能系统或谷氨酸能神经传递，如胆碱酯酶抑制剂利伐斯的明(Rivastigmine)或多奈哌齐(Donepezil),和NMDA受体拮抗剂美金刚(Memantine)(Prasher, 1993 ；Prasher, 2004)。然而，缺少对DS人群的效力的证据。目前，有许多淀粉样蛋白修饰性治疗正在审批，包括靶向Αβ免疫疗法(Rafii，2010)。在小鼠AD模型中表现出有效降低脑部A β负荷和逆转认知缺陷后，若干种疫苗目前已进入临床阶段(Weiner和Frenkel, 2006)。与AD相反，DS中还没有提出靶向A β的免疫疗法。
[0005]在若干种用于治疗患有DS的成人的认知损伤的方法中，使用乙酰胆碱酯酶抑制剂(AChEI)或NMDA受体拮抗剂的现有研究表现出极少或没有效果(Fernandez等人，2007，Hanney等人，2012)。相反，对于淀粉样蛋白在患有DS的人群的认知恶化中发挥作用的假说有显著的支持；Netzer及其同事显示，用Y-分泌酶抑制剂改变APP切割对DS小鼠模型的记忆具有有益的效果(Netzer等人，2010)。这些观察结果基于小鼠模型中的研究，所述研究显示增加的APP基因剂量(对淀粉样蛋白沉积症负责的Αβ肽的亲代蛋白质)，对于表征DS和AD的与年龄相关的神经元退化是必需的(Salehi等人，2006, 2009)。因此，靶向淀粉样蛋白可以是用于预防AD发展的有前景的治疗对策。研发针对Αβ的免疫疗法是基于这样的假设，即，如果分子在原位靶向和隔离Αβ (以可溶性形态和作为寡聚物)，则分子可以增强Αβ的从脑部去除，并使患有DS的人群产生临床益处。可预期的是，通过抗Αβ疫苗生成的抗体将结合纤维状的Aβ沉积物，最终使前斑块溶解或抑制前斑块的生长。目前，认为Αβ寡聚物是毒性最高的A β种类，破坏DS人群中的大部分认知功能(Teller等人，1996)。
[0006]因此，需要预防疗法，其目标是预防或减慢在患有唐氏综合症(DS)的对象中与淀粉样蛋白相关病理学相关联的临床症状的出现，例如，特别是记忆和/或认知损伤或异常。
[0007]特别的是，需要在患有唐氏综合症(DS)的对象中与淀粉样蛋白相关病理学相关联的临床症状的治疗，所述治疗导致改善患有唐氏综合症(DS)的对象的学习能力和/或改善或恢复记忆和/或认知能力。
[0008]在本发明的范围内，提供了帮助满足该需求的测量和工具。特别的是，本发明提供了抗原性肽，其用于在患有唐氏综合症的儿童和青年至中年对象中的预防疗法和AD样认知损伤的治疗。
[0009]在第一个实施方案中，本发明提供了源自淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质的抗原肽片段，特别是源自淀粉样蛋白_β蛋白质的抗原肽片段，或包含所述抗原肽的组合物，用于在患有唐氏综合症的青年至中年对象中，特别是脑内还没有出现淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质相关的斑块，特别是A β相关斑块的患有唐氏综合症的青年对象中，治疗和/或减轻和/或预防记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异常。
[0010]在一个实施方案中，本发明提供了源自淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质的抗原肽片段，特别是源自淀粉样蛋白-β蛋白质的抗原肽片段，或包含所述抗原肽的组合物，用于在患有唐氏综合症的中年对象中，特别是脑内还没有出现淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质相关的斑块，特别是Αβ相关斑块的患有唐氏综合症的中年对象中，治疗和/或减轻和/或预防记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异常。
[0011]在另一个实施方案中，本发明提供了源自淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质的抗原肽片段，特别是源自淀粉样蛋白-β蛋白质的抗原肽片段，或包含所述抗原肽的组合物，用于在患有唐氏综合症的青年对象中，特别是脑内还没有出现淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质相关的斑块，特别是A β相关斑块的患有唐氏综合症的青年对象中，治疗和/或减轻和/或预防记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异常。
[0012]在仍然另一个实施方案中，本发明提供了源自淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质的抗原肽片段，特别是源自淀粉样蛋白_β蛋白质的抗原肽片段，或包含所述抗原肽的组合物，用于在患有唐氏综合症的儿童对象中，特别是脑内还没有出现淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质相关的斑块，特别是A β相关斑块的患有唐氏综合症的儿童对象中，治疗和/或减轻和/或预防记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异常。
[0013]在其他实施方案中，本发明提供了源自淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质的抗原肽片段，特别是源自淀粉样蛋白_β蛋白质的抗原肽片段，或包含所述抗原肽的组合物，用于在患有唐氏综合症的儿童和青年至中年对象中，特别是脑内还没有出现淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质相关的斑块，特别是Αβ相关斑块的患有唐氏综合症的青年对象中，治疗和/或减轻和/或预防记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异常。
[0014]在本发明的仍然另一个实施方案中，将抗原肽施用给患有唐氏综合症的对象，特别是遭受记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异常的唐氏综合症对象，其中所述对象小于60岁，特别是小于55岁，特别是小于50岁，特别是小于45岁，特别是小于40岁，特别是小于35岁，特别是小于30岁，特别是小于25岁，特别是小于20岁，特别是小于15岁，特别是小于10岁，特别是小于5岁，特别是小于3岁。
[0015]在本发明的特定实施方案中，将抗原肽施用给患有唐氏综合症的对象，特别是遭受记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异常的唐氏综合症对象，其中所述对象小于35岁，特别是小于30岁，特别是小于25岁，特别是小于20岁，特别是小于15岁。
[0016]在本发明的特定实施方案中，将抗原肽施用给患有唐氏综合症的对象，特别是遭受记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和 /或内嗅皮质的损伤和异常的唐氏综合症对象，其中所述对象小于15岁，特别是小于10岁，特别是小于5岁，特别是小于3岁。
[0017]在本发明的特定实施方案中，将抗原肽施用给患有唐氏综合症的对象，特别是遭受记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异常的唐氏综合症对象，其中所述对象小于10岁，特别是小于5岁，特别是O至10岁之间，特别是I至10岁之间,特别是2至10岁之间，特别是3至10岁之间,特别是4至10岁之间,特别是5至10岁之间。
[0018]在一个实施方案中，用本发明提供的抗原肽的治疗阻止了脑内，特别是脑内的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质中出现Aβ相关的斑块。
[0019]在某些实施方案中，本发明考虑在脑内已出现Αβ相关的斑块的儿童和青年至中年的唐氏综合症对象中，使用源自淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质的抗原肽片段或包含根据本发明和本文所述的所述抗原肽的组合物，治疗和/或减轻和/或预防记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑内的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异常。
[0020]在本发明的另一个实施方案中，用本发明提供的抗原肽的治疗降低了脑内，特别是脑内的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质中的Αβ相关的斑块的量。
[0021]在一个实施方案中，待用根据本发明的抗原肽或组合物治疗的患者组包含患有唐氏综合症的青年至中年对象，特别是小于65岁，特别是小于60、55或50岁的对象。在一个实施方案中，可以用根据本发明的抗原肽或组合物治疗年龄为O至65岁之间的对象，特别是5至55岁之间，特别是10至50岁之间，特别是15至45岁之间，特别是20至40岁之间，特别是25至35岁之间的对象。
[0022]出于本发明的目的，儿童指小于18岁的对象，特别是年龄在O至18岁之间的对象，特别是在I至10岁之间，特别是2至9岁之间，特别是3至9岁之间，特别是4至9岁之间，特别是5至18岁之间的对象。
[0023]出于本发明的目的，青年对象指小于35岁的对象，特别是年龄在O至35岁之间的对象，特别是在I至30岁之间，特别是5至25岁之间的对象。
[0024]出于本发明的目的，中年对象指年龄在36至65岁之间的对象，特别是在40至60岁之间，特别是45至55岁之间的对象。
[0025]在一个实施方案中，使用根据本发明和本文所述的抗原肽或组合物，治疗患有唐氏综合症并遭受记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异常的儿童或青年至中年对象，导致所述损伤或异常的改善或恢复，特别是记忆改善，特别是改善或恢复识别记忆和/或情景联想记忆。
[0026]在一个实施方案中，使用根据本发明和本文所述的抗原肽或组合物，治疗患有唐氏综合症并遭受记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常的儿童或青年至中年对象，导致受治对象的记忆力增加或完全恢复认知记忆能力。
[0027]使用根据本发明和本文所述的抗原肽治疗患有唐氏综合症的儿童和青年至中年对象的AD样认知损伤或异常显示出如本文公开的治疗效果而不诱导不想要的副作用如脑膜脑炎和少量出血。
[0028]在本发明的某些实施方案中，对象是本文定义的儿童对象，特别是青年对象，特别是中年对象，其患有唐氏综合症，并遭受记忆和/或认知损伤或异常，特别是遭受AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异
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[0029]在本发明的其他实施方案中，用根据本发明和本文所述的抗原肽或组合物治疗预防了在唐氏综合症对象的脑内，特别是在脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质中，特别是在患有唐氏综合症的青年至中年的脑内，特别是在儿童的脑内，特别是在青年的脑内，特别是中年对象的脑内出现Aβ相关的斑块。
[0030]在一个实施方案中，根据本发明和本文所述的抗原肽源自选自朊蛋白、τ蛋白、α-突触核蛋白，亨廷顿蛋白和淀粉样蛋白_β或一种或多种上述肽的组合的淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质。
[0031]在本发明的一个实施方案中,所述A β抗原肽片段对应于A β肽的N-末端部分，特别是包含A β 1-15片段的至少5个，特别是至少6个，特别是至少7个，特别是至少8个，特别是至少9个，特别是至少10个，特别是至少11个，特别是至少12个，特别是至少13个，特别是至少14个，特别是所有的氨基酸残基的N-末端部分。
[0032]在一个实施方案中,Aβ抗原肽片段对应于包含来自Αβ 1-16片段、Αβ 1-17片段、Αβ 1-18 片段、Αβ 1-19 片段、Αβ 1-20 片段、Αβ 1-22 片段、Αβ 1-23 片段、Αβ 1-24 片段、A β 1-25片段或、A β 1-26片段或3-15Α β片段的至少5个，特别是至少6个，特别是至少7个，特别是至少8个，特别是至少9个，特别是至少10个，特别是至少11个，特别是至少12个，特别是至少13个，特别是至少14个，特别是至少15个，特别是所有的氨基酸残基的A β肽的N-末端部分。
[0033]在一个实施方案中，Aβ抗原肽片段对应于包含来自Αβ 20-40或Αβ 20-42片段、A β 21-40 或 A β 21-42 片段、A β 22-40 或 A β 22-42 片段、A β 23-40 或 A β 23-42 片段、A β 24-40 或 A β 24-42 片段、A β 25-40 或 A β 25-42 片段、A β 26-46 或 A β 27-42 片段或A β 27-40或A β 27-42片段或A β 29-40的至少5个，特别是至少6个，特别是至少7个，特别是至少8个，特别是至少9个，特别是至少10个，特别是至少11个，特别是至少12个，特别是至少13个，特别是至少14个，特别是至少15个，特别是所有的氨基酸残基的A β肽的C-末端部分。
[0034]在一个实施方案中，Αβ抗原肽片段对应于包含来自Αβ 15-35，特别是Aβ20_35片段的至少5个，特别是至少6个，特别是至少7个，特别是至少8个，特别是至少9个，特别是至少10个，特别是至少11个，特别是至少12个，特别是至少13个，特别是至少14个，特别是至少15个，特别是所有的氨基酸残基的Aβ肽的中间部分。
[0035]在本发明的另一个实施方案中，Αβ抗原肽片段对应于Αβ肽，特别是Αβ 14-29片段的中央部分。
[0036]在特定的实施方案中，Aβ抗原肽片段对应于Aβ肽的C-末端部分，特别是C-末端Αβ 22-35片段。
[0037]在本发明的另一个实施方案中，可使用全长Αβ 1-39, Aβ 1_40或Αβ 1-42片段。
[0038]在本发明的某些实施方案中，如本文公开的Αβ抗原肽片段可包含一个或多个修饰的或非天然的氨基酸残基。
[0039]在本发明的某些实施方案中，考虑了 Αβ抗原肽片段的用途，所述片段不是由来自A β肽的N-末端部分的13至15个连续氨基酸残基的单一或重复序列段组成的片段，特别不是这样的片段，其中13至15个氨基酸残基的所述连续序列段是从Aβ肽的N-末端片段1-16或1-17获得的，特别是从选自残基1-15、1-14和1_13的Αβ肽的N-末端部分获得的，特别是由W02007/068411中公开的SEQ ID NO:1给出的Αβ卜15肽抗原和SEQ ID NO:3给出的APh6ui4)组成的。在一个实施方案中，根据本发明和本文公开的抗原肽是在载体中重建存在的，所述载体例如囊泡、颗粒体(particulate body)或分子,但特别是在脂质体中重建的。
[0040]在一个实施方案中，根据本发明和本文公开的抗原肽是在载体或脂质体的表面上以单个或重复的阵列存在的。
[0041]在一个实施方案中，载体或脂质体表面上的所述高重复阵列包括至少10个重复的抗原单位/载体分子，特别是至少50个重复的抗原单位/载体分子，特别是至少100个重复的抗原单位/载体分子，特别是至少200个重复的抗原单位/载体分子，特别是至少300个重复的抗原单位/载体分子；特别是至少400个重复的抗原单位/载体分子，特别是至少500个重复的抗原单位/载体分子。
[0042]本发明和 本文所述的抗原组合物可包含构象抗原，特别是本文所述的Αβ抗原，其中大于30 %，特别是大于40 %，特别是大于50 %，特别是大于60 %，特别是大于70 %，特别是大于80%，特别是大于90%，特别是大于95%和多达100%是处于β -片层构象的。
[0043]在本发明的一个实施方案中，组合物在多个实施方案中包含治疗有效量的如本文所述的本发明的抗原肽，和可药用的载体和/或赋形剂，用于治疗和/或减轻和/或预防唐氏综合症对象中的记忆损伤或异常。
[0044]在本发明的另一个实施方案中，组合物在多个实施方案中包含治疗有效量的本文所述的本发明的抗原肽，和可药用的载体和/或赋形剂，用于治疗和/或减轻和/或预防唐氏综合症对象中的认知损伤或异常。
[0045]特别的是，所述记忆和/或认知损伤源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质。
[0046]在本发明的多个特定的实施方案中，组合物在多个实施方案中包含治疗有效量的本文所述的本发明的抗原肽，和可药用的载体和/或赋形剂，用于治疗和/或减轻和/或预防识别记忆损伤和/或情景联想记忆损伤和/或联想学习损伤和/或关于事实和事件的陈述性记忆损伤和/或情节记忆损伤和/或语言功能障碍，如失语症和/或视空间损伤，如物品乱放和对陌生和熟悉地区的探索困难和/或执行功能减少，如冷漠、去抑制、社会隔离、判断力低下、计划困难和/或抽象推理低下和/或人格改变和/或情绪改变，如冷漠、兴奋和精神病和/或失用症和/或实施学习运动任务损伤和/或其他的神经学症状，包括锥体和锥体外系的发现，以及肌阵挛或抽搐。
[0047]特别的是，所述损伤或异常涉及识别记忆。
[0048]在特定的实施方案中，所述用于在唐氏综合症对象中增强或恢复识别记忆的抗原肽源自Αβ肽的N-末端部分，特别是所述抗原肽由Aβ 1-15、Aβ 1-16、A β 1-17、Aβ 1-18,Αβ 1-19、Aβ 1-20、Aβ 1-22或Αβ 1-23的全部或部分氨基酸残基组成。 [0049]特别的是，所述抗原肽由氨基酸残基Αβ 1-15组成。
[0050]在另一个特定的实施方案中，所述用于在唐氏综合症对象中增强或恢复识别记忆的抗原肽源自Αβ肽的N-末端部分，特别是所述抗原肽由全部或部分氨基酸残基组成。
[0051]特别的是，所述损伤或异常涉及情景联想记忆。
[0052]在特定的实施方案中，所述用于在唐氏综合症对象中增强或恢复情景联想记忆的抗原肽源自Αβ肽的N末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基Aβ 1-15、Αβ 1-16、Αβ 1-17、Aβ 1-18、Aβ 1-19、Aβ 1-20、Aβ 1-22 或 Αβ 1-23 的全部或部分组成。
[0053]特别的是，所述抗原肽由氨基酸残基Αβ 1-15组成。
[0054]特别的是，所述损伤或异常涉及联想学习。
[0055]在特定的实施方案中，所述用于在唐氏综合症对象中增强或恢复联想学习的抗原肽源自Αβ肽的N末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基Aβ 1-15、Αβ 1-16、Αβ 1-17,Αβ 1-18、Aβ 1-19、Aβ 1-20、Aβ 1-22 或 Αβ 1-23 的全部或部分组成。
[0056]特别的是，所述抗原肽由氨基酸残基Αβ 1-15组成。
[0057]在另一个特定的实施方案中，所述用于在唐氏综合症对象中增强或恢复联想学习的抗原肽源自A β肽的C末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基A β 20-36、Α β 20-40、Αβ 20-42、Αβ 21-36、Αβ 21-40、Αβ 21-42、Αβ 22-36、Αβ 22-40 或 Αβ 22-42 的全部或部分组成。
[0058]特别的是，所述抗原肽由氨基酸残基A β 22-35组成。
[0059]可以通过呈现部分或完全在载体中连接、整合或重建的抗原肽，实现抗原肽理想构象的形成和稳定，所述载体例如囊泡、颗粒体或分子、或任何其他适合作为抗原肽的载体/佐剂的工具。在本发明的特定的实施方案中，抗原肽通过弱相互作用，例如范德华氏力、疏水性或静电的相互作用，或两种或多种所述相互作用的组合在载体中连接、整合或重建，使得所述肽以特定的构象呈现在载体表面，通过将所述抗原肽限制在其移动的三维自由度中从而阻止或严格限制构象变化，来维持和稳定所述构象。
[0060]当使用囊泡、颗粒或颗粒体作为载体/佐剂时，例如脂质体，可以选择抗原肽的组合物使其整体的净电荷等于肽所连接的载体/佐剂表面的净电荷。在等电荷的载体/佐剂表面与抗原肽之间，但特别是在等电荷的载体表面与构成抗原肽的氨基酸残基之间，更特别是在等电荷的载体表面与包含在抗原肽中的等电荷的氨基酸残基之间有效的静电斥力，可导致抗原肽采用定义的、高特异性和稳定的构象，以确保高的生物学活性。结果是抗原肽被暴露并呈现为高生物学活性的构象，由于其允许靶生物体的免疫系统与包含在生物学活性构象的抗原性构建体中的抗原决定簇自由地相互作用，这导致强大和构象特异性的免疫应答，在靶生物体中导致例如高抗体滴度。
[0061]可以通过使用脂质体作为载体，进一步增加免疫原性应答，所述脂质体可以在待用根据本发明的治疗性疫苗治疗的靶动物或人体内，作为佐剂发挥功能以增加或刺激的免疫应答。任选的，脂质体还可以含有其他佐剂，例如脂质A、明矾、磷酸钙、白介素I和/或多糖和蛋白质的微胶囊，但特别是脱毒的脂质A，如单磷酰或二磷酰脂质A，或可适用于本发明范围内的任何其他佐剂，例如明矾、磷酸钙、白介素I和/或多糖和蛋白质的微胶囊、LPS、CpG 0DN, Pam2CSK4、Pam3CSK4、dsRNA、ssRNA、胞壁酰二肽、Quil Q、QS-21。
[0062]可用于本发明的组合物中的脂质体包括本领域技术人员已知的方法。可使用任何可用于制备脂质体的标准脂质。可使用标准的双层和多层脂质体制备本发明的组合物。虽然可使用本领域技术人员已知的任何制备脂质体的方法，但最优选的脂质体是根据Alving等人，Infect.1mmun.60:2438-2444, 1992, (Lauer等人，1992)的方法制备的，其通过引用整合到本文中。脂质体可具有双重功能，在于其可用作包含本文上述超分子构建体的载体，并且同时，在待用根 据本发明的治疗性疫苗治疗的靶动物或人体内，作为佐剂发挥功能以增加或刺激的免疫应答。任选的，脂质体还可以含有另外佐剂或免疫调节剂或两者，例如脂质A、明矾、磷酸钙、白介素I和/或多糖和蛋白质的微胶囊，但特别是脂质A，更特别是脱毒的脂质A，如单磷酰或二磷酰脂质A或明矾。
[0063]脂质体可由选自二肉豆蘧酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二肉豆蘧酰磷脂酰乙醇胺(DMPEA)、二肉豆蘧酰磷脂酰甘油(DMPG)和胆固醇的组分构成。
[0064]在一个实施方案中，本发明考虑使用阴离子型脂质作为脂质体膜中的阳离子型脂质的替代物，所述阴离子型脂质选自:
[0065]a.具有头部基团磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、L-α-磷脂酰肌醇-4-磷酸或磷脂酸的二酰基-磷脂类；
[0066]b.具有头部基团磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸或磷脂酸的溶血磷脂类，和
[0067]c.心磷脂、二溶血-心磷脂、单溶血-心磷脂。
[0068]在一个方面，本发明考虑使用阳离子型脂质作为脂质体膜中的阴离子型脂质的替代物，所述阳离子型脂质选自:
[0069]a.具有头部基团3_ 二甲基铵-丙烷、3_ 二甲基铵-丙烷、3_乙基憐酸胆喊或3_憐脂酰乙醇胺的二酰基-磷脂类；和
[0070]b.D-赤鞘氨醇、二甲基双十八烷基溴化铵、N-[l_(2，3-二肉豆蘧氧代)丙基]-N，N-二甲基-N-(2-羟乙基)溴化铵、N，N，N-三甲基-2-双[(1_氧代_9_十八烯基)氧]_(Z，Z)-1-丙铵硫酸甲酯或3 β-[N-(N’，N’-二甲基氨基乙烷)-氨基甲酰]胆固醇盐酸。
[0071]在本发明的一个实施方案中，与上述头部基团连接的脂链可以
[0072]a.是饱和的或不饱和的，
[0073]b.长度不同的(CH2)n，其中η在3至24之间，且
[0074]是对称或不对称取代的。
[0075]在一个实施方案中，本发明和本文所述的抗原组合物包含脂质体制品和佐剂，特别是脂质Α、明矾、磷酸钙、白介素I和/或多糖和蛋白质的微胶囊，但特别是脂质Α，更特别是脱毒的脂质Α，如单磷酰或二磷酰脂质A或明矾。
[0076]可以根据本文公开的方法，制备包含与包埋在本文所述的脂质体中的亲脂性部分偶联的Αβ肽的本发明的脂质体组合物。
[0077]当使用脂质体作为载体/佐剂时，还可以通过与促进插入到脂质体载体/佐剂的脂双层中的亲脂性或疏水性部分偶联，进一步修饰本文提供的抗原肽。所述疏水性部分可以是脂肪酸、甘油三酯、甘油二脂、类固醇、鞘磷脂、糖脂或磷脂。
[0078]在特定的实施方案中，亲脂性或疏水性部分是具有至少I个碳原子，特别是至少2个碳原子，特别是至少3个碳原子，特别是至少4个碳原子，特别是至少6个碳原子，特别是至少8个碳原子，特别是至少12个碳原子，特别是至少16个碳原子的碳骨架的烷基或脂肪酸。
[0079]亲脂性或疏水性部分可以是脂肪酸、甘油三酯和磷脂，其中脂肪酸碳骨架具有至少4个碳原子，特别地亲脂性部分具有碳骨架为至少约14个碳原子和多达约24个碳原子的脂肪酸，更特别地疏水性部分具有至少14个碳原子的碳骨架。疏水性部分的例子包括但不限于棕榈酸、硬脂酸、肉豆蘧酸、月桂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸和胆固醇或DSPE.在本发明的特定实施方案中，疏水性部分是棕榈酸。
[0080]在本发明的特定的实施方案中，本发明和本文所述的抗原组合物包含肽抗原，所述肽抗原包含2个棕榈酸部分，特别是四个棕榈酸部分。
[0081]棕榈酰化作用因为相对减少的(:16:(|脂肪酸部分长度为脂质体双层中的肽提供了锚定位点，导致肽暴露在脂质体表面或在紧邻脂质体表面处呈现。因此，加工抗原的细胞将不得不摄入含肽的完整脂质体。
[0082]在一个实施方案中，本发明的抗原性构建体可包含通过聚乙二醇化(使用聚乙二醇(PEG)或修饰的聚乙二醇)修饰的肽，或通过上述所述的其他方法修饰的肽，如棕榈酸、多聚氨基酸(例如，聚甘氨酸、聚组氨酸)、多糖(例如，聚半乳糖醛酸、聚乳酸、聚乙交酯、几丁质、壳聚糖)、合成的多聚物(聚酰胺、聚氨酯、聚酯)或共聚物(例如，聚(甲基丙烯酸)和N-(2-羟基)丙基甲基丙烯酰胺)等。
[0083]如果在制备抗原性构建体中使用PEG，则游离的PEG末端可以与磷脂酰乙醇胺的分子共价连接(其中脂肪酸可以是:肉豆蘧酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸等，或其组合)。可以在由磷脂类和胆固醇(不同摩尔比例的磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、胆固醇)组成的脂质体中重建该超分子结构。可以使用其他磷脂类。可以使用浓度为约40 μ g/皮摩尔磷脂的脂质A。[0084]在某些实施方案中，本发明的抗原性构建体包含在每个末端与至少一个聚乙二醇化的赖氨酸共价连接，特别地在每个末端与I或2个聚乙二醇化的赖氨酸共价连接的上文所述的抗原肽序列。PEG (聚乙二醇)链的长度可以在η = 8至η = 150.000之间变化,或更长，特别是从η = 10至η = 80.000,更特别的是从η = 10至η = 10.000之间变化。在本发明的特定实施方案中，PEG链的长度不大于η = 45,特别是在η = 5和η = 40之间，更特别的是在η = 10至η = 30之间，甚至更特别η = 10。
[0085]在本发明的其他实施方案中，Aβ肽抗原被结合在肽分子的N-和/或C-末端的2个棕榈酸修饰。
[0086]在某些实施方案中，本发明考虑向预先形成的脂质体外层后插入不同浓度的不同的肽(例如，抗原)类型和/或佐剂类型，如EP申请号10188832所述，其公开内容全文整合到本文中。该后插入方法包括在溶液中预先形成脂质体，和通过疏水性部分修饰抗原肽，使得可获得胶束(micelle)形式的修饰的抗原肽。方法还包括通过诱导胶束降解，从胶束释放抗原肽，随后再整合到预形成的脂质体中。该整合过程由修饰的抗原和/或佐剂与脂质体的(磷)脂双层的疏水性相互作用驱动。特别的是，在没有任何化学反应或其他分子修饰的帮助下，通过将溶解的抗原肽或佐剂(最初以胶束形态呈现)稀释至低于表面活性剂的关键胶束浓度，实现将修饰的抗原肽和/或佐剂溶解到脂质体的外层中。然后将游离形式的抗原肽或佐剂整合到脂质体的外层中由于其疏水性结构域溶解在磷脂的酰基部分中。因此，方法提供了用于根据相应需求负载的一次 性“空白脂质体”的储液。
[0087]特别的是，用于制备包含通过在脂质体中重建的疏水性部分修饰的多种实施方案中本发明和本文所述的抗原肽的基于脂质体的抗原性构建体的此后插入方法包括步骤:1)在溶液中制备脂质体；ii)通过在肽分子的N-和/或C-末端添加至少一个疏水性部分，制备修饰的抗原肽；iii)在存在表面活性剂的条件下，溶解修饰的抗原肽；iv)将溶解的肽，和任选的，佐剂稀释至低于表面活性剂的关键胶束浓度(CMC);和0通过向预先形成的脂质体制品中添加所述抗原肽，和任选的所述佐剂，并将添加的肽，和任选的添加的佐剂溶解到脂质体的外层中，特别地在没有任何化学反应或额外的分子修饰的帮助下，用稀释的，溶解的抗原肽，和任选的佐剂负载预先形成的脂质体。
[0088]如本文中使用的，术语“关键胶束浓度”，也称为CMC，被定义为表面活性剂的这样的浓度，在高于所述浓度时自发形成胶束。在向系统中加入表面活性剂(或任何表面活性材料)后，表面活性剂将最初分入界面中，因而通过a)降低界面能量(按面积χ表面张力计算)和b)通过从与水的接触中去除表面活性剂的疏水性部分，来降低系统的自由能。之后，当表面活性剂覆盖的表面增加而表面自由能(表面张力)减少时,表面活性剂开始凝聚成胶束，因而通过减少表面活性剂的疏水性部分与水的接触面积，而再次减少系统的自由能。在达到CMC后，任何进一步添加表面活性剂将只增加胶束数量(IUPAC.Compendium ofChemical Terminology, 2nd ed.Blackwell Scientific Publicat1ns, Oxford(1997))。
[0089]有利的是，该方法导致高产量的肽和/或佐剂整合，在朝向脂质体双层的外层的脂质体上具有独特的分子展示。特别的是，至少75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%,83%,84%,85%,86%,87%,89%,90%,91 %,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%、99%和多达100%的重建的抗原肽呈现在脂质体的表面，通过其疏水性部分插入脂双层中。[0090]方法还获得了表现出均质大小分布的脂质体制品，其具有在0.4至0.6之间，特别是0.45至0.55，特别是0.5的多分散指数。此外，方法和构建体允许用于免疫系统的肽和/或佐剂的高生物利用度，其结果是改善的免疫应答。佐剂降解，例如MPLA降解是最小化的，或完全不存在，因此，提供了增加的批次重现性。通过上述方法制备的构建体是稳定的，能够无菌过滤，且不导致副免疫应答。
[0091]因此，在本发明的某些实施方案中，提供了包含本发明的抗原肽的抗原性构建体，如本文所述在多个实施方案中所述抗原肽用于在脂质体中重建，其中至少75%、76%、77%,78%,79%,80%,81 %,82%,83%,84%,85%,86%,87%,89%,90%,91 %,92%,93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%和多达100 %的重建的抗原肽呈现在脂质体的表面，通过其疏水性部分插入脂双层中。
[0092]在本发明的仍然其他实施方案中，提供了包含所述抗原性构建体的脂质体制品，所述制品显示了均质的大小分布，具有在0.4至0.6之间的范围，特别是0.45至0.55，特别是0.5的多分散指数。
[0093]在某些实施方案中，抗原肽以高重复阵列，特别是包含至少10个重复的抗原单位/载体分子，特别是至少50个重复的抗原单位/载体分子，特别是至少100个重复的抗原单位/载体分子，特别是至少200个重复的抗原单位/载体分子，特别是至少300个重复的抗原单位/载体分子；特别是至少400个重复的抗原单位/载体分子，特别是至少500个重复的抗原单位/载体分子的重复阵列呈现在载体分子的表面。
[0094]在本发明的某些实施方案中，抗体可用于根据本发明和本文所述的方法中，用于在患唐氏综合症的儿童和青年至中年对象中，治疗和/或减轻和/或预防记忆和/或认知损伤或异常，特别是 AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的记忆和/或认知损伤，特别是识别记忆损伤和/或情景联想记忆损伤和/或联想学习损伤和/或关于事实和事件的陈述性记忆损伤和/或情节记忆损伤和/或语言功能障碍，如失语症和/或视空间损伤，如物品乱放和对陌生和熟悉地区的探索困难和/或执行功能减少，如冷漠、去抑制、社会隔离、判断力低下、计划困难和/或抽象推理低下和/或人格改变和/或情绪改变，如冷漠、兴奋和精神病和/或失用症和/或实施学习运动任务损伤和/或其他的神经学症状，包括锥体和锥体外系的发现，以及肌阵挛或抽搐，所述抗体是响应本文公开的任一种抗原性构建体而生成的。该抗体可以是多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、完全的人抗体、双抗体、骆驼抗体或任何上述抗体的功能性片段，所述片段在治疗记忆和/或认知损伤或异常的方面具有与其来源的抗体基本相同的生物学活性。
[0095]在本发明的某些实施方案中，抗体可用于根据本发明和本文所述的方法中，用于在患唐氏综合症的儿童中，治疗和/或减轻和/或预防记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的记忆和/或认知损伤，特别是识别记忆损伤和/或情景联想记忆损伤和/或联想学习损伤和/或关于事实和事件的陈述性记忆损伤和/或情节记忆损伤和/或语言功能障碍，如失语症和/或视空间损伤，如物品乱放和对陌生和熟悉地区的探索困难和/或执行功能减少，如冷漠、去抑制、社会隔离、判断力低下、计划困难和/或抽象推理低下和/或人格改变和/或情绪改变，如冷漠、兴奋和精神病和/或失用症和/或实施学习运动任务损伤和/或其他的神经学症状，包括锥体和锥体外系的发现，以及肌阵挛或抽搐，所述抗体是响应本文公开的任一种抗原性构建体而生成的。该抗体可以是多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、完全的人抗体、双抗体、骆驼抗体或任何上述抗体的功能性片段，所述片段在治疗记忆和/或认知损伤或异常的方面具有与其来源的抗体基本相同的生物学活性。
[0096]在本发明的某些实施方案中，抗体可用于根据本发明和本文所述的方法中，用于在患唐氏综合症的儿童中，治疗和/或减轻和/或预防记忆和/或认知损伤或异常，特别是AD样记忆和/或认知损伤或异常，特别是源自脑的海马的记忆和/或认知损伤，特别是识别记忆损伤和/或情景联想记忆损伤和/或联想学习损伤和/或关于事实和事件的陈述性记忆损伤和/或情节记忆损伤和/或语言功能障碍，如失语症和/或视空间损伤，如物品乱放和对陌生和熟悉地区的探索困难和/或执行功能减少，如冷漠、去抑制、社会隔离、判断力低下、计划困难和/或抽象推理低下和/或人格改变和/或情绪改变，如冷漠、兴奋和精神病和/或失用症和/或实施学习运动任务损伤和/或其他的神经学症状，包括锥体和锥体外系的发现，以及肌阵挛或抽搐，所述抗体是响应本文公开的任一种抗原性构建体而生成的。该抗体可以是多克隆抗体、单克隆抗体、人源化抗体、完全的人抗体、双抗体、骆驼抗体或任何上述抗体的功能性片段，所述片段在治疗记忆和/或认知损伤或异常的方面具有与其来源的抗体基本相同的生物学活性。
[0097]在本发明的另一个实施方案中，源自淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质的抗原肽片段在本文公开的方法中用于治疗和/或减轻和/或预防源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的记忆和/或认知损伤。
[0098]在一个实施方案中，本发明提供了用于在患有唐氏综合症的对象中，治疗和/或减轻和/或预防记忆损伤或异常的方法，所述方法包括向所述对象施用多种实施方案中本文所述的本发明的抗原肽或组合物。
[0099]在另一个实施方案中，本发明提供了用于在患有唐氏综合症的对象中，治疗和/或减轻和/或预防认知损伤或异常方法，所述方法包括向所述对象施用多种实施方案中本文所述的本发明的抗原肽或组合物。
[0100]特别的是，所述损伤或异常涉及识别记忆。
[0101]在特定的实施方案中，用于增强或恢复患有唐氏综合症的对象中的识别记忆的方法中的所述抗原肽源自Αβ肽的N末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基Αβ 1-15、Αβ 1-16、Aβ 1-17、Aβ 1-18、Aβ 1-19、Aβ 1-20、Aβ 1-22 或 Αβ 1-23 的全部或部分组成。
[0102]特别的是，所述抗原肽由氨基酸残基Αβ 1-15组成。
[0103]在另一个特定的实施方案中，用于增强或恢复患有唐氏综合症的对象中的识别记忆的方法中的所述抗原肽源自Αβ肽的N末端部分，特别是所述抗原肽由全部或部分氨基酸残基组成。
[0104]特别的是，所述损伤或异常涉及情景联想记忆。
[0105]在特定的实施方案中，用于增强或恢复患有唐氏综合症的对象中的情景联想记忆的方法中的所述抗原肽源自Αβ肽的N末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基Αβ 1-15, Αβ 1-16, Αβ 1-17, Αβ 1-18, Αβ 1-19, Αβ 1-20, Aβ 1-22 或 Αβ 1-23 的全部或部 分组成。
[0106]特别的是，所述抗原肽由氨基酸残基Αβ 1-15组成。[0107]特别的是，所述损伤或异常涉及联想学习。
[0108]在特定的实施方案中，用于增强或恢复患有唐氏综合症的对象中的联想学习的方法中的所述抗原肽源自Αβ肽的N末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基Αβ 1-15、Αβ 1-16、Aβ 1-17、Aβ 1-18、Aβ 1-19、Aβ 1-20、Aβ 1-22 或 Αβ 1-23 的全部或部分组成。
[0109]在另一个示例性的实施方案中，活性剂是免疫治疗剂。免疫治疗剂的非限制性例子包括炎性剂、生物学因子、免疫调节蛋白、人和人源化抗体，和免疫治疗药物，如AZT和其他衍生的或修饰的核苷酸。本发明中还可以应用小分子作为活性剂。
[0110]特别的是，所述抗原肽由氨基酸残基Αβ 1-15组成。
[0111]在另一个特定的实施方案中，用于增强或恢复患有唐氏综合症的对象中的联想学习的方法中的所述抗原肽源自Αβ肽的C末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基Aβ 20-36、A β 20-40、A β 20-42、A β 21-36、A β 21-40、A β 21-42、A β 22-36、A β 22-40 或A β 22-42的全部或部分组成。
[0112]特别的是，所述抗原肽由氨基酸残基Αβ 22-35组成。
[0113]对增强和/或恢复患有唐氏综合症的对象中的联想学习特别有效的抗原肽(例如由氨基酸残基Αβ 22-35组成的抗原肽)可以与一种或多种生物学活性化合物组合，所述化合物对识别记忆和/或情景联想记忆具有积极效果。 [0114]在本发明的某些实施方案中，所述患有唐氏综合症的对象是青年至中年对象。
[0115]在本发明的某些实施方案中，所述对象是青年对象。
[0116]在本发明的仍然其他的某些实施方案中，所述对象是」L童对象。
[0117]特别的是，所述对象小于60岁，特别是小于55岁，特别是小于50岁，特别是小于45岁，特别是小于40岁，特别是小于35岁，特别是小于30岁，特别是小于25岁，特别是小于20岁，特别是小于15岁，特别是小于10岁，特别是小于5岁，特别是小于3岁。
[0118]术语“抗体”在本文中是本领域已知的术语，理解为指结合已知抗原，特别是结合免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分的分子或分子的活性片段，即，含有免疫特异性结合抗原的结合位点的分子。本发明的免疫球蛋白可以是免疫球蛋白分子的任何类型(IgG, IgM, IgD, IgE, IgA 和 IgY)或类别(IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)或亚类。
[0119]预期在本发明范围内的“抗体”包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、双特异性抗体、猿猴化(simianized)抗体、人抗体和人源化抗体,及其活性片段。结合抗原的分子的活性片段的例子包括Fab和F(ab’)2片段，包括Fab免疫球蛋白表达文库的产物和任何上述抗体和片段的表位结合片段。
[0120]这些活性片段可通过多种技术从本发明的抗体得到。例如，可以用酶(如胃蛋白酶)切割纯化的单克隆抗体，并进行HPLC凝胶过滤。然后，可以收集含有Fab片段的恰当的级分，并通过膜过滤等浓缩。关于分离抗体活性片段的一般性技术的其他描述，参见例如 Khaw, B.A.等人，J.Nucl.Med.23:1011-1019 (1982) ;Rousseaux 等人,MethodsEnzymologyj 121:663-69，Academic Press，1986。
[0121]“人源化抗体”指一类改造的抗体，其CDR源自非人供体的免疫球蛋白，分子的其余的免疫球蛋白来源部分是源自一种(或多种)人免疫球蛋白。此外，可以改变框架支持残基以保留结合亲和力。获得“人源化抗体”的方法是本领域技术人员普遍已知的(参见例如，Queen 等人，Proc.Natl Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989)，Hodgson 等人,B1/Technoloy, 9:421(1991))o
[0122]还可以通过新的遗传改造方法获得“人源化抗体”，所述方法能够在大型动物(例如，兔)中生产亲和力成熟的类人多克隆抗体。
[0123]术语“单克隆抗体”也是本领域普遍已知的，指在实验室中从单个克隆大规模生产的抗体，仅识别一种抗原。单克隆抗体通常是通过融合正常的短寿命、生产抗体的B细胞与快速生长的细胞，如癌细胞(有时被称为“永生”细胞)来制备的。所获得的杂交细胞或杂交瘤快速加倍，产生生产大量抗体的克隆。
[0124]术语“记忆和/或认知损伤和异常”主要指与患唐氏综合症(DS)的对象中的淀粉样蛋白相关病理学相关联的临床症状，特别指源自脑的海马、前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异常。这类记忆和/或认知损伤的例子是例如但不限于，识别记忆损伤和/或情景联想记忆损伤和/或联想学习损伤和/或关于事实和事件的陈述性记忆损伤和/或情节记忆损伤和/或语言功能障碍，如失语症和/或视空间损伤，如物品乱放和对陌生和熟悉地区的探索困难和/或执行功能减少，如冷漠、去抑制、社会隔离、判断力低下、计划困难和/或抽象推理低下和/或人格改变和/或情绪改变，如冷漠、兴奋和精神病和/或失用症和/或实施学习运动任务损伤和/或其他的神经学症状，包括锥体和锥体外系的发现，以及肌阵挛或抽搐。
[0125]术语“记忆损伤”还指DS的基本特征，通常是其最早的表现。即使不是主要的疾病，但在报告时，大部分DS患者都可发生记忆缺陷。DS中的记忆损伤模式差异很大。在DS中，依赖于内侧颞结构，如内嗅皮质和海马的关于事实和事件的陈述性记忆受深刻的影响，而支持程序性记忆的皮层下系统则相对保留，直到病程的相当晚期。
[0126]在青年DS患者中，情节记忆受到比事实记忆(词汇和概念(语义记忆))更深刻的损伤，事实记忆通常在晚些时候受到损伤。在情节记忆中，在即时回忆(例如，电话号码的内心演练)、近期事件的记忆(一旦必须回忆已经背离意识的物质时起作用)和更久远事件的记忆之间存在差异。由内侧颞叶的海马、内嗅皮质保留的近期事件的记忆主要在青年DS患者中受损。相反，早期保留的即时记忆(由前额皮质记录)与长时间(数年)固化的记忆一样，可以在缺少海马功能的条件下回忆。
[0127]程序性记忆的损伤仅出现在中年DS患者中。语言、执行功能和其他认知领域的功能障碍在病程中以不同速率出现。DS临床表现的异质性可能反映了脑病理学负荷的变化的地理分布。语言功能障碍，即，失语症，是DS的常见症状，首次表现的语言功能障碍通常包括选词困难、说话累赘和自发演讲中的词汇减少，伴随在对抗性命名测试中的命名不能症。可以发展为包括误用错字、演讲内容贫乏和理解障碍。然而，患者通常可以逐字重复短语，直到疾病的相当晚期。DS中的语言困难通常描述为Wernicke型和Broca型的失语症。当要求在一分钟时间内产生字词列表时，DS患者在分类流畅性测试(例如，列举动物)中的表现显著差于字母流畅性测试(例如，列举以F开头的词)。这反映了语义记忆中的特定缺陷。
[0128]丧失视空间技能是DS的另一个早期特征，有时在出现时可以是非常明显的。视空间损伤表现为错误的放置物品和难以探索一开始陌生然后熟悉的地区。视觉失认症(不能识别目标)和人面失认症(不能识别人脸)是后期特征[0129]DS患者中还可见执行功能的损伤。这些症状包括洞察力低下和降低的抽象推理能力。随着疾病发展，通常出现人格改变(如冷漠、社会隔离和去抑制)、判断力低下和计划，和不能完成任务。叠加型抑郁症也可以以该方式出现，其在痴呆的背景中是难以诊断的。
[0130]对缺陷的洞察力降低(病感失认症)是DS的另一个独特特征。对患者而言，拒绝承认或低估自身缺陷，并在被指出时对其进行解释并不罕见。访问旁系家史(如配偶)对获得准确的病史而言是关键性的。事实上，通常是家庭成员使认知损伤的疾病获得医生关注。洞察力的丧失随时间和整体疾病严重程度而增加，可以与行为紊乱相关；具有相对保留的洞察力的患者更易于抑郁，而洞察力损伤较多的患者更易于焦虑、去抑制和表现出精神病特征。行为紊乱的出现，包括焦虑、进攻性、走神和精神病(幻觉、妄想、错误辨识综合症)可以导致患者与家庭成员的明显痛苦，通常可见于DS的晚期。
[0131]青年DS患者一般具有正常的神经学检查，但认知检查除外。虽然DS患者中确实出现锥体和锥体外系运动症状、肌阵挛和抽搐，但这些通常是晚期现象。类似的，额叶释放信号(紧握、撅嘴反射、抗拒反射)和失禁是DS的晚期特征，而非早期特征。
[0132]在一个实施方案中，本发明的免疫原性组合物可以是治疗性疫苗，包含治疗或预防有效量的本发明和上文所述的的抗原性构建体，并且在例如下文所述的利用本发明组合物的试剂盒的背景下，可以制备成液态溶液或可注射的悬浮液，或者是适合在注射前溶解的固体形态。
[0133]“治疗或预防有效量”指抗体、肽、化合物或药物组合物的量，当向人或动物施用所述量时，在所述人或动物中导致治疗的或预防的效果。本领域技术人员按照常规方法，可以方便的确定有效量。
[0134]可以向人或动物 ，特别是向罹患AD样认知损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤或异常的患有唐氏综合症的人或动物施用本发明的免疫原性组合物，以在所述人或动物诱导免疫应答从而减轻与疾病相关的所述AD样症状，或恢复在不受疾病影响的健康个体中可见的状况。
[0135]由于实际上所有的唐氏综合症人群最终都在生活史的某些时间点罹患AD样认知损伤，因此，在表现出AD样损伤之前向唐氏综合症人群施用所述疫苗也是有益的。此时，所述疫苗将作为预防性治疗发挥作用。
[0136]可以通过任何恰当的标准施用途径，向人或动物施用本发明的免疫原性组合物。一般而言，可以通过局部、口腔、直肠、鼻或肠道外(例如，静脉内、皮下或肌肉内)途径施用组合物。此外，可以将组合物掺入到缓释基质(如可生物降解的聚合物)中，所述聚合物被植入到需要递送的位置附近，例如肿瘤位点。方法包括施用单次剂量，以预定的时间间隔施用重复剂量，和持续施用预定的时间段。
[0137]在本发明的特定实施方案中，以重复的剂量，特别是以I至15次剂量，更特别的是2至10次剂量，更特别的是3至7次剂量，甚至更特别的是4至6次剂量，以I至10周的时间间隔，特别是I至6周的时间间隔，更特别的是I至4周的时间间隔，甚至更特别的是2至3周的时间间隔，施用本发明的抗原性构建体，特别是包含治疗有效量的所述抗原性构建体的免疫原性组合物。通过在强化后合适的时间，特别是强化后3至10天，更特别是是强化后4至8天，更特别是是强化后5至6天采集血清样品监控免疫应答，并使用已知的方法，特别是常用的免疫测定之一，例如ELISA测定法确定抗原性构建体的免疫原性。[0138]特别的是，通过肠道外，特别是通过腹膜内、静脉内、皮下和肌肉内注射施用本发明的抗原肽组合物。
[0139]组合物的剂量取决于治疗的病况，使用的特定的组合物，和其他临床因素，如患者的体重、大小和条件、体表面积、待施用的特定化合物或组合物、同时施用的其他药物，和施用途径。
[0140]本发明的免疫原性组合物可以和用于治疗与唐氏综合症相关联的症状的其他生物活性物质和程序组合施用。其他生物活性物质可以以混合物的形式，作为已包含本发明的免疫原性组合物的同一组合物的一部分，其中免疫原性组合物和其他生物活性物质在相同的可药用的溶剂和/或载体中相互混合或与相同的可药用的溶剂和/或载体相互混合，或者可以作为单独组合物的部分单独提供，所述单独组合物可以单独提供或以试剂盒的部分的形式一起提供。
[0141]本发明的免疫原性组合物可以间歇地或顺序地和一种或多种其他生物活性物质同时施用。例如，本发明的免疫原性组合物可以与第一额外的生物活性物质同时施用，或在施用所述组合物之后或之前顺序施用。如果选择其中共同施用多于一种其他的生物活性物质与至少一种本发明的免疫原性组合物的应用方案，则化合物或物质可以部分同时施用，部分以多种组合顺序施用。
[0142]因此，本发明的另一个目标是提供治疗或预防有效量的本发明的免疫原性组合物，和任选地一种或多种其他的生物活性物质的混合物，以及提供使用本发明的这类组合物或其混合物的方法，用于预防和/或治疗性治疗和/或减轻淀粉样蛋白相关病理学在患有唐氏综合症的儿童或青年至中年对象中的效应，特别是用于改善或恢复记忆损伤或异常，特别是源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质的损伤和异常，特别是用于改善或恢复识别记忆损伤和/或 情景联想记忆损伤和/或联想学习损伤和/或关于事实和事件的陈述性记忆损伤和/或情节记忆损伤和/或语言功能障碍，如失语症和/或视空间损伤，如物品乱放和对陌生和熟悉地区的探索困难和/或执行功能减少，如冷漠、去抑制、社会隔离、判断力低下、计划困难和/或抽象推理低下和/或人格改变和/或情绪改变，如冷漠、兴奋和精神病和/或失用症和/或实施学习运动任务损伤和/或其他的神经学症状，包括锥体和锥体外系的发现，以及肌阵挛或抽搐。
[0143]除本发明的免疫原性组合物以外,本发明的混合物可包含生物活性物质,例如用于对患有唐氏综合症的儿童或青年至中年对象中的AD样症状的用药中的已知化合物。
[0144]其他的生物活性物质或化合物可以通过与本发明的免疫原性组合物相同或相似的机制，或通过不相关的作用机制，或通过多种相关的和/或不相关的作用机制产生其生物学效应。
[0145]一般而言，其他的生物活性化合物可包括针对和结合本文公开的抗原肽的抗体，或用于神经病症的用药中的化合物，例如神经传递增强剂、精神治疗药物、乙酰胆碱酯酶抑制齐LU钙通道阻断剂、生物胺、苯二氮卓(benzodiazepine)镇静剂、乙酰胆碱合成、储藏或释放的增强剂、乙酰胆碱突触后受体激动剂、单胺氧化酶-A或-B抑制剂、N-甲基-D-天冬氨酸谷氨酸受体拮抗剂、非留体类抗炎药物、抗氧化剂和血清素能受体拮抗剂。
[0146]特别的是，本发明的混合物可包含至少一种其他的生物活性化合物与本发明的治疗性疫苗，和任选的，可药用的载体和/或稀释剂和/或赋形剂，所述生物活性化合物选自抗氧胁迫的化合物、抗凋亡化合物、金属螯合剂、DNA修复的抑制剂如哌仑西平(pirenzepin)和代谢物、3-氨基-1-丙烷磺酸(3APS)、1，3-丙烷二磺酸酯(1，3PDS)、分泌酶激活剂、β-和Y -分泌酶抑制剂、和Y-分泌酶调节剂、τ蛋白、神经递质、β-片层中断剂、抗炎分子或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)如他克林(tacrine)、利伐斯的明、多奈哌齐和/或加兰他敏(galatamine),和其他药物和营养补充剂。
[0147]本发明的混合物还可包括烟酸或美金刚胺与本发明的免疫原性组合物，和任选的，可药用的载体和/或稀释剂和/或赋形剂。
[0148]在本发明的一个实施方案中，提供的混合物包含用于治疗包括幻觉、妄想、思维障碍(表现为明显的无条理性、出轨、讲话不切题)、怪诞或无序的行为，以及快感缺乏、情感低沉、冷漠和社会退缩的阳性和阴性精神病症状的“非典型的抗精神病药物”(例如氯氮平(clozapine)、齐拉西酮(ziprasidone)、利培酮(risperidone)、阿立哌唑(aripiprazole)或奥氮平(olanzapine))与本发明的免疫原性组合物和/或治疗性疫苗，和任选的，可药用的载体和/或稀释剂和/或赋形剂
[0149]适合与本发明的免疫原性组合物组合用于混合物中的其他化合物描述在例如W02004/058258 (尤其参见第16和17页)，包括治疗药物靶(第36-39页)、烷基磺酸和烷醇磺酸(第39-51页)、胆碱酯酶抑制剂(第51-56页)、NMDA受体拮抗剂(第56-58页)、雌激素(第58-59页)、非留体抗炎药物(第60-61页)、抗氧化剂(第61-62页)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)激动剂(第63-67页)、降胆固醇剂(第68-75页)；淀粉样蛋白抑制剂(第75-77页)、淀粉样蛋白形成抑制剂(第77-78页)、金属螯合剂(第78-79页)、抗精神病药物和抗抑郁药(第80-82页)、营养补充剂(第83-89页)和增加生物活性物质在脑内的利用度的化合物(参见第89-93页)和前体药(第93和94页)，所述文件通过引用整合到本文 中，尤其是上述页数中提及的化合物。
[0150]在本发明的一个实施方案中，提供了抗原性构建体，其包含不含T细胞表位的A β肽，因此没有潜在的副作用，如由过度活化的补体系统导致的神经病并发症。在本发明的范围内，这可以通过施用Αβ肽抗原，特别是棕榈酰化的Aβ肽抗原，更特别的是棕榈酰化的A β ^15肽抗原，尤其是棕榈酰化的A β ^15肽抗原，A β卜15与补体抑制剂的组合来实现。
[0151]补体抑制剂可以是选自可溶性人补体受体1、抗人补体蛋白质C5例如人源化抗C5单克隆抗体或人源化单克隆抗体的单链片段、Cl-酯酶抑制剂-N和天然的人Cl抑制剂的化合物。
[0152]可以按照Nicolau等人，2002中报道的方法，合成修饰的淀粉样蛋白肽抗原(例如淀粉样蛋白β 1-15肽抗原)。在Nicolau等人中报道的方法可如下修饰，首先合成抗原肽，然后进一步通过向预形成肽的末端氨基酸残基上树脂上(on-resin)移植亲脂性或疏水性部分修饰所述抗原肽。特别的是，使用已知的偶联化学，将受保护的氨基酸，特别是受Fmoc-保护的氨基酸连接至树脂上。去除保护基，偶联第二受保护的氨基酸残基。然后，使用标准的自动化肽合成(利用了已知的保护化学，特别是Fmoc/tBu化学)和标准的侧链保护基来合成A β抗原肽，特别是A β ^15抗原肽，通过在淀粉样蛋白A β ^42的第I至15个氨基酸上偶联，来生产具有给定序列的肽片段。在最后的步骤中，在生长的肽片段上偶联另外2个受保护的氨基酸。然后，选择性切割前两个和最后两个氨基酸的侧链上的Mtt基团，并与棕榈酸偶联。在洗涤树脂后，去除保护基，同时切割树脂，再使用标准的方法进行侧链去保护。然后，可以获得高纯度的终产物，其身份由本领域已知的方法验证，例如电喷雾质谱。
[0153]可以在由脂质体，特别是用二肉豆蘧酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二肉豆蘧酰磷脂酰乙醇胺(DMPEA)、二肉豆蘧酰磷脂酰甘油(DMPG)和胆固醇制备的，任选含有单磷酰脂质A的脂质体组成的构建体中重建修饰的淀粉样蛋白Αβ抗原肽，特别是修饰的Αβ卜15抗原肽。
[0154]在一个实施方案中，本发明考虑使用阴离子型脂质作为脂质体膜中的阳离子型脂质的替代物，所述阴离子型脂质选自:
[0155]a.具有头部基团磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、L-α-磷脂酰肌醇-4-磷酸或磷脂酸的二酰基-磷脂类；
[0156]b.具有头部基团磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸或磷脂酸的溶血磷脂类，和
[0157]c.心磷脂、二溶血-心磷脂、单溶血-心磷脂。 [0158]在一个方面，本发明考虑使用阳离子型脂质作为脂质体膜中的阴离子型脂质的替代物，所述阳离子型脂质选自:
[0159]a.具有头部基团3_ 二甲基铵-丙烷、3_ 二甲基铵-丙烷、3_乙基憐酸胆喊或3_憐脂酰乙醇胺的二酰基-磷脂类；
[0160]b.D-赤鞘氨醇、二甲基双十八烷基溴化铵、N-[l_(2，3-二肉豆蘧氧代)丙基]-N，N-二甲基-N-(2-羟乙基)溴化铵、N，N，N-三甲基-2-双[(1_氧代_9_十八烯基)氧]_(Z，Z)-1-丙铵硫酸甲酯或3 β-[N-(N’，N’-二甲基氨基乙烷)-氨基甲酰]胆固醇盐酸。
[0161]在本发明的一个实施方案中，与上述头部基团连接的脂链可以
[0162]a.是饱和的或不饱和的，
[0163]b.长度不同的(CH2)n，其中η在3至24之间，且
[0164]是对称或不对称取代的。
[0165]在本发明的特定实施方案中，使用含脂质A的脂质体作为佐剂制备抗淀粉样蛋白疫苗。混合二肉豆蘧酰磷脂酰-胆碱、-甘油和胆固醇，特别是以0.9:1.0:0.7的摩尔比混合。然后，添加合适浓度的强免疫调节剂(例如单磷脂酰脂质Α)，特别是在30至50mg/mmol之间，更特别的是在40mg/mmol的磷脂浓度。然后，添加修饰的抗原性Aβ肽，肽与磷脂类的摩尔比在1:30 M 1:200，特别是在1:50 M 1:120之间的摩尔比，更特别的是1:100的摩尔比。去除溶剂，通过例如蒸发，然后用无菌缓冲溶液(例如PBS)将获得的薄膜水合。
[0166]还可以通过交叉流动注射技术，制备脂质体，如在例如(Wagner等人，2002)中所描述的。在将脂质溶液注射到含水缓冲体系中的过程中，脂质倾向于形成“沉淀”，然后自我排列成囊泡。获得的囊泡大小取决于这样的因素，例如脂质浓度、搅拌速率、注射速率和脂质的选择。制备系统可以由交叉流动注射模块、用于极性相(例如PBS缓冲液)的容器、乙醇/脂质溶液容器和压力装置，特别是氮气压力装置组成。含水或极性溶液通过交叉流动注射模块泵出，同时乙醇/脂质溶液被注射到极性相中，伴随应用改变的压力。多种生产脂质体抗原性构建体的方法描述在W02007/068411中。
[0167]在特定的实施方案中，制备用于本发明方法中的脂质体组合物，以包括棕榈酰化的Αβ 1-15，特别是四棕榈酰化的Aβ 1-15以及作为佐剂的单磷脂酰脂质A(MPLA)。
[0168]可以每周或每两周向待免疫的对象皮下施用4至10次，特别是5至6次剂量的脂质体组合物。可以获得血浆探针，并周期性的分析IgG滴度。[0169]可以在唐氏综合症的相关动物模型中证实本发明的脂质体组合物作为在患有唐氏综合症的J L童和青年至中年对象中的免疫原的效果，以及用于在所述对象中治疗记忆缺陷的治疗潜力。特别的是，使用普遍接受作为DS动物模型的Ts65Dn小鼠。Ts65Dn小鼠产生了鼠16号染色体三体，该染色体具有鼠APP基因(Davisson等人，1993 ；Netzer等人，2010)。这些转基因小鼠表现出增加1.5倍的鼠々0 (Hunter等人，2004)，并在若干种记忆任务中证实了行为缺陷(Belichenko等人,2009)。
[0170]本发明可以证实本发明的脂质体组合物诱导升高的抗体滴度，并且所述抗体即使在末次免疫40天后也仍然是升高的。因此，本发明和本文所述的脂质体组合物能够诱导强免疫应答，并能够打破受治疗的唐氏综合症对象中的A β自身耐受。
[0171]本发明和本文所述的脂质体组合物进一步表现出能够在患有唐氏综合症的青年至中年小鼠中诱导与无唐氏综合症的对照组对象中一样高的IgG滴度。本发明的脂质体组合物诱导与对照组相比增加的IgG2a同种型抗体滴度，而IgGl和IgG2b同种型的抗体滴度可与治疗组和对照组相比。治疗组中的IgM类抗体滴度低于对照组。该轻微较低的IgM水平可能是由患有唐氏综合症的小鼠中改变的免疫系统导致的。因此，脂质体组合物能够克服DS人群中描述的对于Αβ的受损的适应性免疫应答(Monsonego等人，2001)。
[0172]本发明和本文所述的脂质体组合物也是安全的，并且不诱导不想要的副作用。特别的是，用脂质体组合物治疗不导致脑的细胞激活，如星状胶质细胞或小胶质细胞的激活。
[0173]本发明和本文所述的脂质体组合物表现出在动物模型中导致较高的判别比，提示治疗在受治动物中导致显著的记忆改善。
[0174]在由训练、线索和情景环节组成的测试中，本发明和本文所述的脂质体组合物还表现出在达到了对照动物中观察到的水平的动物模型中导致增强的木僵(freezing)。这提示免疫是有效的，并增强模型动物的记忆力。
[0175]因此，本发明和本文所述的脂质体组合物能够挽救患有唐氏综合症的儿童和青年至中年对象，特别是在脑内尚未出现Αβ相关的斑块的患有唐氏综合症的儿童和青年至中年对象的记忆缺陷。患有唐氏综合症的患者表现出认知异常，如记忆损伤和异常行为。
[0176]本发明和本文所述的脂质体组合物还能够挽救患有唐氏综合症的儿童和青年至中年对象，特别是在脑内已经出现Αβ相关的斑块的患有唐氏综合症的儿童和青年至中年对象的记忆缺陷。
[0177]在一个实施方案中，用脂质体组合物治疗可以改善或恢复患有唐氏综合症的儿童或青年至中年的记忆缺陷，特别是识别记忆损伤和/或情景联想记忆损伤和/或联想学习损伤和/或关于事实和事件的陈述性记忆损伤和/或情节记忆损伤和/或语言功能障碍，如失语症和/或视空间损伤，如物品乱放和对陌生和熟悉地区的探索困难和/或执行功能减少，如冷漠、去抑制、社会隔离、判断力低下、计划困难和/或抽象推理低下和/或人格改变和/或情绪改变，如冷漠、兴奋和精神病和/或失用症和/或实施学习运动任务损伤和/或其他的神经学症状，包括锥体和锥体外系的发现，以及肌阵挛或抽搐。
附图简介
[0178] 图1显示了 AC1-DS-Ol疫苗的示意图,这是基于脂质体的疫苗,具有四棕榈酰化的小鼠Αβ 1-15抗原和作为佐剂的MPLA。人和小鼠A β 1_15之间的3个氨基酸差异是下划线的。
[0179]图2显示了在用疫苗AC1-DS-Ol免疫的Ts65Dn小鼠中的抗小鼠A β抗体水平。A和B)在用AC1-DS-Ol免疫的小鼠血浆中检测到了抗小鼠-Αβ 40或42IgG滴度。在二次免疫后观察到了诱导的滴度，且即使在第6次注射40天后仍然比用空脂质体免疫的小鼠高。在2N和Ts65Dn小鼠的测量的滴度之间没有差异。C至F)在第4次免疫后检测到了 IgG同种型。G)Ts65Dn小鼠中的IgM滴度几乎不较低。H)在用AC1-DS-Ol免疫的所有小鼠中都检测到了相同的抗MPLA IgG滴度水平。图代表了平均值土SD (n = 202N-AC1-DS-01 ；n =15Ts65Dn-AC1-DS-01 ；n = 182N-空白和 n = llTs6?n-空白。图代表了平均值土SD)。
[0180]图3显示了免疫对记忆表现的效果。2N和Ts65Dn小鼠之间的自发活动差异在免疫后仍然是相似的。B)在新目标识别中，用AC1-DS-Ol免疫的小鼠表现出比用空白疫苗治疗的组显著增强的识别指数(RI)。C)在条件恐惧中，免疫的小鼠在情景环节过程中表现出较高木僵水平的临界显著性。图代表了平均值土SD(n = 202N-AC1-DS-01 ；n = 13Ts65DnAC1-DS-Ol ；n = 182N-空白和 η = llTs65Dn_ 空白)。
[0181]图4显示了用AC1-DS-Ol疫苗治疗的小鼠中的Αβ 40水平。Α)在皮质中，Ts6?n中的A β 40水平几乎不高于2Ν小鼠。疫苗AC1-DS-Ol表现出减少皮质和海马中的A β 42和Αβ 40水平的倾向。在用AC1-DS-Ol治疗后，小脑中的Αβ 42和Αβ 40水平表现出统计学显著的减少。图代表了平均值土SD(n = 102N-AC1-DS-01 ；n = 10Ts65Dn AC1-DS-Ol ；n=82N-空白和η = 5Ts6?n-空白)。B和C)皮质或小脑中的Aβ -40/42比例与RI之间的相关性。D)抗A β IgG滴度的水平与用AC1-DS-Ol治疗的Ts65Dn小鼠血浆中的A β 40水平弱相关。Ε)抗Αβ IgG水平和RI之间的显著相关性(η = 192Ν AC1-DS-Ol ；n = 13Ts65DnAC1-DS-Ol ；n = 182N-空白和 η = llTs65Dn_ 空白)。
[0182]图5显示了炎性反应的研究。A)体重和脑重。B)受治疗的2N和Ts65Dn小鼠中的GFAP免疫反应性(左)和CD45 (右)的共聚焦图像。箭头指向单个的CD45-阳性小胶质细胞。对GFAP免疫反应性的光密度进行定量,在组之间没有揭示出任何差异。每组为η=4。
[0183]图6显示了用以AC1-DS-02免疫的小鼠的血清免疫染色的人DS脑样品的切片。阳性面积提示源自AC1-DS-02的抗体与DS人群的脑内的淀粉样蛋白斑块结合。染色与用6Ε10和用源自AC1-24的抗体获得的染色类似，所述6Ε10是可商购的抗淀粉样蛋白β抗体。AC1-24疫苗对应于AC1-DS-Ol疫苗，差异在于AC1-24中使用的抗原是人A β 1_15序列，而AC1-DS-Ol疫苗含有小鼠Αβ 1-15序列作为抗原(这两个抗原中的3个氨基酸差异参见图1)。当用以PBS免疫的小鼠的血清孵育切片时，没有观察到任何染色。
[0184]图7显示了在条件恐惧测试中，用AC1-DS-02疫苗免疫的TS65Dn小鼠的学习。在获得环节过程中，用AC1-DS-02免疫的TS65Dn小鼠显示了比用PBS免疫的TS65Dn小鼠更大的木僵，特别是在第三次条件刺激(CS)后。图代表了平均值土SD(n = 7Ts65Dn-AC1-DS-02 ；η = 72N-PBS 和 η = 4Ts65Dn_PBS。图代表了平均值土 SD)。
[0185]图8显示了用以AC1-DS-03免疫的小鼠的血清免疫染色的人DS脑样品的切片。阳性面积提示源自AC1-DS-03的抗体与DS人群的脑内的淀粉样蛋白斑块结合。染色与用6E10和用源自AC1-24的抗体获得的染色类似，所述6E10是可商购的抗淀粉样蛋白β抗体。AC1-24疫苗对应于AC1-DS-Ol疫苗，差异在于AC1-24中使用的抗原是人A β 1-15序列，而AC1-DS-Ol疫苗含有小鼠Aβ 1-15序列作为抗原(这两个抗原中的3个氨基酸差异参见图1)。当用以PBS免疫的小鼠的血清孵育切片时，没有观察到任何染色。
[0186]图9显示了用AC1-DS-Ol疫苗免疫的Ts65Dn小鼠的形态学分析。Α)内侧隔核中的ChAT+细胞的数量，B)所有组中的光密度是相似的。C)在用AC1-DS-Ol免疫的Ts65Dn小鼠中，ChAT+细胞体面积比用空白疫苗治疗的Ts65Dn增加(η = 42Ν-空白；n = 4Ts65Dn-空白；n = 42N-AC1-DS-01 和 η = 4Ts65Dn-AC1-DS_01。图代表了平均值土SD)。
实施例
[0187]实施例1 一般方法
[0188]1.1 动物
[0189]使用被称为DS小鼠模型的Ts65Dn小鼠(Davisson等人，1993) (N = 30)和年龄匹配的对照2N(n = 40)。在开始日时，使用的小鼠是5个月龄。在研究结束时(免疫和行为测试)，小鼠是9个月龄。因此，所有在处死时收集的样品都来自9个月龄的小鼠。
[0190]Ts65Dn新生小鼠具有升高的死亡率(约6 %)，主要是由于先天性心脏畸形(Randall200 6，Moore2006)。然而，小鼠甚至可以存活至多18至24个月。在研究中，观察到15%的死亡率。存活的小鼠的大小比正常的同窝幼崽小~20%。在出生时死亡的受影响最重的小鼠，没有活到用于分析，导致低估了三体基因对一些表型的影响(即，心脏缺陷)。然而，就我们的关注而言，存活的小鼠代表了用于分析淀粉样蛋白和AD样病理学的适合的DS模型。
[0191 ] 在用于上述研究的DS小鼠模型中，小鼠在4月龄时表现出增加的淀粉样蛋白水平(Hunter2004)。在9月龄时，淀粉样蛋白β的水平达到根据3拷贝APP基因预测的正常水平的3倍。与DS人群类似，衰老是Ts65Dn脑内沉积淀粉样蛋白的重要因素。尽管淀粉样蛋白与年龄相关的累积，Ts65Dn小鼠不出现斑块。然而，它们确实忠实地重复了在AD和患有唐氏综合症人群中可见的神经元群体的退化(Salehi等人，2009)。
[0192]综上所述，所使用的小鼠模型中的DS特征包含存在病理学蛋白质和表型方面；即，淀粉样蛋白负载和认知损伤。因此，Ts65Dn小鼠可以准确地概括DS的病理发生过程。由于这些小鼠在6月龄时开始以与人可比较的水平积累淀粉样蛋白，将模型小鼠的年龄与年龄从青年至中年的人DS患者相比较。
[0193]用于使用AC1-DS-Ol疫苗的免疫研究的小鼠是通过交配B6EiC3Sn_Ts (1716) 6?η雌性(Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME)和 B6EiC3Sn Fl/J A/a 雄性(JacksonLaboratory)维持了大于10代的Ts65Dn鼠克隆。由于在同系繁殖时三染色体小鼠的育性极低或完全无育性，因此使用该繁殖方案；B6C3背景是最成功的。为了区分2N和Ts65Dn小鼠，从尾部样品中提取基因组DNA。使用定量聚合酶链式反应(PCR)规程(由JacksonLaboratory提供)测量Mxl基因表达，该基因Τ86?ηη中存在3份拷贝。在所有研究中都使用雄性小鼠。在研究开始时它们是4+/-0.3个月大。
[0194]1.2疫苗制备-制备基于脂质体的抗原性构建体
[0195]
【权利要求】
1.源自淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质的抗原肽片段，所述抗原肽片段用于治疗和/或减轻和/或预防患有唐氏综合症的对象中的记忆和/或认知损伤或异常。
2.权利要求1的抗原肽片段，所述抗原肽片段用于预防患有唐氏综合症的对象中的记忆和/或认知损伤或异常。
3.权利要求1和2的抗原肽片段，其中所述记忆和/或认知损伤源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质。
4.权利要求1至3的抗原肽片段，其中所述记忆和/或认知损伤是识别记忆损伤和/或情景联想记忆损伤和/或联想学习损伤和/或关于事实和事件的陈述性记忆损伤和/或情节记忆损伤和/或语言功能障碍，如失语症和/或视空间损伤，如物品乱放和对陌生和熟悉地区的探索困难和/或执行功能减少，如冷漠、去抑制、社会隔离、判断力低下、计划困难和/或抽象推理低下和/或人格改变和/或情绪改变，如冷漠、兴奋和精神病和/或失用症和/或实施学习运动任务损伤和/或其他的神经学症状，包括锥体和锥体外系的发现，以及肌阵挛或抽搐。
5.权利要求1至4的抗原肽片段，其中所述淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质是源自淀粉样蛋白_β蛋白质的抗原肽片段。
6.上述权利要求中任一项的抗原肽片段，其中所述患有唐氏综合症的对象尚未在脑中出现淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质相关的斑块。
7.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述对象在脑中已出现了Αβ相关的斑块。
8.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述斑块是Aβ相关的斑块。
9.上述权利要求中任一项的抗原肽片段，其中患有唐氏综合症的对象中的所述记忆和/或认知损伤或异常是AD样记忆和/或认知损伤或异常。
10.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述患有唐氏综合症的对象是青年至中年对象。
11.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述患有唐氏综合症的对象是中年对象。
12.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述患有唐氏综合症的对象是青年对象。
13.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述患有唐氏综合症的对象是儿童对象。
14.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述对象小于65岁，特别是小于60岁，特别是小于55岁，特别是小于50岁，特别是小于45岁，特别是小于40岁，特别是小于35岁，特别是小于30岁，特别是小于25岁，特别是小于20岁，特别是小于15岁，特别是小于10岁，特别是小于5岁，特别是小于3岁。
15.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述治疗导致 a.记忆的改善和/或恢复；和/或 b.受治疗的对象中的记忆力增加或完全恢复认知能力。
16.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述治疗不诱导不想要的副作用，如脑膜脑炎和少量出血。
17.上述权利要求中任一项的抗原肽，所述抗原肽用于预防脑中出现Αβ相关的斑块。
18.上述权利要求中任一项的抗原肽，所述抗原肽用于降低脑中的Αβ相关的斑块的量。
19.权利要求16或17的抗原肽，所述抗原肽用于降低海马和/或前额皮质和/或嗅内皮质中的Αβ相关的斑块的量。
20.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质选自由朊蛋白、τ蛋白、α-突触核蛋白、亨廷顿蛋白和淀粉样蛋白β组成的组。
21.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述Aβ抗原肽片段对应于A β肽的N-末端部分，特别是N-末端A β 1-15片段。
22.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述Αβ抗原肽片段对应于Αβ肽的中心部分，特别是A β 14-29片段。
23.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述Aβ抗原肽片段对应于A β肽的C-末端部分，特别是C-末端A β 22-35片段。
24.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中在脂质体中重建呈现Aβ肽抗原。
25.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中Aβ肽抗原被亲脂或疏水部分修饰，所述亲脂或疏水部分促进插入到脂质体载体/佐剂的脂质双层中。
26.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中Aβ肽抗原被与肽分子的N和/或C末端结合的棕榈酸修饰。
27.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中Aβ肽抗原被与肽分子的N和/或C末端结合的四个棕榈酸修饰 。
28.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中Aβ肽抗原被与肽分子的N和/或C末端结合的二个棕榈酸修饰。
29.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中抗原肽以重复阵列呈现在脂质体的表面上。
30.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中载体或脂质体表面上的所述高重复阵列包含至少10个重复的抗原单位/载体分子。
31.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中至少75%，特别是至少80%，特别是至少90 %，但尤其是100 %的重建的抗原肽呈现在脂质体的表面上，通过其疏水部分插入到脂质双层中。
32.组合物，包含治疗有效量的上述权利要求中任一项的抗原肽和可药用的载体和/或赋形剂，所述组合物用于治疗和/或减轻和/或预防患有唐氏综合症的对象中的记忆和/或认知损伤或异常。
33.上述权利要求中任一项的组合物，其包含佐剂。
34.上述权利要求中任一项的抗原肽，所述抗原肽用于增强或恢复患有唐氏综合症的对象中的所述损伤或异常。
35.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述抗原肽源自Αβ肽的N末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基 Aβ 1-15、Αβ 1-16、Aβ 1-17, Αβ 1-18、Aβ 1-19, Αβ 1-20,Αβ 1-22或Αβ 1-23的全部或部分组成。
36.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述抗原肽源自Αβ肽的N末端部分，特别是所述抗原肽由全部或部分氨基酸残基组成。
37.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述抗原肽由残基Aβ 1-15组成。
38.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述抗原肽源自Αβ肽的C末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基A β 20-36、A β 20-40、A β 20-42、A β 21-36、A β 21-40、A β 21-42、A β 22-36、A β 22-40 或 A β 22-42 的全部或部分组成。
39.上述权利要求中任一项的抗原肽，其中所述抗原肽由残基Aβ 22-35组成。
40.治疗和/或减轻和/或预防患有唐氏综合症的对象中的记忆和/或认知损伤或异常的方法，所述方法包括向所述对象施用根据上述权利要求中任一项的抗原肽或组合物。
41.权利要求40的方法，其中所述损伤或异常源自脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质。
42.权利要求40和41的方法，其中所述损伤或异常涉及识别记忆和/或情景联想记忆损伤和/或联想学习损伤和/或关于事实和事件的陈述性记忆损伤和/或情节记忆损伤和/或语言功能障碍，如失语症和/或视空间损伤，如物品乱放和对陌生和熟悉地区的探索困难和/或执行功能减少，如冷漠、去抑制、社会隔离、判断力低下、计划困难和/或抽象推理低下和/或人格改变和/或情绪改变，如冷漠、兴奋和精神病和/或失用症和/或实施学习运动任务损伤和/或其他的神经学症状，包括锥体和锥体外系的发现，以及肌阵挛或抽搐。
43.上述权利要求中任一项的方法，其中用于在患有唐氏综合症的对象中增强或恢复识别记忆的方法中的所述抗原肽源自Αβ肽的N末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基 Αβ 1-15、Aβ 1-16、Aβ 1-17、Aβ 1-18、Aβ 1-19、Aβ 1-20, Aβ 1-22 或 Αβ 1-23 的全部或部分组成。
44.上述权利要求中任一项的方法，其中用于在患有唐氏综合症的对象中增强或恢复识别记忆的方法中的所述抗原肽源自Αβ肽的N末端部分，特别是所述抗原肽由全部或部分氨基酸残基组成。
45.上述权利要求中任一项的方法，其中所述抗原肽由氨基酸残基Aβ 1-15组成。
46.上述权利要求中任一项的方法，其中用于在患有唐氏综合症的对象中增强或恢复情景联想记忆的方法中的所述抗原肽源自Αβ肽的N末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基 Αβ 1-15,Αβ 1-16,Αβ 1-17,Αβ 1-18,Αβ 1-19,Αβ 1-20, A β 1-22 或 Αβ 1-23 的全部或部分组成。
47.上述权利要求中任一项的方法，其中用于在患有唐氏综合症的对象中增强或恢复联想学习的方法中的所述抗原肽源自Αβ肽的N末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基 Αβ 1-15、Aβ 1-16、Aβ 1-17、Aβ 1-18、Aβ 1-19、Aβ 1-20, Aβ 1-22 或 Αβ 1-23 的全部或部分组成。
48.上述权利要求中任一项的方法，其中用于在患有唐氏综合症的对象中增强或恢复联想学习的方法中的所述抗原肽源自Αβ肽的C末端部分，特别是所述抗原肽由氨基酸残基 Αβ 20-36、Αβ 20-40、Αβ 20-42、Αβ 21-36、Αβ 21-40、Αβ 21-42、Αβ 22-36、Αβ 22-40 或A β 22-42的全部或部分组成。
49.上述权利要求中任一项的方法，其中所述抗原肽由氨基酸残基Aβ 22-35组成。
50.根据上述权利要求中任一项的方法，所述方法用于在患有唐氏综合症的对象中增加记忆力或完全恢复认知能力，所述方法包括向所述对象施用根据上述权利要求中任一项的抗原肽或组合物。
51.根据上述权利要求中任一项的方法，其中所述对象在脑内尚未出现Αβ相关的斑块。
52.根据上述权利要求中任一项的方法，其中所述对象的脑内已出现Αβ相关的斑块。
53.根据上述权利要求中任一项的方法，其中所述患有唐氏综合症的对象是青年至中年对象。
54.根据上述权利要求中任一项的方法，其中所述患有唐氏综合症的对象是中年对象。
55.根据上述权利要求中任一项的方法，其中所述患有唐氏综合症的对象是青年对象。
56.根据上述权利要求中任一项的方法，其中所述患有唐氏综合症的对象是儿童对象。
57.根据上述权利要求中任一项的方法，其中所述对象小于65岁，特别是小于60岁，特别是小于55岁，特别是小于50岁，特别是小于45岁，特别是小于40岁，特别是小于35岁，特别是小于30岁，特别是小于25岁，特别是小于20岁，特别是小于15岁，特别是小于10岁，特别是小于5岁，特别是小于3岁。
58.用于在患有唐氏综合症的对象中预防记忆和/或认知损伤或异常的方法，所述方法包括向所述对象施用根据上述权利要求中任一项的抗原肽或组合物。
59.用于在患有唐氏综合症的对象中预防记忆损伤或异常的方法，所述方法包括向所述对象施用根据上述权利要求中任一项的抗原肽或组合物。
60.降低患有唐氏综合症的对象的脑内斑块的方法，所述方法包括向所述对象施用根据上述权利要求中任一项的抗原肽或组合物。
61.权利要求60的方法，其中根据上述权利要求中任一项的抗原肽或组合物降低了脑的海马和/或前额皮质和/或内嗅皮质中的斑块。
62.权利要求60和61的方法，其中所述斑块降低导致了减轻和/或预防与识别记忆相关的损伤或异常和/或情景联想记忆损伤和/或联想学习损伤和/或关于事实和事件的陈述性记忆损伤和/或情节记忆损伤和/或语言功能障碍，如失语症和/或视空间损伤，如物品乱放和对陌生和熟悉地区的探索困难和/或执行功能减少，如冷漠、去抑制、社会隔离、判断力低下、计划困难和/或抽象推理低下和/或人格改变和/或情绪改变，如冷漠、兴奋和精神病和/或失用症和/或实施学习运动任务损伤和/或其他的神经学症状，包括锥体和锥体外系的发现，以及肌阵挛或抽搐。
63.上述权利要求中任一项的抗原肽、组合物和/或方法，其中所述抗原肽、组合物和/或方法用于预防神经退化。
64.用于在患有唐氏综合症的对象中诱导针对淀粉样蛋白或淀粉样蛋白样蛋白质的免疫应答的方法。
65.用于生产疫苗的方法，所述方法包括配制上述权利要求中任一项的抗原肽或组合物与可药用的载体或赋形剂和/或佐剂。
66.抗体或抗体混合物，所述抗体或抗体混合物可从用通过权利要求65的方法获得的疫苗免疫的动物中获 得。
67.抗体或抗体混合物，所述抗体或抗体混合物可从用根据上述权利要求中任一项的抗原肽免疫的动物中获得。
68.通过用上述权利要求中任一项的抗原肽免疫对象而生产的抗体。
69.通过用上述权利要求中任一项的组合物免疫对象而生产的抗体。
【文档编号】A61K39/00GK104039346SQ201280057432
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2012年9月21日 优先权日:2011年9月23日
【发明者】A·普法伊费尔, A·穆斯, R·马达尼, P·V·贝里琴科, W·C·莫布里 申请人:Ac免疫有限公司