一种含聚肌胞的注射用原位凝胶及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于动物用药物制剂领域，设及一种含聚肌胞的注射用原位凝胶及其制备 方法，具体设及一种具有适宜相变溫度的含聚肌胞的注射用原位凝胶及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 集约化规模化养殖条件下，高密度饲养环境差，传染性疾病多发，抗生素等药物滥 用，加之营养难W均衡，动物应激频繁，使得畜禽基础免疫力低下，更增加了发病几率，加重 了病情。病毒性疾病因疫苗种类少、生物制品价格高，尤其不易防控，因此开发高效免疫增 强药物，特别是抗病毒有特效的药物迫在眉睫。
[0003] 聚肌胞（Polyinosinic acid-polyc}ftidylic acid,poly I :C)，为多聚肌巧酸 (Polyinosinic acid)和多聚胞巧酸(Polyc}ftidylie acid)的共聚物双链RNA。最早于 1958 年由美国科学家David R.Davies和Alexander Rich发现并合成，1967年Field等发现其具 有强大的干扰素诱导功能，1975年中国成功研制出聚肌胞，并开发相应的注射液，用于医学 临床。已证实聚肌胞作为高效的内源性干扰素诱导剂，藉强大的免疫增强功能，一直为临床 实践应用于辅助抗病毒、抗菌、抗肿瘤药物。
[0004] 研究已证实，聚肌胞诱生干扰素用量小，诱生干扰素效价高，能在人和多种动物如 鸡、猪、兔、狗等体内发挥诱生作用。且证实在一定范围内，聚肌胞诱生干扰素的能力与剂量 呈线性关系;静脉或腹腔注射给药后，血清中干扰素水平在2~化达到高峰，但消退很快，约 4~化即明显消退;人血清含核糖核酸酶，水解聚肌胞，故人体内作用较弱;雄性恒河猴注射 聚肌胞血清中干扰素效价显著高于雌性。聚肌胞也是良好的非专一性免疫激发剂，能增强 免疫细胞活性如T细胞、NK细胞、巨隧细胞等，促进多种细胞因子释放，促进体液免疫，提高 抗体滴度。聚肌胞有广谱抗病毒作用，对流感病毒和瘤疹病毒效果最佳，对肝炎、结膜炎、脑 脊髓炎、口蹄疫、新城疫、猪攝、阿留申等病毒均作用良好，其抗病毒作用一般认为是诱生干 扰素，增强机体免疫力，直接致损及诱导细胞调亡等共同作用结果。此外，聚肌胞还能促进 mRNA水解，抑制蛋白质合成，提高cAMP水平，借助免疫增强功能发挥抗肿瘤作用。
[0005] 聚肌胞在动物体内消除迅速，小鼠静脉注射化标记的聚肌胞后，Imin内血浆中放 射量降低50%~65%，化后放射量仅剩10%。鸡肌肉注射化标记的聚肌胞后，血药浓度达峰 时间Tmax为（1.256 ± 0.248化，消除半衰期T1/2P为(9.227 ± 0.706化，主要分布于肝脏、肾脏 和脾脏中。鸡肌肉注射聚肌胞，隔天给药，连续3次，停药4h后所有可食性组织中药物浓度均 显著低于安全浓度。
[0006] 聚肌胞在医学临床主要用于防治病毒性角膜炎和单纯瘤疹，也用于慢性病毒性肝 炎的辅助治疗。兽医药理学研究报道:聚肌胞与黄巧多糖、左旋咪挫等多种药物联合应用， 可显著增加药物疗效;与疫苗同用，能弥补免疫空白期，缓解疫苗应激反应，增强免疫效果； 此外，对鸡传染性法氏囊、马立克氏病和新城疫，鸭病毒性肝炎，猪攝、猪传染性胃肠炎，兔 病毒性出血症和水貂阿留申病等有良效。
[0007] 我国兽医临床上，未见聚肌胞相关制剂批准上市。医学临床上，已批准上市的聚肌 胞注射液规格有:21111:2111肖，11111:1111肖。兽药、医药均未见聚肌胞注射用原位凝胶制剂上市。兽 医临床上，聚肌胞已见报道研究的剂型有：聚肌胞微囊等。医学临床上，聚肌胞已见报道剂 型有:聚肌胞滴鼻液和干粉等。未见报道设及聚肌胞注射用原位凝胶剂。
[0008] 聚肌胞若W常规注射液应用，一个疗程往往需要重复数次给药，频繁注射和保定 动物费时费事，又易造成动物应激，影响药物疗效和疾病转归。溫敏型原位凝胶 (thermosensitive in situ gel)具有使用方便，生物相容性好，刺激性小，黏膜组织亲和 力强，滞留时间长，体外流变学特征良好的优点，在药物制剂中应用广泛，是近年来缓控释 制剂领域的研究热点。为弥补现有制剂的缺陷，发明人拟制备聚肌胞注射用原位凝胶，达到 一个疗程仅给药一次，使用方面，缓释效果优良的目的。但在制备过程中发现聚肌胞在溫敏 型原位凝胶基质中溶解度下降，易析出沉淀，稳定性差，限制了聚肌胞注射用原位凝胶的开 发和应用。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的提供制备简单、使用方便、释药缓慢、生物相容性好的含聚肌胞的注 射用原位凝胶剂，该注射用原位凝胶剂中一部分聚肌胞包裹在微囊中，药物从微囊中缓慢 释放到凝胶后随着凝胶溶蚀释放起效，另一部分聚肌胞直接溶解在原位凝胶基质中，随着 凝胶的溶蚀而释放起效，本发明通过将聚肌胞制成微囊，提高了聚肌胞和凝胶基质的的相 容性，等于增加了一层缓释保障，药物释放速度缓慢且均一，获得了优良缓释效果。
[0010] 本发明的另一目的是提供含聚肌胞的注射用原位凝胶的制备方法。
[0011] 本发明的目的可通过如下技术方案实现：
[0012] -种含聚肌胞的注射用原位凝胶，包括聚肌胞粉末、聚肌胞微囊、泊洛沙姆407 (P407)、泊洛沙姆188(P188)、高分子阻滞剂、防腐剂、酸碱缓冲剂、注射用水;各组分的用量 如下:聚肌胞粉末0.05-0.8重量份、聚肌胞微囊0.1-5.0重量份、泊洛沙姆407 12.0-27.0重 量份、泊洛沙姆188 0.4-15.0重量份、高分子阻滞剂0.01-10.0重量份、防腐剂0.01-2.0重 量份、注射用水50.0-90.0重量份，酸碱缓冲剂调整注射用原位凝胶的pH在5.5~7.5。
[0013] 优选的，本发明所述的含聚肌胞的注射用原位凝胶，包含如下用量的组分:聚肌胞 粉末0.1-0.5重量份、聚肌胞微囊1.0-4.0重量份、泊洛沙姆407 15.0-25.0重量份、泊洛沙 姆188 0.5-5.0重量份、高分子阻滞剂0.05-5.0重量份、防腐剂0.1-1.5重量份、注射用水 75.0- 90.0重量份，酸碱缓冲剂调整注射用原位凝胶的pH在5.5~7.5。
[0014] 更优选的，本发明所述的含聚肌胞的注射用原位凝胶，包含如下组分:聚肌胞粉末 0.15-0.3重量份、聚肌胞微囊1.3-3.6重量份、泊洛沙姆407 17.0-24.0重量份、泊洛沙姆 188 0.85-2.2重量份、高分子阻滞剂0.08-3.0重量份、防腐剂0.25-1.0重量份、注射用水 80.0- 86.0重量份，酸碱缓冲剂调整注射用原位凝胶的pH在5.5~7.5。
[0015] 所述的聚肌胞微囊中含有20-30%的聚肌胞，所述的聚肌胞微囊是采用复凝聚法 制得的，包括:取明胶、阿拉伯胶分别溶于注射用水中，制备得到质量分数为0.5-6.0%的明 胶溶液和0.1-5.0 %的阿拉伯胶溶液;将明胶溶液和阿拉伯溶液1:1-1:4的体积比混合，在 溫度35-65Γ下持续揽拌;将聚肌胞粉末溶解于揽拌状态下的明胶-阿拉伯胶混合溶液中， 继续揽拌0.5-化;再加入5-10 %的冰醋酸溶液调节溶液的pH值为3.5-4.5，成囊后，往溶液 中加入该溶液体积1-4倍体积的注射用水，揽拌均匀后置于冰浴中快速冷却至10°CW下，加 入37 %的甲醒溶液，揽拌10-30分钟，使甲醒和明胶发生胺醒缩合反应;再加入5-20 %的氨 氧化钢溶液调节抑值为7-9,固化0.5-化，用注射用水反复洗涂微囊至无甲醒，冷冻干燥得 到聚肌胞微囊。
[0016] 所述的聚肌胞粉末由聚肌巧酸和聚胞巧酸聚合，添加单硫酸卡那霉素常规方法聚 合后，冷冻干燥得到的聚肌胞粉末。所述的聚肌胞粉末也可W由市售获得。本发明中聚肌胞 粉末是指用于制备聚肌胞微囊的聚肌胞粉末或在制备注射用原位凝胶时直接溶解在凝胶 基质中的聚肌胞。
[0017] 所述的高分子阻滞剂选自聚乙締醇、聚维酬、甲基纤维素、径丙基甲基纤维素、径 乙基纤维素、径丙基纤维素、簇甲基纤维素钢、卡波姆、透明质酸、黄原胶、壳聚糖、簇甲基壳 聚糖、海藻酸钢、憐脂等中的任意一种或多种;优选选自聚维酬、甲基纤维素、径丙基甲基纤 维素、簇甲基纤维素钢的一种或多种。
[0018] 所述的防腐剂选自径苯醋类、Ξ氯叔下醇、苯甲醇、苯乙醇、醋酸洗必泰、苯扎漠 锭、苯扎氯锭、山梨酸钟、硫柳隶等的任意一种或多种;优选选自山梨酸钟或苯甲醇。
[0019] 所述的酸碱缓冲剂选自酒石酸或其钢盐、醋酸或其钢盐、憐酸或其钢盐、钟盐、构 祿酸或其钢盐等中的一种或多种;优选憐酸或其钢盐、构祿酸或其钢盐、酒石酸或其钢盐中 的两种。
[0020] 本发明所述的含聚肌胞的注射用原位凝胶的制备方法，包含如下步骤：（a)、取处 方量的酸碱缓冲剂，溶于占处方量80 % -90 %的注射用水中制得P册.5~7.5的缓冲液，将处 方量的防腐剂溶于缓冲液中，再加入处方量的聚肌胞粉末，揽拌均匀，得到溶液A;(b)、再将 处方量的凝胶基质泊洛沙姆407和泊洛沙姆188、W及高分子