专利名称：一种京尼平固定活化素b的人工皮肤移植物及制备方法
技术领域：
本发明涉及一种人工皮肤移植物及制备方法，尤其涉及一种京尼平固定活化素B生长因子的人工皮肤移植物及制备方法。
背景技术：
随着社会的不断进步和医学的迅速发展，不少疾病已经得到有效的控制，但皮肤创伤却有增无减。目前，全国有数百万人受其伤害，因此，皮肤创伤是不可忽视的疾病，如烧伤或外伤，这些会损害到皮肤的表皮层与真皮层，甚至造成全层皮肤伤害，当治疗无法愈合的伤口时，常需通过自体皮肤移植来永久封闭伤口，而对于大面积的烧伤伤口或病人伤口再生能力较弱者而言，可供取皮的部位有限；对于开放性的感染性伤口，利用薄裂层皮肤移植物来作皮肤移植治疗的成功率很高，但是，由于薄裂皮肤移植物的真皮层较薄，伤口终会形成增生或收缩的瘢痕孪缩现象而影响重建后皮肤功能。因此，各种不同的生物敷料被提出，并被显示可用为裂层皮肤移植物的替代物。随着伤口愈合研究的深入，人们认识到使用生物敷料的目的不止是为了覆盖创面，还必须能帮助伤口愈合，防止细菌侵袭，减少伤口区域的超高代谢和营养不良，降低疼痛和不适，防止结痂而促进愈合。临床使用量最大的生物敷料是医用脱脂棉，由于肉芽组织向敷料内生长引起粘连，在揭除时产生痛苦和二次创伤，且积液易引起感染。针对这种情况，近几年出现了许多新型敷料，广受好评的是高分子水凝胶皮肤创伤修复敷料，其具有良好透气性和透水性，能抵御细菌的侵入，并能根据创面的外形而成型，其不足之处在于胶体强度差、缺乏耐用性。为了增加胶体强度，高分子水凝胶皮肤创伤修复敷料的合成过程中，通常采用化学交联、物理冻融、辐射合成三种方法，采用化学合成需要使用交联剂和引发剂等有毒有害化学物质，如戊二醛、碳化二亚胺，这又使合成的水凝胶敷料用于伤口护理时，增加了使用风险；采用冻融法合成水凝胶敷料不存在 使用有毒有害化学物质，使得其细胞毒性增加，存在潜在的安全问题。但是合成的敷料具有热可逆性，在温度较高时容易变形，使之不易运输储存，且冻融过程易使水凝胶敷料中的水分溢出，造成其保水能力大大降低，吸收伤口渗出液的能力也降低，从而影响其伤口护理效果，与皮肤不易贴合。采用辐射法合成的水凝胶敷料，由于辐射法制备的水凝胶机械强度较小，尤其是使用单一原料辐照时，产生的凝胶较脆。不论是皮肤移植物，还是皮肤移植物的替代物“生物敷料”，对于可以促进伤口快速愈合，且无毒，有良好的生物相容性的皮肤移植物的替代物，仍是人类迫切需要的和积极研究的方向。
发明内容
本发明的目的在于提供一种京尼平固定活化素B的人工皮肤移植物及制备方法。本发明采用的技术方案为:
一种京尼平固定活化素B的人工皮肤移植物，包括由皮肤移植物支架材料制成的水凝胶，及分布在水凝胶中的经京尼平交联的活化素B。优选的，皮肤移植物支架材料为壳聚糖、羧甲基壳聚糖、海藻酸盐、明胶和胶原蛋白中的至少一种。优选的，皮肤移植物支架材料为明胶和羧甲基壳聚糖。优选的，在皮肤移植物支架材料的水溶液中，依次加入京尼平水溶液、活化素B，混合均匀，得混合液，然后成型加工，同时成胶，得京尼平固定活化素B的人工皮肤移植物。优选的,混合液中皮肤移植物支架材料的浓度为5 20 g/mL。优选的，皮肤移植物支架材料为质量比为9:1的明胶、羧甲基壳聚糖的混合物。优选的，混合液中活化素B的浓度为I 20ng/mL。优选的，混合液中京尼平的浓度为0.01 0.5 g/mL。优选的，制备过程中各原料均为无菌原料。本发明的有益效果是:
本发明的人工皮肤移植物无毒、无致热原性，具有良好的生物相容性；可预防病原微生物入侵，降低感染发生率；可促进上皮组织快速愈合；减少创面体液渗出，并保持局部湿润的微环境，可常规消毒和灭菌，便于储存和运输，应用于烧伤、外伤等皮肤创伤修复中。
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图1是实施例所得不同明胶、壳聚糖含量的人工皮肤移植物图。
具体实施例方式下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。实施例1
一种京尼平固定活化素B的人工皮肤移植物的制备方法，包括以下步骤:
1)原料提纯:
称取5g明胶溶于IOOmL蒸馏水中，加热至50°C搅拌溶解；
称取IOg羧甲基壳聚糖溶于IOOmL蒸馏水中，搅拌室温下溶解；
将溶解后的明胶、羧甲基壳聚糖溶液分别15000转/min高速离心5min，分离得到上清液，分别冷冻干燥24h，分别得到纯化后的明胶、羧甲基壳聚糖；
2)京尼平固定活化素B生长因子的人工皮肤移植物制备
分别称取纯化后的明胶2.25g、羧甲基壳聚糖0.25g，紫外灭菌30min，然后均加入到灭菌的蒸馏水中，加热至50°C搅拌溶解并冷却至室温，用灭菌的蒸馏水定容至40mL，得明胶、羧甲基壳聚糖混合液；
称取25mg京尼平溶解于IOmL灭菌的蒸馏水中，过滤灭菌，得京尼平水溶液；
将京尼平水溶液倒入明胶、羧甲基壳聚糖混合液中，室温下搅匀，加入50uL 10 u g/mL的活化素 B 溶液(R&D Systems, Inc.Catalog Number:659_AB/CF),搅勻后倒入模具中，置于4°C下成胶，得京尼平固定活化素B生长因子的人工皮肤移植物，所得产品至于4°C或者-70°C保存，产品液状下各个成分的最终比例是:明胶4.5 g/mL，羧甲基壳聚糖0.5 g/mL，京尼平0.05 g/mL，活化素B 10ng/mL。所得产品的示意图见图1中的左图。实施例2一种京尼平固定活化素B的人工皮肤移植物的制备方法，包括以下步骤:
1)按实施例1的方法将明胶、羧甲基壳聚糖提纯；
2)人工皮肤移植物的制备:
分别称取纯化后的明胶4.5g、羧甲基壳聚糖0.5g，紫外灭菌30min，然后加入到灭菌的蒸馏水中，加热至50°C搅拌溶解并冷却至室温，用灭菌的蒸馏水定容至40mL，得明胶、羧甲基壳聚糖混合液；
称取25mg京尼平溶解于IOmL灭菌的蒸馏水中，过滤灭菌，得京尼平水溶液；
将京尼平水溶液倒入明胶、羧甲基壳聚糖混合液中，室温下搅匀，加入50uL 10 u g/mL的活化素B溶液，搅匀后倒入模具中，置于4°C下成胶，得京尼平固定活化素B生长因子的人工皮肤移植物，所得产品至于4°C或者-70°C保存，产品液状下各个成分的最终比例是:明胶9 g/mL,羧甲基壳聚糖I g/mL,京尼平0.05 g/mL,活化素B 10ng/mL。所得产品的示意图见图1中的中图。实施例3
一种京尼平固定活化素B的人工皮肤移植物的制备方法，包括以下步骤:
1)按实施例1的方法将明胶、羧甲基壳聚糖提纯；
2)人工皮肤移植物的制备: 分别称取纯化后的明胶9g、羧甲基壳聚糖lg，紫外灭菌30min，然后均加入到灭菌的蒸馏水中，加热至50°C搅拌溶解并冷却至室温，用灭菌的蒸馏水定容至40mL，得明胶、羧甲基壳聚糖混合液；
称取25mg京尼平溶解于IOmL灭菌的蒸馏水中，过滤灭菌，得京尼平水溶液；
将京尼平水溶液倒入明胶、羧甲基壳聚糖混合液中，室温下搅匀，加入50uL 10 u g/mL的活化素B溶液，搅匀后倒入模具中，置于4°C下成胶，得到京尼平固定活化素B生长因子的人工皮肤移植物，所得产品至于4°C或者-70°C保存，产品液状下各个成分的最终比例是:明胶18g/mL,羧甲基壳聚糖2g/mL,京尼平0.05 g/mL,活化素B 10ng/mL。所得产品的示意图见图1中的右图。图1中从左到右的三个产品，颜色逐渐升高，透明度也逐渐降低，产品的强度从左到右也依次升高，可见明胶、羧甲基壳聚糖总的含量越低，所得人工皮肤移植物越柔软，硬度越小，根据不同的病症，选用不同强度的人工皮肤移植物。实施例4
一种京尼平固定活化素B的人工皮肤移植物的制备方法，包括以下步骤:
1)按实施例1的方法将明胶、羧甲基壳聚糖提纯；
2)人工皮肤移植物的制备:
分别称取纯化后的明胶5g、羧甲基壳聚糖lg，紫外灭菌30min，然后均加入到灭菌的蒸馏水中，加热至50°C搅拌溶解并冷却至室温，用灭菌的蒸馏水定容至40mL，得明胶、羧甲基壳聚糖混合液；
称取5mg京尼平溶解于IOmL灭菌的蒸馏水中，过滤灭菌，得京尼平水溶液；
将京尼平水溶液倒入明胶、羧甲基壳聚糖混合液中，室温下搅匀，加入L 10 u g/mL的活化素B溶液，搅匀后倒入模具中，置于4°C下成胶，得京尼平固定活化素B生长因子的人工皮肤移植物，所得产品至于4°C或者-70°C保存。产品液状下各个成分的最终比例是:明胶10 g/mL,羧甲基壳聚糖2 g/mL,京尼平0.01 g/mL,活化素B Ing/mL。
实施例5
一种京尼平固定活化素B的人工皮肤移植物的制备方法，包括以下步骤:
1)按实施例1的方法将明胶、羧甲基壳聚糖提纯；
2)人工皮肤移植物的制备:
分别称取纯化后的明胶5g、羧甲基壳聚糖lg，紫外灭菌30min，然后均加入到灭菌的蒸馏水中，加热至50°C搅拌溶解并冷却至室温，用灭菌的蒸馏水定容至40mL，得明胶、羧甲基壳聚糖混合液；
称取0.25mg京尼平溶解于IOmL灭菌的蒸馏水中，过滤灭菌，得京尼平水溶液；
将京尼平水溶液倒入明胶、羧甲基壳聚糖混合液中，室温下搅匀，加入IOOuL IOug/mL的活化素B溶液，搅匀后倒入模具中，置于4°C下成胶，得京尼平固定活化素B生长因子的人工皮肤移植物，所得产品至于4°C或者-70°C保存。产品液状下各个成分的最终比例是:明胶10 g/mL,羧甲基壳聚糖2 g/mL,京尼`平0.5 g/mL,活化素B 20ng/mL。
权利要求
1.一种京尼平固定活化素B的人工皮肤移植物，包括由皮肤移植物支架材料制成的水凝胶，及分布在水凝胶中的经京尼平交联的活化素B。
2.根据权利要求1所述的人工皮肤移植物，其特征在于:皮肤移植物支架材料为壳聚糖、羧甲基壳聚糖、海藻酸盐、明胶和胶原蛋白中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的人工皮肤移植物，其特征在于:皮肤移植物支架材料为明胶和羧甲基壳聚糖。
4.权利要求1 3任一项所述的人工皮肤移植物的制备方法，包括以下步骤:在皮肤移植物支架材料的水溶液中，依次加入京尼平水溶液、活化素B，混合均匀，得混合液，然后成型加工，同时成胶，得京尼平固定活化素B的人工皮肤移植物。
5.根据权利要求1所述的人工皮肤移植物的制备方法，其特征在于:混合液中皮肤移植物支架材料的浓度为5 20 g/mL。
6.根据权利要求5所述的人工皮肤移植物的制备方法，其特征在于:皮肤移植物支架材料为质量比为9:1的明胶、羧甲基壳聚糖的混合物。
7.根据权利要求1所述的人工皮肤移植物的制备方法，其特征在于:混合液中活化素B的浓度为I 20ng/mL。
8.根据权利要求1所述的人工皮肤移植物的制备方法，其特征在于:混合液中京尼平的浓度为0.01 0.5 g/mL。
9.根据权利要求1所述的人工皮肤移植物的制备方法，其特征在于:制备过程中各原料均为无菌原料。
全文摘要
本发明公开了一种京尼平固定活化素B的人工皮肤移植物及其制备方法，该人工皮肤移植物包括由皮肤移植物支架材料制成的水凝胶，及分布在水凝胶中的经京尼平交联的活化素B；其制备方法在皮肤移植物支架材料的水溶液中，依次加入京尼平水溶液、活化素B，混合均匀，然后成型加工，同时成胶，得产品。本发明产品无毒、无致热原性，具有良好的生物相容性；可预防病原微生物入侵，降低感染发生率；可促进上皮组织快速愈合；减少创面体液渗出，并保持局部湿润的微环境，可常规消毒和灭菌，便于储存和运输，应用于烧伤、外伤等皮肤创伤修复中。
文档编号A61L27/22GK103083721SQ20131002087
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月18日 优先权日2013年1月18日
发明者张琳, 张璐, 陈世萱 申请人:南方医科大学