专利名称：一种快速组织工程皮肤构建修复皮肤缺损的方法
技术领域：
本发明涉及医疗方法领域，特别是一种快速组织工程皮肤构建修复皮肤缺损的方法。
背景技术：
各种原因引起的大面积皮肤缺损如烧伤、创伤是烧伤外科、整形修复外科面临的主要问题。为了有效解决皮源和修复后效果的问题，新的技术与方法不断出现。皮片移植、 皮瓣移植、邮票皮片移植、微粒皮移植、网状皮移植、复合皮移植等。组织工程皮肤的研究也在不断的深入，目前的组织工程皮肤包括自体或异体表皮片真皮替代物及含表皮和真皮双层结构的皮肤替代物3种，而最佳的替代物依然是自体表皮片真皮替代物，因为其余的大多数仅显效于慢性溃疡和烧伤的患者，同时它们也都不同程度的存在切取困难、易于感染、 免疫排斥和过敏等。培养表皮片由于缺乏真皮成分的支持，对机械损伤高度敏感，移植后易形成创面收缩和瘢痕增生，而且由于缺乏真皮，没有实现真正的皮肤重建。然而，自体表皮片真皮替代物由于缺乏表皮，无活细胞，易感染，移植后易降解、收缩，在创面边缘易形成瘢痕。
虽然新的方法都在一定程度上改善与推进了创面修复的治疗水平，但也都存在着各自的不足之处，无法克服皮片存活率低，产品周期长的缺点。发明内容
一种快速组织工程皮肤构建修复皮肤缺损的方法，由刃厚皮片、细胞县液结合复合皮移植的方法组成，其中应用取皮刀切取自体刃厚的皮片备用，皮片面积应大于需修复的创面面积约10%左右；将脱细胞异体真皮基质覆盖于所需覆盖的创面，其表面再覆盖上之前所取的自体刃厚的皮片，修剪出多余的皮片；再将细胞悬液注射或喷洒到前面进行的复合皮植皮区内，经皮片边缘将细胞悬液注射到皮片与脱细胞异体真皮基质之间；再按复合皮移植的方法进行术后处理。
作为本发明的进一步改进所述细胞悬液由皮片制成，将皮片置于已加热至37度的O. 2%胰蛋白酶溶液浸泡消化15 20分钟，使表皮和真皮分离；消化时间可能因皮片厚度、 室温等因素有所不同而定；用无菌镊从胰蛋白酶溶液中取出皮片，使用两把镊子，尝试剥离表皮和真皮；如果分离不易实现，把皮片重新置于已加热的胰蛋白酶溶液中，再孵育5 10 分钟；用两把镊子将消化后的皮片完全分离成真皮和表皮两层，这样可显露真皮-表皮结合部，用镊子固定皮片层，用无菌解剖刀从真皮与表皮结合部表面刮削细胞，应用复方林格氏液冲洗收集刮下的基底层细胞制成细胞悬液。
作为本发明的进一步改进所述的消化时间以15分钟为最少，总的消化时间不超过60分钟。
与现有技术相 比，本发明的有益效果是促进创面愈合、提高皮片成活率、改善愈后皮肤色泽质地。
具体实施方式
本发明人在修复体表缺损时应用异体脱细胞真皮与自体薄皮片的复合皮移植积累了丰富的经验，取得了较好的临床效果。但同时也存在着成活率未能达到理想的要求、成活后皮片质地、色泽及皮肤功能与正常皮肤仍有差距的问题。近期，本发明人将一种快速获得皮肤基底细胞悬液的方法应用于临床，该细胞悬液在促进创面愈合、提高皮片成活率、改善愈后皮肤色泽质地等方面都有良好的效果。经过初步的研究该种细胞悬液中含有基底细胞、朗格罕斯细胞、黑色素细胞和成纤维细胞以及表皮干细胞，丰富的活性细胞群落是其产生临床效果的原因。表皮干细胞是目前作为种子细胞应用于皮肤组织工程研究的热点之一，而脱细胞异体真皮作为支架也被证实为是理想的组织工程皮肤材料，将这两种技术结合在一起应用，得到一种快捷、有效的构建出有完整功能皮肤的方法。
一种快速组织工程皮肤构建修复皮肤缺损的方法，由刃厚皮片、细胞县液结合复合皮移植的方法组成，其中应用取皮刀切取自体刃厚的皮片备用，皮片面积应大于需修复的创面面积约10%左右；将脱细胞异体真皮基质覆盖于所需覆盖的创面，其表面再覆盖上之前所取的自体刃厚的皮片，修剪出多余的皮片；由于理想的人工皮肤包含表皮和真皮两层结构并且两者之间连接紧密；具有柔韧性和一定的机械强度，移植到创面后很快即与创面良好贴附；安全、不携带病毒；表皮与真皮成分能尽快完成自身增殖、分化和功能成熟， 形成更接近于生理的永久性的皮肤替代物等；于是，再将细胞悬液注射或喷洒到前面进行的复合皮植皮区内，经皮片边缘将细胞悬液注射到皮片与脱细胞异体真皮基质之间；再按复合皮移植的方法进行术后处理。
所述细胞悬液由皮片制成，将皮片置于已加热至37度的O. 2%胰蛋白酶溶液浸泡消化15 20分钟，使表皮和真皮分离；消化时间可能因皮片厚度、室温等因素有所不同而定；用无菌镊从胰蛋白酶溶液中取出皮片，使用两把镊子，尝试剥离表皮和真皮；如果分离不 易实现，把皮片重新置于已加热的胰蛋白酶溶液中，再孵育5 10分钟；用两把镊子将消化后的皮片完全分离成真皮和表皮两层，这样可显露真皮-表皮结合部，用镊子固定皮片层，用无菌解剖刀从真皮与表皮结合部表面刮削细胞，应用复方林格氏液冲洗收集刮下的基底层细胞制成细胞悬液；按上述方法制细胞悬液时总量不要过大，当细胞数量一定时悬液总量越多细胞浓度越低。
所述的消化时间以15分钟为最少，皮片较厚、室温较低时消化的时间越长，但总的消化时间不超过60分钟。
病例I 吴某，男，5岁。因诊为“先天性右上肢巨大黑色素细胞痣”入院求治。入院查体见患儿右上肢大部皮肤呈黑色，稍增生，大部分黑色皮肤处有增粗毛发生长。入院后完善术前常规检查未见明显手术禁忌。于气管内麻下行“右上肢巨大黑毛痣切除+大腿取皮右上肢快速组织工程皮肤植皮术”。术中完整切除右上肢黑痣(术后病理确诊为黑色素细胞痣)。电动取皮刀于患儿双侧大腿处切取O. 25mm厚刃厚皮片备用。将所取皮片中约6cm2应用胰蛋白酶于37度消化15分钟。将消化之皮片表皮层与真皮层分离后收集位于基底层的细胞制备成细胞悬液约4ml备用。将Iml细胞悬液喷洒于双侧大腿供皮区后创面覆盖纱士林油纱后加压包扎。右上肢黑痣切除区域格覆盖异体脱细胞真皮基质后将基质细胞悬液喷洒于手术区，再覆盖自体刃厚皮片，植皮区加压包扎固定。术后常规抗炎补液等治疗。患儿右上肢植皮区于术后7天拆除外敷料，见绝大部分植皮区成活良好。术后三个月复诊见植皮区皮肤色泽质地良好，接近正常皮肤，弹性良好，关节功能正常。
综上所述 ，本领域的普通技术人员阅读本发明文件后，根据本发明的技术方案和技术构思无需创造性脑力劳动而作出其他各种相应的变换方案，均属于本发明所保护的范围。
权利要求
1.一种快速组织工程皮肤构建修复皮肤缺损的方法，由刃厚皮片、细胞县液结合复合皮移植的方法组成，其特征在于应用取皮刀切取自体刃厚的皮片备用，皮片面积应大于需修复的创面面积约10%左右；将脱细胞异体真皮基质覆盖于所需覆盖的创面，其表面再覆盖上之前所取的自体刃厚的皮片，修剪出多余的皮片；再将细胞悬液注射或喷洒到前面进行的复合皮植皮区内，经皮片边缘将细胞悬液注射到皮片与脱细胞异体真皮基质之间；再按复合皮移植的方法进行术后处理。
2.按照权利要求1所述的一种快速组织工程皮肤构建修复皮肤缺损的方法，其特征在于所述细胞悬液由皮片制成，将皮片置于已加热至37度的O. 2%胰蛋白酶溶液浸泡消化 15 20分钟，使表皮和真皮分离；消化时间可能因皮片厚度、室温等因素有所不同而定；用无菌镊从胰蛋白酶溶液中取出皮片，使用两把镊子，尝试剥离表皮和真皮；如果分离不易实现，把皮片重新置于已加热的胰蛋白酶溶液中，再孵育5 10分钟；用两把镊子将消化后的皮片完全分离成真皮和表皮两层，这样可显露真皮-表皮结合部，用镊子固定皮片层，用无菌解剖刀从真皮与表皮结合部表面刮削细胞，应用复方林格氏液冲洗收集刮下的基底层细胞制成细胞悬液。
3.按照权利要求2所述的一种快速组织工程皮肤构建修复皮肤缺损的方法其特征在于所述的细胞悬液的消化时间以15分钟为最少，总的消化时间不超过60分钟。
全文摘要
一种快速组织工程皮肤构建修复皮肤缺损的方法法属于医疗方法领域，克服了传统医疗方法的皮片成活率低，周期长的缺点；其中由刃厚皮片、细胞县液结合复合皮移植的方法组成；一种快速组织工程皮肤构建修复皮肤缺损的方法法能够促进创面愈合、提高刃厚皮片成活率、改善愈后皮肤色泽质地等方面都有良好的效果，能够更有效地医疗因各种原因引起的皮肤缺损，如外伤、手术等。
文档编号A61B17/322GK103054628SQ20131003521
公开日2013年4月24日 申请日期2013年1月30日 优先权日2013年1月30日
发明者朱家源 申请人:朱家源