专利名称：维药瘤果黑种草子黄酮在制备治疗慢性阻塞性肺病药物的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及NGS黄酮医药技术领域，是一种维药瘤果黑种草子黄酮在制备治疗慢性阻塞性肺病药物的应用。
背景技术：
慢性阻塞性肺病(chronicobstructive pulmonary disease, COPD)是一种慢性气道阻塞性疾病的统称，主要指具有不可逆性气道阻塞的慢性支气管炎和肺气肿两种疾病。COPD患者预后不良，最终死于呼吸衰竭和肺源性疾病，是造成人类死亡的第四大疾病。COPD发病机制主要是肺支气管慢性炎症，导致支气管痉挛状态的持续存在，组织蛋白酶功能亢进，长期作用使肺支气管组织结构损伤。目前还没有药物能够改变肺功能进行性下降这一趋势。coro对症治疗的化学药物包括:糖皮质激素、支气管扩张剂、抗氧化剂、抗菌剂、祛痰剂等，但由于化学药物副作用较大，不宜长期服用(钟南山，姚婉贞，徐永健.慢性阻塞性肺疾病.第一版.北京大学医学出版社.2007:497-508);市场上尚无针对治疗COPD的中成药；传统中药汤剂服用不便，降低了病人的依从性。因而，寻找新的治疗CCffD药物势在必行。
黑种草属植物属于毛茛科植物金莲花亚科，其中有3个种，分别是:瘤果黑种草(nigella glandulifera Preyn),又名腺毛黑种草；果黑种草(Nigella sativa),又名家黑种草；以及黑种草(Nigella damascena L)。瘤果黑种草的种子呈三棱状卵形,长2.5一3_，宽约1.5_。表面黑色，粗糙，顶端较狭而尖，下端稍钝，有不规则的突起，质坚硬，断面灰色，有油性(疆植物志编辑委员会.新疆植物志。第2卷，第I分册[M].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社，1993:231.)。果黑种草(sativa)广泛分布在地中海地区(埃及、巴基斯坦等地)，古伊朗医学书籍中记载对哮喘和呼吸困难有治疗作用；黑种草(damascena)主要分布在欧洲地区；瘤果黑种草(glandulifera)是新疆特有的植物资源，为我国新疆维吾尔族常用药材。维吾尔医多以瘤果黑种草子(nigella glandulifera seeds, NGS)外用于生发、乌发、止痛、止痒等，内服用于治疗感冒等，如用黑种草子浸葡萄醋后，研成细粉，吸入鼻内(国家中医药管理局.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社，1999:364)。已研究的NGS化学成分包括:脂肪酸化学成分、挥发性化学成分、生物碱化学成分、以常春藤为主的皂苷类和以山奈酚为主·的黄酮类等(刘玉明，杨峻山孙，刘庆华.瘤果黑种草子化学成分的研究.中国中药杂[J].2005，7 (30) 980-982);(倪君君，吴兆华，高慧媛，王喆星，吴立军.瘤果黑种草子的化学成分.沈阳药学大学学报[J].2007，24 (4):215-217);(信学雷，汪汉卿，阿吉艾克拜尔 艾萨.维药瘤果黑种草籽化学成分研究.天然产物研究与开发[J].2012,24:892-896,899)] 目前国外有报道果黑种草(sativa)子改善呼吸系统紊乱的少量体外研究，尚未报道NGS对COPD作用的研究资料。发明内容
本发明提供了一种维药瘤果黑种草子黄酮在制备治疗慢性阻塞性肺病药物的应用，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决目前国内外尚无利用NGS黄酮改善呼吸系统紊乱的问题，本发明中NGS黄酮能有效治疗慢性阻塞性肺病引起的慢性支气管炎症，同时能够有效改善慢性阻塞性肺病引起的肺支气管痉挛症状，阻止形成肺大泡和肺气肿。
本发明的技术方案是通过以下措施来实现的:一种维药瘤果黑种草子黄酮在制备治疗慢性阻塞性肺病药物的应用。
下面是对上述发明技术方案的进一步优化或/和改进: 上述NGS黄酮按下述方法得到:称取NGS非油脂部分，向NGS非油脂中加入重量是NGS非油脂重量6倍至12倍体积浓度是30%至60%的乙醇，回流提取2次至4次、每次0.5小时至2小时，合并提取液，在温度为60°C至80°C条件下常压浓缩至无醇味得到NGS黄酮。
上述所用的乙醇的体积浓度为40%，回流提取3次、每次1.5小时。
上述NGS黄酮按下述方法进行纯化:按大孔树脂吸附进行纯化，NGS黄酮上样液浓度为4.90 mg.πιΓ1，通过AB-8大孔树脂的层析柱，用体积浓度为30%至50%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，挥干溶剂，得棕黄色粉末；将粉末用水溶解，上聚酰胺柱，先用水洗脱，再用4倍柱体积体积浓度为30%至50%的乙醇以2柱体积/h进行洗脱，收集洗脱液，挥干溶剂，得精制NGS黄酮。
本发明的NGS黄酮对由慢性阻塞性肺病引起的慢性支气管炎症具有较稳定的抗慢性炎症作用，同时能够有效改善慢性阻塞性肺病引起的肺支气管痉挛症状，阻止形成肺大泡和肺气肿，其作用机制涉及抑制肺支气管平滑肌M胆碱受体、减少肺支气管组织炎症细胞和炎症细胞因子的功能，在目前国内外研究中尚属首次。
附图1为本发明正常大鼠肺组织切片(HEX 100)。
附图2为本发明肺部炎症肺气肿大鼠模型病理肺组织切片(HEX 100)。
附图3为本发明NGS黄酮 低剂量治疗组肺组织切片(HEX 100)。
附图4为本发明NGS黄酮高剂量治疗组肺组织切片(HEX 100)。
附图5为本发明NGS黄酮中山萘酚的HPLC色谱图，其中，图中的A为对照品的山奈酚峰值。
附图6为本发明NGS黄酮中山萘酚的HPLC色谱图，其中，图中的B为样品的山奈酚峰值。
具体实施方式
本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。
下面结合实施例及附图对本发明作进一步描述: 实施例1，该维药瘤果黑种草子黄酮在制备治疗慢性阻塞性肺病药物的应用。
可根据实际需要，对上述维药瘤果黑种草子黄酮在制备治疗慢性阻塞性肺病药物的应用作进一步优化或/和改进:实施例2，作为上述是实施例的优选，该NGS黄酮按下述方法得到:称取NGS非油脂部分，向NGS非油脂中加入重量是NGS非油脂重量6倍至12倍体积浓度是30%至60%的乙醇，回流提取2次至4次、每次0.5小时至2小时，合并提取液，在温度为60°C至80°C条件下常压浓缩至无醇味得到NGS黄酮。
实施例3，作为上述是实施例的优选，所用的乙醇的体积浓度为40%，回流提取3次、每次1.5小时。
实施例4，作为上述是实施例的优选，该NGS黄酮按下述方法进行纯化:按大孔树脂吸附进行纯化，NGS黄酮上样液浓度为4.90 mg.πιΓ1，通过ΑΒ-8大孔树脂的层析柱，用体积浓度为30%至50%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，挥干溶剂，得棕黄色粉末；将粉末用水溶解,上聚酰胺柱,先用水洗脱,再用4倍柱体积体积浓度为30%至50%的乙醇以2柱体积/h进行洗脱，收集洗脱液，挥干溶剂，得精制NGS黄酮。
1.NGS黄酮的质量控制: 紫外分光光度法(ultraviolet spectrum, UV)测定NGS总黄酮和高效液相色谱法(high performance liquid chroma- tography, HPLC)测定 NGS 中山奈酌.的含量。
(I)UV测定NGS总黄酮:在方法学验证的基础上，以芦丁为对照品，甲醇溶解对照与供试品，乙醇为添加溶媒，加入1%A1C13试剂，最大吸收波长为271nm，测定结果代入建立的标准曲线回归方程，计算出NGS非油脂中黄酮含量为1.52%。
(2)HPLC测定NGS中山奈酚的含量:在系统适应性和方法学考察的基础上，以山奈酚为对照品，选择色谱柱为Diamonsil C18，流动相为甲醇:0.4%磷酸(52: 48)，检测波长为370nm，见附图5和附图6，测定结果代入建立的标准曲线回归方程，计算NGS中黄酮含量为 0.33mg.g 1O
2.NGS黄酮药理作用研究: 2.1NGS黄酮的肺支气管解痉效应 2.1.1小鼠组胺引喘实验: 将小鼠分为对照组和给药组，对照组包括:阴性对照组(即生理盐水组)、阳性对照组(即氨茶碱组)和NGS水煎液组，给药组包括:NGS黄酮低剂量组和NGS黄酮高剂量组。
采用喷氯化乙酰 胆碱及磷酸组胺混合物能兴奋气管平滑肌，引发支气管痉挛，引起小鼠喘咳症状，观察各组对小鼠引喘潜伏期长短的影响。
结论:氯茶碱是目前公知的改善呼吸功能的药物，它能够有效松弛支气管平滑肌，尽管NGS水煎液组较生理盐水组引喘潜伏期延长，但是NGS黄酮低剂量组和NGS黄酮高剂量组，均较水煎液组引喘潜伏期明显延长，说明NGS黄酮可以减轻支气管痉挛症状。实验结果见表I。
表I NGS黄酮对小白鼠平喘实验的影响(X±S ,η =10)
权利要求
1.一种维药瘤果黑种草子黄酮在制备治疗慢性阻塞性肺病药物的应用。
2.根据权利要求1所述的维药瘤果黑种草子黄酮在制备治疗慢性阻塞性肺病药物的应用，其特征在于该NGS黄酮按下述方法得到:称取NGS非油脂部分，向NGS非油脂中加入重量是NGS非油脂重量6倍至12倍体积浓度是30%至60%的乙醇，回流提取2次至4次、每次0.5小时至2小时，合并提取液，在温度为60°C至80°C条件下常压浓缩至无醇味得到NGS黄酮。
3.根据权利要求2所述的维药瘤果黑种草子黄酮在制备治疗慢性阻塞性肺病药物的应用，其特征在于所用的乙醇的体积浓度为40%，回流提取3次、每次1.5小时。
4.根据权利要求2或3所述的维药瘤果黑种草子黄酮在制备治疗慢性阻塞性肺病药物的应用，其特征在于该NGS黄酮按下述方法进行纯化:按大孔树脂吸附进行纯化，NGS黄酮上样液浓度为4.90 mg.πιΓ1，通过AB-8大孔树脂的层析柱，用体积浓度为30%至50%的乙醇进行洗脱，收集洗脱液，挥干溶剂，得棕黄色粉末；将粉末用水溶解，上聚酰胺柱，先用水洗脱，再用4倍柱体积浓度为30%至50%的乙醇以2倍柱体积/h进行洗脱，收集洗脱液，挥干溶剂，得精 制NGS黄酮。
全文摘要
本发明涉及NGS黄酮医药技术领域，是一种维药瘤果黑种草子黄酮在制备治疗慢性阻塞性肺病药物的应用，本发明的NGS黄酮对由慢性阻塞性肺病引起的慢性支气管炎症具有较稳定的抗慢性炎症作用，同时能够有效改善慢性阻塞性肺病引起的肺支气管痉挛症状，阻止形成肺大泡和肺气肿。其作用机制涉及抑制肺支气管平滑肌M胆碱受体、减少肺支气管组织炎症细胞和炎症细胞因子的功能，在目前国内外研究中尚属首次。
文档编号A61K36/71GK103251689SQ201310060018
公开日2013年8月21日 申请日期2013年2月26日 优先权日2013年2月26日
发明者耿东升, 张宏涛, 张文斌 申请人:中国人民解放军新疆军区联勤部药品仪器检验所