一种鳗弧菌二价疫苗及其制备和使用方法
【专利摘要】本发明涉及水产养殖动物病害防治技术，具体的说是一种鳗弧菌（Vibrio?anguillarum）二价疫苗及其制备和使用方法。疫苗为鳗弧菌（Vibrio?anguillarum）01血清型和02血清型两株菌混合的菌悬液，所述鳗弧菌（Vibrio?anguillarum）01血清型和02血清型两株菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2012年12月07日，保藏号分别为CGMCC?No.6942和CGMCC?No.6944。本发明二价灭活疫苗可有效地保护易感鱼类免受致病性鳗弧菌的感染。本发明的二价疫苗拓宽了疫苗保护范围,有效刺激养殖鱼类产生特异性免疫应答反应，并有效提供对疾病的免疫保护效应。制备本发明的鳗弧菌二价疫苗，所使用的材料成本低，对动物和环境安全。
【专利说明】一种鳗弧菌二价疫苗及其制备和使用方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及水产养殖动物病害防治技术，具体的说是一种鳗弧菌（Vibrio anguillarum)二价疫苗及其制备和使用方法。
【背景技术】
[0002] 鳗弧菌是引起水产养殖动物败血症的重要病原之一，由其引起的弧菌病是我国水 产养殖鱼类的主要疾病，感染的养殖鱼类涉及大菱鲆、牙鲆、半滑舌鳎、鲈鱼、美国红鱼等重 要养殖品种，引起养殖鱼类产业的重大经济损失。鳗弧菌病的防治手段主要为药物治疗和 疫苗免疫。药物治疗涉及抗生素和化学药物的使用，容易造成水产品药物残留和细菌的耐 药性，破坏生态环境平衡，对人类健康形成潜在危害。由于抗生素及其他化学药物的应用带 来的危害，在世界范围内受到很大的限制，而疫苗免疫在特异性、安全性和保护效果方面优 于抗生素等药物治疗，已被证明是一种有效安全的疾病防治手段。灭活鱼用疫苗安全性好、 生产成本低，在挪威、西班牙、北美等国家已经有多种商业化的灭活疫苗应用于规模化的鲑 鱼、鳟鱼、鲇鱼等养殖，对减少抗生素使用、保障国家和地区的鱼类经济起到巨大推动作用。 随着养殖温度上升、环境污染、集约化养殖等因素，水生动物的病原微生物变异速度和频率 加快，病原种类及血清型出现增加趋势，针对不断变化的疾病和病原种类，需要及时开展疾 病流行病学研究，明确病原种类及其变化规律，研制和应用有效的新疫苗。根据文献报告， 鳗弧菌有23种血清型，对鱼类致病的有01、02、03血清型，目前出现了 01&、0113、02&、0213等 致病的血清亚型，其他血清型如04、05血清型对养殖鱼类的致病性也有报道。由于血清亚 型菌株和新致病血清型菌株的出现，现有的鳗弧菌疫苗不能给养殖动物提供有效保护或保 护率低，需要根据不同地区不同养殖品种的弧菌病开展流行病学研究，明确致病株及其血 清型，研制能够提供有效保护的鳗弧菌疫苗。
【发明内容】
[0003] 本发明目的在于为克服现有鳗弧菌疫苗对水产养殖动物不能提供完全保护、保护 力低的缺点提供一种鳗弧菌二价疫苗及其制备和使用方法。
[0004] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
[0005] -种鳗弧菌二价疫苗，疫苗为鳗弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清 型两株菌混合的菌悬液，所述鳗弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型两株菌 保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2012年12月07日，保 藏号分别为CGMCC No. 6942和CGMCC No. 6944,保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号 院3号。
[0006] 所述疫苗为溶于磷酸缓冲盐溶液中的菌悬液；所述菌悬液中鳗弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型两株菌按细胞数量比为1 : 1的比例混合。
[0007] 将鳗弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型两株菌分别活化培养、发 酵培养和甲醒灭活后，将灭活后的鳗弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型两 株菌的灭活细胞按数量比为1 : 1的比例混合于无菌磷酸缓冲盐溶液中，即为二价灭活疫 苗。
[0008] 鳗弧菌二价疫苗的制备方法，将鳗弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和 02血清型两株菌分别活化培养、发酵培养和甲醛灭活后，将灭活后的鳗弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型两株菌的灭活细胞按数量比为1 : 1的比例混合于无 菌磷酸缓冲盐溶液中，即为二价灭活疫苗。
[0009] 鳗弧菌二价疫苗的使用方法，其特征在于：所述二价灭活疫苗用于制备防治养殖 鱼类鳗弧菌病的疫苗。将上述二价灭活疫苗注射给药量为1〇 6?l〇8cells/尾；或浸泡给药 浓度为1〇7?l〇9cells/ml，浸泡时间10?30min。
[0010] 本发明采用的鳗弧菌菌株01血清型和02血清型两株菌均保藏于中国普通微生物 菌种保藏管理中心，保藏日期2012年12月07日，保藏号分别为CGMCC No. 6942和CGMCC No. 6944,从我国发生鳗弧菌病的养殖牙鲆和大菱鲆分离，其生理生化、16SrRNA基因系统发 育分析、血清学、PCR鉴定等特征与鳗弧菌的特征符合（参见表1和表2以及图ΙΑ、B、C)。
[0011] 表 1 弧菌 CGMCC No. 6942 和 CGMCC No. 6944 生理生化特征
[0012]
【权利要求】
1. 一种鳗弧菌二价疫苗，其特征在于：疫苗为鳗弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型 和02血清型两株菌混合的菌悬液，所述鳗弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清 型两株菌保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2012年12月 07 日，保藏号分别为 CGMCC No. 6942 和 CGMCC No. 6944。
2. 按权利要求1所述的鳗弧菌二价疫苗，其特征在于：所述疫苗为溶于磷酸缓冲盐溶 液中的菌悬液；所述菌悬液中鳗弧菌（Vibrio anguillarum) 01血清型和02血清型两株菌 按细胞数量比为1 :1的比例混合。
3. 按权利要求1或2所述的鳗弧菌二价疫苗，其特征在于：将鳗弧菌（Vibrio anguillarunOOl血清型和02血清型两株菌分别活化培养、发酵培养和甲醛灭活后，将灭活 后的鳗弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型两株菌的灭活细胞按数量比为1 : 1的比例混合于无菌磷酸缓冲盐溶液中，即为二价灭活疫苗。
4. 一种权利要求1所述的鳗弧菌二价疫苗的制备方法，其特征在于：将鳗弧菌（Vibrio anguillarunOOl血清型和02血清型两株菌分别活化培养、发酵培养和甲醛灭活后，将灭活 后的鳗弧菌（Vibrio anguillarum)01血清型和02血清型两株菌的灭活细胞按数量比为1 : 1的比例混合于无菌磷酸缓冲盐溶液中，即为二价灭活疫苗。
5. -种权利要求1所述的鳗弧菌二价疫苗的使用方法，其特征在于：所述二价灭活 疫苗用于制备防治养殖鱼类鳗弧菌病的疫苗；将上述二价灭活疫苗注射给药量为1〇 6? 108cells/尾；或浸泡给药浓度为107?109cells/ml，浸泡时间10?30min。
【文档编号】A61K39/106GK104138597SQ201310163260
【公开日】2014年11月12日 申请日期:2013年5月7日 优先权日:2013年5月7日
【发明者】莫照兰, 李贵阳, 李 杰 申请人:中国水产科学研究院黄海水产研究所