一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物及其制剂的制作方法
【专利摘要】本发明属于医药【技术领域】，本发明公开了一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物及其制剂；该药物组合物制备成注射制剂，注射制剂中药物组合物制备成的制剂中游离氨基酸占多肽重量小于等于20.0％大于等于3.0％。研究表明，本发明注射制剂具有更好的药理作用和更高的稳定性。
【专利说明】一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物及其制剂
【技术领域】
[0001]本发明属于医药【技术领域】，具体涉及一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物及其 制剂。
【背景技术】
[0002]以鹿骨和甜瓜子为原料的药物制剂，主要是鹿瓜多肽注射制剂，该制剂具有调节 骨代谢、刺激成骨细胞增殖、促进新骨形成的作用，亦可调节钙鳞代谢、增加骨钙沉积、防止 骨质疏松，并具有抗炎、镇痛、抗风湿等作用，已在临床广泛使用。
[0003]鹿瓜多肽注射制剂中骨诱导多肽类生物因子可有效促进机体内影响骨形成和吸 收的骨源性生长因子的合成，包括骨形态发生蛋白（BNPs)、β-转化生长因子（TGF-β)和 成纤维细胞生长因子（FGK)等，从而具有多种生物活性、促进细胞有丝分裂与分化的作用， 并具有容骨活性。其中BMPs是一种高效诱导物质，是间充质细胞向骨系细胞分化的最初 信号分子，能诱导血管周围游动的间充质细胞转化为不可逆性的骨系细胞，即软骨细胞和 成骨细胞，从而促进骨痂形成，诱导新骨形成，促进骨折修复；还可调节细胞外基质成分的 改变，通过与TGF-β和FGF相互之间地协调作用，更好地诱导新骨形成，使骨组织更成熟。 TGF-β则是一族具有多种的蛋白多肽，对成骨细胞及成软骨细胞有促进分化或降低分化的 双重作用，与多种因子如细胞外基质和其他分化调节生长因子一起协同参与对细胞分化的 调节，也可促进细胞外基质的合成，并对其新合成的基质降解有显著抑制作用；对于成骨细 胞也可促进其合成I型胶原、骨粘连素和骨桥蛋白；同时，TGF-β对淋巴细胞和巨噬细胞的 作用表明，它既能缓解炎性反应的破坏性，又能协助巨噬细胞来源的某些细胞因子在组织 修复中发挥作用。FGF是一组肝素粘合多肽，可刺激细胞的趋向移动、增殖和分化，增加合成 胶原细胞的数量，促进骨胶原蛋白及非胶原蛋白的合成，增加骨钙素的合成。甜瓜子提取物 是从葫芦科植物甜瓜的成熟干燥种子经特殊工艺提取而成，能降低骨折局部毛细血管通透 性，减少炎性渗出促进局部血运障碍的恢复；能降低全血粘度及红细胞聚集程度，改善骨痂 局部的血液循环，为骨细胞提供一个良好的供血环境；还能抑制前列腺素的释放，达到止痛 效果。在促进骨折早期愈合中，甜瓜子提取物与补充的骨诱f多肽类生物因子具有协同作 用，可促进骨源性生长因子的合成。鹿瓜多肽富含的多种游离氨基酸为骨细胞合成BNPs、 TGF-β和FGF等骨源性生长因子提供原料，从而促进骨源性生长因子的合成。其中的有机 钙、磷离子可参与钙磷代谢，维持骨容量。
[0004] 临床应用表明，以鹿骨和甜瓜子为原料的注射制剂是治疗骨折不愈合、骨质疏松 症、风湿、类风湿性关节炎、腕舟状骨缺血性坏死和软组织损伤等的有效药物，在骨科的应 用前景广阔。 ^
[0005] 随着该制剂的临床应用越来越广泛，出现一些不良反应，虽然不良反应率比较低， 但药物关系到人的生命，提高其产品质量是重中之重。
【发明内容】
[0006] 基于上述原因， 申请人:通过多年的研究，确定以鹿骨和甜瓜子为原料制备的注射 制剂中，游离氨基酸的含量在一定范围内，具有更好的药理效果，并且制剂稳定性更好，质 量更加优秀。
[0007] 本发明通过下述技术方案实现的。
[0008] 一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物，药物组合物原料为鹿骨和甜瓜子制备的 注射制剂，该药物组合物制备成的制剂中游离氨基酸占多肽重量小于等于20. 0%大于等于 3_0%。
[0009] 上述优选的制剂中游离氨基酸占多肽重量小于等于15. 0%大于等于3. 〇%。
[0010] 上述优选的制剂中游离氨基酸占多肽重量小于等于10· 0%小于等于5. 0%
[0011] 上述所述的制剂中游离氨基酸包括门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精 氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨 酸和赖氨酸。
[0012] 5、根据权利要求1所述的一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物，其中鹿骨和甜 瓜子的重量比为1 _4 : 1 -4。
[0013] 上述所述的注射制剂包括注射液和粉针剂。
[0014] 上述所述的注射制剂的制备方法为：
[0015] 取鹿骨去掉骨髓，粉碎，取甜瓜子，粉碎，加入鹿骨和甜瓜子重量的2-4倍的注射 用水，120°C -125°C提取3次，每次3小时-5小时，合并提取液，过滤，滤液用酸调pH值为 2· 5-3· 5,0°C _5°C静置 12-24 小时，过滤，滤液用碱调 ρΗ9· 0-11. 〇，(TC -5°C静置 12-24 小 时，过滤，滤液用酸调pH值6· 5-7. 5,在15000-17000r/min离心5-10分钟，取上清液用截 取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤， 保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量 l-3mg/ml，得到鹿骨甜瓜子提取液；加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超 滤，保留透过液，透过液经〇· 22 μ m滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，得到注射 液；
[0016] 或者加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过 液经0· 22 μ m滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，冷冻干燥，得到冻干粉针剂。 [0017]上述所述的注射剂的制备方法中酸为醋酸、枸橼酸、马来酸、乳酸或酒石酸。
[0018] 上述所述的注射剂的制备方法中碱为枸橼酸钠、醋酸钠、二乙醇胺或乙二胺。
[0019] 一、药效学试验研究
[0020] 试验1组：药物组合物鹿骨400g，甜瓜子i〇〇g，制备成注射液，其中游离氨基酸占 多肽重量的23%。
[0021] 取鹿骨去掉骨髓，取400g粉碎，加取甜瓜子100g,粉碎，加入鹿骨和甜瓜子重量的 3倍的注射用水，1 21°C提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用盐酸调pH值为3.0， 0°C静置18小时，过滤，滤液用氢氧化钠调 ΡΗ10· 〇, (TC静置12小时，过滤，滤液用盐酸调pH 值7· 0,在16000r/min离心10分钟，取上清液用截取分子量为1〇万的超滤膜超滤，保留透 过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000 的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml,得到甜瓜子提取液；加入活性炭， 过滤，滤液用截取分子量 8〇〇〇的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经〇. 22 μ m滤芯过滤，浓 缩至多肽含量为4mg/ml，灌装，得到注射液；
[0022]试验2组：药物组合物鹿骨400g，甜瓜子i〇〇g，制备成注射液，其中游离氨基酸占 多肽重量的19. 4%。
[0023]取鹿骨去掉骨髓，取400g粉碎，取甜瓜子i〇〇g，粉碎，加入鹿骨和甜瓜子重量的 2倍的注射用水，125°C提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液用枸橼酸调pH值为 3. 0，5°C静置I2小时，过滤，滤液用枸橼酸钠调ρ?19· 〇，5°C静置24小时，过滤，滤液用枸橼酸 调pH值6. 5,在15000r/min离心5分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保 留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为 8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量l 5mg/ml，得到甜瓜子提取液；加入活 性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经〇. 22 μ m滤芯过 滤，浓缩至多肽含量为4mg/ml，灌装，得到注射液；
[0024]试验3组：药物组合物鹿骨400g，甜瓜子l〇〇g，制备成注射液，其中游离氨基酸占 多肽重量的12. 3%。
[0025]取鹿骨去掉骨髓，取400g粉碎，取甜瓜子l〇〇g，粉碎，加入鹿骨和甜瓜子重量的 2. 5倍的注射用水，124°C提取3次，每次3. 5小时，合并提取液，过滤，滤液用乳酸调PH值 为3. 0,3°C静置22小时，过滤，滤液用醋酸钠调ΡΗ10· 5,3?静置22小时，过滤，滤液用乳酸 调pH值7. 2,在15500r/min离心6分钟，取上清液用截取分子量为1〇万的超滤膜超滤，保 留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为 8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2. 5mg/ml，得到甜瓜子提取液；加入活 性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经〇. 22 μ m滤芯过 滤，浓缩至多肽含量为4mg/ml，灌装，得到注射液；
[0026] 试验4组：药物组合物鹿骨400g，甜瓜子100g，制备成注射液，其中游离氨基酸占 多肽重量的7.5%。
[0027]取鹿骨去掉骨髓，取400g粉碎，取甜瓜子，粉碎，加入鹿骨和甜瓜子重量的3倍的 注射用水，121°C提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用酒石酸调PH值为3. 0,0°C 静置I6小时，过滤，滤液用乙二胺调ρΗ10· 0,0°C静置16小时，过滤，滤液用酒石酸调pH值 7. 0,在16000r/min离心8分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过 液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的 超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml，得到甜瓜子提取液；加入活性炭，过 滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0. 22 μ m滤芯过滤，浓缩 至多肽含量为4mg/ml，灌装，得到注射液；
[0028] 试验5组：药物组合物鹿骨400g，甜瓜子100g，制备成注射液，其中游离氨基酸占 多肽重量的2. 90%。
[0029] 取鹿骨去掉骨髓，取400g粉碎，取甜瓜子，粉碎，加入鹿骨和甜瓜子重量的3倍的 注射用水，12, 4°C提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用枸橼酸调pH值为3. 0， 2Γ静置22小时，过滤，滤液用枸橼酸钠调pH10. 0,2?静置22小时，过滤，滤液用枸橼酸 调pH值7. 0,在1600〇r/min离心8分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保 留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为 8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2. 5mg/ml，得到甜瓜子提取液；加入活 性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经ο. 22 μ m滤芯过 滤，浓缩至多肽含量为4mg/ml，灌装，得到注射液；
[0030] 增加骨密度试验
[0031] 试验动物：ICR小鼠，雄性。
[0032] 试验仪器：骨密度测定仪。
[0033]试验方法：将小鼠按体重随机分组，除正常对照组15只外，其余各组均为17只。 分组后的第2山称重，腹腔注射〇. 1%戊巴比妥钠（〇· imi/10g)麻醉，手术野常规消毒后摘 除辜丸，止血甜夹闭，不缝合。手术后腹腔注射环丙沙星（〇· lml/10g),连续3d，手术7d后 给药。除正常对照组外，其余各组均每周肌注地塞米松2次，每次〇· iml (〇. 〇img/i〇g)。各 试验药物组腹腔给药，给药量为1· 5mg/kg，每天1次，连续给药15天，测定处死小鼠，取右侧 股骨测骨密度。试验结果见表1。 '
[0034] 表1对骨质疏松症模型小鼠骨密度的影响 [0035]
[0036]注：与模型组比较 **P < 〇. 〇1，*P
【权利要求】
1. 一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物，药物组合物原料为鹿骨和甜瓜子制备的注 射制剂，其特征在于该药物组合物制备成的制剂中游离氨基酸占多肽重量小于等于20. 0% 大于等于3. 01%。
2. 根据权利要求1所述的一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物，其中游离氨基酸占 多肽重量小于等于15.0%大于等于3.0%。
3. 根据权利要求1所述的一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物，其中制剂中游离氨 基酸占多肽重量小于等于1〇.〇%小于等于5.0%。
4. 根据权利要求1所述的一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物，其中制剂中游离氨 基酸包括门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨 酸、缬氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸。
5. 根据权利要求1所述的一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物，其中鹿骨和甜瓜子 的重量比为1-4 : 1-4。
6. 根据权利要求1所述的一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物，其中注射制剂包括 注射液和粉针剂。
7. 根据权利要求1所述的一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物，其中注射制剂的制 备方法为： 取鹿骨去掉骨髓，粉碎，取甜瓜子，粉碎，加入鹿骨和甜瓜子重量的2-4倍的注射用 水，120°C _125°C提取3次，每次3小时-5小时，合并提取液，过滤，滤液用酸调pH值为 2.5-3.5,0°C _5°C静置 12-24 小时，过滤，滤液用碱调 pH9.0-lL0,0°C _5°C静置 12-24 小 时，过滤，滤液用酸调pH值6. 5-7. 5,在15000-17000r/min离心5-10分钟，取上清液用截 取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤， 保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量 l-3mg/ml，得到鹿骨甜瓜子提取液；加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超 滤，保留透过液，透过液经0. 22 μ m滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，得到注射 液； 或者加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经 0. 22 μ m滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，冷冻干燥，得到冻干粉针剂。
8. 根据权利要求7所述的一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物，其中注射剂的制备 方法中酸为醋酸、枸橼酸、马来酸、乳酸或酒石酸。
9. 根据权利要求7所述的一种原料为鹿骨和甜瓜子的药物组合物，其中注射剂的制备 方法中碱为枸橼酸钠、醋酸钠、二乙醇胺或乙二胺。
【文档编号】A61K36/42GK104248653SQ201310257434
【公开日】2014年12月31日 申请日期:2013年6月26日 优先权日:2013年6月26日
【发明者】朱吉满 申请人:哈尔滨誉衡药业股份有限公司