聚合物胶束及其制备方法和抗肿瘤药物组合物、制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种聚合物胶束及其制备方法和抗肿瘤药物组合物、制剂及其制备方法。该聚合物胶束包括作为外壳的多糖和作为内核的视黄醛，其中，所述视黄醛通过腙键接枝于所述多糖上。腙键具有pH敏感性，只在特定的pH环境下才会断裂而实现所负载的药物的完整释放，不会破坏该药物的活性基团，因此该聚合物胶束具有较高的稳定性；并且，由于视黄醛和多糖本身的特性，使得该聚合物胶束具有较高的生物相容性。
【专利说明】聚合物胶束及其制备方法和抗肿瘤药物组合物、制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及纳米医学【技术领域】，特别是涉及一种聚合物胶束及其制备方法和抗肿瘤药物、制剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]癌症是当今最为常见的危害人类健康并导致死亡的主要病因之一。在中国，每年癌症死亡的人数已居各类病因之首。肿瘤化疗是当今治疗癌症最常用的方法之一，但大多数化疗药物溶解性差，人体内药物无选择性且容易产生耐药性，从而限制了其在临床癌症治疗中的应用。
[0003]近几年来，纳米技术的快速发展导致纳米医学的兴起。纳米医学是一种新型的医学领域，是指借助纳米尺寸的材料作为药物载体来传送药物、基因、蛋白质和显影剂等等。作为载体的纳米尺寸材料主要包括纳米凝胶、纳米微球、微胶囊、脂质体、聚合物胶束等等。其中，聚合物胶束是由两亲性的聚合物在水性介质中自组装而形成，由疏水段和亲水段共同组成，具有独特的核-壳结构，其中疏水性内核被亲水性外壳包围。
[0004]纳米医学的兴起，尤其是聚合物胶束这种纳米药物载体的发展，为癌症的治疗提供了新的希望。聚合物胶束广泛应用于抗肿瘤药物传递系统是其作为药物传递系统表现出独特的优势，与低分子量的表面活性剂相比，聚合物胶束具有较低的临界胶束浓度，可以在体液这种大的稀释环境下，仍然保持聚合物载药系统良好的稳定性，有利于癌症的治疗。
[0005]然而，目前的聚合物胶束由于聚合物潜在的毒性、在体内较差的生物相容性和较低的稳定性而难以应用于临床。
【发明内容】
[0006]基于此，有必要提供一种生物相容性较高、稳定性较高的聚合物胶束及其制备方法。
[0007]进一步，提供一种抗肿瘤药物组合物。
[0008]进一步，还提供一种抗肿瘤药物制剂及其制备方法。
[0009]一种聚合物胶束，包括作为外壳的多糖和作为内核的视黄醛，其中，所述视黄醛通过腙键接枝于所述多糖上。
[0010]在其中一个实施例中，所述多糖和视黄醛的质量比为10?100:20?500。
[0011]在其中一个实施例中，所述多糖为葡聚糖、海藻酸钠、透明质酸、肝素、硫酸软骨素、支链淀粉、果胶、直链淀粉或环糊精。
[0012]在其中一个实施例中，所述视黄醛为全反式视黄醛或11-顺视黄醛。
[0013]一种聚合物胶束的制备方法，包括如下步骤:
[0014]在多糖的羟基上连上联肼得到连上联肼的多糖，将视黄醛和所述连上联肼的多糖溶于溶剂中，于常温反应24?48小时，分离纯化并干燥后得到所述聚合物胶束。
[0015]在其中一个实施例中，所述在多糖的羟基上连上联肼得到连上联肼的多糖的步骤包括:
[0016]将所述多糖溶于第一溶剂中，然后加入吡啶和氯甲酸对硝基苯酯，并加入催化剂，在冰浴条件下反应4?24小时，分离纯化并干燥后得到中间产物 '及
[0017]将所述中间产物溶于第二溶剂中，加入水合肼，反应24?48小时，分离纯化并干燥后得到所述连上联肼的多糖。
[0018]在其中一个实施例中，所述分离纯化并干燥后得到所述聚合物胶束的步骤中，分离纯化的方法具体为:将反应物在所述溶剂中透析2?5天，然后在于超纯水中透析2?5天，真空冷冻干燥得到所述聚合物胶束。
[0019]一种抗肿瘤药物组合物，包括上述聚合物胶束和负载于所述聚合物胶束上的抗肿瘤药物。
[0020]在其中一个实施例中，所述抗肿瘤药物为阿霉素、紫杉醇、多烯紫杉醇、氟尿嘧啶、长春新碱、顺钼、卡钼或视黄酸。
[0021]在其中一个实施例中，所述抗肿瘤药物的质量为所述抗肿瘤药物组合物的质量的1% ?12%。
[0022]一种抗肿瘤药物制剂，包括超纯水和溶解于所述超纯水中的上述抗肿瘤药物组合物。
[0023]在其中一个实施例中，所述抗肿瘤药物组合物的浓度为I?10mg/L。
[0024]一种抗肿瘤药物制剂的制备方法，包括如下步骤:
[0025]将上述聚合物胶束溶于有机溶剂中，然后加入抗肿瘤药物，于室温下搅拌，混合均匀后用超纯水透析，无菌处理后得到所述抗肿瘤药物制剂。
[0026]上述聚合物胶束的视黄醛通过腙键接枝于多糖上，腙键具有pH敏感性，只在特定的PH环境下才会断裂而实现所负载的药物的完整释放，不会破坏该药物的活性基团，因此该聚合物胶束具有较高的稳定性；并且，由于视黄醛和多糖本身的特性，使得该聚合物胶束具有较高的生物相容性。
【专利附图】
【附图说明】
[0027]图1为一实施方式的聚合物胶束的结构示意图；
[0028]图2为一实施方式的聚合物胶束的制备方法的示意图；
[0029]图3为一实施方式的抗肿瘤药物组合物的结构示意图；
[0030]图4为一实施方式的抗肿瘤药物制剂的制备方法的示意图；
[0031]图5为实施例1的聚合物胶束的扫描电镜图；
[0032]图6为不同pH条件下实施例1的抗肿瘤药物制剂中的阿霉素释放曲线；
[0033]图7为阿霉素制剂、聚合物胶束制剂和实施例1的抗肿瘤药物制剂对人乳腺癌MCF-7细胞毒性检测结构图；
[0034]图8为人乳腺癌MCF-7细胞在不同时间点对阿霉素制剂和实施例1的抗肿瘤药物制剂中的阿霉素的摄取情况检测结果图；
[0035]图9为生理盐水、阿霉素制剂、实施例1的聚合物胶束制剂和实施例1的抗肿瘤药物制剂在裸鼠体内抗肿瘤作用的检测结果图。
【具体实施方式】
[0036]为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的【具体实施方式】做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
[0037]请参阅图1，一实施方式的聚合物胶束100，包括多为外壳10的多糖和作为内核30的视黄醛。多糖为亲水性外壳，视黄醛为疏水性内核，视黄醛和多糖形成疏水-亲水两亲性核-壳结构，外壳10和内核30通过腙键20连接。
[0038]多糖为天然多糖。天然多糖具有较高的稳定性、安全、低毒性、亲水性、易于化学修饰和可生物降解等特性。
[0039]优选地，多糖为葡聚糖(Dextran)、海藻酸钠(Alginate)、透明质酸(Hyaluronicacid)、肝素(Heparin)、硫酸软骨素(Chondroitin sulphate)、支链淀粉(Pullulan)、果胶(Pectin)、直链淀粉(Amylose)或环糊精(Cyclodextrin)。
[0040]更优选地，多糖为葡聚糖。葡萄糖作为一种水溶性且分子量均一的多糖，是形成聚合物胶束的最佳候选材料之一。葡聚糖为葡萄糖通过1，6-糖苷键形成的多聚糖，具有较好的生物相容性、生物可降解性和水溶性,且其降解产物为内源性物质,使得该聚合物胶束100具有较高的生物相容性。
[0041]并且，葡聚糖能够克服肿瘤耐药细胞的耐药性，可避免血清蛋白的吸附和内皮网状系统的清除效应，从而延长聚合物胶束100的体内循环时间。因而，将上述聚合物胶束100负载抗肿瘤药物得到的药物组合物用于治疗癌症时，能够延长抗肿瘤药物的作用时间，提闻疗效。
[0042]视黄醛为全反式视黄醛或11-顺视黄醛。
[0043]视黄醛通过腙键接枝在多糖上。腙键具有pH敏感性，在肿瘤局部的弱酸环境下，腙键就会断裂，从而会释放疏水性核内包裹的药物，该药物会从聚合物胶束上脱落下来仍然能保持原来的结构不变，不会破坏药物的活性官能团。但是这种体系在正常生理PH条件下是稳定的，因而能够在肿瘤部位定点释放。
[0044]同时，在肿瘤局部的弱酸环境下，视黄醛能完整地从多糖上脱落下来，并在体内转化成视黄酸。视黄酸是多功能的细胞功能调节物，其调节范围非常广泛，包括细胞分化、细胞生长、细胞增殖和细胞凋亡等。由视黄醛转化而来的视黄酸能够进一步抑制肿瘤细胞的生长。
[0045]全反式视磺酸对多种肿瘤有抑制作用，例如结肠癌、白血病、消化道肿瘤、肺癌等。并且,全反式视磺酸能够提高肿瘤细胞对抗肿瘤药物的敏感性,有利于提高疗效。因此,视黄醛优选为全反式视黄醛，以在体内转化为全反式视黄酸。
[0046]优选地，多糖和视黄醛的质量比为10?100:20?500，以较好地综合多糖和视黄醛的作用，使该聚合物胶束100在获得较高的生物相容性和较高的稳定性的同时，能够延长用该聚合物胶束100负载的药物的作用时间，并使全反式视黄酸与药物协同作用，提高疗效。
[0047]上述聚合物胶束100的视黄醛通过腙键接枝于多糖上，腙键具有pH敏感性，只在特定的pH环境下才会断裂而实现所负载的药物的完整释放，不会破坏该药物的活性基团，因此该聚合物胶束100具有较高的稳定性；并且，由于视黄醛和多糖本身的特性，使得该聚合物胶束100具有较高的生物相容性。
[0048]由于该聚合物胶束100具有较高的稳定性，其腙键只在特定的pH环境下才会断裂，有利于该聚合物胶束100负载的药物的定点、靶向释放，可通过实体瘤的高通透性和滞留效应(EPR效应)将聚合物胶束100被动靶向肿瘤细胞，实现药物在肿瘤部位的有效聚集，提高对肿瘤组织的杀伤力，并降低对正常组织的损害。
[0049]因此，上述聚合物胶束100是一种非常安全高效的药物载体。
[0050]该聚合物胶束100为球形。该聚合物胶束100的直径为90纳米?120纳米。该聚合物胶束100的粒径较小，负载能力强，载药率高。
[0051]一实施方式聚合物胶束的制备方法，包括如下步骤:
[0052]在多糖的羟基上连上联肼得到连上联肼的多糖，将视黄醛和连上联肼的多糖溶于溶剂中，于常温反应12?48小时，分离纯化并干燥后得到所述聚合物胶束。
[0053]在多糖的羟基上连上联肼得到连上联肼的多糖的步骤包括下述步骤SllO和步骤S120。
[0054]步骤SllO:将多糖溶于第一溶剂中，然后加入吡啶和氯甲酸对硝基苯酯，并加入催化剂，在冰浴条件下反应4?24小时，分离纯化并干燥后得到中间产物。
[0055]第一溶剂为能够溶解多糖、吡啶、氯甲酸对硝基苯酯和催化剂的溶剂，优选为二甲基亚讽。
[0056]优选地，多糖在第一溶剂中的浓度为50?100mg/mL。
[0057]吡啶的作用是提供碱性环境有利于反应的进行。优选地，吡啶与第一溶剂的体积相等。
[0058]氯甲酸对硝基苯酯作为反应物。优选地，氯甲酸对硝基苯酯的浓度为30?60mg/
mLo
[0059]催化剂为能够催化多糖和氯甲酸对硝基苯酯反应的催化剂，优选为4-( 二甲氨基)吡啶。优选地，催化剂与多糖的质量比为37.2:1000。
[0060]优选地，分离纯化的方法具体为:用乙醇沉淀反应物，再用乙醇洗涤3?4次，然后用乙醚洗涤2次。
[0061 ] 可以理解，分离纯化的方法不限于此，任何可以将上述中间产物提纯的方法均可以用来提纯该中间产物。
[0062]步骤S120:将中间产物溶于第二溶剂中，加入水合肼，反应12?48小时，分离纯化并干燥后得到连上联肼的多糖。
[0063]第二溶剂为能够溶解上述中间产物和水合肼的溶剂，优选为水。
[0064]水合肼过量，以利于反应进行。优选地，中间产物与水合肼的质量比为5:3。
[0065]优选地，分离纯化的方法具体为:用3500截留分子量的透析袋在超纯水中透析3天。
[0066]可以理解，分离纯化的方法不限于此，任何可以将上述连上联肼的多糖提纯的方法均可以采用。
[0067]干燥采用真空冷冻干燥。
[0068]将视黄醛和制备得到的连上联肼的多糖溶于溶剂中，溶剂优选为二甲基桠枫，于室温下反应12?48小时后，分离纯化得到聚合物胶束。连上联肼的多糖与视黄醛进行反应生成聚合物胶束的步骤如图2所示。
[0069]优选地，分离纯化的方法具体为:将反应物在溶剂中透析2?5天，然后在于超纯水中透析2?5天，真空冷冻干燥得到聚合物胶束。
[0070]首先将反应物在溶剂中透析2?5天，用于透析的溶剂与反应溶剂相同，以将未反应的视黄醛除去，然后在超纯水中透析2?5天，以将其他水溶性杂质除去，得到纯度高的聚合物胶束。
[0071]上述聚合物胶束的制备方法工艺简单，反应条件温和，能耗低，制备成本低。
[0072]请参阅图3，一实施方式的抗肿瘤药物组合物200，包括上述聚合物胶束100和负载于聚合物胶束100上的抗肿瘤药物。图3中，100为上述聚合物胶束，40为抗肿瘤药物。
[0073]抗肿瘤药物为疏水性药物，优选为阿霉素、紫杉醇、多烯紫杉醇、氟尿嘧啶、长春新碱、顺钼、卡钼或视黄酸。
[0074]疏水性的抗肿瘤药物被上述聚合物胶束100的疏水内核包裹而负载在聚合物胶束100上。
[0075]优选地，抗肿瘤药物的质量为抗肿瘤药物组合物的质量的1%?12%。在该质量配比下，能够较好地发挥抗肿瘤药物和由视黄醛转化而来的视黄酸的协调作用，提高疗效。
[0076]上述抗肿瘤药物组合物200使用上述聚合物胶束100作为载体，该聚合物胶束100的腙键能够在肿瘤局部的弱酸环境下断裂而释放疏水性内核包裹的抗肿瘤药物，该抗肿瘤药物的活性基团没有受到破坏，能够实现抗肿瘤药物在肿瘤组织快速、定点、靶向释放。并且，由于上述聚合物胶束100具有较高的生物相容性和较低的细胞毒性，使得该抗肿瘤药物组合物200对人体的毒性比较小，能够广泛应用于临床。
[0077]—实施方式的抗肿瘤药物制剂，包括超纯水和溶解于超纯水中的上述抗肿瘤药物组合物200。超纯水和抗肿瘤药物组合物200形成液体针剂。
[0078]优选地，该抗肿瘤药物组合物200在超纯水中浓度为I?10mg/L。
[0079]该抗肿瘤药物制剂的Zeta电位大小约为_14mv。
[0080]使用这种抗肿瘤药物制剂治疗肿瘤，该制剂中的抗肿瘤药物能够在靶点快速释放，疗效较好；并且，该制剂对人体的毒性较小，能够在有效治疗肿瘤的同时，极大地减少对人体产生的副作用。
[0081]该抗肿瘤药物制剂主要用于恶性肿瘤的治疗。应用时，采用静脉注射进行给药。
[0082]一实施方式的抗肿瘤药物制剂的制备方法，包括如下步骤:
[0083]将上述聚合物胶束100溶于有机溶剂中，然后加入抗肿瘤药物，于室温下搅拌，混合均匀后用超纯水透析，得到抗肿瘤制剂。
[0084]抗肿瘤药物优选为阿霉素、紫杉醇、多烯紫杉醇、氟尿嘧啶、长春新碱、顺钼、卡钼或视黄酸。
[0085]有机溶剂为能够溶解聚合物胶束和抗肿瘤药物的溶剂，优选为二甲基亚砜。有机溶剂的用量应保证能够充分溶解聚合物胶束和抗肿瘤药物。
[0086]于室温下搅拌，使聚合物胶束和抗肿瘤药物混合均匀。优选地,搅拌30小时。
[0087]请参阅图4，聚合物胶束100和抗肿瘤药物混合均匀后用超纯水进行透析，聚合物胶束100和抗肿瘤药物在超纯水中自组装，抗肿瘤药物通过疏水作用被聚合物胶束100的疏水内核包裹而负载于聚合物胶束100上，形成溶于超纯水中的抗肿瘤药物组合物，再进行无菌处理后得到抗肿瘤药物制剂。
[0088]优选地，超纯水透析的时间为24小时。
[0089]无菌处理的方法优选为用220nm无菌滤头进行过滤。这种无菌处理方法无需加热，避免热对抗肿瘤药物组合物产生不良影响。
[0090]上述抗肿瘤药物制剂的制备方法制备工艺简单，聚合物胶束和抗肿瘤药物在水中就能自组装成抗肿瘤药物组合物，便于操作、推广。
[0091]以下通过具体实施例进一步阐述。
[0092]实施例1
[0093]制备抗肿瘤药物制剂及其特性研究
[0094](I)制备聚合物胶束
[0095]将Ig葡聚糖溶于20ml 二甲基亚砜中，待充分溶解后加入20ml吡啶，再加入0.618g的氯甲酸对硝基苯酯和37.2mg4-( 二甲氨基)吡啶，在冰浴条件下反应4小时后用乙醇沉淀，再用乙醇洗涤3次，然后用乙醚洗涤2次，将干燥后得到的中间产物充分溶解在水中，加入过量水合肼反应24小时，然后采用3500截留分子量的透析袋在超纯水溶液中透析3天，冻干后得到连上联肼的多糖，连上联肼的多糖与视黄醛按质量比为5:3在二甲基亚砜中、常温下反应24小时后，先在二甲基亚砜中透析2天，去除掉未反应的视黄醛，之后在超纯水中透析3天，真空冷冻干燥后得到聚合物胶束。
[0096]该聚合物胶束的扫描电镜图见图5。由图5可见，该聚合物胶束的粒径为90纳米?120纳米。
[0097]( 2 )制备抗肿瘤药物制剂
[0098]量取上述聚合物胶束10质量份，充分溶解在一定体积的二甲基亚砜中，称取阿霉素I质量份加入到上述的溶液中，室温条件下搅拌30min，再在超纯水中透析24小时，然后用220nm无菌滤头过滤，得到抗肿瘤药物制剂，表示为DD。
[0099](3)测试上述抗肿瘤药物制剂的阿霉素的释放的影响
[0100]为了测试该抗肿瘤药物制剂的阿霉素释放情况，制备过程中，在超纯水中透析24小时后，分成等三份装入不同的透析袋，然后将透析袋分别浸没在pH5.0、pH6.5和pH7.4三个不同PH条件的磷酸盐缓冲液(PBS)中，用37°C、150rpm摇床模拟体内环境，不同时间点取外液测阿霉素的浓度，同时补入相同体积相同PH的PBS，结果如图6所示。在pH=7.4条件下，24小时阿霉素都几乎不释放，在pH=6.5时释放也非常缓慢，但在pH=5.0时阿霉素的释放非常迅速。由于肿瘤细胞的溶酶体内PH值约为5.0,因此，该抗肿瘤药物制剂能实现阿霉素在肿瘤细胞内的靶向、快速释放。
[0101](4)上述抗肿瘤药物制剂对人乳腺癌MCF-7细胞毒性检测
[0102]将人乳腺癌MCF-7细胞以3X 105/ml接种在96孔板中，每孔100 μ 1，培养过夜后分别加入游离的阿霉素制剂(Dox)、上述抗肿瘤药物制剂(DD)和上述聚合胶束制剂(DR)，Dox和DD中，阿霉素的剂量依次采用了 0.1,0.25,0.5、1、2和4μ g/mL六个不同的剂量，DR中的聚合物胶束的量与DD中阿霉素的量一致，每个孔的体积为100 μ I。于37°C，5%C02条件下培养44小时，再加入MTT继续培养4小时后，将培养液吸出，每个孔中加入150μ I 二甲基亚砜，待结晶紫充分溶解后，读取OD49tl的值，结果如图7所示。由图7看出，DD具有很好的杀死肿瘤细胞的作用，说明DD中的阿霉素能很好的被细胞摄取并且释放出来，DR具有较低的细胞毒性。
[0103]该测试结果表明，聚合物胶束对细胞的毒性小，且用该聚合物胶束包裹阿霉素后，能很好的释放，能有效的杀死肿瘤细胞。单纯的阿霉素制剂对细胞的毒性较大，用上述聚合物胶束进行负载后，较小了细胞毒性。
[0104](5)人乳腺癌MCF-7细胞在不同时间点对上述抗肿瘤药物制剂中的阿霉素的摄取情况检测
[0105]将人乳腺癌MCF-7细胞以5X 104/ml接种在24孔板中，每孔1ml，培养过夜后分别加入游离的阿霉素制剂(Dox)和上述抗肿瘤药物制剂(DD)，采用阿霉素的剂量是I μ g/ml,I小时、6小时、12小时和24小时四个不同的取样点，采用流式细胞仪检测摄取了阿霉素的阳性细胞数，检测结果如图8所示。由图8可看出，DD能很好的被人乳腺癌MCF-7细胞摄取，并且随着时间的推移，阳性细胞数越多。
[0106](6)上述抗肿瘤药物制剂在裸鼠体内抗肿瘤作用的研究
[0107]在4?8周的裸鼠臀背部皮下接种人乳腺癌MCF-7细胞(每只裸鼠的接种量为2 X 16细胞，细胞重悬在10ul无血清的DMEM培养基中)，等瘤长到10mm3后开始治疗，实验分为生理盐水组(Saline)、游离阿霉素组(Dox)、上述聚合物胶束组(DR)和上述抗肿瘤药物制剂组(DD)。Dox的用量为1.5mg/Kg, DR的用量与DD中的多糖纳米胶束载体的用量相当。结果如图9所示。由图9可看出，DD组能很好的抑制肿瘤生长，游离的阿霉素(Dox)虽然在体外有很好的杀死肿瘤细胞的作用，但在体内抗肿瘤效果很差，这说明游离的阿霉素不能很好的进入到肿瘤细胞。而DD具有很好的被动靶向的作用，能实现药物在肿瘤部位的有效聚集，且能很好的释放包裹在疏水性核内的阿霉素，从而有效的杀死肿瘤细胞。并且单独的聚合物胶束载体也表现出很好的抗肿瘤效果，这主要是由于视黄醛的作用得到体现。
[0108]实施例2
[0109]制备抗肿瘤药物制剂
[0110](I)制备聚合物胶束
[0111]将Ig直链淀粉溶于15ml 二甲基亚砜中，待充分溶解后加入15ml吡啶，再加入0.618g的氯甲酸对硝基苯酯和37.2mg4-( 二甲氨基)吡啶，在冰浴条件下反应4小时后用乙醇沉淀，再用乙醇洗涤3次，然后用乙醚洗涤2次，将干燥后得到的中间产物充分溶解在水中，加入过量水合肼反应4小时，然后采用3500截留分子量的透析袋在超纯水溶液中透析3天，冻干后得到连上联肼的多糖，连上联肼的多糖与视黄醛按质量比为5:3在二甲基亚砜中反应12小时后，先在二甲基亚砜中透析2天，去除掉未反应的视黄醛，之后在超纯水中透析3天，真空冷冻干燥后得到聚合物胶束。
[0112](2)制备抗肿瘤药物制剂
[0113]量取上述聚合物胶束100质量份，充分溶解在一定体积的二甲基亚砜中，称取紫杉醇5质量份加入到上述的溶液中，室温条件下搅拌30min，再在超纯水中透析24小时，然后用220nm无菌滤头过滤，得到抗肿瘤药物制剂。
[0114]实施例3
[0115]制备抗肿瘤药物制剂
[0116](I)制备聚合物胶束
[0117]将Ig海藻酸钠溶于1ml 二甲基亚砜中，待充分溶解后加入1ml吡啶，再加入0.6g的氯甲酸对硝基苯酯和37.2mg4-( 二甲氨基)吡啶，在冰浴条件下反应10小时后用乙醇沉淀，再用乙醇洗涤3次，然后用乙醚洗涤2次，将干燥后得到的中间产物充分溶解在水中，加入过量水合肼反应10小时，然后采用3500截留分子量的透析袋在超纯水溶液中透析3天，冻干后得到连上联肼的多糖，连上联肼的多糖与视黄醛按质量比为5:3在二甲基亚砜中反应48小时后，先在二甲基亚砜中透析5天，去除掉未反应的视黄醛，之后在超纯水中透析5天，真空冷冻干燥后得到聚合物胶束。
[0118](2)制备抗肿瘤药物制剂
[0119]量取上述聚合物胶束100质量份，充分溶解在一定体积的二甲基亚砜中，称取多烯紫杉醇12质量份加入到上述的溶液中，室温条件下搅拌30min，再在超纯水中透析24小时，然后用220nm无菌滤头过滤，得到抗肿瘤药物制剂。
[0120]实施例4
[0121]制备抗肿瘤药物制剂
[0122](I)制备聚合物胶束
[0123]将Ig透明质酸溶于20ml 二甲基亚砜中，待充分溶解后加入20ml吡啶，再加入0.618g的氯甲酸对硝基苯酯和37.2mg4-( 二甲氨基)吡啶，在冰浴条件下反应18小时后用乙醇沉淀，再用乙醇洗涤3次，然后用乙醚洗涤2次，将干燥后得到的中间产物充分溶解在水中，加入过量水合肼反应18小时，然后采用3500截留分子量的透析袋在超纯水溶液中透析3天，冻干后得到连上联肼的多糖，连上联肼的多糖与视黄醛按质量比为5:3在二甲基亚砜中反应30小时后，先在二甲基亚砜中透析4天，去除掉未反应的视黄醛，之后在超纯水中透析4天，真空冷冻干燥后得到聚合物胶束。
[0124](2)制备抗肿瘤药物制剂
[0125]量取上述聚合物胶束99质量份，充分溶解在一定体积的二甲基亚砜中，称取多烯紫杉醇I质量份加入到上述的溶液中，室温条件下搅拌30min，再在超纯水中透析24小时，然后用220nm无菌滤头过滤，得到抗肿瘤药物制剂。
[0126]实施例5
[0127](I)制备聚合物胶束
[0128]将Ig透明质酸溶于20ml 二甲基亚砜中，待充分溶解后加入20ml吡啶，再加入0.618g的氯甲酸对硝基苯酯和37.2mg4-( 二甲氨基)吡啶，在冰浴条件下反应15小时后用乙醇沉淀，再用乙醇洗涤3次，然后用乙醚洗涤2次，将干燥后得到的中间产物充分溶解在水中，加入过量水合肼反应48小时，然后采用3500截留分子量的透析袋在超纯水溶液中透析3天，冻干后得到连上联肼的多糖，连上联肼的多糖与视黄醛按质量比为5:3在二甲基亚砜中反应15小时后，先在二甲基亚砜中透析2天，去除掉未反应的视黄醛，之后在超纯水中透析2天，真空冷冻干燥后得到聚合物胶束。
[0129](2)制备抗肿瘤药物制剂
[0130]量取上述聚合物胶束99质量份，充分溶解在一定体积的二甲基亚砜中，称取多烯紫杉醇I质量份加入到上述的溶液中，室温条件下搅拌30min，再在超纯水中透析24小时，然后用220nm无菌滤头过滤，得到抗肿瘤药物制剂。
[0131]实施例6
[0132](I)制备聚合物胶束
[0133]将Ig环糊精溶于20ml 二甲基亚砜中，待充分溶解后加入20ml吡啶，再加入0.618g的氯甲酸对硝基苯酯和37.2mg4- ( 二甲氨基)吡啶，在冰浴条件下反应20小时后用乙醇沉淀，再用乙醇洗涤3次，然后用乙醚洗涤2次，将干燥后得到的中间产物充分溶解在水中，加入过量水合肼反应32小时，然后采用3500截留分子量的透析袋在超纯水溶液中透析3天，冻干后得到连上联肼的多糖，连上联肼的多糖与视黄醛按质量比为5:3在二甲基亚砜中反应42小时后，先在二甲基亚砜中透析4天，去除掉未反应的视黄醛，之后在超纯水中透析4天，真空冷冻干燥后得到聚合物胶束。
[0134](2)制备抗肿瘤药物制剂
[0135]量取上述聚合物胶束99质量份，充分溶解在一定体积的二甲基亚砜中，称取长春新碱I质量份加入到上述的溶液中，室温条件下搅拌30min，再在超纯水中透析24小时，然后用220nm无菌滤头过滤，得到抗肿瘤药物制剂。
[0136]实施例7
[0137]制备抗肿瘤药物制剂
[0138](I)制备聚合物胶束
[0139]将Ig果胶溶于1ml 二甲基亚砜中，待充分溶解后加入1ml吡啶，再加入0.6g的氯甲酸对硝基苯酯和37.2mg4-( 二甲氨基)吡啶，在冰浴条件下反应20小时后用乙醇沉淀，再用乙醇洗涤3次，然后用乙醚洗涤2次，将干燥后得到的中间产物充分溶解在水中，加入过量水合肼反应20小时，然后采用3500截留分子量的透析袋在超纯水溶液中透析3天，冻干后得到连上联肼的多糖，连上联肼的多糖与视黄醛按质量比为5:3在二甲基亚砜中反应36小时后，先在二甲基亚砜中透析5天，去除掉未反应的视黄醛，之后在超纯水中透析5天，真空冷冻干燥后得到聚合物胶束。
[0140](2)制备抗肿瘤药物制剂
[0141]量取上述聚合物胶束100质量份，充分溶解在一定体积的二甲基亚砜中，称取顺钼12质量份加入到上述的溶液中，室温条件下搅拌30min，再在超纯水中透析24小时，然后用220nm无菌滤头过滤，得到抗肿瘤药物制剂。
[0142]以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【权利要求】
1.一种聚合物胶束，其特征在于，包括作为外壳的多糖和作为内核的视黄醛，其中，所述视黄醛通过腙键接枝于所述多糖上。
2.根据权利要求1所述的聚合物胶束，其特征在于，所述多糖和视黄醛的质量比为10 ?100:20 ?500。
3.根据权利要求1所述的聚合物胶束，其特征在于，所述多糖为葡聚糖、海藻酸钠、透明质酸、肝素、硫酸软骨素、支链淀粉、果胶、直链淀粉或环糊精。
4.根据权利要求1所述的聚合物胶束，其特征在于，所述视黄醛为全反式视黄醛或11-顺视黄醛。
5.一种聚合物胶束的制备方法，包括如下步骤: 在多糖的羟基上连上联肼得到连上联肼的多糖，将视黄醛和所述连上联肼的多糖溶于溶剂中，于常温反应12?48小时，分离纯化并干燥后得到所述聚合物胶束。
6.根据权利要求5所述的聚合物胶束的制备方法，其特征在于，所述在多糖的羟基上连上联肼得到连上联肼的多糖的步骤包括: 将所述多糖溶于第一溶剂中，然后加入吡啶和氯甲酸对硝基苯酯，并加入催化剂，在冰浴条件下反应4?24小时，分离纯化并干燥后得到中间产物；及 将所述中间产物溶于第二溶剂中，加入水合肼，反应12?48小时，分离纯化并干燥后得到所述连上联肼的多糖。
7.根据权利要求5所述的聚合物胶束的制备方法，其特征在于，所述分离纯化并干燥后得到所述聚合物胶束的步骤中，分离纯化的方法具体为:将反应物在所述溶剂中透析2?5天，然后在于超纯水中透析2?5天，真空冷冻干燥得到所述聚合物胶束。
8.一种抗肿瘤药物组合物，其特征在于，包括如权利要求1?4任一项所述的聚合物胶束和负载于所述聚合物胶束上的抗肿瘤药物。
9.根据权利要求8所述的抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述抗肿瘤药物为阿霉素、紫杉醇、多烯紫杉醇、氟尿嘧啶、长春新碱、顺钼、卡钼或视黄酸。
10.根据权利要8所述的抗肿瘤药物组合物，其特征在于，所述抗肿瘤药物的质量为所述抗肿瘤药物组合物的质量的1%?12%。
11.一种抗肿瘤药物制剂，其特征在于，包括超纯水和溶解于所述超纯水中的如权利要求8所述的抗肿瘤药物组合物。
12.根据权利要求8所述的抗肿瘤药物制剂，其特征在于，所述抗肿瘤药物组合物的浓度为I?10mg/Lo
13.一种抗肿瘤药物制剂的制备方法，包括如下步骤: 将如权利要求1?4任一项所述的聚合物胶束溶于有机溶剂中，然后加入抗肿瘤药物，于室温下搅拌，混合均匀后用超纯水透析，无菌处理后得到所述抗肿瘤药物制剂。
【文档编号】A61K31/337GK104434792SQ201310416459
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2013年9月12日 优先权日:2013年9月12日
【发明者】马轶凡, 李萍, 张毅娟, 刘宏, 蔡林涛 申请人:中国科学院深圳先进技术研究院