一种阿氏蒿提取物的制备方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种阿氏蒿提取物的制备方法及其应用。其制备方法是将阿氏蒿提取后，通过两次大孔吸附树脂纯化，得到阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C，将上述阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B和阿氏蒿提取物C按一定比例混合，即为阿氏蒿提取物。该阿氏蒿提取物，可与药学上可接受的载体或其他适宜赋形剂相结合，按照常规方法制成口服给药的剂型，可用于制备治疗肺结核药物。
【专利说明】一种阿氏蒿提取物的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药领域，涉及一种中药材提取物的制备方法及应用，具体是涉及阿氏蒿提取物的制备方法及其在制备治疗肺结核药物中的应用。【背景技术】
[0002]肺结核是由结核分枝杆菌入侵机体后在一定条件下引起发病的慢性传染性疾病。目前全球结核病防治形势严峻，2006年全球新增920万个结核病例，2006年有170万人死于结核病。肺结核的治疗以化学治疗为主，近年来结核病免疫学研究大踏步前进，使人们对结核病的发病、临床经过、预后和复发有了更全面的认识。由于结核病免疫学理论的更新，化学治疗和免疫治疗相结合的疗法成为部分患者有效的治疗模式。近年来大量的中医药基础研究显示，中药治疗有杀菌、抑菌、降低毒性、降低耐药发生率和提高患者免疫功能等优势。
[0003]近年来，耐多药菌株和高耐药率结核杆菌使得难治性肺结核迅速增多。西药“全程联合”化疗模式的肝毒性致命弱点，使得西药治疗肺结核受到局限，中医药治疗结核病成为关注的热点，优势包括:一是中医辨证论治，对症治疗，首先能减轻症状，促进患者抗病能力的恢复，缓解并发症，为病人树立其良好的信心。二是中药复方不易引起病菌耐药性，在治疗耐药性肺结核和减缓结核杆菌变异速度方面具有很大的潜力。
[0004]肺结核初起在肺，久则累及脾肾，甚则传遍五脏，在整个疾病过程中表现为气阴亏耗、阴虚火旺、阴阳两虚等正虚证候。肺结核治则补虚培元、扶正杀虫。治疗中，应注重调补肺脾肾三脏，如《理虚元鉴》:“治虚有三本，肺脾肾是也，肺为五脏之天，脾为百骸之母，肾为万物之源，治肺治脾治肾，治劳之道毕矣”。
[0005]阿氏蒿为菊科植物阿氏蒿Artemisia adamsii Besser的干燥地上部分。夏季花期采收，除去杂质，洗净，晾干水气，切段，揉搓出香气，阴干，干燥。收载于《中华人民共和国卫生部药品标准藏药(第一册)》，标准编号:WS3-BC-0050-95。性寒，味苦。具有清热解毒之功效。用于肺炎，胃炎，喉炎，扁桃体炎，结膜炎等。为我国藏蒙等少数民族地区的常用药物。但有关阿氏蒿的基础研究尚十分有限，使该药材的后续推广和应用受到限制。现代研究关于阿氏蒿的化学成分及药理作用鲜有报道。
[0006]国内专利检索，未见阿氏蒿相关专利报道。
[0007]上述文献及专利等，尚未见阿氏蒿或阿氏蒿提取物用于制备治疗肺结核药物的报道。
【发明内容】
[0008]本发明的目的在于提供一种阿氏蒿提取物的制备方法及其在制备治疗肺结核药物中的应用。
[0009]本发明所用阿氏蒿为菊科植物阿氏蒿Artemisia adamsii Besser的干燥地上部分。[0010]本发明一种阿氏蒿提取物的制备方法及其应用，其特征在于所述阿氏蒿提取物的制备方法为:
(1)阿氏蒿，用浓度80%-100%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的8-15倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，得阿氏蒿提取物A ;
(2)将步骤(1)得到药渣A用浓度0-20%乙醇为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的8-15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.10-1.12，滤过，得药液B ;
(3)将步骤(2)得到的药液B，通过非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过极性大孔树脂柱，再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱非极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物B ;再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物C ;
(4)上述阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C，其中一种或两种或三种按一定比例混匀，即得本发明的阿氏蒿提取物。
[0011]本发明一种阿氏蒿提取物的制备方法为:
(1)阿氏蒿，用浓度80%-100%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的8-15倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，得阿氏蒿提取物A ;
(2)将步骤(1)得到药渣A用浓度0-20%乙醇为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的8-15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.10-1.12，滤过，得药液B ;
(3)将步骤(2)得到的药液B，通过非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过极性大孔树脂柱，再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱非极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物B ;再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物C ;
(4)将上述阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C混匀，即得本发明的阿氏蒿提取物。
[0012]优选的本发明一种阿氏蒿提取物的制备方法为:
(O阿氏蒿，用浓度95%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的12倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，得阿氏蒿提取物A ;
(2)将步骤(1)得到药渣A用水为溶剂，加热回流提取，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的12倍，滤过，提取液浓缩至相对密度d=l.11，滤过，得药液B ；
(3)将步骤(2)得到的药 液B，通过DlOl非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过HPD600极性大孔树脂柱，再用浓度60%的乙醇溶液洗脱DlOl非极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物B ;再用浓度60%的乙醇溶液洗脱HPD600极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物C;(4)将上述阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C混匀，即得本发明的阿氏蒿提取物。
[0013]本发明的阿氏蒿提取物的制备方法，所采用的非极性大孔吸附树脂为DlOl大孔吸附树脂、AB-8大孔吸附树脂；所采用的极性大孔吸附树脂为X-5大孔吸附树脂、LSA-40大孔吸附树脂、HPD600大孔吸附树脂。
[0014]本发明的阿氏蒿提取物，可通过加入药剂学允许的各种辅料，制成药剂学上的片剂、颗粒剂、胶囊等口服剂型。
[0015]本发明的一种阿氏蒿提取物的制备方法及其应用，所述的应用为在制备治疗肺结核药物中的应用。即本发明的一种阿氏蒿提取物的制备方法及其在制备治疗肺结核药物中的应用。
[0016]本发明的阿氏蒿提取物、以及阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C，在制备治疗肺结核药物中的应用。均可用于制备治疗肺结核药物。
[0017]本发明的阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C与化学药或中药或天然药物组成治疗肺结核药物。
[0018]本发明的阿氏蒿提取物与化学药或中药或天然药物组成治疗肺结核药物。
[0019]本发明首次对阿氏蒿采用两次大孔吸附树脂纯化技术进行提取物制备研究，分离得到了具有治疗肺结核活性的提取物，包括阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B和阿氏蒿提取物C。制备工艺操作简便，生产成本低，适于工业化大生产。
[0020]本发明提供的阿氏蒿提取物，通过体内抗结核作用研究表明，对牛型结核菌、耐INH菌、耐RFP菌、耐SM菌及耐·INH+RFP+SM的结核菌均有一定的抑制或杀灭作用。体外抗结核作用研究表明，具有显著的抗结核作用。
【具体实施方式】
[0021]下面通过具体实验例和实施例对阿氏蒿提取物的制备方法及其应用做进一步说明但不限于本发明。
[0022]实施例1:阿氏蒿提取物的制备
(1)阿氏蒿30kg，先用浓度95%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的12倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，得阿氏蒿提取物A ;
(2)将步骤(1)得到药渣A用水为溶剂，加热回流提取，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的12倍，滤过，提取液浓缩至相对密度d=l.11，滤过，得药液B ；
(3)将步骤(2)得到的药液B，通过DlOl非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过HPD600极性大孔树脂柱，再用浓度60%的乙醇溶液洗脱DlOl非极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物B ;再用浓度60%的乙醇溶液洗脱HPD600极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物C;
(4)将上述阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C混匀，即得本发明的阿氏蒿提取物。[0023]实施例2:阿氏蒿提取物的制备
(1)阿氏蒿18kg，先用浓度80%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为I次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的15倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，得阿氏蒿提取物A ;
(2)将步骤(1)得到药渣A用浓度10%乙醇为溶剂，加热回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为I小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的8倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.12，滤过，得药液B ；
(3)将步骤(2)得到的药液B，通过AB-8非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过LSA-40极性大孔树脂柱，再用浓度50%的乙醇溶液洗脱AB-8非极性大孔吸附树脂柱，收集50%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物B ;再用浓度70%的乙醇溶液洗脱LSA-40极性大孔吸附树脂柱，收集70%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物C ;
(4)将上述阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C混匀，即得本发明的阿氏蒿提取物。
[0024]实施例3:阿氏蒿提取物的制备
(O阿氏蒿20kg，先用100%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为I小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的8倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，得阿氏蒿提取物A ；
(2)将步骤(1)得到药 渣A用浓度20%乙醇为溶剂，加热回流提取，提取次数为I次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.10，滤过，得药液B ；
(3)将步骤(2)得到的药液B，通过DlOl非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过X-5极性大孔树脂柱，再用浓度70%的乙醇溶液洗脱DlOl非极性大孔吸附树脂柱，收集70%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物B ;再用浓度50%的乙醇溶液洗脱X-5极性大孔吸附树脂柱，收集50%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物C ；
(4)将上述阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C混匀，即得本发明的阿氏蒿提取物。
[0025]实施例4:阿氏蒿提取物片的制备
取实施例1阿氏蒿提取物135g，加入淀粉60g，混匀，制粒，过筛，加微晶纤维素10g，硬脂酸镁0.5g，混匀，压制成500片，即得阿氏蒿提取物片。
[0026]实施例5:阿氏蒿提取物颗粒的制备
取实施例2阿氏蒿提取物135g，加入糊精100g，混匀，制粒，干燥，整粒，即得阿氏蒿提取物颗粒。
[0027]实施例6:阿氏蒿提取物胶囊的制备
取实施例3阿氏蒿提取物135g，加入淀粉40g，混匀，制粒，干燥，整粒，装胶囊1000粒，即得阿氏蒿提取物胶囊。
[0028]实验例1:阿氏蒿提取物体内外抗结核试验。
[0029]1.材料和方法
试验药品:按本发明实施例1方法制备的阿氏蒿提取物、阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C，批号分别为:20110707、20110708、20110709、20110710。临用前用蒸
馏水配成所需浓度的混悬液备用，本实验剂量按g原生药/kg计算。利福平(RPP)胶囊:
0.15gX 100粒，成都锦华药业有限公司出品，批号为110912，有效期至2013-08，临用前用
0.5% CMC配成所需浓度的混悬液备用。
[0030]试验菌株H37RV标准菌(ATCC27294):牛型分支杆菌；单耐RFP菌；单耐INH菌；单耐SM菌；耐INH+SM+RFP菌；均由中国疾病预防控制中心结核病预防控制分中心提供。
[0031]豚鼠:一级动物；雌雄各半，体重:300~320g。生产许可证号:15号，由山东省实验动物研究所提供。
[0032]2.方法与结果
2.1对细菌生长的影响。
[0033]2.1.1体外对结核菌生长的影响最小抑菌浓度(MIC)的测定:采用试管法，将药物分别加入苏通培养基内后，加入定时的菌液(lmg/ml，每支接种0.1 ml)，经37°C培养2周后，每支吸0.1 ml转种于2支改良罗氏(L-J)培养基斜面同时设空白对照管。在含药苏通培养基内培养2周见细菌生长的最小浓度为最小抑菌浓度。最小杀菌浓度(MBC)的测定:将在苏通培养基内未见细菌生长的培养物，分别吸取0.05 ml接种于改良罗氏(L-J)斜面，经37°C培养4周后， 所接种的2支培养基斜面上的菌落数之和少于5个的最小稀释度的药物浓度为该药的最小杀菌浓度。
【权利要求】
1.一种阿氏蒿提取物的制备方法及其应用，其特征在于所述阿氏蒿提取物的制备方法为: (1)阿氏蒿，用浓度80%-100%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的8-15倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，得阿氏蒿提取物A ; (2)将步骤(1)得到药渣A用浓度0-20%乙醇为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的8-15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.10-1.12，滤过，得药液B ; (3)将步骤(2)得到的药液B，通过非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过极性大孔树脂柱，再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱非极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物B ;再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物C ; (4)上述阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C，其中一种或两种或三种按一定比例混匀，即得本发明的阿氏蒿提取物。
2.根据权利要求1所述的一种阿氏蒿提取物的制备方法为: (1)阿氏蒿，用浓度80%-100%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的8-15倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，得阿氏蒿提取物A ; (2)将步骤(1)得到药渣A用浓度0-20%乙醇为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的8-15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.10-1.12，滤过，得药液B ; (3)将步骤(2)得到的药液B，通过非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过极性大孔树脂柱，再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱非极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物B ;再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物C ; (4)将上述阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C混匀，即得本发明的阿氏蒿提取物。
3.根据权利要求1所述的一种阿氏蒿提取物的制备方法为: (1)阿氏蒿，用浓度95%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的12倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，得阿氏蒿提取物A ; (2)将步骤(1)得到药渣A用水为溶剂，加热回流提取，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为阿氏蒿重量的12倍，滤过，提取液浓缩至相对密度d=l.11，滤过，得药液B ； (3)将步骤(2)得到的药液B，通过DlOl非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过HPD600极性大孔树脂柱，再用浓度60%的乙醇溶液洗脱DlOl非极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物B ;再用浓度60%的乙醇溶液洗脱HPD600极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得阿氏蒿提取物C;(4)将上述阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C混匀，即得本发明的阿氏蒿提取物。
4.根据权利要求1、权利要求2所述的阿氏蒿提取物的制备方法，其特征在于:所采用的非极性大孔吸附树脂为DlOl大孔吸附树脂、AB-8大孔吸附树脂；所采用的极性大孔吸附树脂为X-5大孔吸附树脂、LSA-40大孔吸附树脂、HPD600大孔吸附树脂。
5.根据权利要求1、权利要求2、权利要求3所述的阿氏蒿提取物，通过加入药剂学允许的各种辅料，制成药剂学上的片剂、颗粒剂、胶囊等口服剂型。
6.根据权利要求1所述的一种阿氏蒿提取物的制备方法及其应用，所述的应用为在制备治疗肺结核药物中的应用。
7.根据权利要求1所述的阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C在制备治疗肺结核药物中应用。
8.根据权利要求1所述的阿氏蒿提取物A、阿氏蒿提取物B、阿氏蒿提取物C与化学药或中药或天然药物组成治疗肺结核药物。
9.根 据权利要求1所述的阿氏蒿提取物与化学药或中药或天然药物组成治疗肺结核药物。
【文档编号】A61K36/28GK103585228SQ201310527445
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】孔倩倩 申请人:济南星懿医药技术有限公司