一种治疗腰椎间盘突出的中药组合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种服用简单、治疗周期短、治愈率高、疗效巩固、无毒副作用的治疗腰椎间盘突出症的中药组合物，同时还提供其检测方法，具体为对本发明药物制剂中的马钱子、麻黄、赤芍、甘草、鹿衔草、川芎进行鉴别；测定本发明药物制剂中麻黄碱和士的宁的含量；该检测方法重复性好、方便操作有利于控制组合物的质量。
【专利说明】一种治疗腰椎间盘突出的中药组合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种中成药的检测方法，特别是涉及一种治疗腰椎间盘突出的中药组合物的检测方法，属于医药领域。
【背景技术】
[0002]腰椎间盘突出症，又称腰椎间盘纤维环破裂症，或腰椎间盘核突出症，它是纤维环破裂后髓核突出压迫脊神经根而致腰腿痛的一种常见病，多发于壮年体力劳动者，男多于女，其临床症状主要症状表现在：腰、臀、大小腿以至足部反复发作性酸胀、麻痛等不适，严重时可出现肌肉萎缩等症状。腰椎间盘突出症的治疗方法主要有保守治疗和手术治疗两种：一般发病初始除一些特殊情况外，均采取保守治疗，包括腰部理疗、牵引、口服消炎止痛药物、注射糖皮质激素、推拿等；若保守治疗3-6个月以上，症状无缓解或又复发者，则可考虑采用手术治疗，包括髓核摘除术和髓核成形术。我国中医常采用的传统治疗方法包括内服中药汤剂、中药外敷加推拿。但这些治疗方法大多存在疗程长、治愈率低（15^-30%),容易复发、治疗费用高等技术缺陷。 [0003]清代《急救应验良方》九分散为制马钱子、麻黄、乳香、没药。临床应用表明该方对腰椎间盘突出症有较好的治疗作用。但经过我们研究发现，现有制剂存在检测方法落后，产品质量不易控制的缺点。
【发明内容】
[0004]本发明提供一种服用简单、治疗周期短、治愈率高、疗效巩固、无毒副作用的治疗腰椎间盘突出症的药物。还提供其检测方法。
[0005]本发明所述的组合物是由以下重量份的中药原料制成的：
惚木85-95份，老鹳草35-45份，制马钱子1_3份，
鹿衔草35-45份，赤芍35-45份，杜仲40-52份，
麻黄25-35份，川芎25-35份，甘草15-25份，
乳香1_3份，没药(制）1-3份；
为有效控制产品质量，我们建立了此组合物的检测方法法，该方法采用薄层色谱法对马钱子、麻黄、赤芍、甘草、鹿衔草、川芎进行鉴别，采用高效液相色谱法对士的宁、麻黄碱成分进行含量测定。该检测方法精密度、灵敏度及稳定性均好，确保产品质量的“安全、均一、稳定、有效、可控。”
本发明的制剂形式可以包括片剂、胶囊、微丸、滴丸或颗粒剂等口服制剂。
[0006]本发明所述的组合物优选是由以下重量份的中药原料制成的：
惚木90份，老鹳草40份，制马钱子2份，
本发明所述的组合物最优选是由以下重量份的中药原料组成的：
惚木90份，老鹳草40份，制马钱子2份，
鹿衔草40份，赤芍40份，杜仲46份，麻黄30份，川弯30份，甘草20份，
乳香2份，没药(制）2份；
本发明中药组合物的制备方法可以采用以下方法：
通过上述配方的中药原料经过提取或其他方式加工，制成药物活性物质，随后，以该物质为原料，需要时加入药物可接受的载体，按照制剂学的常规技术制成颗粒、片剂、胶囊、微丸或滴丸。所述活性物质可以通过选自以下方式的方法得到，如；通过粉碎、压榨、煅烧、研磨、过筛、渗漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、层析等方法得到，这些活性物质可以是浸膏形式的物质，可以是干浸膏也可以是流浸膏，还可以是高纯度提取物，根据制剂的不同需要决定制成不同的浓度。
[0007]本发明一种制备方式是可以按照下述步骤：所有药材加药材总重5-10倍量的水，浸泡1-2小时后，煎煮2-4次，每次1-2小时，合并滤液，减压浓缩至50~60°C时相对密度
I.15-1. 25，加乙醇搅匀，使药液含醇量达50-70%，静置，滤过，滤液减压回收乙醇并继续浓缩至50~60°C时相对密度I. 20-1. 30，制得本发明药物的活性组分。
[0008]本发明的另一种制备方法是直接粉碎各原料药物，加入一定量的淀粉后，灌入胶囊。
[0009]本发明的中药组合物是由上述11味中药原料组成。
[0010]本发 明的中药组合物，在制成制剂时根据需要可以加入药物可接受的载体，这些载体可以是任何适合制成组合物的载体。
[0011]针对其特点及本发明配方，我们提供了如下检测方法：
本发明所述检测方法包括以下步骤：
对性状进行观察，根据药典的方法对内容物进行检查，对内容物马钱子、麻黄、赤芍、甘草、鹿衔草、川芎进行鉴别，对含有的士的宁、麻黄碱成分进行含量测定。
[0012]因此，本发明的检测方法包括以下步骤：
A.对本发明药物制剂中的马钱子、麻黄、赤芍、甘草、鹿衔草、川芎进行鉴别；
B.测定本发明药物制剂中麻黄碱和士的宁的含量；
其中A鉴别的具体步骤如下：
(O取本品内容物2g，研细，加氢氧化钠试液IOml使溶解，放置10分钟，加入乙醚20ml，超声处理10分钟，放冷，分取乙醚层，滤过，取续滤液10ml，置水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，滤过，滤液作为供试品溶液，另取士的宁对照品，加甲醇制成每Iml含O. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部VIB)试验，吸取上述两种溶液各ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲醇一水（10 ： I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；
(2)取本品颗粒2g，研细，加O.5mol/L氢氧化钠试液50ml，摇散，加氯化钠5g，超声处理10分钟，蒸馏，用盛有O. 5mol/L的盐酸溶液5ml的100ml量瓶接收至近100ml，摇匀，作为供试溶液，另取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成每Iml含O. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲醇一水(15 ： I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；
(3)取本品内容物2g，研细，加乙醚50ml，回流60分钟，滤过，滤液收集备用，药渣挥干乙醚，加氯仿50ml，回流3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水5ml使溶解，加于弱阳离子交换树脂柱上，用50ml水洗脱，洗脱液蒸干，残渣加丙酮20ml使溶解，加活性炭适量脱色滤过，滤液浓缩至约5ml作为供试品溶液，另取芍药苷对照品，加丙酮制成每Iml含O. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲醇一氯仿（10 ： I)为展开剂，在氨蒸气饱和下展开，取出，晾干，喷以10%香草醛硫酸溶液，于105°C加热使斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点；
(4)取鉴别（3)项下的丙酮提取液，挥干丙酮，残渣加氯仿5ml使溶解，作为供试品溶液，另取川芎对照药材lg，加丙酮按供试品溶液制法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲醇一氯仿（5 ： I)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(5)取本品内容物2g，加丙酮50ml，水浴低温回流3小时，滤去丙酮，药渣挥干丙酮，加乙醇40ml，水浴加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次40ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次40ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇20ml使溶解，加活性炭适量，摇匀，放置30分钟，滤过，滤液浓缩至约10ml，作为供试品溶液，另取甘草酸单铵盐对照品，加乙醇制成每Iml含O. 2mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶薄层板上，以氯仿一甲酸一冰醋酸（15 ： I ： I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同 颜色的荧光斑点；
6)取本品内容物2g，加乙醇50ml，水浴加热回流2小时，滤过，滤液中加入等量10%盐酸溶液，水浴加热回流3小时，加水约20ml，蒸去乙醇，用乙酸乙酯提取2次，每次50ml，合并三氯甲烷液，蒸至约20ml，滤过，滤液作为供试品溶液，另取齐墩果酸对照品，加三氯甲烷制成每Iml含O. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烧一甲醇（10:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%硫酸乙醇溶液，100°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯（365nm)下显相同颜色的荧光斑点；
其中B测定含量的具体步骤如下：
(I)士的宁的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以硅胶为填充剂；以环己烧一三氯甲烧一无水甲醇一三乙胺（20:75:5:0. 4)为流动相，流速为1.0ml/min ;检测波长为254nm，理论板数按士的宁峰计算应不低于2000 ；
对照品溶液的制备取士的宁对照品约20mg，精密称定，置200ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每Iml含O. Img的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备取本品颗粒2. Og,精密称定，加氢氧化钠试液15ml使溶解，放置30分钟，精密加入乙醚50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用氯仿补足减失的重量，分取乙醚层，滤过，精密量取续滤液10ml，置水浴蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移并定容至10ml，摇匀，用微孔滤膜（0.45μπι)滤过，滤液作为供试品溶液，测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即
得；
(2)麻黄碱的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛一水(70:30)为流动相；检测波长为280nm，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于2000 ；
对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品适量，加水制成每Iml含10 μ g的溶液，摇匀，精密量取10ml，置25ml量瓶中，加2. 5%盐酸溶液2ml、0. 25mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置60分钟，用2. 5%盐酸溶液调节pH值至中性，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(O. 45 μ m)滤过， 取续滤液，即得；
供试品溶液的制备取本品5粒内容物，精密称定，研细，精密称取约O. 5g，加O. 5mol/L氢氧化钠溶液50ml，加氯化钠5g，超声处理10分钟，蒸馏，用盛有O. 5mol/L盐酸溶液5ml的100ml量瓶接收至近100ml，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取IOml，置25ml量瓶中，加2. 5%盐酸溶液2ml、0. 25mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置60分钟，用2. 5mol/L盐酸溶液调节PH值至中性，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μπι)滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各6μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
【具体实施方式】
[0013]实施例I本发明的中药组合物
惚木52. 2g,老鹳草23. 2g,制马钱子I. 16g，
鹿衔草23. 2g，赤芍23. 2g，杜仲26. I g，
麻黄17. 4，川芎17. 4g，甘草11. 6g，
乳香I. 16g，没药(制）I. 16g ；
以上11味药，将以上所有药材粉碎、细粉混匀，加入一定量的淀粉，灌入胶囊即得。
[0014]
实施例2本发明药物治疗腰椎间盘突出症的临床观察
I、一般资料：
患者35例，男性20例，女性15例，男女比例4 ： 3 ;年龄20-60岁，平均年龄为48岁；病症突发者13例，慢性发作者22例；病程6个月以内者22例，6个月以上者13例；腰椎间盘突出症手术后复发者2例；症型属寒湿型24例，血瘀型11例；腰部CT示突出位置于L3，4间I例，L4、5间16例，L5、SI间8例，L3、4和L4、5同时突出2例，L4、5和，L5、SI同时突出8例；CT示间盘突出位置偏左侧15例，偏右侧11例，中央型9例，突出伴椎管狭窄者2例。
[0015]2、诊断标准
腰椎间盘突出症诊断标准（I)有腰部外伤史，慢性劳损或寒湿者，大部分患者在发病前有慢性腰痛史。（2)腰痛向臀部及下肢放射，腹压增加时疼痛加重。（3)脊柱侧弯，腰椎生理孤度消失或平直，病变部位椎旁压痛，并向下肢放射，腰部活动受限。（4)下肢受累，神经支配区皮肤有感觉过敏或迟钝，病程长者可出现肌肉萎缩，直腿抬高试验和加强试验阳性，膝腱、跟腱反射减弱或消失，拇趾背伸、跖屈肌肌力减弱。（5)X线片检查，脊柱可侧弯.腰椎生理前突消失，病变椎间隙可变窄，相邻边缘椎体骨质增生；CT捡查可显示椎间突出的部位及程度.核磁共振可见病变部位有压挤现象。
[0016]3、治疗方法
口服实施例I的方法制备得到的组合物，I日3次，每次12g，开水冲服，观察4周为一个疗程。作疗效评定。治疗期间，患者以卧床休息为主，停止腰部负重，局部热敷.症状减轻后，积极作腰部锻炼和两下肢交替直腿抬高至最大耐受量。
[0017]4、疗效评定标准
临床痊愈：腰腿痛消失，直腿抬高> 80度，能恢复原工作；
显效：腰腿痛明显减轻，但阴雨天及劳累后仍有症状，直腿抬高60-70度，能参加轻工
作；
好转：腰腿痛减轻，腰部活动功能改善，直腿抬高较治疗前改善；
无效：治疗后症状、体征无改善。
[0018]5、治疗结果：
本组35例，经过4周跟踪治疗，结果：临床痊愈14例，占40%;显效10例，占28. 75%；有效9例·占25.71 无效2例，占5. 72%。总有效率为94. 28%。
[0019]CT对照：经过4周治疗后，进行CT对照.其中，14倒临床痊愈者椎间盘突出范围均有不同程度的缩小，从l_15mm，其余21例CT见椎间盘无明显缩小。
`[0020]随访情况：治疗后半年随访，14例痊愈者无复发；10例显效者无症状加重；9例有效者中.5例症状加重转院治疗,2例无效者已行手术治疗。
[0021]
江某，男，41岁，2006年2月26日，腰痛伴右下肢外侧疼痛、麻木，行走不便。经CT检查，为第3-4腰椎间盘突出症，曾经服用美洛昔康、草乌甲素片，症状无明显好转后，服用本发明中药汤剂，连服20天为I疗程，腰腿痛减轻，腰部活动功能改善。服用2个疗程后，体征消失，直腿抬高70度以上，能恢复正常工作。
[0022]张某，男，37岁，2009年4月13日，自述干活时，腰部异常疼痛，查体：腰部活动受限，脊柱向左侧弯，西医诊断为腰椎间盘突出症。连服10天，精神转佳，疼痛明显减轻，直腿可抬高50度。随访两年未见复发。
[0023]实施例3、实施例I的组合物的检测方法 所述检测方法包括以下步骤：
A.对本发明药物制剂中的马钱子、麻黄、赤芍、甘草、鹿衔草、川芎进行鉴别；
B.测定本发明药物制剂中麻黄碱和士的宁的含量；
其中A鉴别的具体步骤如下：
(O取本品内容物2g，研细，加氢氧化钠试液IOml使溶解，放置10分钟，加入乙醚20ml，超声处理10分钟，放冷，分取乙醚层，滤过，取续滤液10ml，置水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，滤过，滤液作为供试品溶液，另取士的宁对照品，加甲醇制成每Iml含O. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部VIB)试验，吸取上述两种溶液各ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲醇一水（10 ： I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；
(2)取本品颗粒2g，研细，加O. 5mol/L氢氧化钠试液50ml，摇散，加氯化钠5g，超声处理10分钟，蒸馏，用盛有O. 5mol/L的盐酸溶液5ml的100ml量瓶接收至近100ml，摇匀，作为供试溶液，另取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成每Iml含O. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲醇一水(15 ： I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点；
(3 )取本品内容物2g,研细，加乙醚50ml，回流60分钟，滤过，滤液收集备用，药渣挥干乙醚，加氯仿50ml，回流3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水5ml使溶解，加于弱阳离子交换树脂柱上，用50ml水洗脱，洗脱液蒸干，残渣加丙酮20ml使溶解，加活性炭适量脱色滤过，滤液浓缩至约5ml作为供试品溶液，另取芍药苷对照品，加丙酮制成每Iml含O. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲醇一氯仿（10 ： I)为展开剂，在氨蒸气饱和下展开，取出，晾干，喷以10%香草醛硫酸溶液，于105°C加热使斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点；
(4)取鉴别（3)项下的丙酮提取液，挥干丙酮，残渣加氯仿5ml使溶解，作为供试品溶液，另取川芎对照药材lg，加丙酮按供试品溶液制法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μ1，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲醇一氯仿（5 ： I)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(5)取本品内容物2g，加丙酮50ml，水浴低温回流3小时，滤去丙酮，药渣挥干丙酮，加乙醇40ml，水浴加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次40ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次40ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇20ml使溶解，加活性炭适量，摇匀，放置30分钟，滤过，滤液浓缩至约10ml，作为供试品溶液，另取甘草酸单铵盐对照品，加乙醇制成每Iml含O. 2mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶薄层板上，以氯仿一甲酸一冰醋酸（15 ： I ： I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧`光斑点；
6)取本品内容物2g，加乙醇50ml，水浴加热回流2小时，滤过，滤液中加入等量10%盐酸溶液，水浴加热回流3小时，加水约20ml，蒸去乙醇，用乙酸乙酯提取2次，每次50ml，合并三氯甲烷液，蒸至约20ml，滤过，滤液作为供试品溶液，另取齐墩果酸对照品，加三氯甲烷制成每Iml含O. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶薄层板上，以三氯甲烧一甲醇（10:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%硫酸乙醇溶液，100°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯（365nm)下显相同颜色的荧光斑点；
其中B测定含量的具体步骤如下：
(I)士的宁的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以硅胶为填充剂；以环己烷一三氯甲烧一无水甲醇一三乙胺（20:75:5:0. 4)为流动相，流速为1.0ml/min ;检测波长为254nm，理论板数按士的宁峰计算应不低于2000 ；
对照品溶液的制备取士的宁对照品约20mg，精密称定，置200ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每Iml含O. Img的溶液，摇匀，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备取本品颗粒2. Og,精密称定，加氢氧化钠试液15ml使溶解，放置30分钟，精密加入乙醚50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用氯仿补足减失的重量，分取乙醚层，滤过，精密量取续滤液10ml，置水浴蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移并定容至10ml，摇匀，用微孔滤膜（0.45μπι)滤过，滤液作为供试品溶液，
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即
得;
(2)麻黄碱的含量测定 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛一水(70:30)为流动相；检测波长为280nm，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于2000 ；
对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品适量，加水制成每Iml含10 μ g的溶液，摇匀，精密量取10ml，置25ml量瓶中，加2. 5%盐酸溶液2ml、0. 25mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置60分钟，用2. 5%盐酸溶液调节pH值至中性，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(O. 45 μ m)滤过，取续滤液，即得；
供试品溶液的制备取本品5粒内容物，精密称定，研细，精密称取约O. 5g，加O. 5mol/L氢氧化钠溶液50ml，加氯化钠5g，超声处理10分钟，蒸馏，用盛有O. 5mol/L盐酸溶液5ml的100ml量瓶接收至近100ml，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置25ml量瓶中，加
2.5%盐酸溶液2ml、0. 25mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置60分钟，用2. 5mol/L盐酸溶液调节PH值至中性，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μπι)滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各6μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
【权利要求】
1.一种治疗腰椎间盘突出症的中药组合物，其特征在于所述组合物包含以下重量份的中药原料：惚木85-95份，老鹳草35-45份，制马钱子1_3份。
2.根据权利要求1所述的的中药组合物，其特征在于所述组合物包含以下重量份的中药原料：惚木85-95份，老鹳草35-45份，制马钱子1_3份，鹿衔草35-45份，赤芍35-45份，杜仲40-52份，麻黄25-35份，川芎25-35份，甘草15-25份，乳香1-3份，制没药1-3份。
3.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述组合物包含以下重量份的中药原料：惚木90份，老鹳 草40份，制马钱子2份，鹿衔草40份，赤芍40份，杜仲46份，麻黄30份，川芎30份，甘草20份，乳香2份，制没药2份。
4.权利要求1、2和3所述的中药组合物的制备方法，其特征在于：按重量份数，将惚木 85-95份，老鹳草35-45份，制马钱子1_3份，鹿衔草35-45份，赤芍35-45份，杜仲40-52份，麻黄25-35份，川芎25-35份，甘草15-25份，乳香1-3份，制没药1-3份粉碎混匀，加入多少份？淀粉，灌入胶囊，即得。
5.检测权利要求1、2和3所述的一种治疗腰椎间盘突出症的中药组合物的方法，其特征在于：包括以下步骤： A.对本发明药物制剂中的马钱子、麻黄、赤芍、甘草、鹿衔草、川芎进行鉴别； B.测定本发明药物制剂中麻黄碱和士的宁的含量； 其中A鉴别的具体步骤如下： . 1)取本品内容物2g，研细，加氢氧化钠试液IOml使溶解，放置10分钟，加入乙醚20ml，超声处理10分钟，放冷，分取乙醚层，滤过，取滤液10ml，置水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，滤过，滤液作为供试品溶液，另取士的宁对照品，加甲醇制成每Iml含O. Img的溶液，作为对照品溶液，参照《中国药典》2010年版一部VIB中的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲醇一水（10 ： I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点； . 2)取本品颗粒2g，研细，加O.5mol/L氢氧化钠试液50ml，摇散，加氯化钠5g，超声处理10分钟，蒸馏，用盛有O. 5mol/L的盐酸溶液5ml的100ml量瓶接收至近100ml，摇匀，作为供试溶液，另取盐酸麻黄碱对照品加甲醇制成每Iml含O. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲醇一水(15 ： I)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色斑点； . 3 )取本品内容物2g,研细，加乙醚50ml，回流60分钟，滤过，滤液收集备用，药渣挥干乙醚，加氯仿50ml，回流3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水5ml使溶解，加于弱阳离子交换树脂柱上，用50ml水洗脱，洗脱液蒸干，残渣加丙酮20ml使溶解，加活性炭适量脱色滤过，滤液浓缩至约5ml作为供试品溶液，另取芍药苷对照品，加丙酮制成每Iml含O. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶薄层板上，以甲醇一氯仿（10 ： I)为展开剂，在氨蒸气饱和下展开，取出，晾干，喷以10%香草醛硫酸溶液，于105°C加热使斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点； .4)取A鉴别3)中的丙酮提取液，挥干丙酮，残渣加氯仿5ml使溶解，作为供试品溶液，另取川芎对照药材lg，加丙酮按供试品溶液制法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μ 1，分别点于同一硅胶薄层板上，以体积浓度为83. 3%的甲醇溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm波长下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； 5)取本品内容物2g，加丙酮50ml，水浴低温回流3小时，滤去丙酮，药渣挥干丙酮，加乙醇40ml，水浴加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇提取2次，每次40ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次40ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇20ml使溶解，加活性炭适量，摇匀，放置30分钟，滤过，滤液浓缩至约10ml，作为供试品溶液，另取甘草酸单铵盐对照品，加乙醇制成每Iml含O. 2mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶薄层板上，以体积比为15 ： I ： I的氯仿、甲酸和冰醋酸的混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%硫酸乙醇溶液，在105°C加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm波长下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； 6)取本品内容物2g，加乙醇50ml，水浴加热回流2小时，滤过，滤液中加入等量10%盐酸溶液，水浴加热回流3小时，加水约20ml，蒸去乙醇，用乙酸乙酯提取2次，每次50ml，合并三氯甲烷液，蒸至约20ml，滤过，滤液作为供试品溶液，另取齐墩果酸对照品，加三氯甲烷制成每Iml含O. Img的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各ΙΟμΙ，分别点于同一硅胶薄层板上，以体积比为10:1的三氯甲烷和甲醇的混合液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以20%硫酸乙醇溶液，100°C加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯365nm波长下显相同颜色的荧光斑点； 其中B测定含量的具体步骤如下： 1)士的宁的含量测定 色谱条件与系统适用性试验以硅胶为填充剂；以体积比为20:75:5:0. 4的环己烷、三氯甲烷、无水甲醇和三乙胺的混合液为流动相，流速为1.0ml/min ;检测波长为254nm，理论板数按士的宁峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备取士的宁对照品约20mg，精密称定，置200ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每Iml含O. Img的溶液，摇匀，作为对照品溶液； 供试品溶液的制备取本品颗粒2. Og,精密称定，加氢氧化钠试液15ml使溶解，放置30分钟，精密加入乙醚50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，用氯仿补足减失的重量，分取乙醚层，滤过，精密量取续滤液10ml，置水浴蒸干，残渣加醋酸乙酯溶解，转移并定容至IOml，摇匀，用O. 45 μ m微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，SP得; 2)麻黄碱的含量测定 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以70%的乙睛溶液为流动相；检测波长为280nm，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算应不低于2000 ； 对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品适量，加水制成每Iml含10 μ g的溶液，摇匀，精密量取10ml，置25ml量瓶中，加2. 5%盐酸溶液2ml、0. 25mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置60分钟，用2. 5%盐酸溶液调节pH值至中性，加甲醇至刻度，摇匀，用O.45 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得； 供试品溶液的制备取本品5粒内容物，精密称定，研细，精密称取约O. 5g，加O. 5mol/L氢氧化钠溶液50ml，加氯化钠5g，超声处理10分钟，蒸馏，用盛有O. 5mol/L盐酸溶液5ml的100ml量瓶接收至近100ml，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置25ml量瓶中，加.2. 5%盐酸溶液2ml、0. 25mol/L氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置60分钟，用2. 5mol/L盐酸溶液调节PH值至中性，加甲醇至刻度，摇匀，O. 45 μ m用微孔滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液； 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各6μ 1， 注入液相色谱仪，测定，即得。
【文档编号】A61P19/00GK103690606SQ201310692216
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月16日 优先权日:2013年12月16日
【发明者】任亚东, 何建雄, 黄斌, 刘恩桂, 张俊珺 申请人:扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司