一种防治骨质疏松症的药物组合物及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种防治骨质疏松症的药物组合物及其制备方法。本发明公开的一种药物组合物由淫羊藿的提取物和女贞子的提取物组成。本发明具有如下优点：（1）本发明的中药提取物组合物针对OP发病机制之“肾精亏虚、阴阳两虚”的特点，选择平补肾中阴阳之药对淫羊藿、女贞子为研究对象，为开发平补阴阳药对淫羊藿、女贞子有效成分抗骨质疏松的新药提供基础。（2）本发明的中药组合物制剂的原料药资源分布广，毒副作用低，可长期服用。（3）本发明的中药组合物制剂组方精简，有效成分明确，疗效确切，质量可控，且无须传统中药的煎煮过程，服用方便。
【专利说明】一种防治骨质疏松症的药物组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种防治骨质疏松症的药物组合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002]骨质疏松症(osteoporosis，0P)是以骨量减少和骨组织纤维结构退化，继而引起骨骼脆性和骨折危险性增加为特征的系统性骨骼疾病，目前已跃居为世界常见病发病率的第7位。随着我国人均寿命的延长，社会老龄化，OP的发病率也显著增加，已成为影响我国社会的一个重要公共健康问题。据我国部分省市统计，60岁以上的老年人OP的发病率约为59.89%。每年因OP而并发骨折的发病率约为9.6%，并有逐年增加的趋势，给社会、家庭带来了严重的负担。因此，筛选及开发抗OP药物具有重要意义。
[0003]目前，西药针对OP的治疗多采用钙制剂和维生素D、双磷酸盐类、降钙素、选择性雌激素受体调节剂等药物，虽然取得了一定疗效，但多需要联合使用，单纯用药对于OP这一复杂病变而言，难奏长期之效；加之治疗费用高、疗程长、不良反应多及其潜在的致癌性等弊端，使其临床应用受到限制，故治疗现状并不理想。
[0004]鉴于现代医学没有良好的防治OP的药物，不少医家把目光转向中医药疗法。与西药治疗相比，中医药在OP防治过程中着重整体调节，辨证论治，调动内因，作用于多个环节，最终达到纠正机体激素失衡和负钙平衡的功效，且具有毒副作用小、远期疗效佳的独特优势，在防治OP方面取得了较大的进展。OP属于中医学“骨痿”、“骨痹”范畴。中医学认为，OP的发病机制与肾虚、脾虚、血瘀、肝郁有着密切的关系，其中肾虚是本病的病机关键。肾藏精，精化生髓，髓充养 于骨，骨骼的生长、发育、枯荣与肾之精气盛衰密切相关。肾精充足则骨髓生化有源，骨得以滋养而强健有力；肾精亏虚则骨髓生化乏源，骨骼失养而瘫弱无力。现代医学通过对骨密度、骨矿含量及性激素水平与肾虚症的的相关性分析，同样证实了中医“肾主骨”理论的科学性。由此可见，肾虚精亏是OP最根本的发病机制，阴阳双补、补肾填精壮骨之法是治疗OP的根本大法。
[0005]值得注意的是，传统中药汤剂煎煮麻烦，煎液体积较大、味苦，服用、携带不方便；且易发霉发酵，不宜长久贮存及大量制备。传统中成药如肾骨散、骨松康合剂、骨愈灵胶囊、六味壮骨颗粒等，这其中的一些剂型不便携带或服用，有些则药味较多，有效成分含量少，质控标准低，临床治疗中难以取得满意的疗效。现代中药有效成分如续断总皂苷、骨碎补总黄酮、淫羊藿总黄酮等，虽然疗效确切、质量可控，但作用单一，未能体现中医整体调节的观念。因此，以传统中医药理论为基础，结合现代医药理论和技术，开发出一种有效成分明确，疗效确切，质量可控的抗OP药物具有重要意义。
[0006]淫羊藿为补肾壮阳药，为治疗OP使用频率最高的中草药。大量研究已证实，淫羊藿及其有效成分可有效改善骨代谢生化指标，纠正骨代谢异常，降低骨转换率，增加骨密度，改善骨组织病理状态，促进实验性骨质疏松性骨折修复，从而发挥抗OP作用。现代研究表明淫羊藿防治OP的机制主要概括为以下途径:①性激素样作用。②直接抑制骨吸收和促进骨形成。③所含抗炎成分可能影响骨代谢。④富含的多种微量元素对成骨细胞及骨胶原形成有特殊作用。⑤作用于骨基质细胞，促进胶原合成和基质的矿化。淫羊藿抗OP作用与其所含的黄酮类物质有关，它主要发挥了类性激素作用。
[0007]女贞子属常用滋补肝肾阴精的药物，有报道，以女贞子为代表的补肾阴类药物对OP的治疗同样具有良好作用，其作用强度不仅与淫羊藿相近，甚至可能更好；其所含的维生素D样活性物质及雌激素样物质，可以直接通过对肠VDR的表达及钙吸收的调控而维持体内钙稳态；以女贞子为主药的滋补肾阴名方二至丸可有效缓解绝经后骨质疏松患者潮热出汗、失眠多梦及腰膝酸软等症，增加患者骨密度、骨矿含量，升高雌二醇水平，从而改善骨质疏松症状。其抗OP的主要成分以黄酮类、萜类为主。
[0008]大量研究已证实单味淫羊藿及淫羊藿和/或女贞子相关复方在防治OP方面的显著效果，我们基于OP的根本病机为肾虚精亏，在临床中根据患者肾阳及肾阴亏虚的程度选择合适的剂量比例应用淫羊藿、女贞子配伍防治0P，疗效肯定。OP属慢性复杂性病证，须长期服药，单用补阳药淫羊藿性质温燥不宜长期临床应用，若能配伍补益肾精的女贞子以阴中求阳，则可达到《景岳全书.新方八略》中言:“此阴阳相济之妙用也。”
【发明内容】
[0009]本发明的目的是提供一种防治骨质疏松症的药物组合物及其制备方法。
[0010]本发明提供的一种药物组合物，该组合物由淫羊藿的提取物和女贞子的提取物组成；
[0011]所述淫羊藿的提取物按照如下方法制备:将生药淫羊藿用体积百分含量为85%-95%的乙醇的水溶液进行提取，得到提取液；将提取液中的乙醇除去，并进行石油醚萃取，除去叶绿素，得到水相萃取物；将水相萃取物进行D-101大孔吸附树脂吸附分离，用水洗脱至洗脱液无色后，用体积百分含量为85%_95%的乙醇水溶液进行洗脱，得目的洗脱液；将目的洗脱液蒸干，即得淫羊藿的提取物；
`[0012]所述女贞子的提取物按照如下方法制备:将生药女贞子用体积百分含量为70%-80%的乙醇水溶液进行提取，得到提取液；将提取液中的乙醇除去，得到无乙醇的提取液；将无乙醇的提取液进行AB-8大孔吸附树脂吸附分离，水洗除糖，再用体积百分含量为70%-80%的乙醇水溶液进行洗脱，得目的洗脱液；将目的洗脱液蒸干，即得女贞子的提取物。
[0013]上述组合物中，所述生药淫羊藿用体积百分含量为85%_95%的乙醇的水溶液进行提取的条件如下:用体积百分含量为85%-95%的乙醇水溶液作为提取溶剂对所述生药淫羊藿的粗粉提取3次，第1次按照Ig淫羊藿:15mL提取溶剂的比例进行提取，70°C，提取3h;第2、3次均以前一次得到的药渣与提取溶剂按照Ig: IOmL的比例混合进行提取，70°C，提取2h，合并3次提取液即为所述提取液；
[0014]所述乙醇的水溶液中乙醇的体积百分含量具体为90%。
[0015]上述任一所述的组合物中，所述生药女贞子用体积百分含量为70%_80%的乙醇水溶液进行提取的条件如下:用体积百分含量为70%-80%的乙醇水溶液作为提取溶剂对所述生药女贞子的粗粉提取3次，第1次按照Ig女贞子:15mL提取溶剂的比例进行提取，70°C，提取3h;第2、3次均以前一次得到的药渣与提取溶剂按照Ig: IOmL的比例混合进行提取，70°C，提取2h，合并3次提取液即为所述提取液；[0016]所述乙醇的水溶液中乙醇的体积百分含量具体为75%。
[0017]所述淫羊藿的提取物中的淫羊藿黄酮类化合物的质量百分含量不低于50% ；
[0018]所述女贞子的提取物中的女贞子三萜类化合物和女贞子黄酮类化合物的总质量百分含量不低于50%。
[0019]上述任一所述的组合物中，所述淫羊藿的提取物与所述女贞子的提取物的质量比为 2-5:3-10，具体为 2:3。
[0020]上述任一所述的药物组合物在制备预防和/或治疗骨质疏松症的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0021 ] 所述骨质疏松症具体为糖皮质激素性骨质疏松症。
[0022]上述任一所述的药物组合物在制备抑制动物的体重水平下降的产品中的应用也属于本发明的保护范围。
[0023]上述任一所述的药物组合物在制备抑制动物骨转换率水平上升的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0024]上述任一所述的药物组合物在制备抑制动物的碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶和/或骨钙素偏离未患疾病的动物的对应的碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶和/或骨钙素水平的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0025]上述任一所述的药物组合物在制备抑制血清I型前胶原氨基端前肽、I型前胶原羧基端前肽、I型胶原交联羧基末端肽水平上升的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0026]上述任一所述的药物组合物在制备抑制动物的骨I型胶原合成和降解速率上升的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0027]上述任一所述的药物组合物在制备抑制动物的骨最大载荷和/或骨最大桡度下降的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0028]和/ 或，
[0029]上述任一所述的药物组合物在制备抑制动物的骨密度水平下降的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0030]和/ 或，
[0031]上述任一所述的药物组合物在制备抑制动物的骨组织的承载力和/或抵抗外力的冲击能力水平降低的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0032]和/ 或，
[0033]上述任一所述的药物组合物在制备抑制动物的骨小梁面积百分比、骨小梁厚度和/或骨小梁密度的水平下降的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0034]和/ 或，
[0035]上述任一所述的药物组合物在制备抑制动物的骨小梁分离度上升的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0036]所述骨具体为股骨。
[0037]上述任一所述的药物组合物在制备抑制动物的血清皮质醇、雌二醇和/或睾酮水平下降的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0038]上述任一所述的药物组合物在制备抑制动物血清中性激素水平下降的产品中的应用也属于本发明的保护范围；
[0039]所述性激素具体为雌激素和/或雄激素。
[0040]上述任一所述的应用中，所述动物为患有骨质疏松症的动物。
[0041]本发明的组方是根据国家级名老中医李世增教授积四十余年临床之经验而精选创制，平补阴阳之药对淫羊藿、女贞子临床配伍对应用激素导致的骨代谢异常有保护作用。本发明的药物组合物对糖皮质激素性骨质疏松大鼠模型及维甲酸致骨质疏松大鼠模型均有防治作用，证明该药物组合物可用于预防和/或治疗骨质疏松症。
[0042]本发明具有如下优点:
[0043](I)本发明的中药提取物组合物针对OP发病机制之“肾精亏虚、阴阳两虚”的特点，选择平补肾中阴阳之药对淫羊藿、女贞子为研究对象，为开发平补阴阳药对淫羊藿、女贞子有效成分抗骨质疏松的新药提供基础。
[0044]( 2 )本发明的中药组合物制剂的原料药资源分布广，毒副作用低，可长期服用。
[0045]( 3 )本发明的中药组合物制剂组方精简，有效成分明确，疗效确切，质量可控，且无须传统中药的煎煮过程，服用方便。
【专利附图】
【附图说明】
[0046]图1为各组大鼠脱钙骨组织病理切片(HE，X 100)。
【具体实施方式】`
[0047]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0048]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0049]下述实施例中除特殊说明外，%均表示g/100mL。
[0050]雄性3月龄Wistar大鼠购自北京维通利华实验动物技术股份有限公司，合格证号:SCXK (京)2012-0001。
[0051]清洁级健康SD大鼠购自北京维通利华实验动物技术股份有限公司，合格证号:SCXK (京)2007-0001。
[0052]实施例1、淫羊藿和女贞子提取物的制备以及药物组合物的制备
[0053]一、分煎法制备淫羊藿和女贞子提取物:
[0054](一)淫羊藿提取物的制备:取淫羊藿8000g，切碎，用体积百分含量为90%的乙醇水溶液作为提取溶剂提取3次，第1次按照Ig淫羊藿:15mL提取溶剂的比例进行提取，70°C，提取3h ;第2、3次均以前一次得到的药渣与提取溶剂混合(比例为Ig药渣:IOmL提取溶剂)进行提取，70°C，提取2h。合并提取液，除去提取液中的乙醇，再用石油醚萃取提取液3次(除去叶绿素)，弃去石油醚相，收集水相；水相部分上D-101大孔吸附树脂，用水进行洗脱至洗脱液无色后，用体积百分含量为90%的乙醇水溶液进行洗脱，得洗脱液，将洗脱液蒸干，即得棕黄色淫羊藿总黄酮提取物成品，重量约为200g，提取率为2.5%。其中含总黄酮(以淫羊藿苷计)为80%(质量百分含量)，主要包括淫羊藿苷、淫羊藿次苷1、淫羊藿次苷I1、宝藿苷、朝藿定A, B, C等。
[0055](二)女贞子提取物的制备:取女贞子药材8000g，粉粹成粗粉，用体积百分含量为75%的乙醇水溶液作为提取溶剂加热提取3次，第1次按照Ig女贞子:15mL提取溶剂的比例进行提取，70°C，提取3h ;第2、3次均以前一次得到的药渣与提取溶剂混合(比例为Ig药渣:IOmL提取溶剂)进行提取，70°C，提取2h。合并提取液，除去提取液中的乙醇，再上AB-8大孔吸附树脂，水洗(除糖)，弃去水液，再用体积百分含量为75%的乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，蒸干，即得棕褐色女贞子提取物。重量约为400g，提取率为5%。有效成分为总环烯醚萜和总黄酮类，含量分别以齐墩果酸和芦丁计总含量> 80%，主要包括特女贞苷，女贞苷，橄榄苦苷，木樨榄苷二甲酯，女贞酸，新女贞苷，女贞果苷A，B，C，D，芹菜素-7-0-葡萄糖苷等。
[0056]二、药物组合物胶囊的制备:取步骤一制备的淫羊藿提取物200g和女贞子提取物300g，混合均匀，制粒，装胶囊，制成1000粒，每粒0.5g。
[0057]三、药物组合物片剂的制备:取步骤一制备的淫羊藿提取物200g和女贞子提取物300g，两种提取物的混合物与500g糊精混合，制成软材料，过筛制颗粒，70°C常压干燥3小时，加0.5%硬脂酸镁混合，用14目筛整粒后压片，每片0.4g。
[0058]实施例2、淫羊藿女贞子有效成分提取物对维甲酸致大鼠骨质疏松症的影响
[0059]一、将雄性3月龄Wistar大鼠60只，随机分为6组，即正常对照组、模型对照组、淫羊藿女贞子水煎剂对照组(简称:水煎剂组)、淫羊藿女贞子提取物低、中、高剂量组(分别简称:低、中、高剂量组)，每组10只。
[0060]除正常对照组外，其余各组大鼠用维甲酸混悬液(配制方法:先以蒸馏水配制
0.5% (0.5g/100mL)羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液，以此溶液配制7mg -ML-1的维甲酸混悬液)按IOmL -kg^1灌胃，正常对照组以等体积的0.5%CMC-Na灌胃，连续造模2周。造模的同时，各组动物灌胃给予如 下相应的药物或生理盐水，共计3周。
[0061]①水煎剂组:淫羊藿女贞子的水煎剂按照IOmL.kg—1体重灌胃，每日I次。
[0062]淫羊藿女贞子水煎剂制备方法:适量称取淫羊藿、女贞子药材(质量比4:3)混合，首煎加8倍体积的水浸泡Ih后加热煮沸，文火保持沸腾30min，搅拌、趁热滤取药液；药渣再加原药量6倍的水加热煮沸，改文火续煎30min后过滤，合并两次药液，浓缩至含生药
0.95g/mL,放置冰箱冷藏(4°C )备用。
[0063]②低、中、高剂量组:分别给予淫羊藿提取物和女贞子提取物的混合物(质量比2:3，以双蒸水溶解)5mg.mL'lOmg.mL—^Omg.mL-1，均以IOmL.kg—1体重灌胃，每日I次。
[0064]③正常对照组、模型对照组:以IOmL.kg—1体重灌服生理盐水，每日I次。
[0065]二、各组大鼠末次灌胃后禁食16h，腹腔麻醉，腹主动脉取血；各组的各大鼠左侧股骨置于体积百分含量为10%的中性甲醛的水溶液中固定，进行病理学检查；右侧股骨用生理盐水浸泡的湿纱布包裹冻存，供骨密度和骨生物力学检测。实验数据采用均数土标准
差表示，组间比较采用方差齐性检验及单因素方差分析。结果如下:
[0066](一)各组大鼠一般状况及实验前后体重的比较:
[0067]表1各组大鼠实验前后体重的比较(?± s，Λ=10)
[0068]
【权利要求】
1.一种药物组合物，该组合物由淫羊藿的提取物和女贞子的提取物组成； 所述淫羊藿的提取物按照如下方法制备:将生药淫羊藿用体积百分含量为85%-95%的乙醇的水溶液进行提取，得到提取液；将提取液中的乙醇除去，并进行石油醚萃取，除去叶绿素，得到水相萃取物；将水相萃取物进行D-1Ol大孔吸附树脂吸附分离，用水洗脱至洗脱液无色后，用体积百分含量为85%-95%的乙醇水溶液进行洗脱，得目的洗脱液；将目的洗脱液蒸干，即得淫羊藿的提取物； 所述女贞子的提取物按照如下方法制备:将生药女贞子用体积百分含量为70%-80%的乙醇水溶液进行提取，得到提取液；将提取液中的乙醇除去，得到无乙醇的提取液；将无乙醇的提取液进行AB-8大孔吸附树脂吸附分离，水洗除糖，再用体积百分含量为70%-80%的乙醇水溶液进行洗脱，得目的洗脱液；将目的洗脱液蒸干，即得女贞子的提取物。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于:所述生药淫羊藿用体积百分含量为85%-95%的乙醇的水溶液进行提取的条件如下:用体积百分含量为85%-95%的乙醇水溶液作为提取溶剂对所述生药淫羊藿的粗粉提取3次，第1次按照Ig淫羊藿:15mL提取溶剂的比例进行提取，70°C，提取3h;第2、3次均以前一次得到的药渣与提取溶剂按照Ig: IOmL的比例混合进行提取，70°C，提取2h，合并3次提取液即为所述提取液； 所述乙醇的水溶液中乙醇的体积百分含量具体为90%。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于:所述生药女贞子用体积百分含量为70%-80%的乙醇水溶液进行提取的条件如下:用体积百分含量为70%-80%的乙醇水溶液作为提取溶剂对所述生药女贞子的粗粉提取3次，第1次按照Ig女贞子:15mL提取溶剂的比例进行提取，70°C，提取3h;第2、3次均以前一次得到的药渣与提取溶剂按照Ig: IOmL的比例混合进行提取，70°C，提取2h，合并3次提取液即为所述提取液； 所述乙醇的水溶液中乙醇的体积百分含量具体为75%。
4.根据权利要求1-3任一所述的组合物，其特征在于:所述淫羊藿的提取物与所述女贞子的提取物的质量比为2-5:3-10，具体为2:3。
5.权利要求1-4任一所述的药物组合物在制备预防和/或治疗骨质疏松症的产品中的应用。
6.权利要求1-4任一所述的药物组合物在制备抑制动物的体重水平下降的产品中的应用。
7.权利要求1-4任一所述的药物组合物在制备抑制动物骨转换率水平上升的产品中的应用； 和/或， 权利要求1-4任一所述的药物组合物在制备抑制动物的骨密度水平下降的产品中的应用； 和/或， 权利要求1-4任一所述的药物组合物在制备抑制动物的骨组织的承载力和/或抵抗外力的冲击能力水平降低的产品中的应用； 和/或， 权利要求1-4任一所述的药物组合物在制备抑制动物的骨小梁面积百分比、骨小梁厚度和/或骨小梁密度的水平下降的产品中的应用；和/或， 权利要求1-4任一所述的药物组合物在制备抑制动物的骨小梁分离度上升的产品中的应用； 所述骨具体为股骨。
8.权利要求1-4任一所述的药物组合物在制备抑制动物的血清皮质醇、雌二醇和/或睾酮水平下降的产品中的应用。
9.权利要求1-4任一所述的药物组合物在制备抑制动物血清中性激素水平下降的产品中的应用； 所述性激素具体为雌激素和/或雄激素。
10.根据权利要求6-9任一所述的应用，其特征在于:所述动物为患有骨质疏松症的动物。`
【文档编号】A61P19/10GK103768158SQ201410037992
【公开日】2014年5月7日 申请日期:2014年1月26日 优先权日:2014年1月26日
【发明者】刘仁慧, 王秀娟, 许利平, 康学 申请人:首都医科大学