用于预防或治疗炎症性肠病的组合物及其制备方法

用于预防或治疗炎症性肠病的组合物及其制备方法
【专利摘要】向猫给予含有二十二碳六烯酸（DHA）和任选含有选自二十碳五烯酸（EPA），花生四烯酸（ARA），亚油酸（LA）和α-亚油酸（ALA）的一种或多种脂肪酸的组合物以预防或治疗猫炎症性肠病（IBD）。
【专利说明】用于预防或治疗炎症性肠病的组合物及其制备方法
[0001]本申请是以下申请的分案申请:申请日:2006年12月29日；申请号:200680049513.5 (PCT/US2006/062699);发明名称:“用于预防或治疗炎症性肠病的组合物
及其制备方法”。
【技术领域】
[0002]本发明涉及用于预防或治疗炎症性肠病的组合物及其制备方法，尤其是利用二十二碳六烯酸预防或治疗猫炎症性肠病的用途。
【背景技术】
[0003]“炎症性肠病”或“ IBD ”是一类慢性特发性胃肠病，表现为炎症浸润到胃肠道的固有层。IBD包括节段性肉芽肿性小肠结肠炎、淋巴浆细胞肠炎、嗜酸性胃肠结炎，淋巴细胞胃小肠结肠炎，脓肿性小肠结肠炎和组织细胞结肠炎。淋巴浆细胞形式的疾病可能是最常见的IBD类型。具体的IBD类型是基于固有层中发现的炎性浸润物的类型来鉴别的。根据严重程度和细胞类型，炎性浸润物的差异也很大，而淋巴细胞和浆细胞是最常见的细胞类型。炎性浸润物可能涉及到胃、小肠和结肠。例如，猫的胃和小肠通常最易受到影响。在许多情况下涉及到肠的多个部位，临床体征可能是混合的，表现为黏膜损伤的分布较广。IBD的严重程度可从温和的临床征象变化到致命的蛋 白丢失性肠病。
[0004]IBD的临床表现由黏膜炎性浸润物决定。黏膜炎症可破坏正常的吸收过程，这样的破坏会导致吸收障碍和渗透性腹泻。肠道通透性的改变可导致液体、蛋白质和血液漏失到肠腔中。吸收不良的脂肪、碳水化合物和胆汁酸导致分泌性腹泻。炎性介质同样可通过杯形细胞直接引发肠分泌和粘液的产生。黏膜炎性浸润物可改变肠和结肠动力模式，其机制可归因为前列腺素和白三烯对平滑肌的影响。胃和小肠的炎症会刺激引发呕吐的受体。例如，在猫中，IBD最常见的临床现象是慢性呕吐，腹泻和体重降低。
[0005]IBD发展的基本途径与超敏性有关。两个相关的理论试图解释超敏性反应的潜在原因。第一种理论推测患有IBD的猫会产生肠黏膜屏障的缺陷。黏膜完整性的缺失会导致肠道通透性增加以及对通常可耐受的过敏源产生超敏性反应增大。第二种理论推测IBD是由对腔内抗原的异常免疫反应引起的。两种可能的途径都使炎症介质的释放到达最大。这些炎症介质可进一步损伤肠黏膜表面，并产生炎症的循环以及屏障功能的缺失。
[0006]必需脂肪酸在细胞功能调节方面具有特殊的作用。例如，Ω-3 二十碳五烯酸(ΕΡΑ)，Ω-6花生四烯酸和Y-亚麻酸是合成类二十烷的前体物质，类二十烷是作为局部激素和炎症介质起作用的免疫控制分子。由花生四烯酸(ARA)合成的类二十烷与二十碳五烯酸和Y-亚麻酸产生的类二十烷相比具有促炎性，并且当产生过量时可产生病理状态。巨噬细胞是类二十烷的重要来源，并调节炎性和免疫反应的强度和持续时间。巨噬细胞和淋巴细胞的膜磷脂中主要的多不饱和脂肪酸是ARA。服用Y-亚麻酸或EPA可使二十碳五烯酸和Y -亚麻酸替代巨噬细胞膜中的ARA，这样替代的结果使来源于ARA的类二十烷量减少，而来源于EPA和Y -亚麻酸的类二十烷量增多，因此可降低对炎症发作的免疫应答。[0007]目前IBD的确诊是基于对内窥镜和外科手术方法采集的肠黏膜或全层的肠活检标本进行的组织病理学检查。因此，需要另一种比获得活捡标本创伤小的诊断猫IBD的方法。还需要用于预防和治疗猫IBD的新方法和组合物。

【发明内容】

[0008]本发明的一个目的是提供用于预防或治疗猫IBD的方法。
[0009]本发明的另一目的是提供适用于预防或治疗猫IBD的组合物。
[0010]本发明的另一目的是提供确诊猫是否患上IBD的方法。
[0011]本发明的另一目的是提供套盒形式的制品，该套盒含有食物、化合物、组分和装置的组合，用于预防或治疗猫科动物的IBD。
[0012]本发明的另一目的是提供关于本发明的方法、组合物、制品和益处的信息传达手段。
[0013]利用新的预防和/或治疗易感染IBD或患上IBD的猫的方法实现了上述的一个或多个发明目的，该方法包 括给猫服用治疗有效量的二十二碳六烯酸(DHA)。还提供了用于诊断IBD的方法和用于预防和/或治疗IBD的包含有食物、化合物、组分和装置的组合的套盒。
[0014]本发明的另外的目的、特点和优势对于本领域的技术人员将会是显而易见的。【具体实施方式】
[0015]一方面，本发明提供了用于治疗患有IBD的猫的方法。治疗IBD包括改善、抑制和/或根除IBD。本领域技术人员利用诊断检验(如全血细胞计数、血清生化、血清甲状腺素水平、免疫缺陷病毒检验、猫白血病病毒检验、尿分析、寄生虫和细菌的粪便检验)，饮食检验，腹部放射照片和/或超声，和/或黏膜或全层肠活检标本检验)能够诊断IBD(并且能将IBD与其他胃肠道疾病区分)。另一方面，本发明提供了预防猫感染IBD的方法。预防IBD包括降低IBD的危险性，延缓IBD的发作，和/或使猫免于发生IBD。该方法包括给猫服用治疗有效量的二十二碳六烯酸(DHA)，治疗有效量就是当猫患上IBD时能够治疗IBD，或者当猫易感染IBD时能够预防IBD，或者能够降低易感染或患上IBD的猫的⑶4+淋巴细胞和中性粒细胞水平的量。给药就是通过适合的给药途径(如口服、局部应用、肠外应用)将合适剂型的DHA或其它化合物给猫施用。DHA可以纯DHA或DHA衍生物(如酯或盐)的形式或者以含DHA和/或DHA衍生物的组合物的形式给药。此处涉及的DHA和其它脂肪酸包括了这些化合物的衍生物。含有DHA的组合物还可以包含一种或多种常规的药学上可接受的赋形剂(如助剂、载体和/或媒介物)。在一些实施例中，含有DHA的组合物可含有食品组合物。
[0016]本发明是基于一意外的发现，即，不是EPA或其它类似的脂肪酸，而是DHA可用于预防或治疗猫的IBD，并且DHA对其它动物会产生相反的效果。虽然EPA和相关的脂肪酸单独或结合使用时不能预防或治疗IBD，但它们可用于补充DHA，以预防或治疗IBD。于是，治疗有效量的DHA单独使用或与EPA和相关脂肪酸联合使用产生了预料不到的有效预防或治疗猫的IBD的效果。
[0017]正如此处所描述的那样，当给予治疗有效量的DHA时，DHA有效降低了包括易感染或患上IBD的猫在内的猫的⑶4+淋巴细胞和中性粒细胞水平。[0018]一些实施方式中，该方法包括每天对猫给药约6到165mgDHA/kg体重，一些实施方式中是约12到65 mgDHA/kg体重，另一些实施例中是约12到32 mgDHA/kg体重。DHA的日剂量可以一次性给药，也可以分两次或多次给药。
[0019]一些实施方式中，DHA给药包括向猫喂食DHA，也即，喂食DHA或含有DHA(包括DHA的衍生物)的组合物。
[0020]在不同的实施方式中，喂食给猫的含DHA的组合物包含食品组合物。一些实施方式中，该食品组合物符合AAFCO规定的繁殖或维持的最低营养水平需求，参见2005年AAFCO的官方出版物，第137-140页。一些实施方式中，食品组合物包含干性食品。其它一些实施方式中，食品组合物包含半湿性食品。另外一些实施方式中，食品组合物包含湿性食品。此处提到的“干性”、“湿性”、“半湿性”的用语是本领域技术人员所熟悉的。食品组合物可以是一种补充剂、治疗品、零食或者是部分或全部可食用的玩具。在一些实施方式中，食品组合物包含一种或多种食品的混合物或一种低过敏性食品组合物。
[0021]在一些实施方式中，选取的猫是伴侣猫。伴侣猫可以是作为宠物的猫，也可以是广泛驯养的猫，例如不论是否是作为宠物对待的猫(家猫)。一些实施方式中，猫可以是正在长大的猫，正在长大的猫是还未达到成年大小的猫，例如，典型的正在长大的猫是那种不到一年龄的猫。一些实施方式中，猫是成年的猫，成年的猫是完成幼年成长和发育后的任意年龄的猫，包括年长的猫和衰老的猫，例如，典型的成年猫是从一年左右直至其余生的猫。年长的猫是那种具有与年龄有关的患病风险的猫，不论猫是否表现出明显变老的身体或行为体征，例如，典型的年长的猫是那种七年到十一年大的猫。衰老的猫是那种能看出年老迹象的猫，例如，典型的衰老的猫是十二年左右和超过十二年的猫。
[0022]除非另外说明，本发明中所有百分比均是在干物质基础上的重量百分比。“基于干物质”意思为组合物中组分的浓度是在去除组合物中所有水分后测定的。
[0023]在一些实施方式 中，给予猫的组合物包括约0.05%到约1%的DHA。一些实施方式中，组合物包括约0.1%到约0.4%的DHA。在另一些实施方式中，组合物包括约0.1%到约0.2%的DHA。在另一些实施方式中，组合物包括约0.05%到约0.2%的DHA。在另一些实施方式中，组合物包括约0.05%到约0.15%的DHA。在另一些实施方式中，组合物包括从约
0.05%或约 0.1%到约 0.15%、约 0.2%或约 0.4%的 DHA。
[0024]在某些实施方式中，给予猫的组合物进一步包含至少一种脂肪酸，可选自二十碳五烯酸(EPA)、花生四烯酸(ARA)、亚油酸(LA)和α —亚油酸(ALA)。在某些实施方式中，组合物中存在的各种脂肪酸的含量为约0.05%到1%。在某些实施方式中，组合物含有约
0.1 %到约0.5%或者0.1 %到约0.3%的脂肪酸。在一种实施方式中，用于给予猫的组合物进一步包含约0.1%到约0.5%的EPA。在某些实施方式中，组合物含有约0.1 %到约0.3%的EPA。在某些实施方式中，组合物含有约0.05%到0.3%的EPA。进一步地在某些实施方式中，组合物含有约0.15%到0.3%的EPA。在某些实施方式中，组合物包含从约0.05%到约0.3%的EPA。某些实施方式中，组合物包含约0.05%、约0.1%或约0.15%到约0.2%、约 0.3%、约 0.4%或约 0.5%的 EPA。
[0025]在一些实施方式中，给予猫的组合物包含约0.05%到约1%的DHA和约0.05%到约I %的EPA，且组合物中EPA的量与DHA的量的比例约为I到2。在某些实施方式中，组合物中EPA的量与DHA的量的比例约为1.2到1.8。在某些实施方式中，组合物中EPA的量与DHA的量的比例约为1.2到1.5。在某些实施方式中，组合物中EPA的量与DHA的量的比例约为1.3到1.6。进一步地在某些实施方式中，组合物中EPA的量与DHA的量的比例从约为
1、1.2 或 1.3 到约为 1.5,1.6、1.8 或 2。
[0026]在一些实施方式中，预防和治疗方法进一步包括向猫给予一种抗炎症性肠病(抗IBD)剂，该抗IBD剂与DHA联合使用或者与DHA和选自EPA、ARA、LA和ALA的至少一种脂肪酸的组合物联合使用。抗IBD剂是一种用于预防或治疗IBD的化合物，或其衍生物(例如，该化合物的盐、溶剂化物或水合物)，或者是一种包含此类化合物和/或衍生物的组合物。“联合使用”是指抗IBD剂或与DHA合并向猫给药，或与DHA分别地通过相同或不同的给药途径，在与DHA大约相同的时间或定期地，以相同或不同的频率向猫给药。“大约同一时间”是指可在向猫给药DHA时给药抗IBD剂，也可以是向猫给药DHA后的72小时内给药抗IBD剂。“定期地”通常是指含DHA的组合物按照适合的方式喂食给猫，而抗IBD剂则按照适合该药物给药的用药方案施用。因而，“联合使用”明确地包含了在长得多的一段时间内(例如，终身)向猫给予DHA时，可以在指定的时间段向猫给药抗IBD剂。如果不只一种药剂用于向猫给药，那么每种药物的剂型和给药途径可能会不同。本领域技术人员会理解，当向猫喂食单一的含DHA的组合物时或以不同的时间间隔向猫喂食不同的含DHA的组合物时，可向猫给予一种或多种抗IBD剂。
[0027]适合的抗IBD剂包括例如皮质类固醇(如泼尼松、泼尼松龙)，免疫抑制剂(如硫唑嘌呤)和抗生素(如甲硝唑、阿莫西林、泰乐霉素)。抗IBD剂可以例如无机或有机酸盐的形式给药。化合物的盐由于盐的一种或多种物理性质而可能有利，例如在不同的温度和湿度下提高药学稳定性，或者在水或油中具有理想的溶解性，这取决于具体的化合物。这种盐优选为药学上可接受的盐。
[0028]优选的抗IBD剂(可单剂量或分剂量给药)每日总剂量是从约0.0Olmg/kg体重到约100mg/kg体重,更优选的是从约0.01mg/kg体重到约30mg/kg体重,进一步优选的是从约0.01mg/kg体重到约10mg/kg体重。剂量单位组合物可含有这样的量及其因数从而构成了每日剂量。在许多情形， 抗IBD剂将会重复多次给予。如果需要，通常可以每天多次服用以便增加每日总剂量。影响优选剂量方案的因素包括例如，猫的年龄、体重和状况；患病的严重程度；给药途径；药理学方面的因素，例如具体使用的抗IBD剂的活性、效力、药物动力学和毒理学特性；是否利用药物传输体系；给予的抗IBD剂是否作为药物组合物的一部分。于是，剂量方案会有很大差别，并因此可以不同于上述讨论的优选剂量方案。
[0029]另一方面，本发明提供了适用于预防和/或治疗猫IBD的组合物。这些组合物已经在本文的预防和治疗IBD方法部分描述和示例说明。
[0030]另一方面，本发明提供了适合用于预防和治疗IBD方法的组合物的制备方法。该组合物可通过例如混合两种或多种组分(包括食物组合物)制成，或者通过将一种或多种食物组合物与另外的组分，例如DHA、EPA和/或一种抗IBD剂混合，制成本发明的组合物。该组合物也可通过Small Animal Nutrition杂志，第127-146页(2000)中讨论的一种或多种方法制得。
[0031]另一方面，本发明提供了 DHA和任选加入的至少一种选自EPA、ARA、LA和ALA的脂肪酸制备适合用于预防或治疗猫IBD的组合物的用途。在一些实施方式中，本发明提供了利用DHA制备含约0.05%到约1% DHA组合物的用途。在一些实施方式中，组合物中含有约0.1 %到约0.4%的DHA。在某些实施方式中，组合物含有约0.1 %到约0.2%的DHA。在某些实施方式中，组合物含有约0.05%到0.2%的DHA。进一步地在某些实施方式中，组合物含有约0.05%到约0.15%的DHA。在更进一步的某些实施方式中，组合物含有约0.05%，或约0.1%到约0.15%，约0.2%，或约0.4%的DHA。在某些实施方式中，组合物含有食品组合物。
[0032]在一些实施方式中，本发明提供了 DHA和至少一种选自EPA、ARA、LA和ALA (优选EPA)的脂肪酸用于制备预防和/或治疗猫IBD的组合物的用途，该组合物含有约0.05%到约1%的DHA和各占约0.05%到约1%的EPA、ARA、LA和/或ALA。在一些实施方式中，组合物含有约0.1 %到约0.4 %的DHA和约0.1 %到约0.5 %的EPA、ARA, LA和/或ALA中的一种或多种。在某些实施方式中，组合物含有约0.1 %到约0.2%的DHA和约0.1%到约0.3 %的EPA、ARA、LA和/或ALA中的一种或多种。在某些实施方式中，组合物含有约0.05 %到约0.2 %的DHA和约0.05 %到约0.3 %的EPA、ARA, LA和/或ALA中的一种或多种。进一步地在某些实施方式中，组合物含有约0.05%到约0.15%的DHA和约0.15%到约0.3%的一种或多种脂肪酸。在更进一步的某些实施方式中，组合物含有约0.05%或约0.1%到约0.15%，约0.2%，或约0.4 %的DHA和约0.05%，约0.1%，或约0.15%到约0.2%，约
0.3%，约0.4%，或约0.5%的一种或多种脂肪酸。在一些实施方式中，组合物含有食物组合物。
[0033]在一些实施方式中，本发明提供了 DHA和EPA制备组合物的用途，该组合物含有从约0.05 %到约I %的DHA和约0.05 %到约I %的EPA，其中，组合物中EPA的量与DHA的量的比例约为I到2以预防或治疗猫IBD。在某些实施方式中，组合物中EPA的量与DHA的量的比例约为1.2到1.8。在某些实施方式中，组合物中EPA的量与DHA的量的比例约为1.2到1.5。在某些实施方式中，组合物中EPA的量与DHA的量的比例约为1.3到1.6。在进一步的某些实施方式中，组合物中EPA的量与DHA的量的比例约为1，1.2，或1.3到约为1.5，
1.6，1.8，或约2。在一些实施方式中，组合物含有食品组合物。
[0034]另一方面，本发明提供了一种确定猫是否患有IBD的方法。该方法包括将从猫中获得的血液中采集的淋巴细胞分成三份含有相同淋巴细胞数量的样品；将第二份样品接触一定量的促细胞分裂剂一段时间；将第三份样品在一定量的DHA的存在下接触与第二份样品相同量的同一促细胞分裂剂相同的时间；比较所有样品中淋巴细胞的增殖水平。如果第二份样品中的淋巴细胞增殖水平高于第一份样品中的淋巴细胞增殖水平，并且第三份样品中的淋巴细胞水平低于第二份样品中的淋巴细胞增殖水平，则该猫患有IBD。
[0035]从猫中获得的血液中采集淋巴细胞，并将其分成含有相同量淋巴细胞的样品。从猫中获得血液，从血液中分离淋巴细胞，以及计数淋巴细胞的方法均是本领域技术人员已知的。在一些实施方式中，淋巴细胞可用如实施例1中所述的方法采集。从猫的血液中分离的淋巴细胞被分成三份或更多份含有相同量淋巴细胞的样品。在一些实施方式中，淋巴细胞被分成三份样品(如，第一、第二、第三份样品)。其中的一份样品(即，第一份样品)用来作为对照。剩下两份样品中的一份(即，第二份样品)置于一定量的促细胞分裂剂下一段时间，另一份样品(即，第三份样品)在一定量的DHA的存在下置于与第二份样品相同量的同样的促细胞分裂剂下相同的时间。所有样品在相同的温度下培养同样的一段时间。
[0036]促细胞分裂剂是一种引发有丝分裂的制剂。能够引发猫淋巴细胞有丝分裂的任意一种促细胞分裂剂均适用于本发明。在一些实施方式中，促细胞分裂剂是一种多克隆促细胞分裂剂。多克隆促细胞分裂剂是一种能使多种不同特异性或克隆起源的淋巴细胞有丝分裂的促细胞分裂剂。本发明中适于IBD诊断方法的促细胞分裂剂包括例如植物凝集素(PHA)，伴刀豆球蛋白(ConA)，美洲商陆促细胞分裂剂(PWM)，脂多糖(LPS)和抗⑶3抗体。
[0037]测定淋巴细胞增殖的方法是本领域技术人员已知的。任一种体外测定淋巴细胞增殖的方法均适用于本发明的方法。体外淋巴细胞增殖可直接测定(如通过细胞计数或通过有丝分裂指数确定)或间接测定(如通过淋巴细胞群的总体代谢活性率确定或通过监测脱氧核糖核酸(DNA)的合成来确定)，在一些实施方式中，采用实施例1中所述的方法测定体外淋巴细胞增殖。
[0038]本发明的方法的一些实施方式中，淋巴细胞增殖是通过监测DNA的合成来测定的。监控和测定DNA合成的方法是本领域技术人员已知的。任一种监控和测定DNA合成的方法均适用于本发明的方法。DNA的合成可通过例如用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷或5-溴-2’-脱氧尿苷(BrdU)标记有丝分裂活性细胞的DNA，并确定结合到DNA中的3H-胸腺嘧啶脱氧核苷或BrdU的量得以监控和测定。在一些实施方式中，采用实施例1中所述的方法测定DNA的合成。[0039]正如上面讨论的那样，猫是否患上IBD是通过比较第一、第二、第三份样品中体外淋巴细胞增殖水平来确定的。如果第二份样品(即，经促细胞分裂剂处理，但不含DHA的样品)中的淋巴细胞增殖水平高于第一份样品(即，未经促细胞分裂剂或DHA处理的对照组)中的淋巴细胞增殖水平，那么该测定方法中使用的促细胞分裂剂确实刺激了第二、第三份样品中体外淋巴细胞增殖。若符合上述情况，那么将第三份样品(即用促细胞分裂剂和DHA处理的样品)中的淋巴细胞增殖水平与第二份淋巴细胞的增殖水平进行比较。如果第三份样品中的淋巴细胞水平低于第二份样品中的淋巴细胞增殖水平，那么DHA抑制了促细胞分裂剂的促炎症作用，表明猫患有IBD。
[0040]此外，本发明提供了一种套盒形式的用于预防和/或治疗IBD的制品。该套盒包括DHA或本发明的含DHA的组合物。在某些实施例中，该套盒还包括抗IBD剂(即该套盒包括一种或多种抗IBD剂)。在某些实施例中，该套盒进一步包括一种或多种的使用说明(a)把DHA给予猫，(b)把抗IBD剂给予猫，并结合给予其DHA，(c)通过把DHA给予猫，预防和/或治疗IBD，以及(d)通过把抗IBD剂给予猫，并结合给予其DHA，预防和/或治疗IBD。
[0041]在某些实施例中，该套盒包括含有DHA的食品组合物。在某些实施例中，该套盒进一步包括抗IBD剂。在某些实施例中，该套盒还包括一种或多种的使用说明(a)给猫喂食含DHA的食品组合物，(b)把抗IBD剂给予猫，并结合喂食含DHA的食品组合物，(c)通过给猫喂食含DHA的食品组合物以预防和/或治疗IBD，以及(d)通过把抗IBD剂给予猫，并结合向其喂食含DHA的食品组合物，预防和/或治疗IBD。
[0042]此外，本发明提供了一种包括两种或多种组分的套盒形式的制品，当所述组分结合在一起以及任意地与套盒内或外的附加组分结合在一起时，产生本发明的适合预防和/或治疗猫IBD的含DHA组合物。要结合的两种或多种组分之一可以是例如纯DHA或其衍生物或含DHA的组合物。要结合的两种或多种组分中的另一组分可以是例如一种食品组合物。如果要制备组合物，需要添加套盒内或外的附加组分，套盒将提供关于这些附加组分的使用说明。在某些实施例中，该套盒进一步包括抗IBD剂。在一些实施例中，该套盒进一步包括一种或多种使用说明(a)通过两种或多种组分的结合，以及任意地与套盒内或外的附加组分结合，制备该组合物，(b)向猫喂食该组合物，例如用于预防和/或治疗IBD，(c)把抗IBD剂给予猫，并结合向猫喂食该组合物，(d)通过向猫喂食该组合物以预防和/或治疗IBD ;以及(e)通过把抗IBD剂给予猫，并结合向其喂食该组合物以预防和/或治疗IBD。
[0043]在某些实施例中，该套盒在适合套盒组分的单一包装中的分离容器内或者虚拟包装中的分离容器内，包含(A) DHA，(B)含DHA的组合物，或者(C)两种或多种组分，当这些组分结合一起，以及任意地与套盒内或外的附加组分结合一起时，将产生含DHA的组合物，以及一种或多种(I)至少一种选自EPA，ARA，LA和ALA的脂肪酸，(2) 一种适合对炎症性肠病敏感或患有该病的猫食用的食品组合物；(3)—种抗IBD剂，以及(4) 一种或多种以下操作的说明(a)制备仅含DHA或者含有与至少一种选自EPA，ARA, LA和ALA的脂肪酸结合的DHA的组合物，(b)制备一种适合对炎症性肠病敏感或患有该病的猫食用的食品组合物，该组合物含有治疗有效量的单独的DHA或与至少一种选自EPA，ARA, LA和ALA的脂肪酸结合的DHA。(c)把单独的或与至少一种选自EPA，ARA, LA和ALA的脂肪酸结合的DHA给予猫，以预防和/或治疗IBD，(d)向猫喂食仅包含DHA或包含与至少一种选自EPA，ARA，LA和ALA的脂肪酸结合的DHA的组合物，以预防和/或治疗IBD，(e)给予猫抗IBD剂，并结合向其喂食仅包含DHA或包含与至少一种选自EPA，AM’ LA和ALA的脂肪酸结合的DHA的组合物，以及(f )给予猫抗IBD剂，并结合向其喂食仅包含DHA或包含与至少一种选自EPA，AM，LA和ALA的脂肪酸结合的DHA的组合物，以预防和/或治疗IBD。
[0044]术语“单一包装”通常意味着套盒组分是实体联系或结合的一个或多个容器，并被认为是制造、分配、销售或使用上的一个单元。例如，所述容器包括袋子、盒子、瓶子、热缩塑料包，用U形钉固定的或其他固定组分及他们的混合。例如，单一包装可以是实体联合的容器或各个食品组合物，并被认为是制造、分配、销售或使用上的一个单元。术语“虚拟包装”通常意味着套盒组分通过在一种或多种实体或虚拟的套盒组分上的说明书相互联系，该说明书教导使用者如何获取例如在装有组分的袋子中的附加组分，和教导使用者通过网络、接触记录消息、浏览可视性讯息，或者是联系动物看护者获取如何使用套盒的说明。当套盒中包含虚拟包装时，该套盒就限制于用一种或多种实体套盒组分在虚拟环境中的说明。
[0045]此外，本发明提供了关于传达以下一种或多种操作的信息或说明的手段(I)使用DHA或含DHA组合物，以预防和/或治疗猫的IBD，(2)通过把抗IBD剂给予猫，并结合向其喂食DHA或含DHA组合物，以预防和/或治疗猫的IBD，以及(3)使用本发明的套盒用于预防和/或治疗猫IBD，所述手段包括含有所述信息或说明的文件、数字储存媒介、光贮存媒介、音频显示，或可视性显示。在一些实施例中，该传达手段包括含有所述信息或说明的文件、数字储存媒介、光贮存媒介、音频显示，或可视性显示。优选的，该传达手段是可视性的网站或含有所述信息或说明的小册子，产品标签，包装插页，广告，或可视性显示。例如，有用的信息或说明包含(I)如何使用本发明的组合物，方法或套盒的信息或说明，以及(2)若动物看护者对本发明或其使用方法有疑问时的联络信息。
[0046]此外，本发明提供了利用DHA和任选地与至少一种选自EPA，AM，LA和ALA的脂肪酸制备药物的用途。另外，本发明还提供了治疗有效量的所述脂肪酸在制备适用于预防和/或治疗猫IBD的药物方面的用途。通常，制备所述药物是通过将化合物或组合物与赋形剂、缓冲剂、粘合剂、增塑剂、着色剂、稀释剂、压缩剂、润滑剂、香料、润湿剂以及其他本领域技术人员所了解的可用于药物生产和制备、适合动物使用的其他组分混合而制成的。
[0047]本发明并不局限于本文所述的特定方法、实验方案以及试剂，因为他们均可变动。此外，本文所用的术语仅为了描述特定的实施例，并无意限制该发明的范围。除非文中明确指明，本文和附加的权利要求中的“一”、“一种”以及“该”等单数形式也包括复数，类似的，“含”、“含有”以及“包括”等被解释为“包含”而不是“专有”。
[0048]除非另有定义，本文所用的科技术语和缩写均与本领域普通技术人员的常规理解一致。尽管所有与本文中所述的类似或相同的方法、原料均可用来实施本发明，但本文所描述的均是优选的方法、设备和原料。
[0049]本文所提及的所有专利、专利申请以及公开出版物均以法律许可的程度并入本文作为参考文献，用于描述和公开上述参考文献中公开的可用于本发明的化合物、过程、技术、程序、工艺、制品和其他组合物。然而，本文中无任何内容会被理解为承认由于在前发明的缘故而无权居先。
实施例
[0050]本发明可通过以下实施例做进一步说明。除非另有明确说明，这些实施例应被理解为仅为说明本发明，而不意味着限制该发明的范围。
[0051]实施例1
该实施例说明了 DHA和EPA对分别从健康的和患IBD的猫提取的淋巴细胞在体外淋巴细胞增殖的影响。
[0052]该实验使用了十一只健康猫和十一只患IBD的猫。患IBD的猫的经肠部活检诊断，并患有慢性腹病史。在六周内，所有腹的猫均被喂食营养充足的干性食品的猫，显示出肠胃不适。在四、五、六周中， 对所有猫进行抽血。带有等量淋巴细胞的样品将进行体外淋巴细胞增殖实验。
[0053]更具体地说，4.5ml血液与4.5ml HBSS (Hank，s平衡盐水溶液)+25mM HEPES混合。将4ml的Ficoll-Paque Plus (Amersham)缓慢注入被稀释的血液之下。对混合物进行20分钟、500g、25°C的离心分离。弃去上层液体。淋巴细胞被转入一个干净的试管中，并在6ml HBSS+25mM HEPES中再悬浮，随后进行10分钟、200g、25°C的离心处理。弃去上清液，并用6mlHBSS洗涤淋巴细胞。离心和洗涤步骤再重复两次。洗涤后的淋巴细胞随后在5mlAM培养基(Invitrogen)中再悬浮。在100 μ I AM培养基中含有200000个淋巴细胞的样品将被用于淋巴细胞增殖实验。
[0054]淋巴细胞增殖实验利用Amersham’ s Biotrak细胞增殖ELISA系统(版本2)进行。淋巴细胞样品在含有7 μ g/ml PHA(植物血球凝集素)、含有/不含有12.5 μ M和25 μ M DHA或EPA的96孔板上培养40小时，培养室条件为37°C、5% CO2、湿度90%。随后，加入20 μ I的100 μ M BrdU，样品在37°C下培养2小时。然后，从培养室取出平板，在300g、25°C下离心10分钟。培养基通过轻击和吸干去除，细胞在化学通风橱干燥至少15分钟。在每一个孔中加入200 μ I固定剂，平板在室温下培养30分钟。细胞固定剂通过轻击和吸干去除，在每一个孔中加入200 μ I封闭缓冲液，平板在室温下培养30分钟。封闭缓冲液通过轻击和吸干去除，在每一个孔中加入100 μ I抗-BrdU工作液，平板在室温下培养90分钟。抗-BrdU溶液通过轻击和吸干去除,每个孔用300 μ I的洗涤液漂洗3次。在每一个孔中，加入100 μ I的3，3’，5，5’ -四甲基联苯胺，培养10分钟或直到色度达到要求。加入25 μ I IM硫酸终止反应，平板在细胞融合酶标仪(PerkinElmer)上于5分钟内读数。体外淋巴细胞实验的结果列于表1和表2。
[0055]表1
DHA对淋巴细胞增殖的影响
【权利要求】
1.二十二碳六烯酸在制备适合预防或治疗猫炎症性肠病的组合物中的用途，其中所述二十二碳六烯酸的量为足以向猫提供6至165mg/ kg体重/天的二十二碳六烯酸的治疗有效量。
2.权利要求1的用途，其中所述二十二碳六烯酸的量为足以向猫提供12至65mg/kg体重/天的二十二碳六烯酸的治疗有效量。
3.权利要求1或2的用途，其中所述的二十二碳六烯酸呈含有二十二碳六烯酸的组合物的形式。
4.权利要求3的用途，其中组合物包括0.05至0.2%重量的二十二碳六烯酸。
5.权利要求3的用途，其中所述组合物包括食品，补充剂，治疗剂，或者部分或全部可食用的玩具。
6.权利要求5的用途，其中所述食品是小吃。
7.权利要求3的用途，其中所述组合物包括干性、半湿或湿性食品。
8.权利要求1或2的用途，其中进一步包括抗炎症性肠病剂。
9.权利要求1或2的用途，其中进一步包括至少一种选自二十碳五烯酸，花生四烯酸、以及亚油酸的脂肪酸。
10.权利要求9的用途，其中所述亚油酸是α-亚油酸。
11.权利要求9的用途，其中每种脂肪酸占所述组合物的0.05%至1%重量。
12.权利要求9的用途，其中所述的脂肪酸是二十碳五烯酸。
13.权利要求12的用途，其中所述组合物中二十碳五烯酸与二十二碳六烯酸的重量比例为I至2。
14.权利要求1或2的用途，其中所述的组合物进一步包括至少一种选自二十碳五烯酸、花生四烯酸和亚油酸的脂肪酸。
15.权利要求14的用途，其中所述亚油酸是α-亚油酸。
16.权利要求1或2的用途，其中所述的组合物是药物。
17.二十二碳六烯酸和任选的至少一种选自二十碳五烯酸、花生四烯酸以及亚油酸的脂肪酸在制备预防或治疗猫炎症性肠病的药物方面的用途，其中所述二十二碳六烯酸的量为足以向猫提供6至165mg/ kg体重/天的二十二碳六烯酸的治疗有效量。
18.权利要求17的用途，其中所述二十二碳六烯酸的量为足以向猫提供12至65mg/kg体重/天的二十二碳六烯酸的治疗有效量。
19.权利要求17或18的用途，其中所述亚油酸是α-亚油酸。
【文档编号】A61P29/00GK103933021SQ201410161931
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2006年12月29日 优先权日:2005年12月29日
【发明者】C.库, W.D.舍恩赫尔, K.L.格罗斯 申请人:希尔氏宠物营养品公司