治疗关节炎的天然药物提取物及制备药物或保健品的应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于天然药物提取物领域，涉及治疗骨性关节炎的鸦跖花提取物。该提取物采用如下方法制备：（1）将干燥的鸦跖花粉碎，加5～15倍量60%～80%乙醇，于60℃～70℃水浴回流提取2次～4次，每次70min～80min，合并提取液，回收乙醇，得到浸膏Ⅰ；（2）将浸膏Ⅰ加入水溶解，离心，收集上清液，得上清液Ⅱ；上清液Ⅱ用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析纯化，树脂柱径高比为1:7～9，上样体积6BV～8BV，流速为2BV/h～4BV/h，分别以去离子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脱大孔树脂，洗脱液弃去，以30%乙醇为洗脱剂5BV～8BV洗脱，收集洗脱液，得洗脱液Ⅲ；将洗脱液Ⅲ浓缩，干燥，即得。
【专利说明】治疗关节炎的天然药物提取物及制备药物或保健品的应用
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于天然药物提取物领域，涉及一种治疗骨性关节炎的鸦跖花提取物。
【背景技术】
[0003]膝关节骨性关节炎又称为膝关节退行性关节炎，是一多见于年人的以关节软骨退行性改变为特征，无菌性、慢性、进行性侵犯骨质并包括滑膜、关节囊及关节其它结构的全方位、多层次、不同程度的慢性炎症性关节病。流行病学调查显示55~64岁的人群中发病率达40 %，随着世界老龄化人口的增加，其发病率也逐年上升。
[0004]骨关节炎的确切病因及发病机理至今仍未完全阐明，目前的治疗方法也主要是以缓解疼痛，改善功能，提高患者生活质量为目的，尚未有根治或延缓骨关节炎病情的药物问世。西医治疗目前主要以非留体类消炎药为主，但西药价格较贵，长期服用胃肠道反应大，老年患者依从性差。以中医理论为指导的中医药疗法具有独特的辨证理论，治疗该病针对性强，标本兼顾，疗效显著，且远期效果好，可以从整体上控制病情的发展，中医药疗法安全性好，适合长期治疗，因此越来越引起医学界的关注。
[0005]鸦妬花，为毛 茛科植物鸦妬花属植物鸦妬花(Oxygraphis glacialis (Fisch.)Bunge)的花及全草。形态:多年生小草本,高2~9厘米。叶全部基生，叶片卵形、倒卵形至长圆形，长6~20毫米，宽5~25毫米，质地较厚，全缘，常有骨质边缘；叶柄较宽扁，长I~4厘米。6~7月开花，花葶I~3 ;花单生，直径1.5~3厘米；萼片宽倒卵形，长4~10毫米，近革质，宿存；花瓣长7~15毫米，为宽的3~4倍，披针形或长圆形；花托宽扁，无毛。生于海拔3000~5100米的高山草甸、高山灌丛中及石砾草坡上。水边草地。喜欢向阳湿地。分布于西藏、云南西北部、四川西部、陕西南部、甘肃、青海和新疆。西喜马拉雅地区、俄罗斯西伯利亚至中亚也有。全草入药。性味归经:辛、苦，温。入肺、肝二经。功效:祛风散寒、祛风通络、宣通鼻窍。主治:用于外感风寒证、风寒湿痹、鼻渊。
[0006]本发明提供了一种治疗骨性关节炎的鸦跖花提取物，实验研究表明该提取物对骨性关节炎具有较好的治疗作用。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是提供一种鸦跖花提取物。
[0008]本发明的另一目的是提供该提取物的制备方法。
[0009]本发明的还提供该提取物在制备治疗骨性关节炎以及骨质疏松症药物中的应用。
[0010]本发明的目的是通过以下方式实现的:
一种治疗骨性关节炎的鸦跖花提取物，该鸦跖花提取物是采用如下方法制备的:
(I)将干燥的鸦跖花粉碎，加5~15倍量60%~80%乙醇，于60°C~70°C水浴回流提取2次~4次,每次70min~80min,合并提取液，回收乙醇,得到浸膏I ;(2)将浸膏I加入水溶解，离心，收集上清液，得上清液II ;上清液II用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析纯化，树脂柱径高比为1:7~9，上样体积6BV~8BV，流速为2BV/h~4BV/h，分别以去离子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脱大孔树脂，洗脱液弃去，以30%乙醇为洗脱剂5BV~8BV洗脱，收集洗脱液，得洗脱液III ;将洗脱液III浓缩，干燥，即得鸦跖花提取物。
[0011]所述鸦跖花提取物优选是采用如下方法制备的:
(1)将干燥的鸦跖花粉碎，加5倍量80%乙醇，于60°C水浴回流提取4次，每次70min，合并提取液，回收乙醇 ，得到浸膏I ;
(2)将浸膏I加入水溶解，离心，收集上清液，得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析纯化，树脂柱径高比为1:9，上样体积6BV，流速为4BV/h，分别以去离子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脱大孔树脂，洗脱液弃去，以30%乙醇为洗脱剂5BV洗脱，收集洗脱液，得洗脱液III ;将洗脱液III浓缩，干燥，即得鸦跖花提取物。
[0012]所述鸦跖花提取物还可以优选采用如下方法制备:
(1)将干燥的鸦跖花粉碎，加15倍量60%乙醇，于70°C水浴回流提取2次，每次80min，合并提取液，回收乙醇，得到浸膏I ;
(2)将浸膏I加入水溶解，离心，收集上清液，得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析纯化，树脂柱径高比为1:7，上样体积88￥，流速为2BV/h，分别以去离子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脱大孔树脂，洗脱液弃去，以30%乙醇为洗脱剂8BV洗脱，收集洗脱液，得洗脱液III ;将洗脱液III浓缩，干燥，即得鸦跖花提取物。
[0013]所述鸦跖花提取物还可以优选采用如下方法制备:
(1)将干燥的鸦跖花粉碎，加10倍量70%乙醇，于65°C水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收乙醇，得到浸膏I ;
(2)将浸膏I加入水溶解，离心，收集上清液，得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析纯化，树脂柱径高比为1:8，上样体积78￥，流速为3BV/h，分别以去离子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脱大孔树脂，洗脱液弃去，以30%乙醇为洗脱剂7BV洗脱，收集洗脱液，得洗脱液III ;将洗脱液III浓缩，干燥，即得鸦跖花提取物。
[0014]所述的鸦跖花提取物，其特征在于，该鸦跖花提取物采用药学中常规的制药方法制备成口服制剂。
[0015]所述口服制剂优选制备为片剂、丸剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液。
[0016]所述鸦跖花提取物可采用如下方法制备为硬胶囊剂:取鸦跖花提取物，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，装入硬胶囊，即得。
[0017]所述鸦跖花提取物可采用如下方法制备为片剂:取鸦跖花提取物，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成片，即得。
[0018]本发明所述的鸦跖花提取物可用于在制备治疗骨性关节炎药物或保健品。
[0019]本发明所述的鸦跖花提取物还可用于在制备治疗骨质疏松症药物或保健品。
[0020]通过如下实验研究验证本发明的技术效果:
实验一:本发明鸦跖花提取物治疗骨性关节炎的实验研究 I材料与方法
1.1药物与试剂(1)鸦跖花药材饮片，购于兰州惠仁堂药业连锁有限责任公司，粉碎成细粉，备用。
[0021](2)鸦跖花水提取物:取鸦跖花药材饮片加水煎煮2次，合并水煎液，浓缩，干燥，即得鸦跖花水提取物，备用。
[0022](3)本发明鸦跖花提取物，参照本发明说明书实施例1的制备方法制备，备用。
[0023](4)壮骨关节丸(阳性对照组)，华润三九医药股份有限公司生产。
[0024](5)羟脯氨酸标准品:由湖南省药品检验所生化室提供。
[0025](6)组织匀浆器，离心沉淀机，721分光光度计，酸性与碱性磷酸酶试剂盒，TNF- α试剂盒，MDA试剂盒、SOD试剂盒，NO试剂盒，MMP-1及ΜΜΡ-3免疫组化试剂盒。
[0026]1.2实验动物家兔，体重1.5~2.2kg，雌雄各半。将48只白色家兔，雌雄不拘，体重1.95 ±0.5kg,随机分成6组,分别为:
(O空白对照组:灌胃给蒸馏水4ml.kg—1 ；
(2)模型对照组:灌胃给蒸馏水4ml.kg—1 ；
(3)鸦跖花水提取物组:灌胃给鸦跖花水提取物16g-kg-1生药，灌胃剂量为4ml ^kg'
[0027](4)鸦跖花药材细粉组:灌胃给鸦跖花药材饮片细粉16g.k^1生药，灌胃剂量为4mI.kg-1。
[0028](5)壮骨关节丸组:灌胃给壮骨关节丸16g.k^1生药，灌胃剂量为4ml.kg'
[0029](6)鸦跖花提取物组:灌胃给化本发明鸦跖花提取物16g.k^1生药，灌胃剂量为4mI.kg-1。
[0030]1.3实验方法除空白对照组动物外，其余动物按Hulth法复制骨性关节炎模型:即用戊巴比妥麻醉，于内侧髌骨旁切口，切断内侧副韧带，打开关节腔，以眼科剪伸入，剪断前、后交叉韧带，切除内侧半月板，抽屉试验确认前、后交叉韧带完全剪断后，冲洗关节腔，缝合，制成骨性关节炎模型。术后用青霉素抗炎治疗3天。术后灌胃给药3周，观察药物对家兔骨性关节炎的影响。
[0031]1.4观察指标参照Gotdbrg VM法(彭太平等.益肾蠲痹液离子导入治疗骨性关节炎的实验研究.中医正骨.1998.10(5): 6)对膝关节活动进行临床评分。同时进行关节液量的测定，软骨羟脯氨酸及含水量的测定和血清碱性磷酸酶与酸性磷酸酶含量的测定、兔血清中MDA、S0D含量的测定、兔血清和软骨组织中NO含量的测定、兔血清TNF-α含量的测定、兔关节软骨中MMp-1和ΜΜΡ-3含量的测定。
[0032]1.5 Gotdbrg VM 评分
1.5.1局部疼痛刺激反应
分4级:①无异常疼痛反应；②患肢收缩；③患肢收缩、痉挛，伴轻度全身反应；④患肢收缩、痉挛，伴全身颤抖、挣扎。
[0033]1.5.2 步态
分4级:①患肢无跛行，蹬地有力；?患肢轻度跛行，蹬地有力患肢参与行走，但跛行明显；④患肢不能参与行走，不能触地。
[0034]1.5.3关节活动
4 级:① 90° 以上；② 45 ~90° ;@15 ~45° ;@0 ~15°。
[0035]1.5.4 畸形
分2级:① 无畸形改变；②局部肿胀，并有内翻或外翻畸形伴屈曲挛缩超过10°。[0036]2实验结果
2.1对骨性关节炎家兔膝关节临床表现的影响
如表1-1所示，与空白对照组比较，骨性关节炎模型组家兔的临床评分经Ridit检验，其局部疼痛刺激反应、步态(如患肢有无跛行、蹬地有无力等)、关节活动范围及有无畸形改变等均有显著改变(P〈0.01)，有明显骨性关节炎表现，表明模型成功。与模型对照组比较，鸦跖花提取物组动物的局部疼痛刺激反应、步态、畸形改变等均有显著改变(P〈0.01)，鸦跖花提取物组家兔关节活动有好转的趋势，表明鸦跖花提取物组能改善骨性关节炎模型家兔关节炎的临床症状，对骨性关节炎具有较好的治疗作用。
[0037]表1-1对骨性关节炎家兔膝关节临床改变评分
【权利要求】
1.一种治疗骨性关节炎的鸦跖花提取物，其特征在于，该鸦跖花提取物是采用如下方法制备的: (1)将干燥的鸦跖花粉碎，加5~15倍量60%~80%乙醇，于60°C~70°C水浴回流提取2次~4次,每次70min~80min,合并提取液,回收乙醇,得到浸膏I ; (2)将浸膏1加入水溶解，离心，收集上清液，得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析纯化，树脂柱径高比为1:7~9，上样体积6BV~8BV，流速为2BV/h~4BV/h，分别以去离子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脱大孔树脂，洗脱液弃去，以30%乙醇为洗脱剂5BV~8BV洗脱，收集洗脱液，得洗脱液III ;将洗脱液III浓缩，干燥，即得鸦跖花提取物。
2.如权利要求1所述的鸦跖花提取物，其特征在于，该鸦跖花提取物是采用如下方法制备的: (1)将干燥的鸦跖花粉碎，加5倍量80%乙醇，于60°C水浴回流提取4次，每次70min，合并提取液，回 收乙醇，得到浸膏I ; (2)将浸膏I加入水溶解，离心，收集上清液，得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析纯化，树脂柱径高比为1:9，上样体积6BV，流速为4BV/h，分别以去离子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脱大孔树脂，洗脱液弃去，以30%乙醇为洗脱剂5BV洗脱，收集洗脱液，得洗脱液III ;将洗脱液III浓缩，干燥，即得鸦跖花提取物。
3.如权利要求1所述的鸦跖花提取物，其特征在于，该鸦跖花提取物是采用如下方法制备的: (1)将干燥的鸦跖花粉碎，加15倍量60%乙醇，于70°C水浴回流提取2次，每次80min，合并提取液，回收乙醇，得到浸膏I ; (2)将浸膏I加入水溶解，离心，收集上清液，得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析纯化，树脂柱径高比为1:7，上样体积88￥，流速为2BV/h，分别以去离子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脱大孔树脂，洗脱液弃去，以30%乙醇为洗脱剂8BV洗脱，收集洗脱液，得洗脱液III ;将洗脱液III浓缩，干燥，即得鸦跖花提取物。
4.如权利要求1所述的鸦跖花提取物，其特征在于，该鸦跖花提取物是采用如下方法制备的: (1)将干燥的鸦跖花粉碎，加10倍量70%乙醇，于65°C水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收乙醇，得到浸膏I ; (2)将浸膏I加入水溶解，离心，收集上清液，得上清液II;上清液II用AB-8型大孔吸附树脂进行柱层析纯化，树脂柱径高比为1:8，上样体积7BV，流速为3BV/h，分别以去离子水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液洗脱大孔树脂，洗脱液弃去，以30%乙醇为洗脱剂7BV洗脱，收集洗脱液，得洗脱液III ;将洗脱液III浓缩，干燥，即得鸦跖花提取物。
5.如权利要求1~4任意一项所述的鸦跖花提取物，其特征在于，该鸦跖花提取物采用药学中常规的制药方法制备成口服制剂。
6.如权利要求5所述的鸦跖花提取物，其特征在于，该鸦跖花提取物采用药学中常规的制药方法制备成片剂、丸剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液。
7.如权利要求6所述的鸦跖花提取物，其特征在于，该鸦跖花提取物采用如下方法制备:取鸦跖花提取物，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，装入硬胶囊，即得。
8.如权利要求6所述的鸦跖花提取物，其特征在于，该鸦跖花提取物采用如下方法制备:取鸦跖花提取物，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成片，即得。
9.如权利要求1~4任意一项所述的鸦跖花提取物，其特征在于，该鸦跖花提取物在制备治疗骨性关节炎药物或保健品中的应用。
10.如权利要求1~4任意一项所述的鸦跖花提取物，其特征在于，该鸦跖花提取物在制备治疗骨质疏松症药 物或保健品中的应用。
【文档编号】A61P19/10GK103948693SQ201410211263
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年5月20日 优先权日:2014年5月20日
【发明者】吴平安, 刘玲 申请人:王恒信